Tinh chế IgG Chuột kháng đặc hiệu IgG người và cộng hợp HRP.pdf

ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP TINH CHÉ IgG CHUỘT KHÁNG ĐẬC HIỆU IgG NGƯỜI VÀ CỘNG HỢP HRP Sinh viên thực : Huỳnh Phước An MSSV : 1411534870 GVHD : ThS.Thái Thị Tuyết Trinh TP HCM, 2019 ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP TINH CHÉ IgG CHUỘT KHÁNG ĐẶC HIỆU IgG NGƯỜI VÀ CỘNG HỢP HRP Sinh viên thực : Huỳnh Phước An Mã số sinh viên : 1411534870 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giảng viên hướng dẫn: ThS.Thái Thị Tuyết Trinh TP HCM, 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYÊN TÁT THÀNH CỘNG HỊA XÀ HƠI CHÙ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc KHOA CÒNG NGHỆ SINH HỌC - -oOo - NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP Họ tên: Huỳnh Phước An MSSV: 1411534870 Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Lớp: 14DSH02 Đầu đề luận văn: Tinh chế IgG chuột kháng đặc hiệu IgG người cộng họp HRP Mục tiêu: - Tinh chế IgG chuột có độ tinh cao - Tinh chế IgG chuột đặc hiệu IgG người - Cộng hợp thành công IgG chuột đặc hiệu IgG người với HRP Nội dung: - Tinh chế IgG chuột với độ tinh cao - Tạo cột sắc ký lực IgG người - Tinh chế IgG chuột đặc hiệu IgG người - Cộng họp HRP với IgG chuột đặc hiệu IgG người hiệu IgG chuột đặc hiệu IgG người -HRP Thời gian thực hiện: tháng 02/2019 đến tháng 8/2019 Người hướng dần chính: ThS Thái Thị Tuyết Trinh Nội dung yêu cầu KLTN thông qua Bộ môn TP HCM, ngày thảng năm20 Bộ MÔN CÁN Bộ HƯỚNG DẲN (Ký ghi rõ họ tên) (Ký ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Đe thực hồn thành tốt đề tài khóa luận tốt nghiệp này, nhận hồ trợ, giúp đỡ quan tâm nhiều người Với lòng biết ơn sâu sắc tình cảm chân thành, trước hết, xin cảm ơn quý Thầy, Cô Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Nguyễn Tất Thành truyền đạt kiến thức quý báu thời gian học tập Đặc biệt, tơi xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến cô Thái Thị Tuyết Trinh anh, chị phịng Sinh hóa - Sinh dược - Ký sinh trùng, môn Công nghệ Sinh học Y dược, khoa Cơng nghệ Sinh học tận tình giúp đỡ, động viên lúc khó khăn trình thực đề tài Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn đến ba, mẹ, chị ln u thương, chăm sóc động viên để thực hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Huỳnh Phước An Khoa Công nghệ Sinh học Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii TÓM TẮT V SUMMARY vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vii DANH MỤC BẢNG BIẾU viii DANH MỤC CHƯ VIẾT TẮT ix ĐẶT VẤN ĐỀ X CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tong quan 1.1.1 Tổng quan kháng thể 1.1.2 Kháng thể IgG 1.1.3 Kháng thể thứ cấp 1.1.4 Horseradish peroxidase (HRP) 1.1.5 Sản xuất kháng the thứ cấp 1.2 Tình hình nghiên cứu CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 2.1 Noi thực 2.2 Hóa chất trang thiết bị 2.2.1 Hóa chất 2.2.2 Trang thiết bị 12 2.3 Phương pháp nghiên cứu 13 2.3.1 Tinh chế IgG chuột đặc hiệu IgG người 13 iii 2.3.2 Cộng hợp IgG chuột đặc hiệu IgG người với HRP 21 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 Thu nhận IgG chuột (mlgG) tổng số phương pháp tủa Amonium sulphate 23 3.2 Tinh chế IgG chuột kháng IgG người (M anti-HlgG) cột SKAL protein G 24 3.3 Kết tạo cột hlgG 25 3.3.1 Kết cộng hợp hlgG gel CNBr 25 