Nghiên cứu nuôi trồng nấm linh chi trên môi trường lỏng

TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === N TT NGHIP Đề tài: NGHIấN CU NUễI TRNG NẤM LINH CHI TRÊN MÔI TRƢỜNG LỎNG GV hướng dẫn SV thực Lớp MSSV : : : : ThS đào thị xuân nguyN TH NHT 49K - Cụng nghệ thực phẩm 0852045287 VINH - 12/2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên Khóa MSV Ngành : : : : Nguyễn Thị Nhật 49 0852045287 Công nghệ thực phẩm 1.Tên đề tài: Nghiên cứu nuôi trồng nấm Linh chi môi trƣờng lỏng Nội dung nghiên cứu, thiết kế tốt nghiệp: ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… Cán hướng dẫn : Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày hoàn thành đồ án : ThS Đào Thị Thanh Xuân Ngày tháng năm 2012 Ngày tháng năm 2012 Ngày Chủ nhiệm môn (Ký ghi rõ họ tên) Sinh viên hoàn thành nộp đồ án vào ngày tháng năm 2012 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ tên) tháng năm 2012 Ngƣời duyệt (Ký, ghi rõ họ tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Nhật Msv: Khóa: 49 Cán hướng dẫn: ThS Đào Thị Thanh Xuân Ngành: Công nghệ thực phẩm 0852045287 Cán duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Nhận xét cán hƣớng dẫn: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Ngày tháng năm 2012 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Nhật Msv: Khóa: 49 Cán hướng dẫn: ThS Đào Thị Thanh Xuân Ngành: Công nghệ thực phẩm 0852045287 Cán duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Nhận xét cán duyệt: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… tháng năm 2012 Cán duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) Ngày Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn ThS Đào Thị Thanh Xuân, giảng viên khoa Hóa học, trường Đại học Vinh tận tình hướng dẫn em suốt q trình nghiên cứu hồn thành đồ án tốt nghiệp Em xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới thầy cô, cán hướng dẫn thí nghiệm Phịng hóa thực phẩm, Trung tâm kiểm định chất lượng thực phẩm Trường Đại học Vinh tạo điều kiện tận tình giúp đỡ em suốt q trình nghiên cứu hồn thành đồ án tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cám ơn chân thành tới bạn phịng thí nghiệm thực phẩm tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành đồ án Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn vơ hạn tới gia đình, người thân bạn bè động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập làm đồ án tốt nghiệp Vinh, tháng 12 năm 2012 SVTH: Nguyễn Thị Nhật SVTH: Nguyễn Thị Nhật ii Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân TÓM TẮT ĐỒ ÁN Nghiên cứu nuôi trồng nấm Linh chi môi trƣờng lỏng  Nội dung nghiên cứu: - Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường lỏng đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi - Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi - Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi - Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố pH đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi  Kết thu - Đã nghiên cứu sinh trưởng phát triển nấm Linh chi môi trường PG, ME, KMS Kết cho thấy ME môi trường thu nhận sinh khối lớn - Đã nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường KMS đến trình sinh trưởng phát triển nấm Linh chi Kết cho thấy M1 môi trường thu nhận sinh khối lớn - Đã nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng mơi trường PG đến q trình sinh trưởng phát triển