Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng tới sinh khối và hàm lượng polysaccharit của nấm linh chi trên môi trường lỏng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH 664 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên Khóa MSV Ngành : : : : Bạch Thị Hồng 50 0952040412 Công nghệ thực phẩm Tên đề tài: Nghiên cứu số yếu tố ảnh hƣởng tới sinh khối hàm lƣợng polysaccharit nấm Linh chi môi trƣờng lỏng Nội dung nghiên cứu, thiết kế tốt nghiệp: ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… Cán hƣớng dẫn : Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày hoàn thành đồ án : ThS Đào Thị Thanh Xuân Ngày tháng năm 2013 Ngày tháng năm 2014 Ngày Chủ nhiệm môn (Ký ghi rõ họ tên) Sinh viên hoàn thành nộp đồ án vào ngày tháng năm 2014 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ tên) tháng năm Ngƣời duyệt (Ký, ghi rõ họ tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Bạch Thị Hồng Khóa: 50 Cán hƣớng dẫn: ThS Đào Thị Thanh Xuân Cán duyệt: Msv: 0952040412 Ngành: Công nghệ thực phẩm Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Nhận xét cán hƣớng dẫn: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Ngày tháng năm 2014 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Bạch Thị Hồng Msv: 0952040412 Khóa: 50 Ngành: Cơng nghệ thực phẩm Cán hƣớng dẫn: ThS Đào Thị Thanh Xuân Cán duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Nhận xét cán duyệt: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Ngày tháng năm 2014 Cán duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân LỜI CẢM ƠN Đồ án đƣợc thực phịng thí nghiệm Vi sinh, phịng thí nghiệm Hóa thực phẩm Trƣờng Đại học Vinh Tôi xin chân thành cảm ơn ThS Đào Thị Thanh Xuân, giảng viên khoa Hóa học, trƣờng Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hƣớng dẫn tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành đồ án tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn tới thầy (cơ) khoa Hóa học, cán hƣớng dẫn phịng thí nghiệm Vi sinh, Phịng Hóa thực phẩm, khoa Hóa học - Trƣờng Đại học Vinh tạo điều kiện tận tình giúp đỡ tơi suốt q trình hồn thành đồ án tốt nghiệp Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn vơ hạn tới gia đình, ngƣời thân bạn bè động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập làm đồ án tốt nghiệp Cuối cùng, tơi xin kính chúc q thầy cô bạn luôn mạnh khỏe, Hạnh phúc thành công Vinh, tháng 01 năm 2014 SVTH: Bạch Thị Hồng SVTH: Bạch Thị Hồng i Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Nhiệm vụ nghiên cứu Yêu cầu .2 PHẦN I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Tổng quan nấm Linh chi 1.1.1 Giới thiệu nấm Linh chi 1.1.2 Phân loại nấm Linh chi .4 1.1.2.1 Vị trí phân loại 1.1.2.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm hình thái chu trình sống nấm Linh chi 1.1.3.1 Hình dạng màu sắc .6 1.1.3.2 Chu trình sống nấm Linh chi 1.2 Thành phần hóa học hoạt chất sinh học nấm Linh chi .8 1.2.1 Thành phần hóa học đặc tính dƣợc lý nấm Linh chi 1.3 Khả chữa bệnh nấm Linh chi 10 1.3.1 Đối với bệnh tim mạch .11 1.3.2 Hiệu chống ung thƣ 11 1.3.3 Khả kháng HIV 12 1.3.4 Hiệu Linh chi mệt mỏi mãn tính 12 1.3.5 Hiệu giảm đƣờng huyết .13 1.3.6 Khả chống oxy hóa 13 1.4 Tổng quan polysaccharit 14 1.4.1 Khái niệm 14 1.4.1.1 Polysaccharit đồng thể 14 1.4.1.2 Polysaccharit dị thể 15 1.4.2 Phân loại .16 SVTH: Bạch Thị Hồng ii Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân 1.4.3 Cấu trúc 17 1.4.3.1 Ganoderma polysaccharit 19 1.4.4 Ứng dụng polysaccharit 20 1.4.4.1 Tác dụng chống