Báo cáo thực phẩm chức năng

MỞ ĐẦU Trong giai đoạn đại hóa, để theo kịp xu thế giới với mong muốn phát triển kinh tế - xã hội mà nhiều ngành công nghiệp đời hàng loạt với công nghệ tân tiến đầy mẻ Những thay đổi kèm theo việc tạo nhiều sản phẩm bổ ích để đáp ứng nhu cầu người tiêu dùng Bởi lẽ đó, ngày nay, sản phẩm trở nên đa dạng phong phú có nhiều cơng đoạn quy trình thực tiến giúp tạo thành phẩm cách nhanh chóng Trái lại với mặt tích cực ấy, nhu cầu mưu sinh mà người phải chăm làm việc để mang lại sống ấm no cho gia đình Đơi áp lực sống lớn mà họ không quan tâm để ý đến sức khỏe bổ sung thức ăn qua loa để tiếp tục công việc thân Chính việc đó, làm ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe dẫn đến bệnh mang hệ lụy sau tiểu đường, huyết áp, trầm cảm,… Thế nên vào năm gần đây, giới có xu hướng quay lại với hợp chất tự nhiên, việc sử dụng hợp chất thứ cấp hoạt tính sinh học tiềm việc chăm sóc bảo vệ sức khỏe ngày đề cao tính hiệu Một số kể đến tía tơ – loại trồng phổ biến Việt Nam Tía tơ thảo sống quanh năm, y học cổ truyền xem vị thuốc giúp kích thích mồ hơi, đặc biệt, tinh dầu từ tía tơ có tác dụng kháng khuẩn kháng vi-rút đáng kể nên có đặc tính kháng viêm mạnh, chống oxi hóa, ngăn ngừa ung thư,… Vì mà em định chọn tía tơ làm đề tài tìm hiểu việc nghiên cứu để phát triển thành thực phẩm chức giúp hỗ trợ điều trị bệnh lý NỘI DUNG TỔNG QUAN VỀ LÁ TÍA TÔ 1.1 Nguồn gốc, phân bố tên gọi Nguồn gốc Tía tơ cịn biết đến thuốc nam, thơm, thực phẩm chức hay thân thảo hàng năm Theo thời xa xưa, tía tơ loại thảo mộc quan trọng ghi chép tác phẩm kinh điển y học Trung Quốc từ khoảng năm 500 Sau Công Nguyên, đặc biệt ghi chép có tên “Hồ sơ bổ sung bác sĩ tiếng” Ở nơi khác loại thảo mộc đăng ký làm thuốc có tác dụng giúp thoải mái thể thúc đẩy lưu thông máu Các vị thuốc thảo mộc y học cổ truyền Trung Quốc “lá tía tơ” khơ, “thân tía tơ” “hạt tía tơ” tương ứng với Folium Perillae, Caulis Perillae Fructus Perillae Dược điển Trung Quốc (1990), Dược điển Nhật Bản (1991), Herba Perillae liệt kê loại thuốc chiết xuất từ cành tía tơ [14]  Nó thường sử dụng loại thuốc truyền thống loại thực phẩm chức khắp cộng đồng châu Á Phân bố tên gọi Tía tơ trồng vùng núi Ấn Độ Trung Quốc, sau trồng khắp nơi châu lục Cây trồng vùng có khí hậu ơn hịa châu Âu Ở Mỹ Ukrain thấy mọc trạng thái hoang dại Ở Việt Nam, mọc hoang dại tỉnh miền núi phía Bắc (Lào Cai, Lạng Sơn, Hịa Bình,…) Tuy nhiên, nhu cầu sử dụng rau gia vị nhiều, nên vùng ngoại thành Hà Nội người ta trồng tía tơ gần quanh năm Ở Hàn Quốc, Nhật Bản Trung Quốc, tía tơ trồng đến hàng chục ngàn hecta để thu hoạch Đặc biệt, Trung Quốc có lẽ coi trung tâm gen lồi này[8] Từ đồng nghĩa của Perilla frutescens là Ocimum frutescens L Nó cịn biết đến với nhiều tên quốc gia khác Ở Trung Quốc, gọi Zisu; Shiso Nhật Bản; Deulkkae Tilkae Hàn Quốc; Silam Nepal tiếng Ba Lan gọi Pachnotka Ở Ấn Độ, có số tên khắp tiểu bang, chẳng hạn Bhanjeer Banjiraa (Uttarakhand), Hanshi (Manipur), chhawhchhi (Mizoram) [9],[19] 1.2 Thành phần dinh dưỡng Bảng 1.1: Thành phần dinh dưỡng tía tơ 100g phần ăn [6] STT Thành phần dinh dưỡng Đơn vị Hàm STT lượng Thành phần dinh dưỡng Đơn vị Hàm lượng Nước G 89,1 10 Mangan mg 0,73 Năng lượng kJ 105 11 Phospho mg 18 Protein G 2,9 12 Kali mg 284 Glucid G 3,4 13 Natri mg Cellulose G 3,6 14 Kẽm mg 0,86 Tro G 1,0 15 Đồng μg 460 Calci Mg 190 16 Vitamin C μg 13 Sắt Mg 3,2 17 β -caroten μg 5520 Magie Mg 112 1.3 Các hợp chất sinh học ứng dụng Tía tơ giàu dinh dưỡng chứa khoáng chất , vitamin ngồi cịn có nhiều hoạt chất sinh học tìm thấy bật terpenoid, flavonoid Đặc biệt flavonoid có chứa