BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGƯYẺN TÁT THÀNH DƯƠNG THỊ NGỌC HÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CHÓNG OXY HÓA LÁ CÂY LÁ ĐẮNG VERNONIA AMYGDALINA Del ASTERACEAE TRÊN MÔ HÌNH DPPH KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP Dược[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGƯYẺN TÁT THÀNH DƯƠNG THỊ NGỌC HÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CHÓNG OXY HÓA LÁ CÂY LÁ ĐẮNG VERNONIA AMYGDALINA Del ASTERACEAE TRÊN MƠ HÌNH DPPH KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP Dược ĐẠI HỌC Tp HCM- 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH DƯƠNG THỊ NGỌC HÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CHĨNG OXY HĨA LÁ CÂY LÁ ĐẲNG VERNONIA AMYGDALINA Del ASTERACEAE TRÊN MƠ HÌNH DPPH Chuyên ngành: Sản xuất phát triển thuốc KHÓA LUẬN TĨT NGHIỆP Dược ĐẠI HỌC Hướng dần khoa học: Ds Bùi Hoàng Minh Tp HCM- 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu cùa Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Dương Thị Ngọc Hà 111 LỜI CẢM ƠN Khóa luận hoàn thành nhận giúp đờ nhiều nhiều tập thê nhãn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đen: Dược sĩ Bùi Hồng Minh, người đồng hành, tận tình hướng dan, truyền đạt cho tảng kiến thức vô quý báu, động viên giúp đỡ suốt trình thực khóa luận Tập thể giáng viên, kỳ thuật viên Bộ môn Dược liệu tạo điều kiện hỗ trợ tơi để tơi hồn thành tốt khóa luận Bộ mơn Hóa dược, Hóa phân tích, Bào chế giúp đỡ tôi, ho trợ thiết bị cần thiết đế có thê hồn thành tốt khóa luận Khoa Dược- Trường Đại học Nguyễn Tất Thành cho hội làm khóa luận Xin chân thành cảm ơn !!! iv MỤC LỤC MỤC LỤC V DANH MỤC BẢNG BIÉƯ viii DANH MỤC HÌNH ẢNH ix ĐẶT VÁN ĐÈ CHƯƠNG TỐNG QUAN 1.1 TỐNG QUAN VÈ THựC VẬT HỌC 1.1.1 Họ Asteracece 1.1.2 Chi Vernonia 1.1.3 Loài Vemonia amygdalina Delile 1.2 TỐNG QUAN VÈ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.3 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ 1.3.1 Khả chống oxy hóa 1.3.2 Điều trị viêm gan 10 1.3.3 Hạ đường huyết 11 1.3.4 Điều trị sốt rét 11 1.3.5 Khả kháng khuẩn 12 1.3.6 Khả kháng nấm 12 1.4 MỘT SỐ CÒNG DỤNG DÂN GIAN 13 1.5 CHÉPHÁM 13 1.6 GỐC Tự DO VÀ MỘT số MÔ HÌNH THỬ TÁC ĐỘNG CHỐNG OXY HĨA 14 1.6.1 Gốc tự 14 1.6.2 Một số mơ hình thử tác động chống oxy hóa 14 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúư 16 2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ TRANG THIẾT BỊ 16 2.1.1 Nguyên liệu 16 2.1.2 Trang thiết bị 16 2.1.3 Dung mơi, hóa chất 16 V 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúư 17 2.2.1 Chiết xuất 17 2.2.2 Kiểm tra độ tinh khiết 18 2.2.3 Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa mơ hình DPPH 19 CHƯƠNG 3.1 KÉT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 CHIẾT XUÁT VÀ KHẢO SÁT TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA CÁC CAO CỒN 21 3.1.1 Ket chiết xuất cao cồn 21 3.1.2 Ket khảo sát tác dụng chống oxy hóa mơ hình DPPH