nấm Linh chi Kết cho thấy PG + khống + pepton mơi trường thu nhận sinh khối lớn - Đã nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường ME đến trình sinh trưởng phát triển nấm Linh chi Kết cho thấy môi trường PG + ME + khoáng + pepton lượng sinh khối thu nhiều thấp môi trường ME - Đã nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến trình sinh trưởng phát triển nấm Linh chi môi trường ME + Thời gian thích hợp để thu nhận sinh khối 21 ngày + Nhiệt độ ni cấy thích hợp 300C + pH thích hợp cho q trình sinh trưởng phát triển nấm Linh chi pH =5 SVTH: Nguyễn Thị Nhật iii Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT ĐỒ ÁN iii DANH SÁCH BẢNG BIỂU viii DANH SÁCH HÌNH VẼ ix MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích 3 Yêu cầu PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1 Nấm linh chi 1.1.1 Khái quát chung 1.1.2 Phân loại nấm Linh chi 1.1.2.1 Vị trí phân loại 1.2.2.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm hình thái chu trình sống nấm Linh chi 1.1.3.1 Đặc điểm hình thái nấm Linh chi 1.1.3.2 Chu trình sống nấm Linh chi 1.2 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng yếu tố vật lý đến trình sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 1.2.1 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng cho phát triển nấm 1.2.2 Ảnh hưởng yếu tố vật lý lên sinh trưởng nấm 10 1.3 Thành phần hóa học hoạt chất sinh học nấm Linh chi 11 1.3.1 Thành phần hóa học đặc tính dược lý nấm Linh chi 11 1.3.2 Giới thiệu sơ lược hoạt chất sinh học có nấm Linh chi 14 1.3.2.1 Ganoderma polysaccharide (GLPs) 14 1.3.2.3 Ganoderma Adenosine 15 1.3.2.4 Alcaloid 16 1.3.2.5 Hợp chất Saponin 17 SVTH: Nguyễn Thị Nhật iv Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân 1.3.2.6 Germanium hữu [22, 23] 17 1.4 Khả chữa bệnh nấm Linh chi 18 1.4.1 Đối với bệnh tim mạch 19 1.4.2 Hiệu chống ung thư 19 1.4.3 Đối với bệnh hô hấp 20 1.4.4 Khả kháng HIV 20 1.4.5 Khả antioxydant 21 1.5 Một số ứng dụng lâm sàng nấm Linh chi 21 1.5.1 Trị suy nhược thần kinh 21 1.5.2 Trị chứng cholesterol máu cao 22 1.5.3 Trị viêm phế quản mạn tính 22 1.5.4 Trị viêm gan mạn tính 22 1.5.5 Trị chứng giảm bạch cầu 22 1.5.6 Trị bệnh xơ cứng bì, viêm da cơ, bệnh liput ban đỏ, ban trọc 22 1.5.7 Theo sách Trung dược ứng dụng lâm sàng 22 1.5.8 Trị xơ cứng mạch, cao huyết áp, tai biến mạch não 22 1.5.9 Dùng giải độc loại khuẩn 23 1.6 Tình hình nghiên cứu nuôi trồng nấm Linh chi giới Việt Nam 23 1.6.1 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Linh chi giới 23 1.6.2 Tình hình nghiên cứu nuôi trồng nấm Linh chi Việt Nam 24 PHẦN II: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 27 2.1 Thời gian, địa điểm đối tượng nghiên cứu 27 2.2 Vật liệu, hóa chất mơi trường 27 2.2.1 Thiết bị 27 2.2.2 Hóa chất 27 2.2.3 Môi trường sử dụng 27 2.2.3.1 Môi trường giữ giống PGA ( Potato glucose agar) 27 2.2.3.2 Môi trường nuôi cấy 27 2.3 Phương pháp nghiên cứu 30 2.3.1 Quan sát hình thái giải phẫu nấm Linh chi 30 SVTH: Nguyễn Thị Nhật v Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân 2.3.1.1 Hình thái thể 30 2.3.1.2 Phương pháp quan sát hệ sợi nấm, bào tử nấm Linh chi sợi nấm 30 2.3.2 Kỹ thuật cấy chuyền giữ giống 30 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu sinh trưởng phát triển nấm Linh chi số môi trường lỏng 30 2.3.4 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường KMS đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 31 2.3.5 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường PG đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 31 2.3.6 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường ME đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 32 2.3.7 Phương pháp nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 32 2.3.7.1 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng thời gian đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 32 2.3.7.2 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 33 2.3.7.3 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng pH đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 33 PHẦN III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 34 3.1 Quan sát hình thái giải phẫu nấm Linh chi 34 3.1.1 Hình thái thể nấm Linh chi 34 3.1.2 Quan sát hệ sợi nấm Linh chi kính hiển vi 34 3.1.3 Quan sát cấu trúc bào tử nấm Linh chi kính hiển vi 35 3.2 Nghiên cứu sinh trưởng phát triển nấm Linh chi số môi trường lỏng 34 3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường KMS đến phát triển nấm Linh chi 38 3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường PG đến phát triển nấm Linh chi 39 3.5 Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường ME tới phát triển nấm Linh chi 41 SVTH: Nguyễn Thị Nhật vi Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp 3.6 GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi môi trường ME 42 3.6.1 Ảnh hưởng thời gian đến sinh sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 42 3.6.2 Ảnh hưởng nhiệt độ lên môi trường nuôi cấy nấm Linh chi mẫu 609 44 PHẦN IV: KẾT LUẬN 47 PHẦN V: TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 SVTH: Nguyễn Thị Nhật vii Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân 3.1.3 Quan sát cấu trúc bào tử nấm Linh chi dƣới kính hiển vi Hình 3.7 Cấu trúc bào tử nấm mẫu 609 Hình 3.8 Cấu trúc bào tử nấm mẫu 619 Hai mẫu nấm 609 619 tiến hành phân lập khiết phịng thí nghiệm hóa thực phẩm Cả hai giữ giống nhân giống môi trường PGA để thực nghiên cứu sau: 3.2 Nghiên cứu sinh trƣởng phát triển nấm Linh chi số môi trƣờng lỏng Khối lượng sinh khối nấm Linh chi thu nhận môi trường khác khác tùy thuộc vào thành phần dinh dưỡng môi trường nuôi cấy Nghiên cứu tiến hành môi trường PG, ME, KMS Mơi trường PG: thành phần nước chiết khoai tây bổ sung thêm glucose Môi trường ME: Thành phần nước chiết malt chiết từ malt đại mạch với nồng độ chất khô 100Bx, bổ sung thêm cao nấm men Môi trường KMS: thành phần đường saccharose, (NH4)2SO4, khống Lấy mẫu thời điểm 6, 9, 12, 15, 18, 21 ngày, sấy đến khô nhiệt độ 40 500C tiến hành cân trọng lượng thu kết sau: SVTH: Nguyễn Thị Nhật 35 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Bảng 3.1 Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 môi trường PG, ME, KMS Khối lượng sinh khối (g/100ml) KLTB MT 12 ngày 15 ngày 18 ngày 21 ngày PG 0,3252 0,5130 0,6848 0,7023 0,8172 1,8641 ME 0,5988 0,7829 1,0839 2,2169 2,5900 5,5904 KMS 0,082 0,099 0,1920 0,2813 0,3390 0,4519 Khối lượng sinh khối ( g/100ml ) Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 môi trường PG, ME, KMS PG ME KMS 12 15 18 21 Thời gian ( ngày ) Hình 3.9: Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 môi trường PG, ME, KMS Bảng 3.2 Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 619 môi trường PG, ME, KMS