Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy, điều kiện nuôi cấy, quang kỳ và ánh sáng đèn LED đến sự tăng trưởng, tạo cây hoàn chỉnh loài lan kim tuyến anoectochilus setaceus blume IN VITRO

ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY, ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY, QUANG KỲ VÀ ÁNH SÁNG ĐÈN LED ĐẾN SỰ TĂNG TRƯỞNG, TẠO CÂY HOÀN CHỈNH LOÀI LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume.) IN VITRO Ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS Trịnh Thị Lan Anh Sinh viên thực MSSV : 1611100391 : Nguyễn Thanh Thuận Lớp : 16DSHA1 TP Hồ Chí Minh, 2020 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY, ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY, QUANG KỲ VÀ ÁNH SÁNG ĐÈN LED ĐẾN SỰ TĂNG TRƯỞNG, TẠO CÂY HOÀN CHỈNH LOÀI LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume.) IN VITRO Ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS Trịnh Thị Lan Anh Sinh viên thực MSSV : 1611100391 : Nguyễn Thanh Thuận Lớp : 16DSHA1 TP Hồ Chí Minh, 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan nội dung đồ án tốt nghiệp công trình nghiên cứu thực tơi hướng dẫn TS Trịnh Thị Lan Anh – giảng viên trường Đại học Công Nghệ TP HCM Đồ án thực sở nghiên cứu lý thuyết, tiến hành nghiên cứu thực nghiệm phịng thí nghiệm Cơng nghệ Sinh học Thực vật - Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH, trường Đại học Công Nghệ TP HCM Các số liệu, bảng, biểu đồ sử dụng phân tích đồ án hồn tồn trung thực Đồ án khơng chép hình thức nào, phát có gian lận tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm TP Hồ Chí Minh, ngày 25 tháng 09 năm 2020 Sinh viên thực NGUYỄN THANH THUẬN ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP LỜI CẢM ƠN Em xin cảm ơn Ban giám hiệu trường Đại học Công nghệ TP HCM tạo điều kiện cho em học tập thực đồ án nghiên cứu Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH ngành Công Nghệ Sinh Học Để hoàn thành đồ án tốt nghiệp em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến TS Trịnh Thị Lan Anh Cô trực tiếp hướng dẫn, dạy đóng góp ý tưởng q trình em thực đồ án Cơ khơng giảng dạy kiến thức, mà cịn truyền cảm hứng khích lệ, động viên em khơi dậy đam mê làm nghiên cứu khoa học Qua tạo động lực cho em theo đuổi đến khơng ngừng học hỏi, tìm hiểu thêm kiến thức bổ ích Em thực biết ơn Cơ giúp đỡ ln hỗ trợ em vượt qua khó khăn q trình thực đồ án để có kết thành công hôm Em xin chân thành cảm ơn quý Thầy, Cô, Anh Chị nhân viên phịng thí nghiệm Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH, trường Đại học Công nghệ TP HCM tạo điều kiện hỗ trợ cho em suốt trình hoàn thành đồ án Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè cổ vũ, động viên, giúp đỡ em suốt trình học tập thực đồ án Đặc biệt bạn Huỳnh Thị Thanh Tuyền lớp 16DSHA1 đồng hành em suốt khoảng thời gian qua Em xin chân thành cảm ơn! TP Hồ Chí Minh, ngày 25 tháng 09 năm 2020 Sinh viên thực NGUYỄN THANH THUẬN ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH ẢNH viii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài 3 Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học 5.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết cấu đồ án CHƯƠNG 1:TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.2.2 Ảnh hưởng thành phần hóa học 1.3.3 Ảnh hưởng yếu tố vật lý 11 1.5.2 Giá thể 12 1.5.3 Đơn vị sử dụng dung dịch nano 16 1.5.3.1 Giới thiệu hạt nano bạc 17 1.5.3.2 Sơ lược hạt nano chitosan 22 1.5.3.3 Sơ lược nano đồng 23 1.6 Ảnh hưởng ánh sáng đến thực vật 27 1.6.3 Vai trò ánh sáng nhân giống in vitro 28 1.7.1 Ảnh hưởng ánh sáng LED (Light Emitting Diode) nuôi cấy in vitro 29 1.8 Phương pháp nuôi cấy lỏng lắc in vitro 40 1.9.1 Phân loại thực vật lan Kim tuyến 43 1.9.2 Đặc điểm hình thái 43 1.9.4 Điều kiện sinh sống lan Kim tuyến 45 1.9.5 Giá trị dược liệu lan Kim tuyến 46 1.9.6 Thành phần hoạt chất có lan Kim tuyến 48 i ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 1.9.7 Giá trị kinh tế lan Kim tuyến thị trường 48 1.11 Tình hình nghiên cứu nước loài lan Kim tuyến 49 1.11.1 Tình hình nghiên cứu giới 49 1.11.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 50 CHƯƠNG 2:VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 55 2.1 Địa điểm thời gian tiến hành đề tài 55 2.1.1 Địa điểm 55 2.1.2 Thời gian 55 2.2 Vật liệu phương pháp 55 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 55 2.2.3 Môi trường nuôi cấy 56 2.2.4 Trang thiết bị dụng cụ 56 2.2.5 Điều kiện nuôi cấy 58 2.2.6 Mẫu cấy 58 2.2.7 Nội dung nghiên cứu 58 2.3 Bố trí thí nghiệm 59 2.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng CMC (carboxymethyl cellulose) đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro môi trường lớp 59 2.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng alginate đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro môi trường lớp 60 2.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng kiểu kết hợp thành phần giá thể nuôi cấy đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro 61 2.3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng thể tích mơi trường đến tăng trưởng lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro nuôi cấy lỏng lắc 62 2.3.