3.3.2 Kiểm tra thông số cột 26 3.4 Tinh chế M anti-HIgG đặc hiệu qua cột SKAL hlgG 27 3.5 Kiểm tra hiệu trình tinh chế cột SKAL hlgG 27 3.6 Ket kiểm tra trình cộng hợp HRP với M anti-HIgG 29 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO 31 PHỤ LỤC 33 IV TÓM TẤT Đe tài: “Tinh chế IgG chuột kháng đặc hiệu IgG người cộng hợp HRP” thực từ tháng 8/2018 đến tháng 8/2019 Phịng thí nghiệm Sinh hóa - Sinh dược - Ký sinh trùng thuộc khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Nguyễn Tất Thành, với mục tiêu tinh chế kháng thể IgG chuột đặc hiệu IgG người cộng hợp HRP, làm tiền đe cho quy trình sản xuất kháng thể đặc hiệu dùng sản phàm chấn đốn bệnh người Đe tài có nội dung: Tinh chế IgG chuột tong so, tạo cốt sắc ký lực IgG người, tinh chế IgG chuột đặc hiệu IgG người cộng hợp enzyme HRP với IgG chuột đặc hiệu IgG người Ket đạt sau: • Tinh chế IgG chuột tong so độ tinh cao • Tinh chế thành cơng IgG chuột kháng IgG người đặc hiệu với độ tinh • Công hợp thành công IgG chuột kháng IgG người đặc hiệu với enzyme HRP V SUMMARY Subject: "Refining specific IgG antibody for IgG antibodies, HRP conjugate" was carried out from August 2018 to August 2019 at Biochemistry Laboratory Pharmacology - Parasitology of Technology Department Biology and Environment, Nguyen Tat Thanh University, with the goal of purifying IgG-specific mouse IgG antibodies HRP conjugate, is a prerequisite for specific antibody production processes used in diagnostic products, disease in humans The subject has contents: • Refining specific mouse IgG antibodies for IgG antibodies • Combined enzyme HRP • Check purity and post-refmed IgG antibody activity • Evaluate effectiveness after conjugation Results of the research: • Successful purification of mouse IgG antibodies against IgG with purity> 95% • Successfully combining anti-IgG mouse IgG antibodies specific by HRP enzyme vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Kháng thể IgG Hình 2.1 Sơ đồ tinh chế IgG chuột kháng IgG người đặc hiệu cộng hợp HRP Hình 3.1 Ket điện di gel poly-acrylamaide 12,5% sau tủa Amonium Sulphate bão hòa 45% 23 Hình 3.2 Sắc ký đồ M anti-HIgG cột SKAL protein G 25 Hình 3.3 Kết tạo cột sắc ký lực HlgG 26 Hình 3.4 Sắc ký đồ tinh chế M anti-HIgG đặc hiệu qua cột SKAL hlgG 27 Hình 3.5 Kiểm tra tinh chế M anti-HIgG đặc hiệu qua cột SKAL hlgG 28 Hình 3.6 Kết kiểm tra trình cộng hợp HRP .29 vii DANH MỤC BẢNG BIẾU Bảng 2.1 Thành phần gel điện di SDS - PAGE 11 Bảng 2.2 Các thiết bị sử dụng đề tài 12 Bảng 3.1 Tinh chế mlgG kháng người cột SKAL protein G 25 Bảng 3.2 Ket cộng hợp hlgG gel CNBr 26 Bảng 3.3 Ket thông số kiếm tra cột HlgG 26 Bảng 3.4 Tinh chế M anti-HIgG đặc hiệu qua cột SKAL hlgG 27 viii ... văn: Tinh chế IgG chuột kháng đặc hiệu IgG người cộng họp HRP Mục tiêu: - Tinh chế IgG chuột có độ tinh cao - Tinh chế IgG chuột đặc hiệu IgG người - Cộng hợp thành công IgG chuột đặc hiệu IgG người. .. dung: - Tinh chế IgG chuột với độ tinh cao - Tạo cột sắc ký lực IgG người - Tinh chế IgG chuột đặc hiệu IgG người - Cộng họp HRP với IgG chuột đặc hiệu IgG người hiệu IgG chuột đặc hiệu IgG người. .. lực IgG người, tinh chế IgG chuột đặc hiệu IgG người cộng hợp enzyme HRP với IgG chuột đặc hiệu IgG người Ket đạt sau: • Tinh chế IgG chuột tong so độ tinh cao • Tinh chế thành cơng IgG chuột kháng