apigenin - một sản phẩm tự nhiên thuộc phân lớp flavone, aglycone số glycoside tự nhiên Hình 1.1: Cấu trúc apigenin Hình 1.2: Cấu trúc apigenin dẫn xuất glycosidic, glucuronid, acetyl hóa metyl este với số biflavonoid apigenin [21] Apigenin người sử dụng dạng chiết xuất thực vật để điều trị số rối loạn tình trạng viêm nhiễm, phát hợp chất cốt lõi Nhiều hoạt động dược lý, bao gồm chống viêm, chống độc, chống ung thư, v.v., cho apigenin. Nghiên cứu apigenin có nhiều mục tiêu phân tử liên quan đến chứng viêm [10] Qua đó, ta xem xét tía tơ ngun liệu tốt giúp tăng gia vị hỗ trợ cảm quan thực phẩm, liệu sử dụng để sản xuất thành thực phẩm chức giá trị bổ ích có cịn hữu hiệu việc hỗ trợ sức khỏe Từ đó, mà nghiên cứu đời tìm hiểu sâu sắc để thỏa mãn đáp ứng nhu cầu thị trường SẢN PHẨM TINH DẦU TÍA TƠ 2.1 Hình thành ý tưởng Để hình thành sản phẩm đó, bước phải thật thận trọng xem xét nhiều yếu tố khách quan Chính thế, đánh giá khảo sát xem cần thiết giai đoạn để góp phần thu thập thơng tin nhìn nhận rõ vấn đề để lựa chọn hợp lý Bởi lẽ đó, khảo sát thực ba quốc gia Mỹ, Nhật Bản Việt Nam để mang lại độ xác an tồn từ ngun liệu Tại Mỹ, tinh dầu tía tơ nằm danh mục phụ gia thực phẩm phép sử dụng Nó dùng để bổ sung vào loại nước sốt, bánh kẹo, chewing gum, tạo hương cho sản phẩm sarsaparilla - loại đồ uống phổ biến Mỹ Ngoài Nhật Bản, tinh dầu tía tơ coi chất tạo có chứa dẫn xuất perillaldehyde - quan trọng ngành sản xuất thuốc để giảm mùi hăng cay, làm cho sản phẩm có hương vị hài hịa Bên cạnh thực việc khảo sát Việt Nam, có 43 (97,7%) người biết đến tía tơ việc sử dụng chúng thường xuyên 11 (25,6%) Trong đó, Nhật Bản lại sử dụng loại với tần suất cao, xem loại rau vơ lý tưởng ăn kèm với tươi sống mà người Nhật tin dùng Xét mặt nhận biết sử dụng sản phẩm, Mỹ Nhật Bản đời loại sản phẩm vận dụng tinh dầu tía tơ hoạt động sản xuất khác Nhưng trái lại, Việt Nam tinh dầu tía tơ cịn mẻ với người, tiến hành khảo sát có tới 34 (79,1%) người chưa biết đến sản phẩm Và người biết đến sử dụng chúng có (4,7%) Hầu hết người biết tía tơ dùng loại gia vị bổ sung vào thức ăn mà chưa biết đến cơng dụng hiệu chúng mang lại Chính thế, sản phẩm tinh dầu tía tơ lại nghiên cứu nhiều sản xuất thành thực phẩm chức giúp hỗ trợ sức khỏe 2.2 Xác định ý tưởng 2.2.1 Thành phần tinh dầu Bảng 2.1: Thành phần tinh dầu tía tơ Thổ Nhĩ Kỳ [13] Hợp chất Hàm lượng (%) Hợp chất Hàm lượng (%) Perillaketone 35,6 β-Caryophyllene 4,3 Isoegomaketone 35,1 (Z,E)-α-Farnesene 2,7 Bảng 2.2: Thành phần tinh dầu tía tô Zisu Trung Quốc [12] Hợp chất Hàm lượng (%) Hợp chất Hàm lượng (%) Perillaldehyde 29,6 β-Caryophyllene 13,8 Limonene 15,6 (Z,E)-α-Farnesene 9,2 Bảng 2.3: Thành phần tinh dầu tía tơ Nhật Bản [1] Hợp chất Hàm lượng (%) Hợp chất Hàm lượng (%) Perillaldehyde 42,32 Benzaldehyde 7,31 D-Limonene 35,15 Caryophyllene 4,49 Bảng 2.4: Thành phần hóa học tinh dầu tía tơ Việt Nam (Quảng Nam) [7] STT Thành phần α -Pinene Hàm lượng Hàm lượng STT Thành phần 0,21 14 α -Bourbonene 0,22 β -Phellandrene 0,05 15 Methyleugenol 0,03 β -Myrcene 0,23 16 δ -Selinene 0,02 p-Cymene 0,01 17 β -caryophyllene 33,88 D-Limonene 11,43 18 β -copaene 0,09 Trans- β -Ocimene 0,11 19 Humulene 3,83 β -Ocimene 0,07 20 (E)- β -Famesene 0,24 γ -Terpinene 0,01 21 γ -Muurolene 4,58 Linalool 0,76 22 10 α -Terpineol 0,04 23 α -Farnesene 0,26 11 Citronellol 0,08 24 γ -Asarone 35,12 12 γ -Elemene 0,16 25 Nerolidol 0,38 13 α -Copaene 0,45 26 α -Cadinol 0,06 (%) Trans-α Bergamotene (%) 7,66 2.2.2 Tác dụng sinh học Khái niệm Tinh dầu chất lỏng thơm dễ bay thu từ nguyên liệu thực vật, bao gồm hoa, rễ, vỏ cây, lá, hạt, quả,…Trong