Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường lỏng lắc, các chất điều hòa sinh trưởng thực vật, dung dịch NANO và đèn LED đến khả năng sinh và phục hồi mô sẹo hà thủ ô đỏ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ HUTECH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VIỆN KHOA HỌC ỨNG DỤNG HUTECH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MƠI TRƯỜNG LỎNG LẮC, CÁC CHẤT ĐIỀU HỒ SINH TRƯỞNG THỰC VẬT, DUNG DỊCH NANO VÀ ĐÈN LED ĐẾN KHẢ NĂNG TĂNG SINH VÀ PHỤC HỒI MÔ SẸO HÀ THỦ Ô ĐỎ (POLYONUM MULTIFLORUM THUNB), MỘT LOẠI DƯỢC LIỆU QUÝ Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHÊ SINH HỌC GVHD: TS Trịnh Thị Lan Anh SVTH: Dương Trịnh Hạo Uyên – 1611100238 Lê Thị Nguyên Đan – 1611100274 Lớp: 16DSHA1 TP Hồ Chí Minh, năm 2020 i LỜI CAM ĐOAN Chúng em xin cam đoan nội dung đồ án tốt nghiệp “Nghiên cứu ảnh hưởng mơi trường lỏng lắc, chất điều hồ sinh trưởng thực vật, dung dịch nano đèn LED đến khả tăng sinh phục hồi mô sẹo Hà thủ đỏ (Polyonum multiflorum Thunb), lồi dược liệu q.” cơng trình nghiên cứu thực chúng em hướng dẫn cô TS Trịnh Thị Lan Anh Đề tài tiến hành nghiên cứu phịng thí nghiệm cơng nghệ sinh học, Trung tâm đào tạo nhân lực chất lượng cao, Trường Đại học Công nghệ TP HCM Các số liệu kết nghiên cứu hoàn toàn trung thực Chúng em xin hoàn toàn chịu trách nhiệm lời cam đoan TP HCM, ngày 29 tháng 09 năm 2020 Sinh viên thực Dương Trịnh Hạo Uyên i Lê Thị Nguyên Đan LỜI CẢM ƠN Sau thời gian dài thực đồ án phịng thí nghiệm cơng nghệ sinh học, Trung tâm đào tạo nhân lực chất lượng cao, Trường Đại học Cơng nghệ TP HCM đến nhóm em hồn thành xong đề tài Để đạt kết ngày hôm chúng em xin chân thành cảm ơn Ban giám Hiệu trường ĐH Công nghệ TP HCM tạo điều kiện để chúng em học tập hoàn thành đề tài nghiên cứu Chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô Viện Khoa Học Ứng Dụng Hutech tận tình dạy, giúp đỡ truyền đạt kiến thức quý giá bổ ích cho chúng em suốt thời gian học tập vừa qua Trong suốt năm qua trường đại học, em học tập biết kiến thức mẻ, chuyên sâu làm nhiều đề tài nghiên cứu nói chung đề tài tốt nghiệp nói riêng, em ln nhận quan tâm, dạy tận tình từ q Thầy anh chị khóa để trải nghiệm trọn vẹn thời sinh viên thật tươi đẹp thỏa mãn ước mơ, khát vọng Chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cô TS Trịnh Thị Lan Anh – người trực tiếp hướng dẫn em thực đề tài tốt nghiệp Cơ tận tình bảo, hướng dẫn giải đáp thắc mắc đề phương án cách tiếp cận vấn đề cho chúng em suốt trình thực hồn thành đề tài nghiên cứu Lời nói tiếp theo, chúng em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình Gia đình ln hập phương, động lực lớn đời chúng em, giúp chúng em vượt qua khó khăn chuyên tâm học hành Bên cạnh gia đình cịn có người bạn, người cộng chúng em vượt qua khó khăn học tập trình làm đồ án, giúp đỡ lẫn để người hồn thành sn sẻ nghiên cứu đạt kết tốt nghiệp tốt Cảm ơn bạn nhiều: Anh Sang, Mỹ Linh, Thịnh, Hạnh, Thuận,…đã giúp đỡ hỗ trợ chúng em hoàn thành đồ án ii Một lần chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới quý thầy cô, anh chị, bạn bè đồng hành chúng em suốt năm đại học Vì kiến thức thân hạn chế, thời gian thực đề tài có hạn nên q trình học tập thực đề tài khơng thể tránh khỏi sai sót, kính mong nhận ý kiến đóng góp quý giá từ quý thầy cô hội đồng Em xin cảm ơn! TP HCM, ngày 29 tháng 09 năm 2020 Sinh viên thực Dương Trịnh Hạo Uyên iii Lê Thị Nguyên Đan MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH ẢNH iv MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề 1.1 Tính cấp thiết vấn đề 1.2 Tầm quan trọng vấn đề 1.3 Ý nghĩa khoá học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn Tình hình nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu 4.1 Đối tượng nghiên cứu 4.2 Phạm vi nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Các kết đạt iv Kết cấu đồ án CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 10 1.