Nghiên cứu nhân sinh khối hệ sợi nấm đông cô (Lentinula edodes) trên môi trường lỏng và đánh giá hoạt tính kháng khuẩn từ dịch chiết sinh khối hệ sợi nấm đông cô.pdf

ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP NGHIÊN CỨU NHÂN SINH KHỐI HỆ SỢI NẤM ĐÔNG CÔ {Lentinula edodes) TRÊN MƠI TRƯỜNG LỎNG VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN TỪ DỊCH CHIẾT SINH KHỐI HỆ SOI NẤM ĐÔNG CƠ Sinh viên thực : Nguyễn Phương Hồi Bảo MSSV : 1411530966 GVHD : TS Đồ Tiến Vinh ThS Mai Thị Phương Hoa TP HCM, 2019 ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP NGHIÊN CỨU NHÂN SINH KHỐI HỆ SỢI NẤM ĐÔNG CÔ {Lentinula edodes) TRÊN MÔI TRƯỜNG LỎNG VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN TỪ DỊCH CHIẾT SINH KHỐI HỆ SOI NẤM ĐÔNG CÔ Sinh viên thực :Nguyễn Phương Hoài Bảo Mã số sinh viên : 14115530966 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giảng viên hướng dẫn : ThS Đồ Tiến Vinh ThS Mai Thị Phương Hoa TP HCM, 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYÊN TÁT THÀNH KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HỊA XẢ HÔI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc - - oOo - NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP Họ tên: Nguyền Phương Hồi Bảo MSSV: 1411530966 Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Lóp: 14DSH02 Đầu đề luận văn: Nghiên cứu nhân sinh khối hệ sợi nấm Đông Cô (Lentinula edodes) mơi trường lỏng đánh giá hoạt tính kháng khuẩn từ dịch chiết sinh khối hệ sợi nấm Đông Cô (Lentinula edodes) Mục tiêu Xác định thành phần khống nong độ pH mơi trường thích hợp đe nuôi cấy hệ sợi nấm Đông Cô (Lentinula edodes) môi trường lỏng Nội dung: - Phân lập khảo sát ảnh hưởng số loại môi trường đến q trình ni cấy hệ sợi tơ nấm Đông Cô - Khảo sát ảnh hưởng thành phần khống đen q trình ni cấy sợi nấm Đơng Cô môi trường lỏng - Khảo sát ảnh hưởng pH môi trường đến tốc độ tăng trưởng cùa hệ sợi nấm Đông Cô môi trường lỏng Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng mầu nấm Đơng Cơ ban đầu đến q trình ni cấy hệ sợi nấm Đông Cô môi trường long - Đánh giá khảng khuẩn dịch chiết hệ sợi nấm Đông Cô Thời gian thực hiện: tháng 02/2019 đến tháng 8/2019 Người hướng dần chính: TS Đồ Tiến Vinh Người hướng dần phụ: ThS Mai Thị Phương Hoa Nội dung yêu cầu KLTN thông qua Bộ môn TP HCM, ngày tháng năm 20 Bộ MÔN CÁN Bộ HƯỚNG DẢN ThS Đồ Tiến Vinh LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn trường Đại học Nguyền Tất Thành, suốt thời gian học tập đây, nhận quan tâm, bảo tận đội ngũ giảng viên Ban Giám Hiệu nhà trường Quý thầy cô khoa Cơng nghệ sinh học, gia đình tập thể bạn sinh viên khoa Công nghệ sinh học Hiên tại, sau hồn thành Khóa luận tốt nghiệp mình, với biết ơn với trân trọng xin chân thành cảm ơn đen: ThS ĐỒ Tiến Vinh ThS Mai Thị Phương Hoa phịng ni cấy mô te bào thực vật Khoa công nghệ sinh học trường Đại học Nguyễn Tất Thành, người thầy người tận tâm dìu dắt, hướng dần, tận tâm bảo suốt khoảng thời gian học tập thực đề tài Xin chân thành gửi lời cảm ơn đến với gia đinh bạn bè tôi, ủng hộ động viên, giúp đờ, tạo điều kiện tốt giúp đỡ suốt q trình thực đề tài, để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Bên cạnh đó, phần kiến thức kinh nghiệm hạn chế Nên nội dung báo cáo nhiều hạn chế thiếu sót, tơi mong nhận phê bình, nhận xét Quý thầy cô tất bạn bè lớp để nâng cao bổ sung kiến thức cùa thân Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn kính chúc Q thầy