Phân tích thành phần axit amin và vitamin e trong nấm linh chi (ganoderma microporum r s hseu) nuôi cấy trên môi trường lỏng bằng phương pháp hplc

664 TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === TRẦN THI MAI ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Đề tài: PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN AXIT AMIN VÀ VITAMIN E TRONG NẤM LINH CHI (Ganoderma Microporum) NUÔI CẤY TRÊN MÔI TRƢỜNG LỎNG BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC NGHỆ AN - 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Đề tài: PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN AXIT AMIN VÀ VITAMIN E TRONG NẤM LINH CHI (Ganoderma microporum R.S.Hseu) NUÔI CẤY TRÊN MÔI TRƢỜNG LỎNG BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC Giáo viên hướng dẫn: PGS TS.Trần Đình Thắng Sinh viên thực hiện: Trần Thị Mai Lớp: 50K - Công nghệ thực phẩm Mã số sinh viên: 0952040395 NGHỆ AN - 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Trần Thị Mai Mãsốsinhviên: 0952040395 Khóa: 50 Ngành: Cơng nghệ Thực phẩm Tên đề tài: “Phân tích thành phần axit amin vitamin E nấm linh chi (Ganoderma microporum R.S.Hseu) nuôi cấy môi trƣờng lỏng phƣơng pháp HPLC” Nhiệm vụ nghiên cứu:  Thu mẫu nấm linh chi (Ganoderma microporum) từ vườn Quốc gia Pù Mát tự nhiên phân lập  Nuôi cấy thu nhận sinh khối  Nghiên cứu tổng quan nấm linh chi, giá trị thành phần dinh dưỡng nấm  Nghiên cứu phương pháp HPLC  Phân tích thành phần axit amin, vitamin E nấm linh chi (Ganoderma microporum) phương pháp HPLC  Xử lý kết đưa số đề xuất kiến nghị Họ tên cán hướng dẫn : PGS TS.Trần Đình Thắng Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày tháng năm 2013 Ngày hoàn thành đồ án Ngày tháng 01 năm 2014 : Chủ nhiệm môn Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) (Ký, ghi rõ họ, tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Trần Thị Mai Mã số sinh viên: 0952040395 Khóa : 50 Ngành : Cơng nghệ thực phẩm Cán hướng dẫn: PGS T.S.Trần Đình Thắng Cán duyệt: ………… Nhiệm vụ nghiên cứu :  Thu mẫu nấm linh chi (Ganoderma microporum) từ vườn Quốc gia Pù Mát tự nhiên phân lập  Nuôi cấy thu nhận sinh khối  Nghiên cứu tổng quan nấm linh chi, giá trị thành phần dinh dưỡng nấm  Nghiên cứu phương pháp HPLC  Phân tích thành phần axit amin, vitamin E nấm linh chi (Ganoderma microporum) phương pháp HPLC  Xử lý kết đưa số đề xuất kiến nghị Nhận xét cán hƣớng dẫn: …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Ngày tháng 01 năm 2014 Cán hướng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Trần Thị Mai Khóa 50 : Ngành : Mã số sinh viên: 0952040395 Công nghệ thực phẩm Cán hướng dẫn: PGS TS.Trần Đình Thắng Cán duyệt: ………… Nhiệm vụ nghiên cứu :  Thu mẫu nấm linh chi (Ganoderma microporum) từ vườn Quốc gia Pù Mát tự nhiên phân lập  Nuôi cấy thu nhận sinh khối  Nghiên cứu tổng quan nấm linh chi, giá trị thành phần dinh dưỡng nấm  Nghiên cứu phương pháp HPLC  Phân tích thành phần axit amin, vitamin E nấm linh chi (Ganoderma microporum) phương pháp HPLC  Xử lý kết đưa số đề xuất kiến nghị Nhận xét cán duyệt : …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Ngày tháng 01 năm 2014 Cán hướng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP i GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng LỜI CẢM ƠN Khóa luận thực phịng thí nghiệm Vi sinh, phịng