Khối lượng sinh khối (g/100ml) KLTB MT 12 ngày 15 ngày 18 ngày 21 ngày PG 0,2532 0,3912 0,5378 0,6930 0,8021 1,4523 ME 0,3775 0,5129 0,8675 1,5414 1,9183 3,2375 KMS 0,063 0,085 0,1197 0,1972 0,2834 0,3951 SVTH: Nguyễn Thị Nhật 36 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Khối lượng sinh khối ( g/100ml ) Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 619 môi trường PG, ME, KMS 3.5 2.5 1.5 PG ME KMS 0.5 12 15 18 21 Thời gian ( ngày ) Hình 3.10: Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 619 môi môi trường PG, ME, KMS Từ kết nhận thấy ME môi trường thu nhận lượng sinh khối lớn hai chủng nấm 609 619 Môi trường PG KMS trình sinh trưởng Với chủng nấm 609 sau 21 ngày ni cấy khối lượng sinh khối thu nhận môi trường ME đạt 5,5904g/100ml Với chủng nấm 619 sau 21 ngày ni cấy khối lượng sinh khối thu nhận môi trường ME đạt 3,2375g/100ml Kết so sánh với kết nghiên cứu nuôi trồng chủng nấm phân lập Mexico [21] cho thấy có khác biệt: Với chủng nấm phân lập nuôi trồng Mexico mơi trường PG thu nhận lượng sinh khối lớn Như loài khác nhau, thu nhận địa điểm khác có thích ứng phát triển với mơi trường khác Mặc dù PG, KMS thu nhận khối lượng không cao, nhiên thay đổi, bổ sung thêm nguồn dinh dưỡng PG KMS thay đổi sinh trưởng phát triển nấm Vì chúng tơi thực nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường KMS, PG, ME đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi SVTH: Nguyễn Thị Nhật 37 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân 3.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng thành phần dinh dƣỡng môi trƣờng KMS đến phát triển nấm Linh chi KMS mơi trường có nguồn cacbon bổ sung dạng đường saccharose, nguồn Nitơ bổ sung dạng (NH4)2SO4, khoáng Nguồn C, nguồn N khác ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi Vì dựa sở môi trường KMS thực nghiên cứu sau: + Thay saccharose glucose (môi trường KMG ) + Thay saccharose glucose, bổ sung thêm nguồn dinh dưỡng N hữu dạng pepton (môi trường M1) + Thay saccharose glucose, nguồn dinh dưỡng N vô dạng (NH4)2SO4 N hữu dạng pepton, bổ sung vitamin B1 (môi trường M2) Chủng nấm 609 nuôi cấy môi trường KMS, KMG, M1, M2 Lấy mẫu thời điểm 6, 9, 12, 15, 18, 21 ngày, sấy đến khô nhiệt độ 40 - 500C cân trọng lượng thu kết sau: Bảng 3.3 Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 môi trƣờng KMS, KMG, M1, M2 Khối lượng sinh khối (g/100ml) KLTB MT 12 ngày 15 ngày 18 ngày 21 ngày KMS 0,082 0,099 0,1920 0,2813 0,3390 0,4519 KMG 0,2216 0,4098 0,6723 0,7046 0,7920 0,8132 M1 0,2795 0,4255 0,7341 1,0121 1,3350 1,4492 M2 0,1252 0,2975 0,4678 0,7288 0,8330 1,0203 SVTH: Nguyễn Thị Nhật 38 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Khối lượng sinh khối ( g/100ml ) Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 môi trường KMS, KMG, M1, M2 1.6 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 KMS KMG M1 M2 12 15 18 21 Thời gian ( ngày ) Hình 3.11: Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 môi trường KMS, KMG, M1, M2 Từ kết nhận thấy M1 môi trường thu nhận sinh khối lớn chủng nấm 609 KMS thu nhận sinh khối thấp So với KMS sau 21 ngày nuôi cấy khối lượng sinh khối đạt 0,4519 g/100ml M1 đạt 1,4492 g/100ml 3.