suốt lịch sử, loại dầu quan tâm nhiều, nhiều công dụng chúng bị theo thời gian, người ta thường chấp nhận người chiết xuất chúng từ thơm kể từ buổi bình minh lồi người Các ứng dụng tinh dầu cho mục đích khác đa dạng khơng bao gồm việc sử dụng chúng nấu ăn để tăng hương vị lợi ích sức khỏe thực phẩm mà ứng dụng sản xuất nước hoa mỹ phẩm [20] Có nhiều định nghĩa khác tinh dầu, xác có lẽ định nghĩa đề xuất Schilcher, Hegnauer Coh Riechter, tóm tắt Sonwa: “Tinh dầu sản phẩm hỗn hợp sản phẩm, hình thành tế bào chất thường tồn dạng giọt nhỏ tế bào Chúng dễ bay có mùi thơm” Chúng bao gồm “hỗn hợp chất có mùi thơm hỗn hợp chất có mùi thơm khơng mùi”, chất có mùi thơm định nghĩa “hợp chất tinh khiết mặt hóa học, dễ bay điều kiện bình thường mùi hữu ích cho xã hội” [23] Cơ chế hoạt động Apigenin Lá tía tơ có vị ngọt, tính bình, chứa khoảng 3,1% chất đạm, 0,8% chất béo, 4,1% chất bột đường, 1,1% tro Các non sử dụng loại gia vị, già sử dụng ăn trang trí hương liệu chữa lành vết thương Đặc biệt, tía tơ có số lợi ích sức khỏe chứa nhiều hợp chất thực vật báo cáo loài hợp chất phenolic (axit Rosmarinic, axit caffeic, axit ferulic), flavonoid (luteolin, apigenin), Phytosterol, Tocopherols, Policosanols axit béo [16] Apigenin điều chỉnh đáng kể mỡ máu, giảm trọng lượng động vật giảm tổng lượng cholesterol, chất béo trung tính cholesterol lipoprotein mật độ thấp huyết chuột ăn kiêng nhiều chất béo Trọng lượng thể hàm lượng cholesterol huyết tăng bất thường chế độ ăn nhiều chất béo Apigenin làm tăng hoạt động superoxide dismutase tế bào nội mô tĩnh mạch rốn người bị thương tăng lượng oxit nitric tế bào tiết [17] Về mặt giảm huyết áp giãn mạch, nghiên cứu apigenin làm giãn vòng co động mạch chủ chuột phenylephrine gây ống nghiệm Các thí nghiệm apigenin ức chế tăng sinh tế bào trơn mạch máu theo cách phụ thuộc vào liều lượng khoảng nồng độ định, cho thấy apigenin quan trọng việc ngăn ngừa bệnh tim mạch tăng huyết áp xơ vữa động mạch Ngoài ra, vai trò apigenin vận chuyển ngược cholesterol, ức chế hình thành tế bào bọt, chống lại trình oxy hóa bảo vệ tế bào nội mô mạch máu nghiên cứu Nghiên cứu cung cấp thêm chứng vai trò apigenin việc điều chỉnh chuyển hóa cholesterol, cho thấy sử dụng để điều trị lâm sàng bệnh tim mạch mạch máu não [17] Trong ống nghiệm, apigenin có hoạt tính estrogen phát triển tế bào chuyển nạp phụ thuộc vào estrogen có tác dụng phụ với 17 β -estradiol In vivo, apigenin làm giảm mức độ thụ thể estrogen nội sinh tử cung chuột, tăng cường khả sinh estrogen liều lượng thấp estradiol chuột chưa trưởng thành có tác dụng bảo vệ hình thành khối u da, bệnh ung thư phụ thuộc vào hormone Nhiều chế hoạt động đề xuất để giải thích đặc tính (chống) estrogen (chống) gây ung thư này: tương tác với thụ thể estrogen điều chỉnh sinh tổng hợp chuyển hóa hormone steroid, tăng cường giao tiếp tế bào tiếp giáp khoảng cách, cảm ứng apoptosis [11] Các đặc tính chống tiểu đường apigenin khả ức chế hoạt động α-glucosidase, tăng tiết insulin, tương tác trung hòa loại oxy phản ứng (ROS) tế bào, góp phần vào phịng ngừa biến chứng tiểu đường. Apigenin cho thấy khả cung cấp nitric oxide (NO) vừa phải cho tế bào nội mơ, hạn chế nguy tổn thương tế bào nội mô rối loạn chức tăng đường huyết Việc sử dụng apigenin cho chuột điều trị alloxan cho thấy vai trò bảo vệ gan hợp chất dinh dưỡng này, có khả làm tăng hoạt động chất chống oxy hóa tế bào, chẳng hạn catalase (CAT) superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH) [21] Nhiều đường tín hiệu điều chỉnh cách điều trị apigenin. Trong tế bào ung thư gan, apigenin chất đối kháng kinase ức chế đường ERK (kinase điều chỉnh tăng sinh peroxisome). Apigenin ức chế phân tử tín hiệu IKKα hạ nguồn NF-κB, ngăn chặn tiến triển ung thư tuyến tiền liệt. Apigenin gây trình apoptosis tế bào ung thư tuyến giáp không tăng sinh người thông qua việc điều hịa giảm q trình tự động phosphoryl hóa EGFR tyrosine phosphoryl hóa quan tác động hạ nguồn nó, protein hoạt hóa mitogen (MAP) kinase [18] 2.3 Sản xuất thử nghiệm/ dự kiến 2.3.1 Quy trình cơng nghệ sản xuất tinh dầu tía tơ phương pháp trích ly [3] Lá tía tơ Phơi khơ Xay Ethanol Trích ly Mixen Xử lý Đuổi dung môi Tinh chế Bã Tinh dầu Kiểm tra Pha chế, phối trộn Dịch vỏ nang Tạo nang Sấy khơ Đóng hộp Thành phẩm Hình 2.1: Mơ hình quy trình sản xuất tinh dầu tía tơ phương pháp trích ly Lá tía tơ (độ ẩm 82%) phơi khơ điều kiện tự nhiên đến độ ẩm 20%, sau mang xay đến độ mịn 2mm < d  3mm Ngun liệu khơ nghiền đem trích ly lần dung môi ethanol 96% với phương pháp trích ly động: nhiệt độ trích ly 60oC, trích ly lần Lần 1: tỷ lệ nguyên liệu/dung mơi 1/8, thời gian trích ly Lần 2: tỷ lệ nguyên liệu/dung môi 1/5, thời gian trích ly Lần 3: tỷ lệ nguyên liệu/dung mơi 1/5, thời gian trích ly Sau trích ly, dịch trích ly đặc thiết bị cô quay chân không thu tinh dầu tía tơ thơ Sau đó, tinh dầu tía tơ thô đưa vào công đoạn tinh chế cồn tuyệt đối 99,5 % nhiệt độ lạnh - 5oC, lọc bỏ hợp chất kết tủa nhựa, sáp để thu tinh dầu sản phẩm Dung môi thu hồi xử lý tái sử dụng cho lần trích ly Tiến hành kiểm tra chất lượng tinh dầu Sau thực pha chế phối trộn với dịch vỏ nang để tạo thành nang Sau hồn thành mang viên nang sấy khơ nhiệt độ 20-25 oC với độ ẩm 30% Bước cuối kiểm định, đóng gói tạo thành phẩm Các yếu tố ảnh hưởng đến trình trích ly: [5] Độ ẩm nguyên liệu: Khi độ ẩm ngun liệu lớn tốn thể tích thiết bị trích ly tốn lượng dung môi sử dụng, tổn thất tinh dầu q trình đặc Khi độ ẩm nguyên liệu thấp ảnh hưởng tới trình tách thoát tinh dầu khỏi bề mặt nguyên liệu Độ mịn nguyên liệu: Nguyên liệu để nguyên dạng thơ hiệu suất trích ly thấp tinh dầu ngun liệu khó tiếp xúc với dung mơi Nhưng ngun liệu nghiền mịn gây bí bết cản trở tiếp xúc nguyên liệu dung môi, cản trở q trình lọc Dung mơi: phải đảm bảo yêu cầu hoà tan tốt tinh dầu khơng hồ tan chất, tạp chất khác có ngun liệu; Có nhiệt độ sơi thấp, nhiên q thấp tổn thất dung mơi lớn, sản xuất dễ gây hoả hoạn khó làm ngưng tụ để thu hồi dung môi; Dung môi khơng tác dụng hóa học với tinh dầu; Độ nhớt dung mơi bé để rút ngắn thời gian trích ly (độ nhớt nhỏ khuếch tán nhanh); Dung mơi hịa tan tinh dầu lớn hòa tan tạp chất bé; Dung mơi khơng ăn mịn thiết bị, khơng gây mùi lạ cho tinh dầu đặc biệt không gây độc hại; Dung mơi phải có giá thành thấp dễ mua 10 Các yếu tố công nghệ số lần trích ly, tỷ lệ ngun liệu/dung mơi, tốc độ khuấy trộn nguyên liệu, thời gian trích ly, nhiệt độ trích ly góp phần làm ảnh hưởng đến chất lượng tinh dầu 2.3.2 Quy trình cơng nghệ sản xuất tinh dầu tía tơ phương pháp chưng cất [4],[5] Lá tía tơ Xay Chưng cất Bã Phân ly Nước thải Nước Tinh chưng dầu thô Xử lý Tinh chế Tinh dầu loại II Tinh dầu Kiểm tra Pha chế, phối trộn Dịch vỏ nang Tạo nang Sấy khơ Đóng hộp Hình 2.2: Mơ hình quy trình sản xuất tinhThành dầu tía tơ phương pháp chưng cất phẩm 11 Ngun liệu có chất lượng đồng đều, khơng bị sâu bệnh, thu hái điều kiện khô Trước đưa vào chưng cất cần trải mỏng nguyên liệu nơi thống mát bảo quản nhiệt độ phịng Thời gian lưu trữ tối đa 48h kể từ thời điểm thu hái Ngun liệu tía tơ cần cắt nhỏ với kích thước < d  mm kích thước lớn ảnh hưởng tới q trình tinh dầu Ngược lại, kích thước nhỏ nguyên liệu bị bết dính chưng cất, làm cho trình xâm nhập nước khuếch tán