Hóa thực phẩm Trung tâm Phân tích – Chuyển giao Công nghệ Môi trường, Trường Đại học Vinh Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin chân thành cảm ơn đến thầy giáo PGS TS.Trần Đình Thắng - Khoa Hóa, Trường Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi suốt q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Nhân dịp này, tơi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, cán khoa Hoá, trường Đại học Vinh tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu môi trường học tập khoa học, giúp cho có kiến thức vững vàng trước bước vào đời Cuối tơi xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ tơi hồn thành đề tài Vinh, ngày tháng năm 2014 Sinh viên thực Trần Thị Mai SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng MỤC LỤC ii Trang LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG, HÌNH v DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ CÁI VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Chi Ganoderma 1.1.1 Đặc điểm chung 1.1.2 Vị trí phân loại [1, 2] 1.1.3 Đặc điểm phân bố sinh thái nấm linh chi 1.1.4 Thành phần hóa học nấm Linh chi 1.1.4.1 Thành phần hóa học nấm 1.1.4.2 Thành phần chất hoạt tính nấm 1.1.4.3 Hàm lượng nguyên tố nấm 1.1.5 Mục đích sử dụng 1.2 Nuôi cấy nấm 1.2.1 Môi trường rắn 1.2.2 Môi trường lỏng 1.3.Tổng quan axit amin, vitamin E 1.3.1 Axitamin 1.3.1.1 Cấu tạo 1.3.1.2 Phân loại axit amin 1.3.1.3 Tính chất 10 1.3.1.4 Vai trò axit amin 11 1.3.2 Vitamin E 12 SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng iii 1.3.2.1 Cấu tạo 12 1.3.2.2 Tính chất 13 1.3.2.3 Vai trò 14 1.4 Tổng quan phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 14 1.4.1 Cơ sở lý thuyết 14 1.4.2 Nguyên tắc trình sắc ký cột 15 1.4.3 Phân loại 16 1.4.4 Cấu tạo hệ thống HPLC 16 1.4.4.1 Bình chứa dung mơi 17 1.4.4.2 Bộ khử khí (Degasse) 18 1.4.4.3 Bơm (Pump) 18 1.4.4.4 Bộ phận tiêm mẫu (injection) 18 1.4.4.5 Cột sắc ký 18 1.4.5.6 Đầu dò (Detector) 18 1.4.5.7 Bộ phận ghi tín hiệu 19 1.4.5.8 In kết 20 1.4.5 Chọn điều kiện sắc ký 20 1.4.5.1 Lựa chọn pha tĩnh 20 1.4.5.2 Lựa chọn pha động 21 1.4.6 Tiến hành sắc ký 22 1.4.6.1 Chuẩn bị dụng cụ máy móc 22 1.4.6.2 Chuẩn bị dung môi pha động: 22 1.4.6.3 Chuẩn bị mẫu đo HPLC 22 1.4.6.4 Cách đo HPLC 23 Chƣơng PHƢƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM 24 2.1 Phương pháp 24 2.2 Thực nghiệm 24 2.2.1 Thực nghiệm nuôi cấy 24 2.2.1.1 Vật liệu thí nghiệm 24 2.2.1.2 Môi trường dinh dưỡng 24 SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng iv 2.2.1.3 Phương pháp tiến hành thí nghiệm 25 2.2.2 Phân tích 26 2.2.2.1 Axitamin 26 2.2.2.2 Vitamin E 30 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1.Nuôi cấy 34 3.1.1 Kết nuôi cấy môi trường rắn 34 3.1.2 Kết nuôi cấy môi trường lỏng 35 3.2.Phân tích 36 3.2.1 Axit amin 36 3.2.1.1.Xây dựng đường chuẩn biểu diễn phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ 36 3.2.1.2 Xử lý kết 44 3.1.4 Hàm lượng axit amin sau thủy phân 44 3.2.2 Vitamin E 44 3.2.2.1 Xác định khoảng tuyến tính đường chuẩn Vitamin E 45 3.2.2.1 Sắc đồ dung dịch chuẩn α- tocopherol 47 3.2.2.3 Xử lý kết 49 3.2.2.4 Xác định độ lặp lại phương pháp 49 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 4.1 Kết luận 51 4.2 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 41 Arg: Y = 90,394 x + 279,050 R2 = 0,999 