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng thành phần dinh dƣỡng môi trƣờng PG đến phát triển nấm Linh chi Môi trường PG thành phần nước chiết khoai tây bổ sung thêm đường glucose Môi trường chủ yếu nguồn dinh dưỡng C, cịn N khống Vì dựa sở môi trường PG thực nghiên cứu sau: Bổ sung số chất khoáng K, P, Mg2+, nguồn dinh dưỡng N dạng pepton Chủng nấm 609 619 nuôi cấy mơi trường PG + khống + pepton Lấy mẫu thời điểm 6, 9, 12, 15, 18, 21 ngày, sấy đến khô nhiệt độ 40 - 500C cân trọng lượng thu kết sau: Bảng 3.4 Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 mơi trƣờng PG, PG + khống + pepton Khối lượng sinh khối (g/100ml) KLTB MT 12 ngày 15 ngày 18 ngày 21 ngày PG 0,3252 0,5130 0,6848 0,7023 0,8172 1,8641 PG + khoáng + pepton 0,3596 0,5242 0,8925 1,1865 1,5962 2,1547 SVTH: Nguyễn Thị Nhật 39 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Khối lượng sinh khối ( g/100ml ) Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 mơi trường PG, PG +khống + pepton 2.5 1.5 PG PG + khoáng + pepton 0.5 12 15 18 21 Thời gian ( ngày ) Hình 3.12: Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 môi trường PG, PG + khoáng + pepton Bảng 3.5 Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi mẫu 619 môi trƣờng PG, PG + khoáng + pepton Khối lượng sinh khối (g/100ml) KLTB MT PG 12 ngày 15 ngày 18 ngày 21 ngày 0,2532 0,3912 0,5378 0,6930 0,8021 1,4523 0,3137 0,5113 0,7192 1,1589 1,5529 2,0409 PG + khoáng + pepton Khối lượng sinh khối ( g/ 100ml ) Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 619 mơi trường PG, PG + khống + pepton 2.5 1.5 PG PG + khoáng + pepton 0.5 12 15 18 21 Thời gian ( ngày ) Hình 3.13: Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 619 môi trường PG, PG + khoáng + pepton SVTH: Nguyễn Thị Nhật 40 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Từ kết chúng tơi nhận thấy: mơi trường PG + khống + pepton thu nhận sinh khối lớn hai chủng nấm 609 619 Với chủng nấm 609, so với PG sau 21 ngày nuôi cấy khối lượng sinh khối đạt 1,8641 g/100ml PG + khống + pepton đạt 2,1547 g/100ml Với chủng nấm 619, so với PG sau 21 ngày nuôi cấy khối lượng sinh khối đạt 1,4523 g/100ml PG + khống + pepton đạt 2,0409 g/100ml 3.5 Nghiên cứu ảnh hƣởng thành phần dinh dƣỡng môi trƣờng ME tới phát triển nấm Linh chi Môi trường ME thành phần nước chiết malt chiết từ malt đại mạch, có nồng độ chất khơ 100Bx bổ sung cao nấm men Đây môi trường giàu dinh dưỡng chất kích thích sinh trưởng, nhiên q trình chuẩn bị mơi trường địi hỏi trang thiết bị phức tạp, giá thành cao Vì thực nghiên cứu thay phần lớn nước chiết malt nước chiết khoai tây, bổ sung thêm số khống nguồn dinh dưỡng N dạng pepton Mơi trường PG + 10% ME + khoáng + pepton Lấy mẫu thời điểm 6, 9, 12, 15, 18, 21 ngày, sấy đến khô nhiệt độ 40 500C cân trọng lượng thu kết sau: Bảng 3.6 Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 môi trƣờng ME, PG + ME + khoáng + pepton Khối lượng sinh khối (g/100ml) KLTB MT ME PG + 10% ME + khoáng + pepton 12 ngày 15 ngày 18 ngày 21 ngày 0,5988 0,7829 1,0839 2,2169 2,5900 5,5904 0,3667 0,5428 0,9024 1,3557 1,7845 3,3850 SVTH: Nguyễn Thị Nhật 41 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Khối lượng sinh khối ( g/100ml ) Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 mơi trường ME, PG + ME + khống + pepton ME PG + ME + khoáng + pepton 12 15 18 21 Thời gian ( ngày ) Hình 3.14: Khối lượng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 mơi trường ME, PG +10% ME + khống +peton Từ kết nhận thấy rằng: Khi thay phần lớn nước chiết malt nước chiết khoai tây khối lượng sinh