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào 10 1.2 Ảnh hưởng yếu tố mơi trường đến q trình ni cấy mơ thực vật 10 1.2.1 Điều kiên nuôi cấy tế bào thực vật 11 1.2.2 Môi trường nuôi cấy mô tế bào 12 1.2.3 Các chất điều hoà sinh trưởng thực vật 13 1.2.4 Vai trò chất ĐHST TV hình thành mơ sẹo 15 1.3 Các dung dịch nano 15 1.3.1 Nano đồng 16 1.3.1.1 Ảnh hưởng nano đồng thực vật 17 1.3.1.2 Cơ chế kháng khuẩn nano đồng 18 1.3.2 Nano bạc 18 1.3.2.1 Ảnh hưởng nano bạc lên thực vật 19 1.3.3 Nano chitosan 20 1.3.3.1 Ảnh hưởng chitosan nuôi cấy tế bào thực vật 21 1.3.3.3 Sơ lược số nghiên cứu chitosan nuôi cấy mô tế bào thực vật 22 1.4 Giới thiệu auxin 2,4-D (2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) 23 1.4.1 Khái niệm 23 1.4.2 Ảnh hưởng 2,4-D nuôi cấy mô tế bào thực vật 23 1.4.3 Sơ lược số nghiên cứu 2,4-D nuôi cấy mô thực vật 23 v 1.5 Ánh sáng 24 1.5.1 Các loại ánh sáng 24 1.5.3 Đèn LED 24 1.5.4.1 Ưu nhược điểm đèn LED 27 1.5.6.2 Một số nghiên cứu sử dụng đè LED nuôi cấy in vitro 27 1.6 Phương pháp lỏng lắc 29 1.7 Mô sẹo 31 1.7.1 Khái niệm 31 1.7.2 Mục đích ni cấy mơ sẹo 31 1.7.3 Những nghiên cứu mô sẹo dược liệu 32 1.7.3.1 Sâm Ngọc Linh (Panax Vietnamensis) 32 1.7.3.2 Cây Trinh nữ hoàng cung (Crinum latifolium L.) 32 1.8 Sơ lược Hà thủ ô đỏ (Polyonum multiflorum Thunb) 33 1.8.1 Phân loại khoa học 33 1.8.3 Đặc điểm thực vật 34 1.8.4 Giá trị dược liệu Hà thủ ô đỏ 35 1.8.4.1 Giá trị làm thuốc 35 1.8.4.2 Thành phần hoá học tác dụng dược lý 37 1.9 Tình hình nghiên cứu, sản xuất Hà thủ đỏ Việt Nam giới 38 1.9.1 Tình hình nghiên cứu sản xuất Hà thủ ô Việt Nam 38 1.9.2 Tình hình nghiên cứu, sản xuất Hà thủ ô giới 40 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 41 vi 2.1 Địa điểm thời gian tiến hành đồ án 41 2.1.1 Địa điểm 41 2.1.2.Thời gian tiến hành 41 2.2.Vật liệu 41 2.2.1 Nguồn mẫu 41 2.2.2 Môi trường điều kiện nuôi cấy 42 2.2.3 Thiết bị dụng cụ 42 2.3 Phương pháp nghiên cứu 45 2.4.Bố trí thí nghiệm 45 2.4.1.Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BAP đến tăng sinh mô sẹo 45 2.4.2.Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng 2,4-D đến tăng sinh mơ sẹo46 2.4.3.Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng thể tích mơi trường ni cấy lỏng lắc đến tăng sinh mô 47 2.4.4.Thí nghiệm 4: Khảo sát thời gian lắc nuôi cấy lỏng lắc đến tăng sinh mô sẹo 48 2.4.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát dung dịch nano đồng đến phục hồi mơ sẹo 49 2.4.6 Thí nghiệm 6: Khảo sát dung dịch nano bạc đến phục hồi mơ sẹo 50 2.4.7.Thí nghiệm 7: Khảo sát dung dịch nano chitosan đến phục hồi mô sẹo 51 2.4.8 Thí nghiệm 8: Khảo sát ánh sáng đèn LED đơn sắc đến phục hồi 52 2.4.9 Thí nghiệm 9: Khảo sát ánh sáng đèn LED hỗn hợp đến phục hồi mô sẹo 53 2.4.10.Thí nghiệm 10: Khảo sát chu kì chiếu sáng đến phục hồi mơ 54 vii 2.4.11.Thí nghiệm 11: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ kinetin đến phục hồi mô sẹo 55 2.5 Chỉ tiêu theo dõi 56 2.6 Thống kê xử lý số liệu 56 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 57 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng nồng độ BAP đến tăng sinh mô sẹo 57 3.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng nồng độ 2,4-D đến tăng sinh mô sẹo 63 3.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng thể tích mơi trường đến tăng sinh mô sẹo 69 3.4 Thí nghiệm Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến tăng sinh mô sẹo 75 3.