Cys-SS-Cys: Y = 33,765 x + 35,361 R2 = 0,999 Met: Y = 98,277 x + 264,613 R2 = 0,999 SVTH: Trần Thị Mai GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng Tyr: Y = 82,722 x + 131,608 R2 = 0,999 Val: Y = 87,661 x + 261,128 R2 = 0,999 Phe: Y = 65,241 x + 649,869 R2 = 0,998 Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 42 Ile: Y = 87,611 x + 68,496 GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng Pro: Y = 53,824 x + 13,408 R2 = 0,999 R2 = 0,998 Leu: Y = 90,332 x + 261,085 Lys: Y = 31,784 x + 66,572 R2 = 0,999 R2 = 0,999 Để xác định giá trị LOD LOQ phương pháp, ta tiến hành đo chuẩn Aspartic lặp lại lần nồng độ chuẩn 10 pmol; 20 pmol 100 pmol Kết qua ba lần đo chuẩn biểu diễn bảng sau: Bảng 3.3: Giá trị LOD LOQ Aspartic qua lần đo chuẩn Nồng Nồng độ đo đƣợc độ Sy Lần Lần Lần 10pmol 10,286 9,975 10,003 0,172 25pmol 25,944 24,998 25,070 0,526 99,843 100,843 0,723 chuẩn 100pmol 99,438 SVTH: Trần Thị Mai Sy(tb) LOD LOQ 0,474 0,027 0,090 Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng 43 Tương tự, ta có giá trị LOD LOQ phương pháp qua lần đo nồng độ khác 10 pmol, 25pmol, 100pmol, axit amin lại, kết bảng sau : Bảng 3.4: Giá trị LOD LOQ TT Acid amin LOD LOQ Glu 0,025 0,083 Ser 0,016 0,052 His 0,024 0,080 Gly 0,021 0,071 Thr 0,021 0,069 Ala 0,022 0,073 Arg 0,016 0,053 Tyr 0,020 0,066 Cys-SS-Cys 0,046 0,152 10 Val 0,051 0,051 11 Met 0,015 0,048 12 Phe 0,018 0,061 13 Ile 0,016 0,053 14 Leu 0,016 0,052 15 Lys 0,046 0,153 16 Pro 0,029 0,095 Với: 3*Sy 10*LOD LOD = LOQ = m m: hệ số góc phương trình hồi quy Độ lệch chuẩn Sy: Σ( Xi – Xtb )2 Sy = SVTH: Trần Thị Mai n-1 ΣXi Xtb = n Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 44 GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng Qua bảng số liệu 3.4 ta thấy phương pháp có giới hạn phát giới hạn định lượng nhỏ chứng tỏ thiết bị có độ nhạy cao, phát định lượng hàm lượng axit amin dạng vết có mẫu phân tích 3.2.1.2 Xử lý kết Từ giá trị diện tích pic đo ta tính hàm lượng Co (ppm) - Hàm lượng axit amin (µg/g) có mẫu tính theo cơng thức: C = (C0/ m) Vdm f Trong đó: C : Hàm lượng axit amin có mẫu (µg/g) Co: Nồng độ axit amin dịch chiết tính từ đường chuẩn, tính theo pmol m: Khối lượng mẫu lấy để phân tích (g) Vdm: Thể tích bình định mức mẫu (ml) f : Hệ số pha lỗng (nếu có) 3.1.4 Hàm lƣợng axit amin sau thủy phân Hình 3.9: Sắc đồ hỗn hợp axit amin mẫu nấm linh chi (Ganoderma microporum) Ta có hàm lượng axit amin 1g mẫu nấm linh chi (Ganoderma microporum) sau: SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng 45 Bảng 3.5: Hàm lượng axit amin mẫu nấm linh chi (Ganoderma microporum) Axit amin Diện tích Asp 623,900 353,276 46,986 Glu 743,566 383,016 56,303 Ser 265,564 27,884 His - - KPH Gly 1437,820 766,218 57,466 Thr 645,268 291,122 34,644 Ala 2317,504 1326,759 118,082 Arg 555,973 153,176 26,653 Try 208,667 147,252 8,430 10 Cys-SS-Cys 440,782 600,354 72,643 11 Val 623,400 206,633 24,176 12 Met 212,909 - - 13 Phe 993,829 263,609 43,496 14 Ile 33,535 - - 15 Leu 815,144 306,675 40,174 16 Lys 163,660 152,732 22,299 17 Pro 812,957 767,648 88,280 5984,032 667,515 642,401 Tổng C (µg/g) Hàm lƣợng TT Ppm 3.2.2 Vitamin E 3.2.2.1 Xác định khoảng tuyến tính đƣờng chuẩn Vitamin E Dãy chuẩn vitamin E khảo sát có nồng độ sau: ppm; 10 ppm; 20 ppm; 40 ppm Phân tích chuẩn nói xác định phương