cơ, đặt biệt ThS Đồ Tiến Vinh ThS Mai Thị Phương Hoa dồi sức khỏe gặt hái nhiều thành cơng cơng viêc Nguyễn Phương Hồi Bảo Khoa Công nghệ Sinh học Trường Đại Học Nguyền Tất Thành MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii TÓM TẮT iv SUMMARY V DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC BẢNG BIẾU vii DANH MỤC CHỮ VIỂT TẮT viii ĐẶT VẤN ĐỀ ix Tính cấp thiết đề tài ix Mục tiêu đề tài X CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu nấm Đông Cô 1.1.1 Phân bố sinh thái 1.1.2 Đặc điêm thực vật 1.1.3 Thành phần hóa học 1.2 Một số cơng trình nghiên cứu nuớc 1.2.1 Cơng trình nghiên cứu nước 1.2.2 Công trình nghiên cứu ngồi nước CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 2.1 Nơi thực 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Thí nghiệm 1: Phân lập khảo sát ảnh hưởng cùa số loại mơi trường đen q trình nuôi cấy hệ sợi tơ nấm ii 2.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng thành phần khống đến q trình ni cấy sợi nấm Đơng Cơ môi trường lỏng 2.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hường nồng độ pH môi trường đến tốc độ tăng trưởng hệ sợi nấm Đông Cô môi trường lỏng 2.3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng cùa hàm lượng mẫu nấm Đông Cô ban đầu đến q trình ni cấy hệ sợi nấm Đơng Cơ môi trường lỏng 2.3.5 Đánh giá kháng khuẩn dịch chiết hệ sợi nấm Đông Cô 10 2.4 Thiết kế phương pháp thu nhập số liệu 10 2.4.1 Thiết kế thí nghiệm 10 2.4.2 Phương pháp thu nhập số liệu 11 CHUÔNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 12 3.1 Ket phân lập ảnh hưởng cùa số loại môi trường thạch đến q trình ni cấy hệ sợi tơ nấm 12 3.2 Ket ảnh hưởng cùa thành phần khống đến q trình ni cấy sợi nấm Đơng Cơ môi trường lỏng 16 3.3 Xác định ảnh hưởng nồng độ pHmơi trường đếnq trình ni cấy sợi nấm Đông Cô môi trường lỏng 18 3.4 Xác định ảnh hưởng lượng mẫu nấmĐông ban đầu đến qtrình ni cấy sợi nấm Đơng Cô môi trường lỏng 19 3.5 Xác định kháng khuẩn dịch chiết hệ sợi nấm Đông cô nuôi môi trường lỏng 21 3.4.1 Chiết xuất dịch chiết nấm Đông cô 21 3.4.2 Xác định tính kháng khuẩn từ dịch chiết nấm Đông cô 22 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 25 PHỤ LỤC 26 iii TÓM TẤT Đe tài: “Nghiên cứu nhân sinh khối hệ sọi nấm Đông Cô (Lentinula edodes) mơi trường lỏng đánh giá hoạt tính kháng khuẩn từ dịch chiết sinh khối hệ sọi nấm Đông Cô (Lentìnula edodes)”, thực từ tháng 01 năm 2019 đến tháng 08 năm 2019 phịng thí nghiệm Cơng nghệ sinh học Thực vật khoa Công Nghệ Sinh Học, Trường Đại học Nguyền Tất Thành Mục tiêu đề tài xác định phành phần khoáng, nồng độ pH thích họp đe ni cấy hệ sợi nấm Đông Cô (Lentinula edodes) môi trường lỏng hoạt tính kháng khuẩn từ dịch chiết nấm Đơng Cơ Đe tài gồm có năm nội dung khảo sát: Phân lập khảo sát môi trường thạch đe nuôi cấy sợi tơ nấm Đơng Cơ; Ảnh hưởng thành phần khống đến q trình ni cấy mơi trường lỏng; Nồng độ pH môi trường ảnh hưởng đến nuôi cấy sợi nấm; Ảnh hưởng hàm lượng mẫu nấm Đông Cô ban đầu đến phát triển sợi nấm; Và cuối hoạt tính kháng khuấn dịch chiết hệ sợi nấm Ket đạt tháng nghiên cứu: - Mơi trường thạch thích hợp để ni hệ sợi nấm Đông Cô PGA + dịch chiết cà rốt - Mơi trường lỏng thích hợp để ni cấy hệ sợi nấm Đông Cô PG + dịch chiết cà rốt - pH để thích họp ni cấy hệ sợi nấm Đông Cô - Lượng mầu ban đầu thích hợp ni cấy hệ sợi nấm Đơng Cơ cm2 thạch chứa sinh khối hệ sợi/40ml môi trường - Dịch chiết sinh khối hệ sợi nấm Đông Cô có khả kháng khuẩn