BỘ CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VÕ THỊ KIM HOA NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT CAO ACTISO CÓ HỖ TRỢ ENZYME VÀ THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI CYNARIN VÀ ACID CHLOROGENI[.]
BỘ CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VÕ THỊ KIM HOA NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT CAO ACTISO CÓ HỖ TRỢ ENZYME VÀ THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI CYNARIN VÀ ACID CHLOROGENIC TỪ LÁ CÂY ACTISO Chuyên ngành: HO PH N T CH Mã chuyên ngành: 8440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÀNH PHỐ HỒ CH MINH, NĂM 2021 Cơng trình đƣợc hồn thành Trƣờng Đại học Cơng nghiệp TP Hồ Chí Minh Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Nguyễn Quốc Thắng Luận v n thạc s đƣợc ảo vệ Hội đồng chấm ảo vệ Luận v n thạc s Trƣờng Đại học Cơng nghiệp thành phố Hồ Chí Minh ngày 10 tháng 09 n m 2021 Thành phần Hội đồng đánh giá luận v n thạc s gồm: PGS.TS Nguyễn Ngọc Tuấn… - Chủ tịch Hội đồng PGS.TS Ngô V n Tứ……… - Phản iện TS Trần Thị Thanh Thuý… - Phản iện PGS.TS Nguyễn V n Cƣờng - Ủy viên TS Cao Xuân Thắng …… - Thƣ ký (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc sĩ) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƢỞNG KHOA CNHH PGS.TS Nguyễn Ngọc Tuấn PGS.TS Nguyễn Văn Cƣờng BỘ CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Võ Thị Kim Hoa MSHV: 18104831 Ngày, tháng, n m sinh: 31/05/1980 Nơi sinh: TP.HCM Chun ngành: Hố Phân Tích Mã chuyên ngành: 8440118 I TÊN ĐỀ TÀI: Nghiên cứu tách chiết cao actiso có hỗ trợ enzyme thẩm định phƣơng pháp phân tích đồng thời cynarin acid chlorogenic từ actiso NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Nhiệm vụ Actiso, cynarin, acid chlorogenic, ứng dụng cynarin, acid chlorogenic, phƣơng pháp trích ly, phƣơng pháp định lƣợng cynarin, acid chlorogenic, tình hình nghiên cứu nƣớc Nội dung Thẩm định quy trình phân tích đồng thời cynarin acid chlorogenic; Khảo sát phƣơng pháp trích ly cynarin, acid chlorogenic từ actiso; Khảo sát ảnh hƣởng điều kiện trích ly ằng enzyme pectinase: + Khảo sát yếu tố: Nồng độ enzyme, pH, nhiệt độ thủy phân; + Khảo sát đồng thời a yếu tố ằng quy hoạch thực nghiệm tâm xoay ậc hai với mơ hình Box-Wilson, xử lý số liệu ằng phần mềm Design Expert 11.0; Thử nghiệm hoạt tính kháng oxi hố cao trích II NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 10.07.2020 III NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ : 30.06.2021 IV NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC : TS Nguyễn Quốc Thắng Tp Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 09 năm 2021 NGƢỜI HƢỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) (Họ tên chữ ký) TS Nguyễn Quốc Thắng TS Nguyễn Quốc Thắng TRƢỞNG KHOA CNHH (Họ tên chữ ký) PGS.TS Nguyễn Văn Cƣờng LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn cha mẹ gia đình tạo điều kiện thuận lợi, ủng hộ tinh thần hỗ trợ q trình thực hồn thành luận v n Em xin gửi lời cảm ơn đến quý Thầy, Cơ ộ mơn Kỹ thuật Hố phân tích, Thầy, Cơ khoa Cơng nghệ Hóa học, Trƣờng Đại học Cơng nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh tận tình truyền đạt kiến thức tạo điều kiện thuận lợi cho em q trình học tập hồn thành luận v n tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Nguyễn Quốc Thắng tận tình hƣớng dẫn em hoàn thành luận v n Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến tập thể anh chị ạn è Công ty BV Pharma tạo giúp đỡ, hỗ trợ điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận v n Tác giả Võ Thị Kim Hoa i TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ Đề tài tập trung vào hai nội dung: Phân tích đồng thời cynarin chlorogenic acid thiết ị HPLC, cột Shimpack GISS C18 30 °C, đầu dị Photodiode Array đặt ƣớc sóng 325 nm cynarin 321 nm chlorogenic acid Pha động hỗn hợp MeOH 5% AcOH tỉ lệ 10:90; v/v, tốc độ dòng 1.5 mL/phút Tổng thời gian phân tích mẫu 25 phút Phƣơng trình tuyến tính, hệ số tƣơng quan cynarin khoảng nồng độ từ 31,5 đến 73,5 mg/L, y = 16736x + 31934, r2 = 0,9998 chlorogenic acid nồng độ từ 39,0 đến 91,0 mg/L y = 19094x + 43864, r2 = 0,9996 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng lần lƣợt 0,64 mg/L, 1,93 mg/L cynarin 0,30 mg/L, 0,90 mg/L chlorogenic acid Hiệu suất thu hồi từ 96,15% đến 100,73% cynarin từ 98.53% đến 103,14% chlorogenic acid Cynarin chlorogenic acid đƣợc trích ly từ Cynara scolymus L Bằng phƣơng pháp hỗ trợ ởi enzyme pectinase Ảnh hƣởng độc lập nồng độ enzyme, pH, nhiệt độ đến q trình trích ly đƣợc khảo sát để chọn khoảng điều kiện thích hợp để enzyme phát huy tác dụng Sau sử dụng mơ hình Box Wilson phần mềm Design Expert 11.0 để thiết kế thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng đồng thời yếu tố này, sử dụng để thiết kế Trong đó, sử dụng mẫu đối chứng khơng sử dụng enzyme để trích ly Hoạt tính kháng oxi hố cao trích đƣợc khảo sát ằng cách sử dụng 2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl ằng phản ứng khử sắt ii ABSTRACT In this research, the first, the method simultaneous determination of cynarin and chlorogenic acid were used HPLC, Shim-pack GISS C18 column, at a temperature of 30 °C, with Photodiode Array Detector set at 325 nm for cynarin and 321 nm for chlorogenic acid The mobile phase a mixture of MeOH and 5% AcOH solution in a ratio 10:90; v/v, set at a flow rate of 1.5 mL/min Total chromatographic analysis time per sample was approximately 25 The linear range were collected from 31.5 to 73.5 mg/L for cynarin with linear regression 16736x + 31934, correlation coefficient r2 = 0.9998 and from 39.0 to 91.0 mg/L for chlorogenic acid with linear regression 19094x + 43864, correlation coefficient r2 = 0.9996 The limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) were 0.64 mg/L and 1.93 mg/L for cynarin and 0.30 mg/L and 0.90 mg/L chlorogenic acid, respectively The recovery was from 96.15% to 100.73% for cynarin and from 98.53% to 103.14% for chlorogenic acid The second, cynarin and chlorogenic acid were extracted from Cynara scolymus L by enzyme-assisted method, which was Enzyme pectinase The effect of three independent variables in terms of enzyme concentration, pH, temperature was investigated to find a range of suitable conditions, which can help enzyme pectinase to activate well Then, the Box and Wilson design was applied to survey the simultaneous effect of these factors, using Design Expert 11.0 software for the experimental design and regression analysis of the experimental cynarin and chlorogenic obtained in the extract At the same time, the control sample was extracted similarly in that process, but enzyme pectinase was not added in sample The antioxidant activity of the extract were investigated by 2,2- diphenyl-1picrylhydrazyl radical scavenging capacity assay and potassium