ung thƣ 22 1.4.4.2 Tăng cƣờng khả miễn dịch 22 1.4.4.3 Tác dụng chống q trình làm lão hố 23 1.4.4.4 Tác dụng Linh chi lên hệ tim mạch 23 1.4.4.5 Bảo vệ gan, trị viêm gan mãn tính 23 1.4.4.6 Trị chứng giảm bệnh cầu .24 1.5.5 Nguồn nguyên liệu chứa polysaccharit 24 1.5.6 polysaccharit nấm Linh chi 25 1.5.6.1 Thu nhận polysaccharit từ thể 25 1.5.6.2 Định lƣợng polysaccharit 26 1.5.6.3 Quy trình tách chiết polysaccharit từ nấm 27 1.5.7 Tình hình nghiên cứu Hợp chất polysaccharit nấm Linh chi giới Việt Nam 29 1.5.7.1 Tình hình nghiên cứu hợp chất polysaccharit nấm Linh chi giới 29 1.5.7.2 Tình hình nghiên cứu Hợp chất polysaccharit nấm Linh chi Việt Nam 31 PHẦN II: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 33 2.1 Thời gian, địa điểm đối tƣợng nghiên cứu 33 2.2 Vật liệu, hóa chất mơi trƣờng 33 2.2.1 Thiết bị .33 2.2.2 Hóa chất 33 2.2.3 Môi trƣờng sử dụng 33 2.2.3.1 Môi trƣờng giữ giống PGA ( Potato glucose agar) 33 2.2.3.2 Môi trƣờng nuôi cấy 34 SVTH: Bạch Thị Hồng iii Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân 2.3 Phƣơng pháp tách chiết polysaccharit ngoại bào (ESP) từ sinh khối nấm Linh chi 35 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu ảnh hƣởng yếu tố hóa lý dinh dƣỡng tới sinh khối hàm lƣợng polysaccharit nấm Linh chi 36 2.4.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng thời gian 36 2.4.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng pH 36 2.4.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt độ 37 2.4.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng Cacbon 37 2.4.5 Nghiên cứu ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng Nitơ 38 2.6.6 Phƣơng pháp xử lý kết phân tích 39 PHẦN III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 41 3.1 Chiết polysaccharit ngoại bào (EPS) từ sinh khối nấm Linh chi 41 3.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng yếu tố hóa lý dinh dƣỡng tới sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi môi trƣờng lỏng 42 3.2.1 Ảnh hƣởng thời gian đến sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) .42 3.2.2 Ảnh hƣởng pH đến hàm lƣợng sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) 44 3.2.3 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hàm lƣợng sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) .47 3.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng khác đến sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) 49 3.3.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng cacbon đến sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) 49 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng nguồn nitơ đến sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) .52 PHẦN IV: KẾT LUẬN 56 PHẦN V: TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 SVTH: Bạch Thị Hồng iv Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Điều kiện môi trƣờng cần thiết cho phát triển nấm Linh chi Bảng 1.2 Thành phần hóa học nấm Linh chi Bảng 1.3 Thành phần chất có hoạt tính nấm Linh chi Bảng 1.4 Lục bảo Linh chi tác dụng trị liệu 10 Bảng 2.1 Giá trị phân bố chuẩn T- student 38 Bảng 3.1 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi (VU) .42 Bảng 3.2 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến hàm lƣợng polysaccharit 43 Bảng 3.3 Khảo sát ảnh hƣởng pH đến hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi (VU) 45 Bảng 3.4 Khảo sát ảnh hƣởng pH đến hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) 46 Bảng 3.5 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi (VU) .47 Bảng 3.6 