khối thu thấp cụ thể: Sau 21 ngày nuôi cấy khối lượng sinh khối nấm Linh chi chủng 609 môi trường ME đạt 5,5904 g/100ml, cịn mơi trường PG + 10% ME + khoáng + pepton đạt 3,3850 g/100ml Các nghiên cứu môi trường PG, ME, KMS cho thấy tốt cho trình sinh trưởng phát triển nấm Linh chi ME Vì chọn môi trường nuôi cấy ME thực nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi là: ảnh hưởng thời gian, nhiệt độ, pH… 3.6 Nghiên cứu số yếu tố ảnh hƣởng đến sinh trƣởng phát triển nấm Linh chi môi trƣờng ME 3.6.1 Ảnh hƣởng thời gian đến sinh sinh trƣởng phát triển nấm Linh chi Quá trình sinh trưởng tơ nấm phải trải qua giai đoạn: giai đoạn thích nghi, giai đoạn phát triển, giai đoạn cân giai đoạn già cỗi Trong thí nghiệm để tiến hành ni cấy sinh khối bình tam giác 500ml, chứa 100ml môi trường ME Điều chỉnh pH = 5, nuôi nhiệt độ 30 0C, lấy mẫu thời điểm 6, 9,12, 15, 18, 21, 24 ngày, sấy khô 40 - 500C, sau đem cân đến khối lượng không đổi ghi nhận số liệu SVTH: Nguyễn Thị Nhật 42 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Bảng 3.7: Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 môi trƣờng ME Khối lượng sinh khối (g/100ml) KLTB 12 ngày 15 ngày 18 ngày 21 ngày 24 ngày 0,5988 0,7829 1,0839 2,2169 2,5900 5,5904 5,6022 MT ME Đường cong sinh trưởng nấm Linh chi mẫu 609 Khối lượng sinh khối g/100ml 0 10 15 20 25 30 Thời gian ( ngày ) Hình 3.15: Đường cong sinh trưởng nấm Linh chi mẫu 609 Bảng 3.8: Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi mẫu 619 môi trƣờng ME Khối lượng sinh khối g/100ml KLTB MT ME 12 ngày 15 ngày 18 ngày 21 ngày 24 ngày 0,3775 0,5129 0,8675 1,5414 1,9183 3,2375 3,3518 Đường cong sinh trưởng nấm Linh chi mẫu 619 Khối lượng sinh khối g/100ml 3.5 2.5 1.5 0.5 0 10 15 20 25 30 Thời gian ( ngày ) Hình 3.16: Đường cong sinh trưởng nấm Linh chi mẫu 619 SVTH: Nguyễn Thị Nhật 43 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Đường cong sinh trưởng yếu tố quan trọng q trình ni cấy sinh khối sợi nấm Linh chi Dựa vào biểu đồ ta biết xác khoảng thời gian sinh khối phát triển mạnh nhất, lúc sinh khối ổn định lúc sinh khối bắt đầu già Từ biểu đồ sinh trưởng ta thấy: - Trong ngày đầu tơ nấm thích nghi với mơi trường, sinh khối tăng lên - Đến ngày thứ 9, sinh khối phát triển không nhanh - Từ ngày 12 đến ngày 21, sinh khối phát triển nhanh, đặc biệt từ ngày 18 đến ngày 21 - Từ ngày 24 trở sinh khối tăng chậm 3.6.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ lên môi trƣờng nuôi cấy nấm Linh chi mẫu 609 Nhiệt độ nhân tố quan trọng đến sinh trưởng phát triển nấm, ảnh hưởng trực tiếp đến phản ứng sinh hóa bên tế bào, kích thích hoạt động chất sinh trưởng, enzym chi phối toàn hoạt động sống nấm Mỗi lồi nấm khác có nhiệt độ phát triển thích hợp riêng Khi nhiệt độ cao hay thấp ảnh hưởng tới tốc độ phát triển sợi nấm.Vì tiến hành nghiên cứu điều kiện nhiệt độ 200C, 250C, 300C, 350C Theo dõi sinh trưởng phát triển nấm Linh chi môi trường ME, vòng 15 ngày thu sinh khối đem lọc đem sấy khơ 40 - 500C sau đem cân đến khối lượng không đổi ghi nhận số liệu Bảng 3.9: Ảnh hƣởng nhiệt độ lên tốc độ tạo sinh khối Linh chi mẫu 609 Nhiệt độ 20 25 30 35 KLTB 1.2900 1.8823 2.2169 1.4298 Khối lượng sinh khối g/100ml Ảnh hưởng nhiệ t độ đế n sinh trưởng v phát triể n nấm Linh chi 2.5 1.5 Series1 0.5 0 20 40 Nhiệ t độ Hình 3.17: Ảnh hưởng nhiệt độ lên tăng sinh khối nấm Linh chi mẫu 609 SVTH: Nguyễn Thị Nhật 