Tinh chế IgG Thỏ kháng đặc hiệu IgG người và cộng hợp HRP.pdf

ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP TINH CHẾ IgG THỎ KHÁNG ĐẶC HIỆU IgG NGƯỜI VÀ CỘNG HỢP HRP Sinh viên thực : Lê Nhật Hòa MSSV : 1311519240 GVHD : ThS Thái Thị Tuyết Trinh TP Hồ Chí Minh, năm 2019 ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TÓT NGHIỆP TINH CHẾ IgG THỎ KHÁNG ĐẶC HIỆU IgG NGƯỜI VÀ CỘNG HỢP HRP Sinh viên thực : Lê Nhật Hòa Mà số sinh viên : 1311519240 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giảng viên hướng dẫn : ThS Thái Thị Tuyết Trinh TP Hồ Chí Minh, năm 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYÊN TÁT THÀNH KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HỊA XẰ HỊI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc - oOo - - NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TĨT NGHIỆP Họ tên: Lê Nhật Hịa MSSV: 1311519240 Lớp: 14DSH02 Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Đầu đề luận văn: Tinh chế IgG thỏ kháng đặc hiệu IgG người cộng hợp HRP Mục tiêu - Tinh chế IgG thỏ có độ tinh cao - Tinh chế IgG thỏ đặc hiệu IgG người - Cộng hợp thành công IgG thở đặc hiệu IgG người với HRP Nội dung: - Tinh chế IgG thỏ với độ tinh cao - Tạo cột sắc ký lực IgG người - Tinh chế IgG thỏ đặc hiệu IgG người kiêm tra hiệu trình tinh chế - Cộng hợp HRP với IgG thỏ đặc hiệu IgG người hiệu IgG thở đặc hiệu IgG người - HRP Thời gian thực hiện: tháng 02/2019 đến tháng 8/2019 Người hướng dần chính: ThS Thái Thị Tuyết Trinh Nội dung yêu cầu KLTN thông qua Bộ môn TP HCM, ngày tháng năm20 Bộ MÔN (Ký ghi rõ họ tên) CÁN Bộ HƯỚNG DẪN (Ký ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới Thái Thị Tuyết Trinh tận tình hướng dần bảo cho em suốt trình nghiên cứu thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn Khoa Công nghệ Sinh học, trường Đại Học Nguyễn Tất Thành tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập thực đề tài tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô khoa Công nghệ Sinh học tận tình giảng dạy, trang bị cho em kiến thức quý báu năm học vừa qua Con xin chân thành cảm ơn cha mẹ người sinh con, dưỡng dục động viên ùng hộ vật chất lần tinh thần đồng hành suốt thời gian qua Em xin cảm ơn quan tâm giúp đỡ ủng hộ anh chị bạn bè trình thực khóa đề tài Mặc dù cố gắng hồn thành khóa luận phạm vi khả cho phép giới hạn kiến thức khả lý luận thân cịn nhiều thiếu sót hạn chế, nên chắn không tránh khỏi thiếu sót Em kính mong nhận thơng cảm, dẫn đóng góp thầy giáo đe khóa luận em hồn thiện tốt Khoa Công nghệ Sinh học Trường Đại Học Nguyền Tất Thành MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii TÓM TẮT V SUMMARY vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vii DANH MỤC BẢNG BIẾU viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ix ĐẶT VẤN ĐỀ X CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu kháng thề 1.1.1 Cấu tạo cùa kháng the 1.1.2 Phân tử IgG thể 1.1.3 ứng dụng IgG chấn đoán 1.2 Kháng thể sơ cấp kháng the thứ cấp 1.2.1 Kháng sơ cấp 1.2.2 Kháng thể thứ cấp 1.2.3 Kháng the đơn dòng đa dòng 1.3 Enzyme horseradish peroxidase (HRP) 1.4 Tình hình nghiên cứu nước giới .8 1.4.1 Trong nước 1.4.2 Trên giới CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN củu 10 ii 2.1 Nơi thực 10 2.2 Nội dung nghiên cứu 10 2.3 Hóa chất trang thiết bị 10 2.3.1 Vật liệu hóa chất 10 2.3.2 Trang thiết bị 13 2.4 Phương pháp nghiên cứu 14 2.4.1 Phương pháp Tủa huyết với muối Amonium Sulphate 14 2.4.2 Phương pháp Thẩm tích 15 2.4.3 Phương pháp định lượng protein máy quang phố với bước sóng 280nm 260nm 16 2.4.4 Tinh chế IgG cột sắc ký lực (SKAL) protein G 17 2.4.5 Điện di SDS-PAGE 18 2.4.6 Phương pháp