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) 48 Bảng 3.7 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng cacbon đến hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi (VU) 50 Bảng 3.8 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng đến hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) 51 Bảng 3.9 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng nitơ đến hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi (VU) 53 Bảng 3.10 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng nitơ đến hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) 54 SVTH: Bạch Thị Hồng v Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xn DANH MINH HÌNH VẼ Hình 1.1 Cổ Linh chi Hình 1.2 Linh chi Hình 1.3 Chu trình phát triển nấm Linh chi Hình 1.4 Một số polysaccharit tự nhiên 19 Hình 1.5 Sơ đồ quy trình ni trồng nấm Linh chi 26 Hình 1.6 Qui trình chiết suất polysaccharit từ nấm Linh chi Error! Bookmark not defined Hình 1.7 Quy trình tách chiết polysaccharit từ nấm 28 Hình 2.1 Quy trình tách chiết polysaccharit từ sinh khối nấm Linh chi 35 Hình 3.1 Quy trình tách chiết polysaccharit từ sinh khối nấm Linh chi 41 Hình 3.2 Sinh khối nấm linh chi (VU) 55 SVTH: Bạch Thị Hồng vi Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi sau 7, 12, 15, 18, 21, 24 ngày ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) 43 Biểu đồ 3.2 Hàm lƣợng polysaccharit nấm Linh chi sau 7, 12, 15, 18, 21, 24 ngày 44 Biểu đồ 3.3 Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi giá trị pH khác 45 Biểu đồ Hàm lƣợng polysaccharit sinh khối nấm giá trị pH khác .46 Biểu đồ 3.5 Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi nuôi trồng nhiệt độ khác 48 Biểu đồ 3.6 Hàm lƣợng polysaccharit sinh khối nấm nhiệt độ khác 49 Biểu đồ 3.7 Hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi môi trƣờng cacbon khác 50 Biểu đồ 3.8 Hàm lƣợng polysaccharit sinh khối nấm nguồn cacbon khác 51 Biểu đồ 3.9 Khối lƣợng sinh khối nấm môi trƣờng nitơ khác 53 Biểu đồ 3.10 Hàm lƣợng polysaccharit sinh khối nấm môi trƣờng nitơ khác .54 SVTH: Bạch Thị Hồng vii Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Để xử lý kết thực nghiệm thực phần mềm Microsoft Excel Bảng 3.3 Khảo sát ảnh hƣởng pH đến hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi (VU) Hàm lƣợng Sinh khối (g/l) pH TB Độ lệch chuẩn Lần Lần Lần 3 13,460 13,080 13,270 13,270 0,155 17,120 17,900 17,510 17,510 0,318 26,180 26,350 26,265 26,265 0,069 19,600 19,520 19,560 19,560 0,033 15,260 15,920 15,590 15,590 0,269 Biểu đồ 3.3 Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi giá trị pH khác Khối lƣợng sinh khối (g/l) 30 25 20 15 Khối lƣợng sinh khối (g/l) 10 pH = pH = pH = pH = pH = Từ kết cho ta thấy khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi có khả tăng trƣởng tốt khoảng pH = đến pH = Khi nuôi cấy mơi trƣờng có pH = khối lƣợng sinh khối thấp 13,270 (g/l) khối lƣợng sinh khối cao 26,265 (g/l) pH = - Vậy pH = thích hợp để ni cấy nấm Linh chi - Kết phù hợp với kết nghiên cứu nuôi trồng sinh khối nấm Linh chi từ Montenegro [20] cho thấy sinh khối nấm đƣợc trồng giá SVTH: Bạch Thị Hồng 45 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân trị pH thấp thu đƣợc không đáng kể (1,40 ± 0,20 0,60 ± 0,01g/l môi trƣờng tƣơng ứng) ngày 14 sau trồng thu đƣợc sinh khối lớn (20,60 ± 0,60 g/l) pH = 5, sau giảm tăng thêm độ pH - Nhƣng kết không phù hợp với kết Fang Zhong (2002) Hsiehetal (2005) ngƣời ta thu đƣợc tối đa sản xuất sinh khối sợi nấm pH =6 Bảng 3.4 Khảo sát ảnh hƣởng pH đến hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) Hàm lƣợng polysaccharit (g/l) pH TB Độ lệch chuẩn Lần Lần Lần 3 1,730 1,690 1,710 1,710 0,016 2,650 2,715 2,683 2,683 0,027 5,120 5,340 5,230 5,230 0,090 3,250 3,120 3,185 3,185 0,053 2,260 2,340 2,300 2,300 0,033 Biểu đồ Hàm lƣợng polysaccharit sinh khối nấm giá trị pH khác Hàm lƣợng polysaccharit (g/l) Hàm lƣợng polysaccharit (g/l) pH = pH = pH = pH = pH = - Dựa vào biểu đồ ta thấy sinh khối nấm đƣợc trồng giá trị pH thấp pH = thu đƣợc không đáng kể 1,710 g/l, pH = đạt đƣợc kết SVTH: Bạch Thị Hồng 46 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Formatted: Indent: First line: 0.38" Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân cao 5,230 g/l giá trị pH khác thu đƣợc hàm lƣơng polysaccharit mức bình thƣờng Nhƣ pH tối ƣu để thu nhận polysacharit pH = đạt 5,230 (g/l) - Kết đƣợc so sánh với kết nghiên cứu nuôi trồng sinh khối nấm Linh chi từ Montenegro [20] cho thấy có khác biệt: Yang Lian (1998) thấy giá trị pH tối ƣu để tổng hợp polysaccharit ngoại bào pH =4 3.2.3 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hàm lƣợng sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) Nhiệt độ nhân tố quan trọng đến sinh trƣởng phát triển nấm, ảnh hƣởng trực tiếp đến phản ứng sinh hóa bên tế bào, kích thích hoạt động chất sinh trƣởng, enzym chi phối toàn hoạt động sống nấm Mỗi loài nấm khác có nhiệt độ phát triển thích hợp riêng Khi nhiệt độ cao hay thấp ảnh hƣởng tới tốc độ phát triển sợi nấm.Vì chúng tơi tiến hành nghiên cứu điều kiện nhiệt độ 20oC, 25oC, 30oC, 35oC Theo dõi sinh trƣởng phát triển nấm Linh chi mơi trƣờng lỏng pH = 5, vịng 21 ngày thu sinh khối đem sấy khô 40 – 50oC đem cân, sau tách chiết polysaccharit cân đến khối lƣợng không đổi ghi nhận số liệu - Để xử lý kết thực nghiệm thực phần mềm Microsoft Excel Bảng 3.5 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi (VU) Nhiệt độ Hàm lƣợng Sinh khối (g/l) TB Độ lệch chuẩn Lần Lần Lần 20 13,500 13,960 13,240 13,567 0,297 25 23,160 23,300 22,720 23,060 0,247 30 26,250 26,320 26,640 26,403 0,169 35 16,840 17,400 17,080 17,107 0,229 SVTH: Bạch Thị Hồng 47 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Formatted: Indent: First line: 0.38" Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Biểu đồ 3.5 Khối lƣợng sinh khối nấm Linh chi nuôi trồng nhiệt độ khác - Khi nuôi trồng sinh khối nấm nhiệt độ khác thu đƣợc hàm lƣợng sinh khối khác Sinh khối nấm phát triển mạnh nhiệt độ 25oC đến 30oC Nhiệt độ 30oC hàm lƣợng sinh khối thu đƣợc cao 26,403 g/l - Vậy nhiệt độ 30oC thích hợp cho sinh trƣởng phát triển sinh khối nấm Linh chi Bảng 3.6 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) Nhiệt độ Hàm lƣợng polysaccharit (g/l) Độ lệch TB chuẩn Lần Lần Lần 20 13,500 13,960 13,240 1,713 0,068 25 23,160 23,300 22,720 3,353 0,241 30 26,250 26,320 26,640 5,480 0,071 35 16,840 17,400 17,080 2,669 0,043 SVTH: Bạch Thị Hồng 48 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Biểu đồ 3.6 Hàm lƣợng polysaccharit sinh khối nấm nhiệt độ khác - Từ kết thấy rằng: Hàm lƣợng polysaccharit thu đƣợc nhiều nhiệt độ 25oC 3,353 g/l nhiều nuôi trồng sinh khối nấm Linh chi nhiệt độ 30oC đƣợc 5,480 g/l, ni trồng sợi nấm nhiệt độ 20oC hàm lƣợng polysaccharit thu đƣợc không đáng kể - Vậy nhiệt độ 30oC nhiệt độ thích hợp để thu nhận polysaccharit sinh khối nấm Linh chi - Nghiên cứu yếu tố ảnh hƣởng thời gian, nhiệt độ, pH cho thấy tốt cho thu nhận sinh khối hàm lƣợng polysaccharit là: Thời gian 21 ngày, pH = 5, nhiệt độ 30oC Vì chọn Thời gian 21 ngày, pH = 5, nhiệt độ 30oC để thực nghiên cứu ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng khác đến sinh khối hàm lƣợng polysaccharit nấm Linh chi 3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng khác đến sinh khối hàm lượng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) 3.3.