44 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Từ kết thấy rằng: Khối lượng sinh khối nấm linh chi có khả tăng trưởng tốt nhiệt độ 300C Khi ni cấy nhiệt độ 300C khối lượng sinh khối cao 2,2169g/100ml; tăng nhiệt độ lên 350C, khối lượng sinh khối giảm đáng kể cịn ni nhiệt độ 250 C sinh khối thu 1,8823g/100ml Cịn 200C sinh khối thu thấp 1,2900g/100ml Vậy nhiệt độ 300C thích hợp cho sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 3.6.3 Ảnh hƣởng pH lên môi trƣờng nuôi cấy nấm Linh chi mẫu 609 pH mơi trường có ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng phát triển hệ sợi nấm Linh chi Sự tăng giảm pH (chính tăng giảm H+) môi trường nuôi cấy kích thích kìm hãm phát triển hệ sợi nấm Linh chi Để tìm pH thích hợp cho sinh trưởng phát triển sợi nấm Linh chi khảo sát nghiên cứu giá trị pH: pH = 4; pH = 4,5; pH = 5; pH = 5,5; pH = 6; pH = 6,5; pH = 7, pH = 7,5 Tiến hành nuôi cấy giá trị pH khác vịng 15 ngày sau lấy mẫu, đem sấy khô 40 - 500C đem cân đến khối lượng không đổi ghi nhận số liệu Bảng 3.10: Ảnh hƣởng pH lên tốc độ tạo sinh khối Linh chi mẫu 609 pH KLTB(g) 1,1210 4,5 5,5 6,5 1,4692 2,2169 1,9207 1,5329 1,4287 7,5 0,9820 0,6739 Khối lượng sinh khối g/100ml Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi 2.5 1.5 0.5 0 pH Hình 3.18: Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi Từ kết thấy rằng: Khối lượng sinh khối nấm linh chi có khả tăng trưởng tốt khoảng pH = 4,5 đến pH = 6,5 Khi nuôi cấy môi SVTH: Nguyễn Thị Nhật 45 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân trường có pH = 7,5 khối lượng sinh khối thấp 0,6739g/100ml Lượng sinh khối thu cao 2,2169g/100ml giá trị pH = Vậy pH môi trường giá trị thích hợp để thu lượng sinh khối lớn Các nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi môi trường ME thu kết sau: + Thời gian thích hợp để thu nhận sinh khối 21 ngày + Nhiệt độ ni cấy thích hợp 300C + pH thích hợp cho q trình sinh trưởng phát triển nấm Linh chi pH =5 Hình 3.19: Sinh khối nấm 609 sau 24 ngày SVTH: Nguyễn Thị Nhật Hình 3.20: Sinh khối nấm 619 sau 24 ngày 46 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân PHẦN IV: KẾT LUẬN  Đề tài đạt kết sau: - Khi nuôi cấy môi trường ME, KMS, PG ME thu nhận sinh khối lớn Đối với chủng nấm 609 đạt 5,5904g/100ml, chủng 619 đạt 3,2375 g/100ml sau 21 ngày nuôi cấy - Khi thay đổi thành phần KMS M1 thu nhận sinh khối lớn So với KMS đạt 0,4519 g/100ml M1 đạt 1,4492 g/100ml sau 21 ngày nuôi cấy chủng nấm 609 - Khi bổ sung thêm khoáng nguồn dinh dưỡng Nitơ vào PG PG + khống + pepton thu nhận sinh khối lớn Đối với chủng nấm 609 đạt 2,1547g/100ml ; chủng nấm 619 đạt 2,0409 g/100ml - Khi thay phần lớn nước chiết malt tinh bột khoai tây khối lượng thu thấp cụ thể : với ME đạt 5,5904 g/100ml, PG + 10%ME + khoáng + pepton đạt 3,3850g/100ml - Đã nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến trình sinh trưởng phát triển nấm Linh chi môi trường ME + Sinh khối phát triển mạnh sau 21 ngày nuôi cấy + Nhiệt độ nuôi cấy thích hợp 300C + pH thích hợp pH =5  Hướng nghiên cứu đề tài Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến hoạt chất sinh học có nấm Linh chi SVTH: Nguyễn Thị Nhật 47 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân PHẦN V: TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Đoàn Sáng, 2003 Linh chi nguyên chất bệnh thời Nhà xuất Y học, Hà nội, Việt nam Lê Xuân Thám, 1996 Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điển hấp thu khoáng nấm Linh chi Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr).Karst Luận án phó tiến sỹ khoa học sinh học, Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà nội, Việt nam Lê Xuân Thám, 1996 Nấm Linh chi - dược liệu quí việt nam Nhà xuất Mũi Cà Mau Lê Xuân Thám, 2005 Nấm Linh chi vàng - nấm Hồng chi Báo khoa học phổ thơng, số 31/05 (1154) Lê Duy Thắng, 2001 Kỹ thuật nuôi trồng nấm ăn, tập Nhà xuất Nông nghiệp Nguyễn Lân Dũng, 2001 Công nghệ nuôi trồng nấm, tập Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Hữu Đống, 2003 Nuôi trồng chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Hữu Đống Đinh Xuân Linh, 2000 Nấm ăn nấm dược liệu - công dụng công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Hà nội Nguyễn Hữu Đống, Nguyễn Thị Sơn Zani Federico, 2002 Cơ sở khoa học công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội 10 Nguyễn Đức Lượng, 2003 Vi sinh học công nghiệp, tập Nhà xuất Đại học Quốc Gia TP.HCM 11 Nguyễn Đức Lượng, Phan Thị Huyền Nuyễn Ánh Tuyết, 2003 Thí nghiệm cơng nghệ sinh học, tập 2, thí nghiệm vi sinh vật học Nhà xuất Đại học Quốc Gia TP.HCM 12 Nguyễn Phước Nhuận, 2001 Giáo trình sinh hoá học, phần Nhà xuất Đại học Quốc Gia TPHCM 13 Trần Hùng, 2004 Phương pháp nghiên cứu dược liệu Đại học Y Dược TP.HCM SVTH: Nguyễn Thị Nhật 48 Lớp: 49K - CN thực phẩm Đồ án tốt nghiệp 14 GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Trần Văn Mão, 2004 Nuôi trồng chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Tài liệu tiếng Anh 15 Steyaert R.L, 1972 Species of Ganoderma and related genera mainly of the boyor and leiden herbaria National de Beigique, Burxelle 16 Shufeng Zhou, A clinical Study of a Ganoderma lucidum extract in patients with type II diabetes mellitus Division of Pharmacology and Clinical Pharmacology, Faculty of Medicine and Health Science, Auckland University, Auckland, NewZealand 17 Shufeng Zhou, Yihuai Gao, Gouliang Chen, Xihu Dai and Jingxian Ye A phaseI/II study of a Ganoderma lucidum extract in patients with coronary heart disease 18 Yihuai Gao, Guoliang Chen, Jin Lan, He Gao and Shufeng Zhou, 2001 Extractoin of Ganoderma polysaccharides at relatively low temperature Froc Int Symposium Ganoderma Sci, Auckland 19 Yihuai Gao, Jin Lan and Zhifang Liu, Extraction and determination of Ganoderma polysaccharides Int Med Complement Med Vol 1, Supplement 1,00-00 20 Zhaoji - Ding, 1980 The Ganodermataceae in chine Berlin Shiffigart 21 Z Nasreen / T Kausar / M Nadeem / R Bajwa Micología Aplicada Internacional, january, año/vol 17, número 001 Colegio de Postgraduados (Campus Puebla, México Puebla, México) pp 5-8 SVTH: Nguyễn Thị Nhật 49 Lớp: 49K - CN thực phẩm ... ĐỒ ÁN Nghiên cứu ni trồng nấm Linh chi môi trƣờng lỏng  Nội dung nghiên cứu: - Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường lỏng đến sinh trưởng phát triển nấm Linh chi - Nghiên cứu ảnh... chi (Linh chi đen gọi Huyền chi) + Thanh chi (Linh chi xanh gọi Long chi) + Bạch chi (Linh chi trắng gọi Ngọc chi) + Hồng chi (Linh chi vàng cịn gọi Kim chi) + Tử chi (Linh chi tím) Cho đến Linh. .. 1.6 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Linh chi giới Việt Nam 23 1.6.1 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Linh chi giới 23 1.6.2 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Linh chi Việt Nam