tinh dầu gặp khó khăn Nguyên liệu sau làm nhỏ, tiến hành chưng cất tinh dầu thiết bị chưng cất có nồi riêng với điều kiện kỹ thuật sau: áp suất hơi: atm; tỷ lệ khối lượng nguyên liệu/thể tích thiết bị: 0,4 kg/l; tốc độ chưng cất: 30 lít/h; nhiệt độ nước ngưng: 40oC; thời gian chưng cất: 180 phút Hỗn hợp tinh dầu nước cho vào thiết bị phân ly Sau phân ly ta tinh dầu thô nước chưng Tinh dầu thô xử lý để tinh dầu thành phẩm, nước chưng cho bể tiếp tục phân ly để thu tinh dầu loại II Tiếp theo, mang tinh dầu sau tinh chế kiểm tra chất lượng Khi đạt đủ yêu cầu tiến hành thực pha chế phối trộn với dịch vỏ nang để tạo thành nang Sau hồn thành mang viên nang sấy khơ nhiệt độ 20-25 oC với độ ẩm 30% Bước cuối kiểm định, đóng gói tạo thành phẩm Các yếu tố ảnh hưởng đến trình chưng cất: [2],[5] Thời gian thu hái: Đối với loại có chứa tinh dầu, thời điểm thu hái yếu tố quan trọng ảnh hưởng trực tiếp đến hàm lượng tinh dầu sản phẩm Nguyên liệu thu hái thời điểm khác ngày Phải thu hái vào thời điểm mà độ ẩm khơng khí thấp nhất, lượng ánh sáng chiếu vào cao nhất, quang hợp bốc nhiều để có hàm lượng tinh dầu tích lại đạt cao Thời gian để héo: Một số loại nguyên liệu sau thu hái tiếp tục tạo tinh dầu số khác lại giảm lượng tinh dầu chứa nguyên liệu nên yếu tố thời gian để héo có tác động đến hàm lượng tinh dầu thu Khi thời gian để héo lâu, bị hư dần hàm lượng tinh dầu giảm nhiều Tinh dầu thu bị trở màu Nhiệt độ: điều chỉnh nhiệt độ dịch ngưng cho nằm khoảng 30-40 oC (bằng cách điều chỉnh tốc độ nước làm lạnh) dịch ngưng q nóng làm tăng độ hịa tan tinh dầu vào nước làm bay tinh dầu Để kiểm tra trình chưng cất kết thúc 12 chưa người ta dùng kính hứng dịch ngưng, thấy kính cịn váng dầu q trình chưng cất chưa kết thúc Thiết bị chưng cất: phải đảm bảo cho q trình chưng cất tiến hành nhanh chóng thuận lợi, hỗn hợp bay phải đảm bảo chứa nhiều tinh dầu, thế, hệ thống phải có cấu tạo để nước tiếp xúc toàn khối ngun liệu 2.4 Mơ hình thử nghiệm lâm sàng Tăng lipid máu yếu tố nguy độc lập xơ vữa động mạch Xơ vữa động mạch nguyên nhân quan trọng dẫn đến bệnh tim mạch mạch máu não Xơ vữa động mạch hình thành mảng gọi mảng xơ vữa bên động mạch. Mảng xơ vữa hình thành bởi: lipid, chủ yếu cholesterol, tế bào trơn, tế bào máu, collagen sợi đàn hồi, canxi Tổ chức Y tế giới định nghĩa: “Xơ vữa động mạch phối hợp tượng thay đổi cấu trúc nội mạc động mạch lớn vừa, bao gồm tích tụ cục chất lipid, phức glucid, máu sản phẩm máu, mô xơ cặn lắng acid, tượng kèm theo thay đổi lớp trung mạc” [22] Xơ vữa động mạch hậu q trình viêm, oxy hóa học nhiều tác nhân bên bên ngoài, đặc biệt lipid chất mang chúng huyết áp cao, hoạt động mãn tính nội mạc, bề mặt huyết quản nội mạc lòng động mạch. Quá trình diễn tồn động mạch mức độ lớn thấp hơn, ngoại trừ tiểu động mạch mạch mao mạch, chủ yếu phát triển rối loạn chức nội mô tổng quát dày lớp nội mạc; thứ hai, lan tỏa dạng mảng xơ vữa phân bố ưu tiên đến động mạch khu vực định. Bệnh xơ cứng, có liên quan đến hậu quả, phát triển chủ yếu diện mô collagen lắng đọng canxi tử cung, phần phản ứng với trình viêm biểu hành động chữa bệnh sinh học bảo vệ [22] Bệnh tim mạch xơ vữa động mạch (ASCVD) nguyên nhân gây tử vong tồn giới Năm 2015, có tới 31% số ca tử vong toàn cầu ASCVD Tại Hoa Kỳ EU, ASCVD chiếm 33–40% tỷ lệ tử vong nguyên nhân lứa tuổi ASCVD nguyên nhân gây tử vong EU, gánh nặng bệnh tật ASCVD Hoa Kỳ lớn bệnh mãn tính khác Ở Hàn Quốc, bệnh tim mạch, bao gồm bệnh tim (tức nhồi máu tim, đau thắt ngực suy tim) bệnh mạch máu não nguyên nhân chính/ hàng đầu gây tử vong [15] 13 Ở nước công nghiệp 50% tử vong tim mạch nguyên nhân xơ vữa