trình hồi quy tuyến tính dựa vào diện tích pic SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng 46 Bảng 3.6: Diện tích pic vitamin E tương ứng với nồng độ chuẩn Nồng độ chuẩn Diện tích pic Lần Lần Lần 160,699 160,584 160,699 10 445,460 445,531 445,459 20 955,863 955,704 955,865 40 1924,540 1924,690 1924,538 m B R2 (ppm) 49,123 - 37,135 0,999 Sử dụng chương trình Microsoft Excel để xây dựng đường chuẩn, ta có phương trình đường chuẩn xác định hàm lượng vitamin E sau: Phương trình hồi qui đường chuẩn theo diện tích pic có dạng: y = mx +b x nồng độ, y diện tích pic m = 49,123 b = -37,135 Hệ số hồi quy tuyến tính R2 = 0,999 y = 49.123x - 37.135 R2 = 0.9999 2500 Area 2000 1500 1000 500 0 10 20 30 40 50 Am ount Hình 3.10: Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pic thu nồng độ chuẩn vitamin E Giá trị LOD LOQ phương pháp qua lần đo nồng độ khác ppm, 10ppm, 20ppm, 40 ppm ta đươc kết bảng sau : SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng 47 Bảng 3.7: Giá trị LOD LOQ Với: Giá trị Chuẩn vitamin E(ppm) LOD 0,004 LOQ 0,015 3*Sy LOD = LOQ = m 10*LOD LO m hệ số góc phương trình hồi quy Độ lệch chuẩn Sy: Σ( Xi – Xtb )2 Sy = n-1 ΣXi Xtb = n Qua bảng số liệu ta thấy phương pháp có khoảng giới hạn phát khoảng định lượng nhỏ chứng tỏ thiết bị có độ nhạy cao, phát hàm lượng vitamin E dạng vết có mẫu phân tích 3.2.2.1 Sắc đồ dung dịch chuẩn α- tocopherol Hình 3.11: Sắc đồ dung dịch chuẩn α- tocopherol nồng độ ppm SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 48 GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng Hình 3.12: Sắc đồ dung dịch chuẩn α-tocopherol nồng độ 10 ppm Hình 3.13: Sắc đồ dung dịch chuẩn α-tocopherol nồng độ 20 ppm Hình 3.14: Sắc đồ dung dịch chuẩn α- tocopherol nồng độ 40 ppm SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 3.2.2.3 Xử lý kết GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng 49 Từ giá trị diện tích pic đo ta tính hàm lượng vitamin E (ppm) Sau ta tính hàm lượng vitamin E (µg/g) có mẫu nấm theo công thức sau: C = (C0/ m) Vdm f Trong : - C hàm lượng vitamin E có mẫu, tính theo µg/g - Co: Hàm lượng vitamin E Có dịch chiết ( Co) thông qua đường chuẩn, mg/l - f: hệ số pha lỗng (nếu có) - m: khối lượng mẫu thử(g) - Vdm: Thể tích bình định mức mẫu (ml) Bảng 3.8: Kết phân tích hàm lượng vitamin E nấm linh chi (Ganoderma microporum) C0(ppm) 57,593 Thể tích mẫu (ml) Diện tích pic C(µg/g) 2778,188 38,395 10 3.2.2.4 Xác định độ lặp lại phƣơng pháp Theo lý thuyết thống kê, đại lượng đặc trưng cho độ lặp lại độ lệch chuẩn SD hệ số biến thiên CV% (RSD) Thực phân tích 15g nấm, tiến hành phân tích lặp lại lần điều kiện Kết phân tích lần lặp lại độ lặp lại phương pháp nêu bảng 3.9 Độ lặp lại phương pháp đánh giá qua độ lệch chuẩn tương đối (RSD) Dựa vào nồng độ tương ứng tính kết trung bình tính độ lệch chuẩn hệ số biến thiên theo công thức đây: SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng 50 Bảng 3.9: Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu nấm linh chi (Ganoderma microporum) TT Thể Tích Nồng Độ 10 38,395 10 38,875 10 38,983 Xtb 38,751 S 0,313 CV(%) 0,810 - Giá trị trung bình hàm lượng vitamin E mẫu nấm là: Xtb = n  x = 38,751 n i 1 n Độ lệch chuẩn: s  (x i 1 i  xtb ) n 1 Độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = = 0,313 0.313 S  100 =  100 = 0,810 