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng dung dịch nano đồng đến phục hồi mô sẹo 81 3.6 Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng dung dịch nano bạc đến phục hồi mô sẹo 88 3.7 Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng dung dịch nano chitosan đến phục hồi mô sẹo 95 3.8 Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED đơn sắc đến phục hồi mô sẹo 102 3.9 Thí nghiệm 9: Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED hỗn hợp đến phục hồi mô sẹo 107 3.10 Thí nghiệm 10: Ảnh hưởng chu kì chiếu sáng đến phục hồi mô sẹo 113 viii 3.11 Thí nghiệm 11: Ảnh hưởng nồng độ kinetin đến phục hồi mô sẹo 119 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 125 4.1 Kết luận 125 4.2 Kiến nghị 125 TÀI LIỆU THAM KHẢO 127 PHỤ LỤC ix Tài liệu Internet http://agrobiotech.gov.vn/NewsDetail.aspx?ID=723&CatID=7 http://agrobiotech.gov.vn/ https://images.app.goo.gl/SskFPsWo37JMFmrb6 https://indochinaherb.vn/ https://opcpharma.com/vuon-duoc-lieu/ha-thu-o-do.html Nguồn: sách đỏ Việt nam- PhầnII Thực vật https://www.slideshare.net/trongthuy3/luan-an-nghien-cuu-bao-che-vien-nenchua-cao-ha-thu-o-do-hay https://www.researchgate.net/publication/327515726_Danh_gia_tac_dong_cua_n ano_bac_trong_viec_cai_tien_chat_luong_cay_hoa_hong_rosa_sp_nuoi_cay_in_ vitro http://luanvan.net.vn/luan-van/nghien-cuu-kha-nang-tai-sinh-choi-va-cum-choitrong-nuoi-cay-in-vitro-cay-ha-thu-o-do-polygonum-multiflorum-thunb-52364/ https://xemtailieu.com/tai-lieu/xay-dung-quy-trinh-nhan-giong-in-vitro-cay-hathu-o-do-polygonum-multiflorum-thunb-560072.html https://m.123doc.net/document/5890610-buoc-dau-khao-sat-anh-huong-cua-anhsang-led-light-emiting-diode-den-kha-nang-tai-sinh-cay-ca-phe-voi-coffeacanephora-qua-phoi-soma.htm 131 PHỤ LỤC Phụ Lục A: Thành phần môi trường MS (Muashighe Skoong, 1962) Thành phần Nồng độ(mg/l) CaCl2.2H2O 440 KH2PO4 170 KNO3 1900 Mg2SO4.7H2O 370 NH4NO3 1650 MnSO4.4H2O 22,3 ZnSO4.7H2O 8,6 H3PO3 6,2 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,025 FeSO4.7H2O 27,8 Na2.EDTA 37,3 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 Glicine Myo-Inositol 100 Vitamin thành Acid Nicotinic (Niaxin) 0,5 phần hữu Thiamine HCl (Vitamin 0,1 Muối khoáng đa lượng Muối khoáng vi lượng B1) Pyridoxine HCl (Vitamin B6) 0,5 Phụ Lục B: Thống kê xử lý số liệu chương trình Statistical Analysic Systems V.8 (SAS ) Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BAP đến tăng sinh mô sẹo Trọng lượng tươi TRONG LUONG TUOI 00:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels T Values A0 A1 A2 A3 Number of Observations Read 60 Number of Observations Used 60 TRONG LUONG TUOI 00:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure Dependent Variable: N Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 50.37918925 16.79306308 226.93 F 50.37918925 16.79306308 226.93 F Model 0.08398689 0.02799563 58.42 F 0.08398689 0.02799563 58.42 F Model 15.52933333 5.17644444 192.74 F 15.52933333 5.17644444 192.74 F Model 4.53933333 1.51311111 29.02 F 4.53933333 1.51311111 29.02 F Model 57.09601624 19.03200541 541.76 F F Model 0.36045020 0.12015007 324.86 F F Model 18.03112500 6.01037500 178.62 F 18.03112500 6.01037500 178.62 F Model 3.63593833 1.21197944 81.36 F 3.63593833 1.21197944 81.36 F Model 16.74815943 5.58271981 988.23 F F Model 0.11601692 0.03867231 248.25 F F Model 19.57712500 6.52570833 579.76 F F Model 10.79700500 3.59900167 188.38 F 10.79700500 3.59900167 188.38 F Model 7.44242656 2.48080885 2401.12 F 7.44242656 2.48080885 2401.12 F Model 0.02845743 0.00948581 220.27 F 0.02845743 0.00948581 220.27 F Model 7.11383333 2.37127778 76.38 F 7.11383333 2.37127778 76.38 F Model 3.30983333 1.10327778 73.55 F T 3.30983333 CHIEU RONG CUM MO SEO 1.10327778 73.55 00:00 Monday, February 10, 2014