cao cồn 21 3.2 CHIẾT XUÁT VÀ KHẢO SÁT TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN 29 3.2.1 Ket chiết xuất phân đoạn 29 3.2.2 Ket khảo sát tác dụng chống oxy hóa mơ hình DPPH phân đoạn 29 3.3 PHÂN LẬP VÀ TINH CHẾ 36 3.3.1 V1 36 3.3.2 v2 38 3.4 THỬ TÁC DỤNG CHỐNG oxY HÓA CÁC CHẤT 40 3.4.1 Ket q khảo sát hoạt tính chống oxy hóa mơ hình DPPH V1 40 3.4.2 Ket khảo sát hoạt tính chống oxy hóa mơ hình DPPH v2 41 3.4.3 Chứng dương Vitamin c 42 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC VI DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIÉT TÁT ALP Alkaline Phosphatase ALT Alanin amino transferace AST Aspartate amino transferace BHA Butylated hydroxyanisol BHT Butyled hydroxytoluen CCỈ4 Tetraclomethan CHC13 Chloroform DMSO Dimethyl sufoxit DPPH 2,2-diphenyl-1 -picrylhydrazyl DTK Độ tinh khiet EtOAc Ethyl Acetat EtOH Ethanol HCOOH Acid Formic HPLC High Performance Liquid Chromatography HTCO Hoạt tính chống oxy hóa IC50 Nồng độ ức chế tối đa nửa MeOH Methanol SKLM Sắc ký lớp mỏng TT Thuốc thử vs Vanilin Sulfuric vii DANH MỤC BẢNG BIẾU • Bảng 3.1 Ket chiết xuất cao cồn 21 Bảng 3.2 Kết khảo sát nồng độ DMSO 22 Bảng 3.3 Thông số hoạt tính chống oxy hóa cao cồn 96% 23 Bảng 3.4 Thơng số hoạt tính chống oxy hóa cao cồn 70% 24 Bảng 3.5 Thơng số hoạt tính chống oxy hóa cao cồn 50% 25 Bảng 3.6 Thơng so hoạt tính chống oxy hóa cao cồn 25% 26 Bảng 3.7 Thông so hoạt tính chống oxy hóa cao nước .27 Bảng 3.8 Giá trị IC50 mầu cao cồn 28 Bảng 3.9 Ket phân đoạn 29 Bảng 3.10.Kết khảo sát DMSO 30 Bảng 3.11 Thông số hoạt tính chống oxy hóa phân đoạn CHCI3 31 Bảng 3.12.Thơng số hoạt tính chống oxy hóa phân đoạn EtOAc 32 Bảng 3.13.Thơng số hoạt tính chống oxy hóa phân đoạn MeOH 33 Bảng 3.14.Giá trị IC50 phân đoạn 34 Bảng 3.15.Ket phân đoạn thu từ sắc ký cột tải 35 Bảng 3.16.Thơng số hoạt tính chống oxy hóa V| 40 Bảng 3.17.Thông số hoạt tính chống oxy hóa cùa V2 41 Bảng 3.18.Thơng số hoạt tính chống oxy hóa chất tinh khiết Vitamin c 42 Bảng 3.19.Giá trị IC50 V1, V2 Vitamin c 43 viii DANH MỤC • HÌNH ẢNH Hình 3.1 Sắc ký đồ cao cồn EtOAc- MeOH- HCOOH (9:1:0,05) 22 Hình 3.2 Hoạt tínhdập tắt gốc tự DPPH cao cồn 96% 23 Hình 3.3 Hoạt tínhdập tắt gốc tự DPPH cao cồn 70% 24 Hình 3.4 Hoạt tínhdập tắt gốc tự DPPH cao cồn 50% 25 Hình 3.5 Hoạt tínhdập tắt gốc tự DPPH cao cồn 25% 26 Hình 3.6 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH cao nước 27 Hình 3.7 Giá trị IC50 hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH cao cồn 28 Hình 3.8 Sắc ký đồ phân đoạn EtOAc-MeOH-HCOOH (8:2:0,05) 30 Hình 3.9 Hoạt tính dập tắt gốc tự phân đoạn CHCh 31 Hình 3.10.Hoạt tính dập tắt gốc tự phân đoạn EtOAc 32 Hình 3.11 Hoạt tính dập tắt gốc tự phân đoạn MeOH 33 Hình 3.12.Giá trị IC50 hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH cùa phân đoạn 34 Hình 3.13.Sắc ký đồ V| 36 Hình 3.14.Sắc ký đồ thử tinh khiết HPLC chất V] 37 Hình 3.15.Sắc ký đồ V2 38 Hình 3.16.Sắc ký đồ thừ tinh khiết HPLC chất V2 39 Hình 3.17.Hoạt tính dập tắt gốc tự V1 40 Hình 3.18.Hoạt tính dập tắt gốc tự V2 41 Hình 3.19.Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH chất tinh khiết Vitamin c 42 Hình 3.20.Giá trị IC50 hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH V1, V2 Vitamin C 43 ix Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - Năm học 2013-2018 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CHĨNG OXY HĨA LÁ CÂY LÁ ĐẮNG VERNONIA AMYGDALINA DEL ASTERACEAE TRÊN MÔ HÌNH DPPH Dương Thị Ngọc Hà Hướng dẫn khoa học: DS Bùi Hồng Minh Nội dung tóm tắt Mở đầu: Lá (Vernonia amygdalina Del.) sử dụng rộng rãi Châu Phi điều trị bệnh viêm gan, đái tháo đường, sốt rét, Đã có nhiêu nghiên cứu giới cho thấy tác dụng dược lý đáng q cùa lồi Do đó, đề tài tiến hành khảo sát hoạt tính chống oxy hóa Lá Đang Việt Nam {Vernonia amygdalina Del Asteraceae) mơ hình DPPH cao cồn có độ khác nhau, phân đoạn chất phân lập ĐỐI tượng nghiên cứu: Cao nước, cao (25%, 50%, 70%, 96%), phân đoạn chất phân lập Phương pháp nghiên cứu: Định danh nguyên liệu thông qua so sánh với tài liệu chuyên ngành Đánh giá tác dụng chống oxy hóa mơ hình DPPH (bán mỏng, quang phổ) Kết quả: Cao 96% (IC50= 72,82 pg/ml) có khả chong oxy hóa mạnh nhất, sau cao cồn 50% (ICso= 163,73 pg/ml), cao cồn 70% (ICso= 217,80 pg/ml), cao cồn 25% (ICso= 241,86 pg/ml) cao nước (ICso= 522,45 pg/ml) có khả chong oxy hóa Cao 96% phân tách thành phân đoạn có độ phân cực khác nhau, phân đoạn EtOAc tác dụng mạnh (ICso= 49,9 pg/ml), tiếp phân đoạn MeOH (ICso= 130,49 pg/ml) phân đoạn CHCh (ICso= 561,39 pg/ml) có khả chống oxy hóa Phân đoạn EtOAc tiên hành phân tách bang sắc ký cột nhanh két hợp kết tinh phân đoạn thu V1 (ICỉ0=5,8 pM) V2 (ICso=4,8 pM) có tác dụng chống oxy hóa mơ hình DPPH cao Vitamin c (ICso=17,l pM) Kết luận: Cao 96% (ICso=72,82 pg/ml) cho tác dụng mạnh Cao cồn 96% phân tách thành phân đoạn: CHCh, EtOAc H2O; phân đoạn EtOAc có tác dụng mạnh (ICso=49,9 pg/ml) Phân đoạn EtOAc phân tách bàng kỳ thuật sắc ký cột kết hợp với ket tinh phân đoạn V1 (Cynarosid) V2 (Luteolin) Cà hai chất cho két quà hoạt tính chống oxy hóa mạnh vitamin c với IC50 5,8 pM 4,8 pM Từ khóa: Vernonia amygdalina, DPPH, chổng oxy hóa, flavonoid, luteolin ... 3.4 THỬ TÁC DỤNG CHỐNG oxY HÓA CÁC CHẤT 40 3.4.1 Ket quà khảo sát hoạt tính chống oxy hóa mơ hình DPPH V1 40 3.4.2 Ket khảo sát hoạt tính chống oxy hóa mơ hình DPPH v2 41 3.4.3 Chứng dương... hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH V1, V2 Vitamin C 43 ix Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - Năm học 2013-2018 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CHĨNG OXY HĨA LÁ CÂY LÁ ĐẮNG VERNONIA AMYGDALINA DEL ASTERACEAE TRÊN... khỏe Chính đề tài thực nhằm mục đích ? ?Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa Lá Đắng mơ hình DPPH? ?? với mục tiêu cụ the khảo sát tác dụng chong oxy mơ hình DPPH trên: - Cao cồn có nồng độ khác cao nước