Nghiên cứu ảnh hưởng của chất điều hòa sinh trưởng thực vật và nguồn mẫu lên sự phát sinh mô sẹo của mẫu cây bá bệnh eurycoma longifolia jack

Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vii MỞ ĐẦU Chương 1:TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu Bá bệnh 1.1.1 Phân loại học 1.1.2 Nguồn gốc phân bố 1.1.3 Đặc tính sinh học 1.1.3.1 Đặc điểm phân loại Bá bệnh 1.1.3.2 Đặc điểm hình thái Bá bệnh 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Ứng dụng 1.1.6 Các nghiên cứu Bá bệnh 10 1.1.6.1 Tình hình nghiên cứu giới 10 1.1.6.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 12 1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến phát sinh mô sẹo 12 1.2.1 Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật 12 1.2.2 Vai trò quan, tuổi quan ánh sáng đến hình thành mơ sẹo 15 1.3 Phương pháp lớp mỏng tế bào (Thin cell layers) 18 1.3.1 Khái niệm 18 1.3.2 Những tính chất đặc trưng hệ thống TCL 19 1.3.3 Ưu điểm 19 1.4 Mô sẹo 21 1.4.1 Khái niệm 21 1.4.2 Mục đích nuôi cấy mô sẹo 21 i Đồ án tốt nghiệp 1.4.3 Quá trình tạo mô sẹo 21 1.4.4 Những nghiên cứu mô sẹo dược liệu 22 1.4.4.1 Sâm Ngọc Linh (Panax Vietnamensis) 22 1.4.4.2 Cây Trinh nữ hoàng cung (Crinum latifolium L.) 23 1.4.4.3 Cây Thông đỏ Hymalaya (Taxus wallichiana Zucc.) 24 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 25 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 25 2.2 Vật liệu 25 2.2.1 Đối tượng thí nghiệm 25 2.2.2 Điều kiện nuôi cấy 25 2.2.3 Trang thiết bị dụng cụ 25 2.2.4 Hóa chất mơi trường thí nghiệm 26 2.2.6 Phương pháp xử lý số liệu 27 2.3 Nội dung nghiên cứu 27 2.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy tử diệp 27 2.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy non 28 2.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy cuống non 29 2.3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy tử diệp 30 2.3.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy non 31 2.3.6 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy cuống non 32 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy tử diệp 34 ii Đồ án tốt nghiệp 3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy non 40 3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy cuống non 46 3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy tử diệp 51 3.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy non 55 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 62 4.1 Kết luận 62 4.2 Đề nghị 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO Error! Bookmark not defined PHỤ LỤC iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT 2,4-D : 2,4-dichlorophenoxyacetic acid BA : – benzyladenine BAP : N6– benzyllaminopurine CĐHSTTV : Chất điều hòa sinh trưởng thực vật DKW : Drive- Kuniyuki Wainut IAA : Axit α- indol axetic Ltcl : Long thin cell layer MS : Murashige and Koog (1962) NAA : α – napthalene acetic acid SPSS : Statistical Product and Services Solutions TCL : Thin cell layer TDZ : N-phenyl-N′-1, 2, 3-thiadiazol-5-ylurea tTCL : transverse thin cell layer iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Các nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên mẫu cấy tử diệp Bá bệnh 28 Bảng 2.2 Các nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên mẫu cấy non Bá bệnh 29 Bảng 2.3 Các nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên mẫu cấy cuống non Bá bệnh 30 Bảng 2.4 Các nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên mẫu cấy tử diệp Bá