động mạch chiếm 50% Tại Mỹ người 60 tuổi có 88% xơ vữa động mạch, người già khơng người không bị xơ vữa động mạch Ở người trẻ, 300 lính Mỹ tuổi trung bình 22 chết chiến tranh Triều Tiên, mổ tử thi thấy 77% bị xơ vữa động mạch với mức độ nhiều hay Thế nói, xơ vữa động mạch bệnh nguy hiểm người, yếu tố từ tâm lý, xã hội, môi trường di truyền chuyển hóa tác động đến chế gây bênh Để hạn chế tình trạng diễn ngày nhiều hơn, Kun Zhang cộng (2017) đưa mơ hình nghiên cứu apigenin điều chỉnh trao đổi chất cholesterol in vivo đóng vai trị việc giảm mức độ chất béo máu cách thúc đẩy hấp thụ chuyển đổi cholesterol, đồng thời đẩy nhanh trình vận chuyển ngược chiều cholesterol Nghiên cứu giúp chứng minh apigenin có vai trị chống lại q trình oxy hóa bảo vệ mạch máu [17] 2.4.1 Vật liệu phương pháp Động vật thí nghiệm 60 chuột ICR (loại II) nặng (Hitachi, Ltd., Tokyo, Nhật Bản) 18-20g mua từ Trung tâm Động vật thí nghiệm Đại học Sơn Đơng Những chuột ni phịng động vật Thí nghiệm bắt đầu sau tuần cho ăn thích nghi Các lồi động vật tiếp cận với thức ăn nước uống q trình thí nghiệm Tất thức ăn nước uống khử trùng Phân nhóm mơ hình hóa Nhóm I: nhóm đối chứng bình thường Nhóm II: nhóm mơ hình động vật giàu chất béo Nhóm III: nhóm sử dụng apigenin liều lượng thấp Nhóm IV: nhóm sử dụng apigenin liều lượng vừa phải Nhóm V: nhóm sử dụng apigenin liều lượng cao Nhóm VI: nhóm sử dụng simvastatin Mỗi nhóm bao gồm 12 chuột Liều hàng ngày thuốc kiểm sốt tích cực, simvastatin, 12 mg/ kg Natri metyl cellulose sử dụng làm dung môi để pha chế huyền phù thuốc Những chuột sử dụng apigenin simvastatin cách tiêm vào dày lần ngày 28 ngày liên tục Những chuột nhóm đối chứng nhóm mơ hình tiêm vào dày thể tích dung mơi 14 Nuôi cấy tế bào Tế bào THP-1 nuôi cấy với môi trường RPMI-1640 chứa 10% huyết bò thai chứa 100 U/ml penicillin 100 U/ml streptomycin 37˚C môi trường chứa 5% CO2 Phương tiện thay đổi 2-3 ngày lần.Tế bào nội mô tĩnh mạch rốn người (EA.hy926) tế bào trơn mạch máu (A10) nuôi cấy môi trường Eagle's cải tiến Dulbecco (DMEM) có chứa 10% FBS, 100U/ml penicillin 100U/ml streptomycin môi trường không đổi - Tủ ấm nhiệt độ chứa 5% CO2 37˚C Thành lập mơ hình tế bào bọt có nguồn gốc từ đại thực bào Tế bào THP-1 nuôi cấy RPMI-1640 chứa 10% FBS Các tế bào ly tâm 8.000 x g phút, tái đình chỉ, đếm gieo hạt vi mẫu giếng với mật độ 1,5 x 105 tế bào/giếng Các tế bào biệt hóa thành đại thực bào cảm ứng PMA (Sigma Aldrich) 48 Chất lỏng giếng loại bỏ Tế bào rửa ba lần PBS Môi trường nuôi cấy RPMI-1640 khơng có huyết sau thêm vào giếng Các giải pháp thích hợp thêm vào nhóm để xử lý trước Sau đó, tế bào ủ 24 Giải pháp thay đổi sau 24 Các tế bào nuôi cấy thêm 48 2.4.2 Kết Bảng 2.5: Ảnh hưởng apigenin trọng lượng thể, trọng lượng gan, số AS, TC, LDL-C SOD (trung bình ± SD) chuột mơ hình có chất béo cao Bảng 2.6: Ảnh hưởng apigenin dòng chảy cholesterol đại thực bào tỷ lệ cholesteryl ester/TC 15 Bảng 2.7: Tác dụng apigenin hoạt động NO SOD tiết tế bào EA.hy926 bị thương H2O2 Qua mô hình thí nghiệm ghi nhận hàm lượng TC TG gan chuột nhóm mơ hình tăng lên đáng kể hoạt tính SOD huyết giảm đáng kể so với nhóm đối chứng bình thường Điều chế độ ăn nhiều chất béo làm tăng mức lipid gan chuột, tăng hàm lượng lipid bất thường ức chế hoạt động SOD in vivo Hoạt tính SOD huyết chuột nhóm apigenin tăng 20,95% so với nhóm mơ hình (Bảng 2.5) Tốc độ dịng chảy cholesterol tế bào nhóm sử dụng apigenin cao tăng lên 51,68% so với nhóm bình thường Tốc độ dòng chảy cholesterol tế bào nhóm sử dụng apigenin vừa phải tăng 31,88% Điều apigenin thúc đẩy dòng chảy cholesterol đại thực bào làm giảm hàm lượng