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng Cacbon đến sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) - Môi trƣờng sử dụng cho nghiên cứu cacbon đƣợc bổ sung dƣới dạng đƣờng D-glucose, Nguồn cacbon khác ảnh hƣởng lớn đến hàm lƣợng sinh khối hàm lƣợng polysaccharit nấm Linh chi Vì thực thay glucose nguồn: Lactose, Sucrose, Maltose, Fructose với hàm lƣợng 9,75 g/l SVTH: Bạch Thị Hồng 49 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Formatted: Font: Times New Roman Bold, Condensed by 0.2 pt Formatted: Justified Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân - Sinh khối nấm Linh chi đƣợc nuôi nhiệt độ 30oC, pH = tới 21 ngày, Lấy sinh khối rửa đem sấy nhiệt độ 50oC cân tới khối lƣợng không đổi xác định hàm lƣợng sinh khối Linh chi - Tiến hành chiết polysaccharit cách sử dụng chiết xuất kiềm kết tủa cồn, Ly tâm sấy tới khối lƣợng không đổi ta thu đƣợc hàm lƣợng polysaccharit - Để xử lý kết thực nghiệm thực phần mềm Microsoft Excel Bảng 3.7 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng cacbon đến hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi (VU) Hàm lƣợng sinh khối (g/l) Lần Lần Lần 26,580 25,900 26,820 26,433 Độ lệch chuẩn 0,390 Lactose 23,160 23,300 22,720 23,060 0,247 Sucrose 19,940 19,520 19,720 19,727 0,172 Maltose 15,260 15,170 14,830 15,087 0,185 Fructose 12,240 13,480 12,020 12,580 0,643 Môi trƣờng D-Gucose TB Formatted: Line spacing: single Biểu đồ 3.7 Hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi môi trƣờng cacbon khác Formatted: Centered Khối lượng sinh khối (g/l) 30 25 20 Khối lƣợng sinh khối (g/l) 15 10 Glucose Lactose SVTH: Bạch Thị Hồng Sucrose Maltose Fructose 50 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân - Tất nguồn cacbon có ảnh hƣởng sâu sắc đến sinh trƣởng phát triển sinh khối nấm - Dựa vào kết ta thấy sinh khối nấm Linh chi đạt hàm lƣợng cao nuôi cấy môi trƣờng glucose 26,433 g/l, môi trƣờng lactose 23,060 g/l - Nhƣ mơi trƣờng glucose mơi trƣờng thích hợp để thu nhận hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi Khi thiếu mơi trƣờng glucose ta thay mơi trƣờng lactose Bảng 3.8 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng đến hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) Hàm lƣợng polysaccharit (g/l) Môi TB Độ lệch trƣờng Lần Lần Lần chuẩn D-Gucose 5,580 5,480 5,700 5,587 0,090 Lactose 3,480 3,500 3,420 3,467 0,034 Sucrose 2,960 2,840 2,870 2,890 0,051 Maltose 2,130 2,080 1,860 2,023 0,117 Fructose 1,830 1,940 1,820 1,863 0,054 Formatted: Font: pt Biểu đồ 3.8 Hàm lƣợng polysaccharit sinh khối nấm nguồn cacbon khác SVTH: Bạch Thị Hồng 51 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân - Các nghiên cứu môi trƣờng glucose, Lactose, Sucrose, Maltose, Formatted: Indent: First line: 0.38" Fructose cho hàm lƣợng polysaccharit khác Hàm lƣợng polysaccharit đạt cao 5,587 g/l môi trƣờng glucose, môi trƣờng lactose 3,467 g/l - Nhƣ hàm lƣợng polysacharit đạt cao 5,587 g/l môi trƣờng glucose - So sánh kết với kết nghiên cứu Trametes versicolor Coprinus sp [18] có khác nhau: Họ nghiên cứu đƣợc tất nguồn cacbon đƣợc sử dụng, môi trƣờng sucrose nguồn cacbon tốt để thu nhận polysaccharit - Nhƣng kết phù hợp với Alofe (1985) Kadiri (1990) báo cáo glucoza nguồn carbohydrate thích hợp để thu nhận polysaccharit [18] 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng nguồn Nitơ đến sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) - Sử dụng môi trƣờng không bổ sung nguồn dinh dƣỡng nitơ - Các môi trƣờng đƣợc bổ sung thêm nguồn nitơ khác ảnh hƣởng lớn đến hàm lƣợng sinh khối hàm lƣợng polysacharit nấm Linh chi Vì tơi thực bổ sung nguồn nitơ: Yeast extract, ure, pepton, casein với hàm lƣợng g/l - Sinh khối nấm Linh chi đƣợc nuôi nhiệt độ 30oC, pH = tới 21 ngày, Lấy sinh khối rửa đem sấy nhiệt độ 50oC cân tới khối lƣợng không đổi xác định hàm lƣợng sinh khối Linh chi - Tiến hành chiết polysaccharit cách sử dụng chiết xuất kiềm kết tủa cồn, Ly tâm sấy tới khối lƣợng không đổi ta thu đƣợc hàm lƣợng polysaccharit - Để xử lý kết thực nghiệm thực phần mềm Microsoft Excel SVTH: Bạch Thị Hồng 52 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Formatted: Indent: First line: 0.38" Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Bảng 3.9 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng nitơ đến hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi (VU) Môi trƣờng Hàm lƣợng sinhkhối (g/l) TB Độ lệch chuẩn Lần Lần Lần 15,960 15,820 15,800 15,860 0,071 Yeast extract 21,960 21,910 21,870 21,913 0,037 Ure 18,960 18,840 18,880 18,893 0,050 Pepton 20,480 20,450 20,430 20,453 0,021 Casein 17,390 17,420 17,420 17,410 0,014 MT không bổ sung nguồn nitơ Biểu đồ 3.9 Khối lƣợng sinh khối nấm môi trƣờng nitơ khác Nguồn dinh dƣỡng nitơ có ảnh hƣởng lớn đến sinh trƣởng phát triển sinh khối nấm dựa vào biểu đồ ta thấy: Khi bổ sung thêm nguồn dinh dƣỡng nitơ với hàm lƣợng 2g/l hàm lƣợng sinh khối nấm tăng lên đáng kể Hàm lƣợng sinh khối thu đƣợc cao 21,913 g/l môi trƣờng Yeast extract 20,453 g/l mơi trƣờng pepton, cịn mơi trƣờng khơng chứa nitơ thu đƣợc hàm lƣợng không đáng kể SVTH: Bạch Thị Hồng 53 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân - Nhƣ môi trƣờng Yeast extract môi trƣờng thu đƣợc hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi cao 20,453 g/l - Kết Phù hợp với kết nghiên cứu Trametes versicolor Coprinus sp [18] Họ nghiên cứu đƣợc môi trƣờng Yeast extract kích thích suất sinh khối cao sau ngày nuôi cấy, suất sinh khối dao động 2,0 – 19 g/l Bảng 3.10 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng nitơ đến hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi (VU) Hàm lƣợng polysaccharit Môi trƣờng (g/l) TB Độ lệch Formatted: Line spacing: 1.5 lines chuẩn Lần Lần Lần MT không bổ sung nguồn nitơ 2,780 2,720 2,698 2,733 0,035 Yeast extract 3,980 3,970 3,890 3,947 0,040 Ure 2,950 2,870 2,920 2,913 0,033 Pepton 3,860 3,850 3,730 3,813 0,059 Casein 1,957 1,960 1,960 1,959 0,002 Biểu đồ 3.10 Hàm lƣợng polysaccharit sinh khối nấm môi trƣờng nitơ khác Formatted: Centered 4,5 3,5 2,5 Hàm lượng polys accharit (g/l) 1,5 0,5 MT không chứa nitơ SVTH: Bạch Thị Hồng Y eas t extract ure pepton 54 cas ein Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân - Các nguồn nitơ khác ảnh hƣởng sâu sắc đến sản xuất polysaccharit ngoại bào (ESP) - Dựa vào biểu đồ ta thấy: Khi bổ sung thêm nguồn dinh dƣỡng nitơ với hàm lƣợng 2g/l hàm lƣợng polysaccharit tăng lên đáng kể Hàm lƣợng polysaccharit thu đƣợc cao 3,947 g/l môi trƣờng Yeast extract, cịn mơi trƣờng khơng chứa nitơ thu đƣợc hàm lƣợng không đáng kể - Nhƣ môi trƣờng Yeast extract môi trƣờng thu đƣợc hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi cao 3,813 g/l - Kết Phù hợp với kết nghiên cứu