bệnh 31 Bảng 2.5 Các nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên mẫu cấy non Bá bệnh 32 Bảng 2.6 Các nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên mẫu cấy cuống non Bá bệnh 33 Bảng 3.1 Ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy tử diệp sau 45 ngày nuôi cấy 35 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy non sau 45 ngày nuôi cấy 41 Bảng 3.3 Ảnh hưởng BA NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy cuống non sau 45 ngày nuôi cấy 47 Bảng 3.4 Ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy tử diệp sau 45 ngày nuôi cấy 52 Bảng 3.5 Ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy non sau 45 ngày nuôi cấy 55 Bảng 3.6 Ảnh hưởng BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy cuống non sau 45 ngày nuôi cấy 58 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 So sánh tỷ lệ mơ sẹo hình thành khối lượng tươi trung bình mơ sẹo theo nồng độ NAA riêng lẻ lên mẫu cấy lớp mỏng tử diệp (bảng 3.1) 36 Biểu đồ 3.2 So sánh tỷ lệ mơ sẹo hình thành khối lượng tươi trung bình mơ sẹo theo nồng độ NAA riêng lẻ lên mẫu cấy lớp mỏng non (bảng 3.2) 433 Biểu đồ 3.3 So sánh tỷ lệ mô sẹo hình thành khối lượng tươi trung bình mô sẹo theo nồng độ NAA riêng lẻ lên mẫu cấy lớp mỏng non (số liệu bảng 3.3) 499 Biểu đồ 3.4 So sánh tỷ lệ mơ sẹo hình thành khối lượng tươi trung bình mơ sẹo theo nồng độ TDZ riêng lẻ lên mẫu cấy lớp mỏng tử diệp (số liệu bảng 3.4) 53 Biểu đồ 3.5 So sánh tỷ lệ mơ sẹo hình thành khối lượng tươi trung bình mơ sẹo theo nồng độ TDZ riêng lẻ lên mẫu cấy lớp mỏng non (số liệu bảng 3.5) 56 Biểu đồ 3.6 So sánh tỷ lệ mơ sẹo hình thành khối lượng tươi trung bình mơ sẹo theo nồng độ TDZ riêng lẻ lên mẫu cấy lớp mỏng cuống non (số liệu bảng 3.6) 59 vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Hình Bá bệnh Hình 1.2 Các dược phẩm chiết xuất từ Bá bệnh 10 Hình 3.1.a Ảnh hưởng NAA kết hợp với BA lên mẫu tử diệp với nồng độ – mg/l 37 Hình 3.1.b Ảnh hưởng NAA kết hợp với BA lên mẫu tử diệp với nồng độ – mg/l 38 Hình 3.2 Ảnh hưởng NAA kết hợp với BA lên mẫu cấy với nồng độ từ 0,5 – 4,0 mg/l 44 Hình 3.3 Ảnh hưởng NAA két hợp với BA lên mẫu cấy cuống với nồng độ từ 0,0 – 4,0 mg/l 50 Hình 3.4 Ảnh hưởng TDZ kết hợp với BA lên mẫu tử diệp với nồng độ 0,2 – 1,0 mg/l .54 Hình 3.5 Ảnh hưởng TDZ kết hợp với BA lên mẫu non với nồng độ 0,2 – 1,0 mg/l 57 Hình 3.6 Ảnh hưởng TDZ kết hợp với BA lên mẫu cuống non với nồng độ 0,2 – 1,0 mg/l 61 Hình 3.7 Hình thái giải phẫu nguồn mẫu khác a, b) Mẫu lá; c, d) Mẫu tử diệp 61 vii Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Đặt vấn đề Từ xa xưa cỏ đóng vai trị quan trọng đời sống người Nó không nơi trú ẩn, nguồn thực phẩm phong phú, nguyên liệu sản xuất vật dụng cần thiết cho sống mà nguồn dược liệu quý giá Con người khám phá tìm khả trị bệnh cỏ ghi chép hiểu biết vào sách thành y điển danh tiếng từ lâu đời Ngày nay, khoảng 25% loại dược phẩm có nguồn gốc từ thực vật số tăng tương lai ngày nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học khám phá từ cỏ người dần có xu hướng quay trở lại với dược phẩm có nguồn gốc từ thiên nhiên Tuy nhiên, việc sử dụng dược liệu hạn chế chiết xuất trực tiếp lượng từ thực vật việc tổng hợp nhân tạo cịn gặp nhiều khó khăn đường tổng hợp nhân tạo gặp nhiều khó khăn chưa làm sáng tỏ Thu nhận hợp chất thứ cấp có hoạt tính sinh học từ thực vật phương pháp nuôi cấy tế bào đơn xem giải pháp hữu hiệu để sản xuất, làm giàu hàm lượng ổn định nguồn cung cấp