cholesterol nội bào Điều apigenin điều chỉnh chuyển hóa cholesterol đại thực bào, tăng dòng chảy cholesterol từ bên bên đại thực bào giảm tích tụ cholesterol tế bào Hàm lượng cholesteryl ester tỷ lệ cholesteryl ester so với TC tăng 4,05 lần 1,58 lần so với nhóm bình thường (Bảng 2.6) Nồng độ apigenin 1x10-5 mol/l làm cho mức NO tiết tế bào EA.hy926 bị thương tăng 40,86% Dựa so sánh với nhóm đối chứng, ủ tế bào EA.hy926 với H 2O2 dẫn đến giảm đáng kể 37,62% hoạt động SOD nội bào Apigenin ức chế yếu tăng sinh tế bào trơn mạch máu A10 có xu hướng phụ thuộc vào liều lượng Tuy nhiên, khơng có khác biệt đáng kể tác dụng ức chế ba liều apigenin Apigenin liều cao ức chế đáng kể tăng sinh tế bào A10 tác dụng ức chế phụ thuộc vào liều lượng (Bảng 2.7) Trong mơ hình này, chuột ăn kiêng nhiều chất béo bị tăng lipid máu tái tạo Mức độ TC, TG LDL-C huyết chuột mơ hình tăng lên đáng kể tuần tiếp xúc với chế độ ăn nhiều chất béo, cho thấy thiết lập thành cơng mơ hình tăng lipid máu Kết apigenin làm giảm hàm lượng TC, TG LDL-C chuột 16 phụ thuộc vào liều lượng Apigenin làm giảm đáng kể trọng lượng thể; nồng độ TC, TG LDL-C huyết thanh; hàm lượng TC TG, cho thấy apigenin ức chế hiệu mức tăng lipid máu, cải thiện rối loạn chuyển hóa cholesterol, giảm tích tụ lipid gan phục hồi cân chuyển hóa lipid Nghiên cứu nồng độ mRNA HMG-CoAR, CYP7A1 LDL-R gan chuột thuộc nhóm mơ hình giảm đáng kể sau tiếp xúc với chế độ ăn nhiều chất béo so với nhóm đối chứng bình thường Từ đó, cho thấy sử dụng sản phẩm có chứa apigenin làm giảm hàm lượng cholesterol cách thúc đẩy hấp thụ LDL-C gan tăng chuyển hóa cholesterol gan thành axit mật Nghiên cứu apigenin cải thiện cân lipid bị rối loạn có khả sử dụng để điều trị bệnh xơ vữa động mạch gan nhiễm mỡ Kết cung cấp tảng cho nghiên cứu sâu chế hoạt động apigenin việc điều chỉnh chuyển hóa cholesterol 17 KẾT LUẬN Trong trình phát triển xơ vữa động mạch, stress oxy hóa gây biểu phân tử kết dính mạch máu, thúc đẩy phản ứng viêm cục gây tăng sinh tế bào (22) Tăng lipid máu làm tăng lượng oxy tạo gốc tự in vivo (23), làm tăng căng thẳng oxy hóa (24) có liên quan đến xuất tiến triển xơ vữa động mạch Trong nghiên cứu hoạt động SOD chuột nhóm mơ hình giảm tác dụng đối kháng chống lại stress oxy hóa bị ức chế Apigenin làm tăng hoạt tính SOD, tăng khả chống oxy hóain vivo, giảm lượng lipoprotein mật độ thấp oxy hóa tạo ra, ức chế phát triển xơ vữa động mạch Căng thẳng nhẹ mãn tính khơng thể đốn trước áp dụng rộng rãi mơ hình hành vi động vật chứng trầm cảm, có giá trị tốt khả dự đoán đáng tin cậy Nghiên cứu tiết lộ tác dụng chống trầm cảm tiềm việc điều trị perilladehyde chứng trầm cảm LPS gây chuột, liên quan đến thay đổi đáp ứng monoaminergic khả phòng thủ chống viêm Trong nghiên cứu này, quan sát thấy perilladehyde có hiệu việc giảm thời gian bất động FST TST mà không ảnh hưởng đến hoạt động vận động tự phát 24 sau thử thách LPS Những kết cho thấy perilladehyde làm giảm hành vi giống trầm cảm LPS gây Tóm lại, perillaldehyde có lợi ích điều trị bệnh trầm cảm liên quan đến viêm, tác động đến thay đổi chuyển hóa serotonin norepinephrine Kết hoạt động giống thuốc chống trầm cảm perillaldehyde trung gian phần thông qua việc thay đổi phản ứng monoaminergic Như vậy, việc sử dụng tinh dầu tía tơ hiệu hỗ trợ giảm căng thẳng gây bệnh trầm cảm 18 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Lâm Xuân Thanh cộng (2000) Nghiên cứu thành phần hương Tạp chí Nơng nghiệp Cơng nghiệp thực phẩm (số 10), 468-469 Lê Ngọc Thạch cộng (1999) Khảo sát tinh dầu tía tơ ĐH Khoa Học Tự Nhiên TPHCM Nguyễn Thị Hoàng Lan cộng (2014) Nghiên cứu cơng nghệ trích ly Tạp chí Khoa học Phát triển - Tập 12, số 3, 404-411 Nguyễn Thị Hoàng Lan cộng (2018) Xác định thông số để xây dựng quy trình cơng nghệ chưng cất tinh dầu tía tơ Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam tập 16, số 3, 275-281 Nguyễn Thọ Phạm Ngọc Thạch (2008) Kỹ thuật sản xuất tinh dầu, phần In Giáo trình Kỹ thuật sản xuất sản phẩm nhiệt đới Đà Nẵng: NXB Bách Khoa PGS TS Nguyễn Công Khẩn, PGS TS Hà Thị Anh Đào (2007) Bảng thành phần thực phẩm Việt Nam (Vietnamese Food Composition Table) Bộ Y tế, Viện dinh dưỡng: NXB Y học Trần Thị Ngọc Bích, Đỗ Thị Thúy Vân (2017) Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học tinh dầu tía tơ thu hái tỉnh Quảng Nam Tạp chí Khoa học Xã hội, Nhân văn & Giáo dục - Tập 7, số 3, 1-5 Viện Dược liệu (2006) Tía tơ In Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam - Tập (pp 943-949) NXB Khoa Học Kĩ Thuật Tài liệu Tiếng Anh Akriti Dhyani, Rajni Chopra and Meenakshi Garg (2019) A Review On Nutritional Value, Functional Properties and Pharmacological Application of Perilla (Perilla Frutescens L.) Biomedical & Pharmacology Journal (Vol 12), 649-660 10.Ali, F R (2016 ) Health functionality of apigenin: A review International Journal of Food Properties, 20(6), 1197-1238 11.Angéline Gradolatto, J.-P B (2005) Pharmacokinetics and metabolism of apigenin in female and male rats after a single oral administration In Drug Metabolism and Disposition (pp 33 (1), 49-54) 19 12.Baokang Huang et al (2011) Comparison of HS-SPME with hydrodistillation and SFE for the analysis of the volatile compounds of Zisu and Baisu, two varietal species of Perilla frutescens of Chinese origin Food Chemistry (Volume 125), 268–275 13 Başer1 K.H.C et al (2003) Composition of the essential oil of Perilla Flavour and Fragrance Journal (Volume 18), 122–123 14 Chen, Y.P (1997) Application and prescriptions of Perilla in traditional Chinese medicine In Perilla: The genus Perilla (pp 37–45) Harwood Academic Publishers 15.Hyungtae Kim, S K (2019) Prevalence and incidence of atherosclerotic cardiovascular disease and its risk factors in Korea: a nationwide population-based study In BMC Public Health (pp 19, 1112) 16.Kanokkarn Phromnoi, M S (2019) Polyphenols and Rosmarinic acid Contents, Antioxidant and AntiInflammatory Activities of Different Solvent Fractions from NgaMon (Perilla frutescens) Leaf Journal of Pharmacy and Nutrition Sciences, (5), 18 17.Kun Zhang, W S (2017) Apigenin in the regulation of cholesterol metabolism and protection of blood vessels In EXPERIMENTAL AND THERAPEUTIC MEDICINE (Volume 13, Issue 5) (pp 1719-1724) 18.Meng, S Z.-F (2017) Apigenin inhibits renal cell carcinoma cell proliferation Oncotarget, 8(12), 19834-19842 19.R K.bachheti, Archana Joshi, Tofik Ahmed (2014) A Phytopharmacological Overview on Perilla frutescens International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, 55-61 20.Ríos, J.-L (2016) Chapter - Essential Oils: What They Are and How the Terms Are Used and Defined In Essential oils in food preservation, flavor and Safety (pp 3-10) ACADEMIC PRESS 21.Salehi, B., Venditti, A., Sharifi-Rad, M., et al (2019) The Therapeutic Potential of Apigenin International Journal of Molecular Sciences, 20(6), 1305 22.Soltero-Pérez, I (2002) Toward a new definition of atherosclerosis including hypertension: a proposal Journal of Human Hypertension , 16, 23-25 23.Sonwa, M (2000) Isolation and Structure Elucidation of Essential Oil Constituents In Comparative Study of the Oils of Cyperus alopecuroides, Cyperus papyrus, and Cyperus rotundus Germany: University of Hamburg 20