Trametes versicolor Coprinus sp [18] Họ nghiên cứu đƣợc mơi trƣờng Yeast extract kích thích tốt sản xuất polysaccharit ngoại bào 7,835 mg/l sau ngày ni cấy Hình 3.2 Sinh khối nấm Linh chi (VU) SVTH: Bạch Thị Hồng 55 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Formatted: Justified Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân PHẦN IV: KẾT LUẬN Đề tài đạt đƣợc kết sau: - Hàm lƣợng sinh khối hàm lƣợng polysaccharit thu đƣợc khác nuôi cấy thời điểm khác 7, 12, 15, 18, 21 ngày + Hàm lƣợng sinh khối đạt cao 25,913 g/l 21 ngày + Hàm lƣợng polysaccharit cao 5,593 g/l 21 ngày - Giá trị pH ảnh hƣởng lớn đến hàm lƣợng sinh khối hàm lƣợng polysaccharit + Hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi phát triển mạnh pH =5, sinh khối đạt hàm lƣợng cao 26,265 g/l + pH thích hợp để thu nhận hàm lƣợng polysaccharit cao 5,230 g/l pH =5 - Đã nghiên cứu đƣợc yếu tố nhiệt độ ảnh hƣởng đến hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi hàm lƣợng polysaccharit + Nhiệt độ 30oC nhiệt độ thích hợp để ni trồng sinh khối thu nhận polysaccharit - Đã nghiên cứu đƣợc ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng khác tới hàm lƣợng sinh khối hàm lƣợng polysaccharit + Nguồn cacbon thích hợp để sinh khối nấm phát triển mạnh thu nhận hàm lƣợng polysaccharit cao môi trƣờng glucose + Môi trƣờng chứa nguồn nitơ thích hợp để thu nhận hàm lƣợng sinh khối hàm lƣợng polysaccharit môi trƣờng Yeast extract Hƣớng nghiên cứu đề tài Nghiên cứu ảnh hƣởng số yếu tố hóa lý thành phần dinh dƣỡng đến hàm lƣợng sinh khối hoạt chất sinh học có nấm Linh chi SVTH: Bạch Thị Hồng 56 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân PHẦN V: TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt PGS TS Nguyễn Thƣợng Dong (2007), Nấm Linh chi, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Lê Xuân Thám, 1996 Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điển hấp thu khoáng nấm Linh chi Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr).Karst Luận án phó tiến sỹ khoa học sinh học, Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà nội, Việt nam Đoàn Sáng, 2003 Linh chi nguyên chất bệnh thời Nhà xuất Y học, Hà nội, Việt nam Lê Xuân Thám (1998), Nấm Linh chi thuốc quý, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội Bùi Chí Hiếu CTV, 1993 Tìm hiểu tác dụng lâm sàng nấm Linh chi Tài liệu tham khảo nội bộ, Tp HCM, 1993 Nguyễn Lân Dũng, 2001 Công nghệ nuôi trồng nấm, tập Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Hữu Đống, 2003 Nuôi trồng chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Hữu Đống Đinh Xuân Linh, 2000 Nấm ăn nấm dƣợc liệu - công dụng công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Hà nội Trần Văn Mão, 2004 Nuôi trồng chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội 10 PGS.TS Nguyễn Thị Chính (2005) Phát triển cơng nghệ sản xuất nấm dƣợc liệu phục vụ tăng cƣờng sức khỏe Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên 11 Nguyễn Lân Dũng, 2001 Công nghệ nuôi trồng nấm, tập Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội 12 Trần Hùng, 2004 Phƣơng pháp nghiên cứu dƣợc liệu Đại học Y Dƣợc TP.HCM SVTH: Bạch Thị Hồng 57 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân 13 Nguyễn Thị Chính , Vũ Thành Cơng, Ick-Dong Yoo, Jong-Pyung Kim, Đặng Xuyến Nhƣ, Dƣơng Hồng Dinh Nghiên cứu số thành phần hoạt chất sinh học nấm Linh chi Ganoderma lucidum nuôi trồng Việt Nam Báo cáo Hội nghị Sinh học toàn quốc, Hà nội (2005) 14 Nguyễn Thị Chính, Kiều Thu Vân, Dƣơng Đình Bi, Nguyễn Thị Đức Hiền