nguyên liệu cho sản xuất thuốc chữa bệnh có nguồn gốc từ thực vật Tầm quan trọng Với xu hướng dùng thảo dược thiên nhiên để chữa bệnh, Bá bệnh trở thành đối tượng nghiên cứu nhiều quốc gia khu vực Đơng Nam Á, đặc biệt cịn xem nhân sâm Malaysia, có nhiều tiềm nguồn dược liệu chữa bệnh sốt, đau bụng, chống sốt rét tăng cường sức khỏe sinh lý nam giới, … Lý chọn đề tài Trong năm gần đây, nhu cầu sử dụng sản phẩm chiết xuất từ rễ vỏ Bá bệnh ứng dụng làm dược liệu ngày tăng, điều tạo nên áp lực cho việc trì quần thể Mặt khác, việc thu nhận hợp chất Đồ án tốt nghiệp thứ cấp nuôi cấy nghiên cứu cho kết tốt Ginsenoside từ nhân sâm (P ginseng) (Choi cộng sự, 1994; Franklin Dixon, 1994); Rosmarinic acid từ tía tơ (Coleus bluemei) (Ulbrich cộng sự, 1985); Berberin từ liễu sam (C japonica) (Matsubara cộng sự, 1989)… Chính thế, việc ni cấy tế bào thực vật xem phương pháp ưu để cung cấp ổn định nguồn nguyên liệu mà không làm ảnh hưởng đến nguồn tự nhiên [18], [31], [45] Xuất phát từ vấn đề đề tài “Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật nguồn mẫu lên phát sinh mô sẹo mẫu cấy Bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack)” tiến hành Ý nghĩa đề tài Thí nghiệm đề nhằm khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến khả hình thành mơ sẹo, với mục đích tăng nhanh số lượng mơ sẹo để làm nguồn vật liệu cho thí nghiệm thu nhận sinh khối có hợp chất thứ cấp nhằm ứng dụng rộng rãi y học Tình hình nghiên cứu Năm 2005, Hussein cộng nghiên cứu nhân nhanh chồi qua nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Bá bệnh [24] Năm 2006, Hussein cộng thành công việc tạo chồi bất định từ nuôi cấy rễ thân Bá bệnh [23] Năm 2010, Mahmood cộng nghiên cứu cảm ứng mô sẹo từ quan Bá bệnh [30] Năm 2010, Miyake cộng nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào ung thư quassinoids [31] Năm 2014, Trần Trọng Tuấn cộng nghiên cứu trình phát sinh mô sẹo từ mẫu bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack) [12] Đồ án tốt nghiệp Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật (chất ĐHSTTV) đến phát sinh mô sẹo nuôi cấy mẫu tử diệp, non cuống non Bá bệnh Nhiệm vụ nghiên cứu Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA NAA riêng lẻ hay kết hợp bổ sung vào môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) [32] đến phát sinh mô sẹo từ nuôi cấy mẫu tử diệp Bá bệnh Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NAA BA riêng lẻ hay kết hợp bổ sung vào môi trường MS đến phát sinh mô sẹo từ nuôi cấy mẫu non Bá bệnh Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NAA BA riêng lẻ hay kết hợp bổ sung vào môi trường MS đến phát sinh mô sẹo từ nuôi cấy cuống non Bá bệnh Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp bổ sung vào môi trường MS đến phát sinh mô sẹo từ nuôi cấy tử diệp Bá bệnh Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp bổ sung vào môi trường MS đến phát sinh mô sẹo từ nuôi cấy mẫu non Bá bệnh Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA TDZ riêng lẻ hay kết hợp bổ sung vào môi trường MS đến phát sinh mô sẹo từ nuôi cấy cuống Bá bệnh Phương pháp nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu: phương pháp lớp mỏng tế bào Phương pháp thống kê: sử dụng phần mềm SPSS Kết đạt đề tài Xác định yếu tố ngoại sinh kích thích phát sinh hình thái Bá bệnh nhằm tăng nhanh số lượng lớn mô sẹo Đồ án tốt nghiệp [26] Hutchinson M.J., Saxena P.K (1996) Acetylsalicylic acid enchances and synchronizes TDZ-induced somatic embryogenesis in geranium tissue cultures, Plant Cell Rep., 15, 512-515 [27] Huy N.P., Nhut D.T (2012) In vitro morphogenic response of leaf explants of kiwifruit (Actinidia deliciosa), J Biotechnol, 10(4A), 995-1003 [28] Itokawa H., Kishi E., Morita H., Takeya K (1992) Cytotoxic quassinoids and tirucallane-type triterpenes from the woods of Eurycoma longifolia, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 40, 1053-1055 [29] Itokawa H., Qin X.R., Morita H., Takeya K., Iitaka Y (1993) Novel quassinoids from Eurycoma longifolia, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 41, 403-405 [30] Mahmood M., Normi R., Subramaniam S (2010) Optimization of suitable auxin application in arecalcitrant woody forest plant of Eurycoma longifolia (Tongkat Ali) for callus induction, African Journal of Biotechnology, 9, 8417-8428 [31] Miyake K.,Li F.,Tezuka Y.,Awale S., Kadota S (2010) Cytotoxic activity of quassinoids from Eurycomalongifolia, Natural Product Communications, 5, 1009-1012 [32] Morita M., Xing X.H., Unno H (1999) Synchronized shoot regenation of rice (Oriza sativa L.) calli on solid medium by adjustment of intracellular 2,4 D concentratio, Plant Cell Rep., 18, 633-639 [33] Murnilawati A.G.H., Masitah H., Rosna M.T (2005) Callus Induction from Tobacco (Nicotiana tabacum) Leaf Explants for the Production of Quinone, Dev Chem Eng Mineral Process, 13(5/6), 563-572 [34] Murashige T., Skoog F (1962) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures, Physiological Plant Pathology, 15, 473-497 67 Đồ án tốt nghiệp [35] Nancy A.E (2003) A new classic of cytokinin research: cytokinin-deficient arabidopsis plants provide new insights into cytokinin biology, The plant cell, 15, 2489-2492 [36] Pierik R.L.M (1998) In vitro culuture of higher plants, Kluwer Academic Publishers [37] Preece J.E., Sutter E.G (1991) Acclimatization of micropropagated plants to the greenhouse and field, Microppropagation Technology and Application, Kluwer Academic Pulishers, 71-93 [38] Sandra M.K., Allen L.M (1987) Effect of BA, NAA, and 2,4-D on red maple callus growth, Plant Cell, Tissue and Organ Culture 10, 57-63 [39] Shaiful B.I., Wan M.Z W M., Annie G.,2 Nik H N H., Zatul M.M.K., Eckehard L (2012) Randomized Clinical Trial on the Use of PHYSTA Freeze-Dried Water Extract of Eurycoma longifolia for the Improvement of Quality of Life and Sexual Well-Being in Men, Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 1-10 [40] Suong N.N., Bhatnagar S., Polonsky J., Vuilhorgne M., Prange´ T., Pascard C (1982) Structure of laurycolactone A and B, new C18-quassinoids from Eurycoma longifolia and revised structure of eurycomalactone (X-ray analysis), Tetrahedron Letters, 23, 5159-5162 [41] Tada H., Yasuda F., Otani K., Doteuchi M., Ishihara Y., Shiro M (1991) New antiulcer quassinoids from Eurycoma longifolia, European Journal of Medicinal Chemistry, 26, 345-349 [42] Thoi L.V., Suong N.N (1970) Constituents of Eurycoma longifolia Jack, The Journal of Organic Chemistry, 35, 1104-1109 [43] Thoi L.V., Suong, N.N (1963) Chemical constituents from the bark of Eurycoma longifolia, II Isolation of ß-sitosterol, campeserol, and 2,6– dimethoxybenzoquinone, Ann Fac Sci., Univ., 1, 43-51 [44] Vaughan H (1974) Regulators of cell division in plant tissues XX, The cytokinins of coconut milk, Physiology Plant, 32, 66-70 68 Đồ án tốt nghiệp [45] Visser C., Fletcher R.A., Saxena P.K (1995) TDZ stimulates expansion and greening