38.75100 xtb Trong đó: Xi: nồng độ vitamin E lần chạy thứ i Xtb: nồng độ trung bình n lần chạy n: số lần chạy lặp lại Nhận xét: Kết tính tốn cho thấy, phương pháp có lặp lại cao, cho độ tốt, đáp ứng yêu cầu định lượng SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 51 GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Sau hoàn thành khóa luận, tơi thu kết sau: 1) Nuôi cấy thu nhận sinh khối nấm mơi trường lỏng 2) Đã xây dựng phương trình đường chuẩn vitamin E phương trình đường chuẩn 17 loại axit amin 3) Xác định hàm lượng axit amin vitain E sinh khối nấm linh chi (Ganoderma microporum) nuôi cấy môi trường lỏng:  Axit amin Phát thấy hàm lượng 14 loại axit amin có đầy đủ loại axit amin thiết yếu cần thiết cho thể người như: Isoleucin, Leucin, Lysin, Phenillalanin, Threonin, Tryptophan Valin (trừ Methionin) - Tổng lượng axit amin: 667,515 ppm - Bốn loại axit amin có hàm lượng lớn là:  Alanine: 118,082 ppm  Proline: 88,280 ppm  Cys-SS-Cys: 72,643 ppm  Glycine: 57,466 ppm  Vitamin E Từ kết phân tích cho thấy mẫu nấm linh chi (Ganoderma microporum) có phát thấy hàm lượng vitamin E  Hàm lượng vitamin E: C = 38,751 µg/g  Độ lặp lại vitamin E mẫu nấm với độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0,810 %  Đã xác định giới hạn phát LOD phương pháp là: LOD = 0,004 ppm  Đã xác định giới hạn xác định phương pháp là: LOQ = 0,015 SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng 52 Dựa vào kết cho thấy phương pháp HPLC có khoảng giới hạn phát khoảng định lượng nhỏ chứng tỏ thiết bị có độ nhạy cao, dùng để xác định hàm lượng axit amin vitamin E dạng vết có mẫu 4.2 Kiến nghị Do điều kiện phân tích không cho phép nên tiến hành phân tích hàm lượng axit amin vitamin E phương pháp phân tích khác tiến hành phân tích hàm lượng số vitamin khác nấm Trong trình chuẩn bị xử lý mẫu hàm lượng axit amin bị tổn thất nhiều, đặc biệt bị bay Nếu tơi muốn khảo sát thêm điều kiện nhằm tối ưu hóa phương pháp như: nồng độ axit thủy phân, nhiệt độ thủy phân, thời gian thủy phân… Do tính chất vitamin dễ bị hao hụt tác dụng ánh sáng, nhiệt độ cao nên hàm lượng vitamin E mẫu nấm sử dụng bé Trong chế biến bảo quản thực phẩm, để bảo tồn lượng vitamin nhiều ta nên: - Chọn mua hoa rau tươi Nếu bạn mua rau trực tiếp từ người nông dân trồng rau lý tưởng loại rau tồn lại sau nhiều ngày bán lượng lớn vitamin E Cịn khơng thể chắn độ tươi rau quả, dành ưu tiên cho sản phẩm đơng lạnh đóng hộp Tuy q trình chế biến đóng hộp đơng lạnh làm hao hụt phần lượng vitamin, lượng có cịn nhiều so với rau héo úa - Bảo quản rau nơi khơng có ánh sáng nhiệt độ thấp (tủ lạnh) nhằm tránh hao hụt vitamin E - Không nên chế biến kỹ hoa rau củ Nấu rau thời gian ngắn có thể, đủ để vừa chín tới thơi nấu kỹ rau cách nhanh để phá huỷ lượng vitamin E Tuy nhiên điều không áp dụng với tất loại thực phẩm - Nếu có thể, sử dụng thực phẩm tươi chế biến ngày, trình cấp rã đông nguyên nhân gây hao hụt vitamin SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng 53 - Để nguyên phần vỏ chế biến rau củ phần lớn chất dinh dưỡng nằm phía lớp vỏ Nấm khơng loại thực phẩm giàu dinh dưỡng mà cịn sử dụng dược liệu quý việc hỗ trợ điều trị bệnh, tăng khả miễn dịch cho thể, kháng ung thư, giải độc, trừ gốc tự chống lão hóa Do vậy, việc xác định thành phần có nấm để phát hoạt tính điều cần thiết Vì điều kiện có