Nghiên cứu số hoạt chất sinh học tác dụng chữa bệnh nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) Proceedings- Hội nghị cơng nghệ sinh học tồn quốc, Hà Nội (1999) 15 Lê Mai Hƣơng cộng (2010) Nghiên cứu nuôi trồng số loại nấm ăn nấm dƣợc liệu Việt Nam, thu nhận, chuyển hóa khảo sát hoạt tính kháng u thực nghiệm polysaccharit chúng Viện Khoa học công nghệ Việt Nam 16 Lý Thời Trân(1590) Trong Bản thảo cƣơng mục, đƣợc xuất kim lăng Tài liệu tiếng Anh 17 Yap, A-T and Ng, M-L.M 2001 An improved method for the isolation of lentinan from the edible and medicinal shiitake mushroom, Lentinus edodes (Berk.) Sing (Agaricomycetideae) International Journal of Medicinal Mushrooms 18 Adebayo–Tayo Bukola Christianah and Edwin Emeka Ugwu (2011) Influence of Different Nutrient Sources on Exopolysaccharit Production and Biomass Yield by Submerged Culture of Trametes versicolor and Coprinus sp AU J.T.15(2): 63-69 19 Jelena Vukojevic, Mirjana Stajic And Jasmina Simonic (2006) Effect of medium PH and cultivation period on mycelial biomass, polysaccharit, and ligninolytic enzime production by Ganoderma Lucidum from montegro Arch Biol Sci, Belgrade, 58(3), 179-182 20 Man Deuk Han, Yeon Soo Han, Sung Hee Hyun and Hyun Woung Shin (2008) Solubilization of water-insoluble b-glucan isolated from Ganoderma SVTH: Bạch Thị Hồng 58 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Đào Thị Thanh Xuân Lucidum Journal of Environmental Biology, 29(2) 237-242 21 Pang.X, Chen.Z, Gao.X, Liu.W, Slavin.M, Yao.W, and Yu.L.L (2007) Potential of a Novel polysaccharit preparation (GLPP) from Anhui – Grown Ganoderma lucidum in Tumor Treatment and lmmunostimulation Journal of Food Science, Vol.72, Nr.6 22 Wang Chi, Zh Y Hua, 1994 A new kind of preparation of Ganoderma lucidum in treating 35 patients with coronary cardiac disease Proc 94 Inter Sym On Ganoderma Res., p58-9 Beijing, China, 1994 23 Zhao, J D and Zhang, X Q Resources and taxonomy of Ling zhi in China”, International Symposium on Ganoderma Research Beijing, Beijing Medical University, (1994), 24-26 24 Kidd, P.M., 2000 The use of mushroom glucans and proteoglycans in cancer treatment Altern Med Rev 25 Yi-Wei Chang and Ting-Jang Lu (2004) Molecular Characterization of Polysaccharits in Hot-Water Extracts of Ganoderma lucidum Fruiting Bodies Graduate Institute of Food Science and Technology, National Taiwan University, Taipei, Taiwan (R.O.C.) 26 Yihuai Gao, Guo Liang Chen, Jin Lin Hua Gao and Shufeng Zhou, 2001 Extractoin of Ganoderma polysaccharides at relatively low temperature Froc Int Symposium Ganoderma Sci, Auckland 27 Cum Zhuang; Takashi Mizuno and Hitosgi (1994) Fractionation and antitumor activity of polysaccharides from Grifola frondosa mycelium Tạp chí Bioscience Biotechnology and Biochemistry, Journal of Natural products, 58(1), 185-188 SVTH: Bạch Thị Hồng 59 Lớp: 50K - Công nghệ Thực Phẩm ... lƣợng polysaccharit nấm Linh chi môi trƣờng lỏng? ?? Nhiệm vụ nghiên cứu - Nghiên cứu ảnh hƣởng số yếu tố hóa lý thành phần dinh dƣỡng môi trƣờng lỏng tới hàm lƣợng sinh khối nấm Linh chi - Nghiên cứu. .. xích chi (linh chi đỏ), huỳnh chi (linh chi vàng), hắc chi (linh chi đen), tử chi (linh chi tím), bạch chi (linh chi trắng) chi (linh chi xanh) có tác dụng làm thuốc tốt nên gọi Lục Bảo Linh chi. .. 3.1 Chi? ??t polysaccharit ngoại bào (EPS) từ sinh khối nấm Linh chi 41 3.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng yếu tố hóa lý dinh dƣỡng tới sinh khối hàm lƣợng polysaccharit ngoại bào (EPS) nấm Linh chi môi