Streptococcus pyogenes iv SUMMARY Thesis:” Research about doubling Yarn type biomass of Shiitake in liquidated environment and evaluating antibacterial feature from extraction of yarn-type shiitake biomass (Lentinula edodes)”, which conducted from January to August of 2019 in biotechnology and plant Lab, Department of High tech agriculture and biometric, Nguyen Tat Thanh University The purpose of this study is determine the suitable mineral composition and pH concentration to grow yam-type shiitake in liquidated environment and antibacterial extraction from shiitake The topic including surveys which are affection of mineral composition to growing process in liquidated environment, pH concentration affect growing process of shiitake, affection of initial shiitake sample to the growing of shiitake and lastly, antibacterial feature of shiitake extraction After month conducting the research, the results are listed below: - The agar medium suitable for growing Lentinula edodes mycelium is PGA + 10% of carrot extract - Suitable liquid medium for culturing Lentinula edodes mushroom mycelium is PG + carrot extract - pH to suit the culture of Lentinula edodes mushroom mycelium is - The amount of initial sample suitable for growing Lentinula edodes mycelium is cm2 of fibrous biomass/40ml of medium - Lentinula edodes mushroom mycelium Streptococcus pyogenes N extract has antibacterial DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Nấm Đơng Cô Hình 2.1 Sơ đồ tổng quan nghiên cứu Hình 3.1 Phân lập nấm Đơng Cơ môi trường PGA: Mầu ban đầu (A); Mầu sau ngày (B); Mầu sau ngày (C); Mầu sau 12 ngày (D) 12 Hình 3.2 Nấm Đông Cô sau ngày nuôi cấy môi trường: Môi Trường PGA (A); Môi trường PGA + 10% Nước dừa (B); Môi trường PGA + 100 g/L dịch chiết Cà rốt (C); Môi trường PGA + g/L Pepton (D) 13 Hình 3.3 Nấm Đông Cô sau ngày nuôi cấy môi trường A (Môi Trường PGA); B (Môi trường PGA + 10% Nước dừa); c (Môi trường PGA + 100 g/L dịch chiết Cà rốt); D (Môi trường PGA + g/L Pepton) 14 Hình 3.4 Hệ sinh khối sợi nấm Đông cô môi trường lỏng môi trường Môi Trường PG (A); Môi trường PG + 10% Nước dừa (B); Môi trường PG + 100 g/L dịch chiết Cà rốt (C); Môi trường PG + 3g/L Pepton (D) 17 Hình 3.5 Hệ sợi nấm Đông cô môi trường lỏng PG + dịch chiết cà rốt với nồng độ pH = 19 Hình 3.6 Lọc thu sinh khối hệ sợi nấm Đông cô môi trường lỏng PG + dịch chiết cà rốt với nồng độ pH = 21 Hình 3.7 Chiết xuất dịch chiết nấm Đông cô từ hệ sợi nấm Đông cô A (hệ tơ nấm Đông cô ngâm dầm môi trường enthanol); B (cao thô nấm Đông cô sau quay); c (dịch chiết Đơng pha lỗng) 22 Hình 3.8 Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm Đông Cô: A B ( Đĩa đối chứng với: A đìa mơi trường vi khuan; B mơi trường vi khuấn có enthanol); c ( Mơi trường vi khuẩn có dịch chiết nấm Đông Cô) 23 VI ... nghệ sinh học Lóp: 14DSH02 Đầu đề luận văn: Nghiên cứu nhân sinh khối hệ sợi nấm Đông Cô (Lentinula edodes) môi trường lỏng đánh giá hoạt tính kháng khuẩn từ dịch chiết sinh khối hệ sợi nấm Đông. .. NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP NGHIÊN CỨU NHÂN SINH KHỐI HỆ SỢI NẤM ĐÔNG CÔ {Lentinula edodes) TRÊN MƠI TRƯỜNG LỎNG VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN TỪ DỊCH CHIẾT SINH KHỐI HỆ SOI NẤM ĐÔNG... 21 Hình 3.7 Chiết xuất dịch chiết nấm Đông cô từ hệ sợi nấm Đông cô A (hệ tơ nấm Đông cô ngâm dầm môi trường enthanol); B (cao thô nấm Đông cô sau cô quay); c (dịch chiết Đông cô pha lỗng)