hạn nên người thực đề tài không tránh khỏi thiếu sót Rất mong góp ý bảo thầy cô giáo bạn sinh viên SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 54 GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt: Nguyễn Lân Dũng (2001), Công nghệ nuôi trồng nấm, tập 2, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Hữu Đống Đinh Xuân Linh (2000), Nấm ăn nấm dược liệu công dụng công nghệ nuôi trồng, Nhà xuất Hà Nội Phạm Luận (1999), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu cao, Khoa Hóa học, Trường Đại học Tổng hợp Hà Nội Nguyễn Đức Lượng, Phan Thị Huyền Ngyễn Ánh Tuyết (2003), Thí nghiệm cơng nghệ sinh học, tập 2, thí nghiệm vi sinh vật học, Nhà xuất Đại học Quốc gia TPHCM Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2003), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập 2, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Lê Xuân Thám (1996), Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điển hấp thu khoáng nấm Linh chi Ganoderma lucidum (Leyss,ex Fr),Karst, Luận án phó tiến sỹ khoa học sinh học, Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội, Việt Nam Lê Xuân Thám (1996), Nấm Linh chi - dược liệu quí việt nam, Nhà xuất Mủi Cà Mau Lê Xuân Thám (2005), Nấm Linh chi vàng - nấm Hoàng chi, Báo Khoa học Phổ thông, số 31/05 (1154) Tiếng anh: Boh, B., M Berovief, J S Zhang and L Z Bi (2007) Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds Biotechnology Annual Review 13:265-301 SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS TS.Trần Đình Thắng 55 10 Molnar-Per I (2000), Role of chromatography in the analysis of sugar, carboxylic acids and amino acid in food, Journal of Chromatography A, 891 11 Moore, S Stein, W.H (1948), Phorimatric ninhydrin method for use in the chromatography of amino acid, journal of Biological Chemistry 176 12 Xu J W., Zhao W., and Zhong J.J (2010), Biotechnological production and application of ganoderic acids Appl Microbiol Biotechnol 87: 457– 46 13 Wachtel-Galor, S., B Tomlinson, I.F.F Benzie (2004), Ganoderma lucidum ('Lingzhi'), a Chinese medicinal mushroom: biomarker responses in a controlled human supplementation study, British Journal of Nutrition 91(2): 263-269 14 Zhaoji – Ding (1980), The Ganodermataceae in chine, Berlin Shiffigart 15 Zjawiony J K (2004) Biologically Active Compounds from Aphyllophorales (Polypore) Fungi J Nat Prod., 67 (2): 300-310 Trang Web: 16 http://tusach.thuvienkhoahoc.com 17 14 http://www.hoahocvietnam.com 18 http://www.Y học cổ truyền 19 http://www Namlinhchi.com 20 http://www.ebook.edu.vn 21 http://tailieu.vn 22 http://www.Vitamin – Khoa học- Sách hay – MaxReading.com SVTH: Trần Thị Mai Lớp 50K – Hóa ... tài: ? ?Phân tích thành phần axit amin vitamin E nấm linh chi (Ganoderma microporum R. S. Hseu) nuôi cấy môi trƣờng lỏng phƣơng pháp HPLC? ?? Nhiệm vụ nghiên cứu:  Thu mẫu nấm linh chi (Ganoderma microporum) ...TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Đề tài: PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN AXIT AMIN VÀ VITAMIN E TRONG NẤM LINH CHI (Ganoderma microporum R. S. Hseu) NUÔI CẤY TRÊN MÔI TRƢỜNG LỎNG... S? ?? sinh trưởng hệ s? ??i nấm linh chi (Ganoderma microporum) 34 Hình 3.2: S? ?? sinh trưởng hệ s? ??i nấm linh chi (Ganoderma microporum) sau ngày nuôi cấy môi trường PDA 34 Hình 3.3: S? ?? sinh trưởng