ferricyanide reducing power iii LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu ản thân Các kết nghiên cứu kết luận luận v n trung thực, không chép từ ất kỳ nguồn dƣới ất kỳ hình thức Việc tham khảo nguồn tài liệu (nếu có) đƣợc thực trích dẫn ghi nguồn tài liệu tham khảo quy định Tác giả Võ Thị Kim Hoa iv MỤC LỤC MỤC LỤC…… v DANH MỤC HÌNH ẢNH viii DANH MỤC BẢNG BI U x DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xi MỞ ĐẦU……… 1 Đặt vấn đề .1 Mục tiêu nghiên cứu Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu 3.2 Phạm vi nghiên cứu .2 Cách tiếp cận phƣơng pháp nghiên cứu .2 4.1 Thẩm định phƣơng pháp phân tích đồng thời hàm lƣợng cynarin acid chlorogenic từ cao actiso ằng thiết ị HPLC 4.2 Khảo sát điều kiện trích ly cao chứa cynarin acid chlorogenic từ actiso 4.3 Thử nghiệm hoạt tính kháng oxi hố cao trích .2 Ý ngh a thực tiễn đề tài .2 CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Cây actiso 1.1.1 Danh pháp phân loại khoa học 1.1.2 Mô tả thực vật 1.1.3 Khu vực phân ố, kỹ thuật trồng thu hoạch 1.1.4 Thành phần hóa học actiso .6 1.1.5 Công dụng actiso 1.2 Hoạt chất cynarin acid chlorogenic 1.2.1 Tính chất cơng dụng cynarin 1.2.2 Tính chất cơng dụng acid chlorogenic 10 1.2.3 Phƣơng pháp phân tích cynarin acid chlorogenic .12 1.2.4 Ứng dụng cynarin acid chlorogenic 13 1.3 Các phƣơng pháp trích ly 19 v 1.3.1 Phƣơng pháp ngấm kiệt 19 1.3.2 Phƣơng pháp chiết Soxhlet 20 1.3.3 Phƣơng pháp trích ly có hỗ trợ vi sóng (microwave-assisted extraction) 21 1.3.4 Phƣơng pháp trích ly có hỗ trợ siêu âm (ultrasound-assisted extraction) 22 1.3.5 Phƣơng pháp trích ly ằng lƣu chất siêu tới hạn (supercritical fluid extraction) 23 1.3.6 Phƣơng pháp trích ly có hỗ trợ enzyme (enzyme-assisted extraction) 25 1.4 Sơ lƣợc tình hình nghiên cứu 29 1.4.1 Một số nghiên cứu giới .29 1.4.2 Một số nghiên cứu nƣớc 31 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM 33 2.1 Thiết ị, dụng cụ hóa chất sử dụng nghiên cứu 33 2.1.1 Nguyên liệu 33 2.1.2 Thiết ị, dụng cụ 34 2.1.3 Hóa chất 36 2.1.4 Nơi làm thí nghiệm 37 2.2 Xác nhận phƣơng pháp phân tích đồng thời cynarin acid chlorogenic từ cao trích .38 2.2.1 Khảo sát khoảng tuyến tính phƣơng pháp phân tích 38 2.2.2 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng 38 2.2.3 Độ chụm 38 2.2.4 Hiệu suất thu hồi 39 2.2.5 Quy trình phân tích cynarin acid chlorogenic từ cao chiết 39 2.3 Khảo sát kỹ thuật chiết cynarin acid chlorogenic từ cao actiso .40 2.3.1 Kỹ thuật chiết ằng dung môi 41 2.3.2 Kỹ thuật chiết đại .41 2.4 Khảo sát điều kiện trích ly cynarin acid chlorogenic từ actiso ằng enzyme 42 2.4.1 Khảo sát ảnh hƣởng yếu tố 43 2.4.2 Ảnh hƣởng đồng thời yếu tố 44 2.5 Thử nghiệm hoạt tính kháng oxi hố cao trích .45 2.5.1 Khảo sát khả n ng loại gốc tự ằng phƣơng pháp DPPH 45 2.5.2 Khảo sát n ng lực khử 46 vi ... ằng enzyme Xuất phát từ lý trên, chọn đề tài ? ?Nghiên cứu tách, chiết cao actiso có hỗ trợ enzyme thẩm định phương pháp phân tích đồng thời cynarin acid chlorogenic từ actiso” Mục tiêu nghiên cứu. .. Phân Tích Mã chuyên ngành: 8440118 I TÊN ĐỀ TÀI: Nghiên cứu tách chiết cao actiso có hỗ trợ enzyme thẩm định phƣơng pháp phân tích đồng thời cynarin acid chlorogenic từ actiso NHIỆM VỤ VÀ... tiêu nghiên cứu Thẩm định quy trình phân tích đồng thời cynarin acid chlorogenic từ actiso Nghiên cứu kỹ thuật chiết cao actiso nhằm đạt hiệu cao trích ly cynarin acid chlorogenic Thử nghiệm