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng tốc độ lắc mẫu đến tăng trưởng lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro nuôi cấy lỏng lắc 63 ii ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 2.3.6 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hưởng mật độ mẫu cấy đến tăng trưởng lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro nuôi cấy lỏng lắc 64 2.3.7 Thí nghiệm 7: Khảo sát ảnh hưởng quang kỳ đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro mơi trường agar + bơng gịn xé vụn 65 2.3.8 Thí nghiệm 8: Khảo sát ảnh hưởng ánh sáng đèn LED đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro môi trường agar + gòn xé vụn 67 2.4 Chỉ tiêu theo dõi 72 2.5 Thống kê xử lý số liệu 72 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 73 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng CMC (carboxymethyl cellulose) đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro môi trường lớp 73 3.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng alginate đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro môi trường lớp 79 3.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng kiểu kết hợp giá thể đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro 84 3.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng thể tích mơi trường đến tăng trưởng loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro nuôi cấy lỏng lắc 91 3.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng tốc độ lắc mẫu đến tăng trưởng loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro nuôi cấy lỏng lắc 95 3.6 Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng mật độ mẫu cấy đến tăng trưởng loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro nuôi cấy lỏng lắc 100 iii ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 3.7 Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng quang kỳ đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro môi trường agar + bơng gịn xé vụn 107 3.8 Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED đơn sắc đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro mơi trường agar + bơng gịn xé vụn 114 3.9 Thí nghiệm 9: Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED kết hợp đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro mơi trường agar + bơng gịn xé vụn 121 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 128 4.1 Kết luận 128 4.2 Kiến nghị 128 TÀI LIỆU THAM KHẢO 129 PHỤ LỤC iv ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ASA Acetylsalicylic acid (Aspirin) AC Than hoạt tính BA Benzyladenine BAP 6-Benzyl amino purine B LED xanh dương CMC carboxymethyl cellulose DNA Deoxyribonucleic acid FL Đèn huynh quang GA3 Gibberellic acid KIN Kinetin LED Light emitting diode MS Murashige Skoog, 1962 ND Nước dừa NAA α-naphthaleneacetic acid NĐ – CP Nghị định phủ PE Polyethylene RNA Ribonucleic acid R LED đỏ SH Schenk Hildebrandt,1972 UV Ultraviolet W LED trắng αNAA α-naphthylacetic acid v ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Số nguyên tử bạc hạt ag-np 18 Bảng 1.2 Ảnh hưởng bước sóng ánh sáng khác lên thực vật 27 Bảng 1.3 Phân loại thực vật lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) 43 Bảng 2.1 Khảo sát Ảnh hưởng cmc (carboxymethyl cellulose) đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro môi trường lớp 60 Bảng 2.2 Khảo sát Ảnh hưởng alginate đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro môi trường lớp 61 Bảng 2.3 Khảo sát Ảnh hưởng kiểu kết hợp thành phần giá thể nuôi cấy đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh loài lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro 62 Bảng 2.4 Khảo sát Ảnh hưởng thể tích mơi trường đến tăng trưởng lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro nuôi cấy lỏng lắc 63 Bảng 2.5 Khảo sát Ảnh hưởng tốc độ lắc mẫu đến tăng trưởng lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro nuôi cấy lỏng lắc 64 Bảng 2.6 Khảo sát Ảnh hưởng mật độ mẫu cấy đến tăng trưởng lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro nuôi cấy lỏng lắc 65 Bảng 2.7 Khảo sát Ảnh hưởng quang kì đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro mơi trường agar + bơng gịn xé vụn 66 Bảng 2.8 Khảo sát Ảnh hưởng ánh sáng đèn led đơn sắc đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh loài lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume.) in vitro mơi trường agar + bơng gịn xé vụn 68 vi ... NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY, ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY, QUANG KỲ VÀ ÁNH SÁNG ĐÈN LED ĐẾN SỰ TĂNG TRƯỞNG, TẠO CÂY HOÀN CHỈNH LOÀI LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume. ) IN VITRO. .. ảnh hưởng môi trường nuôi cấy, điều kiện nuôi cấy, quang kì ánh sáng đèn LED ảnh hưởng đến khả tăng trưởng, phát triển hoàn chỉnh loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume. ) in vitro môi. .. tục tốt cho tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan Kim tuyến Nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng đèn LED đến tăng trưởng tạo hoàn chỉnh lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume. ) in vitro môi trường agar