tạo cột sắc ký lực IgG người (hlgG) 19 2.4.7 Phương pháp tinh chế IgG thỏ đặc hiệu IgG người (R anti-HIgG đặc hiệu) qua cột protein hlgG 21 2.4.8 Phương pháp Dot Blot 22 2.4.9 Cộng hợp HRP với RlgG đặc hiệu hlgG 22 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Tinh chế IgG thỏ kháng IgG người tổng số (R anti-HIgG) 24 3.1.1 Tủa huyết với amonium sulphate 45% 24 3.1.2 Tinh chế rlgG có độ tinh cao cột sắc ký lực protein G 25 3.3 Tạo cột sắc ký lực hlgG 27 3.4 Tinh chế IgG thỏ đặc hiệu IgG người (R anti-HIgG đặc hiệu) cột SKAL hlgG 28 3.5 Kiếm tra trình tinh chế qua cột SKAL hlgG 29 iii 3.6 Kết R anti-HIgG đặc hiệu cộng hợp HRP 30 KỂT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO 32 PHỤ LỤC 33 IV TÓM TẤT Đe tài: “Tinh chế IgG thỏ kháng đặc hiệu IgG người cộng hợp HRP.” thực từ tháng 2/2019 đen tháng 8/2019 phịng thí nghiệm Hóa sinh - Sinh dược - Ký Sinh Trùng phòng Ung thư - Te bào gốc, môn Công nghệ Sinh học Y dược Khoa Công nghệ Sinh học trường Đại Học Nguyền Tất Thành với mục tiêu Tinh chế IgG thỏ có độ tinh cao, tinh chế IgG thỏ đặc hiệu IgG người, cộng họp thành công IgG thỏ đặc hiệu IgG người với HRP Đe tài có bốn nội dung: Tinh che IgG thỏ với độ tinh cao, tạo cột sắc ký lực IgG người, tinh chế IgG thỏ đặc hiệu IgG người, cộng hợp HRP với IgG thỏ đặc hiệu IgG người hiệu IgG thỏ đặc hiệu IgG người cộng hợp HRP Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: Tinh chế thành cơng IgG thỏ có độ tinh cao Đà tạo thành công cột sắc ký lực Tinh chế thành công IgG thỏ đặc hiệu IgG người Cộng hợp thành công HRP lên IgG thỏ đặc hiệu IgG người V SUMMARY The topic: "Purifying IgG-specific rabbit IgG and HRP conjugation" is carried out from February 2019 to August 2019 at the biochemical laboratory - biochemistry parasites and cancer prevention - international The original stem cells, the biotechnology department of Nguyen Tat University's biotechnology and pharmacy into the goal Purify rabbit IgG with high purity, Refine IgG-specific rabbit IgG, Successful combination of IgG-specific rabbit IgG with HRP The topic has four contents: Purify rabbit IgG with high purity, create human IgG affinity chromatography column, refine IgG-specific rabbit IgG, HRP conjugate with IgG-specific rabbit IgG and IgG-specific rabbit IgG effect - HRP Results achieved after months of research: Successfully refine rabbit IgG with high purity Successfully created the affinity column Successfully refined IgG-specific rabbit IgG Successful combination of HRP on IgG-specific rabbit IgG VI DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cấu trúc phân tử kháng thể IgG Hình 2.1 Sơ đồ thí nghiệm 14 Hình 3.1 Ket điện di gel poly-acrylamaide 12,5% sau tủa amonium sulphate bão hòa 45% 24 Hình 3.2 Sắc ký đồ qua cột protein G peak protein không bám cột, peak protein bám cột 26 Hình 3.3 Kết tạo cột sắc ký lực HlgG 27 Hình 3.4 Sắc ký đồ qua cột HIgG peak không gắn cột, peak gắn cột 28 Hình 3.5 Kết kiềm tra hoạt tính IgG thỏ đặc hiệu HlgG 29 Hình 3.6 Kết Dot Blot cộng hợp HRP 30 vii ... tài ? ?Tinh chế IgG thỏ kháng đặc hiệu IgG người cộng hợp HRP” Mục tiêu đề tài - Tinh chế IgG thỏ có độ tinh cao - Tinh chế IgG thỏ đặc hiệu IgG người - Cộng hợp thành công IgG thỏ đặc hiệu IgG người. .. luận văn: Tinh chế IgG thỏ kháng đặc hiệu IgG người cộng hợp HRP Mục tiêu - Tinh chế IgG thỏ có độ tinh cao - Tinh chế IgG thỏ đặc hiệu IgG người - Cộng hợp thành công IgG thở đặc hiệu IgG người. .. ký lực IgG người, tinh chế IgG thỏ đặc hiệu IgG người, cộng hợp HRP với IgG thỏ đặc hiệu IgG người hiệu IgG thỏ đặc hiệu IgG người cộng hợp HRP Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: Tinh chế thành