in cucumber cotyledons, Physiol Mol Biol Plants, 1, 21-26 69 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Bảng Bảng ANOVA ảnh hưởng nồng độ BA, NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy tử diệp ANOVA gram Sum of Squares Between Groups Df Mean Square 800 44 018 Within Groups 1.458 360 004 Total 2.258 404 F 4.492 Sig .000 Bảng Bảng phân hạng ảnh hưởng nồng độ BA, NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy tử diệp Đồ án tốt nghiệp gram ba- Subset for alpha = 0.05 naatudi ep D un N 10 02700 03356 03356 ca n a 30 40 14 35 29 41 16 11 43 19 04356 04356 04892 04892 05833 05833 05833 05833 06856 06856 06856 06856 08133 08133 08833 08833 08889 08889 08989 08989 09211 09211 09233 09233 09678 09678 10100 0435 0489 0583 0583 0685 0685 0813 0883 0888 0898 0921 0923 0967 1010 04892 05833 05833 05833 05833 06856 06856 06856 06856 06856 06856 08133 08133 08133 08133 08833 08833 08833 08833 08889 08889 08889 08889 08989 08989 08989 08989 09211 09211 09211 09211 09233 09233 09233 09233 09678 09678 09678 09678 10100 10100 10100 10100 0921 0923 0967 1010 09678 10100 10100 11 12 Đồ án tốt nghiệp 25 15 17 39 20 10 45 44 24 34 23 13 21 42 26 38 10278 10322 1027 10278 10278 10278 10278 10322 10322 10322 10322 10667 10667 10667 10667 10689 10689 10689 10689 10922 10922 10922 10922 11056 11056 11056 11056 11244 11244 11244 11244 11556 11556 11556 11556 11733 11733 11733 11733 12267 12267 12267 12267 12322 12322 12322 12344 12344 12344 12522 12522 12522 13011 13011 13011 9 9 9 1032 1066 1068 1092 1105 1124 1155 1173 13678 13678 13711 13711 13733 13733 1027 1032 1066 1068 1092 1105 1124 1155 1173 1226 1232 1234 1252 1301 1367 1371 1373 10278 10278 10322 10322 10667 10667 10689 10689 10922 10922 11056 11056 11244 11244 11556 11556 11733 11733 12267 12267 12322 12322 12344 12344 12522 12522 13011 13011 13678 13678 13711 13711 13733 13733 1226 1232 1234 1252 1301 1367 1371 1373 Đồ án tốt nghiệp 36 18 33 37 12 27 28 22 31 32 13789 13789 13967 13967 14478 14667 15333 1378 1396 1447 1466 1533 1660 13789 13789 13967 13967 14478 14478 14667 14667 15333 15333 16600 16600 17044 17044 17100 17100 17167 17167 17522 1378 1396 1447 1466 1533 1660 1704 1710 1716 1752 1956 2581 Sig 059 062 051 051 060 064 061 053 050 052 051 1.000 Bảng Bảng ANOVA ảnh hưởng nồng độ BA, NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy non ANOVA gram Sum of Squares df Mean Square Between Groups 251 44 006 Within Groups 202 225 001 F 6.337 Sig .000 Đồ án tốt nghiệp ANOVA gram Sum of Squares df Mean Square Between Groups 251 44 006 Within Groups 202 225 001 Total 453 269 F Sig 6.337 000 Bảng Bảng phân hạng ảnh hưởng nồng độ BA, NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy non gram Subset for alpha = 0.05 labanaa a Duncan N 1 00600 00600 00600 00600 00600 30 00600 36 00600 37 00600 38 00600 40 00600 41 00600 42 00600 43 00600 44 00600 45 00600 18 00617 31 00633 34 00633 16 00700 4 Đồ án tốt nghiệp 29 00783 33 00900 39 00917 35 00983 27 01033 25 01300 01300 26 01300 01300 32 01667 01667 01667 20 01767 01767 01767 24 01767 01767 01767 28 01950 01950 01950 22 02000 02000 02000 21 02033 02033 02033 19 02133 02133 02133 17 02267 02267 02267 23 02383 02383 02383 6 05267 05267 05267 11 05533 05533 05533 05617 05617 05617 15 07533 07533 07533 08683 08683 08683 13 08917 08917 08917 10 09433 09433 14 09433 09433 12 09617 09850 Sig .428 059 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000 060 065 052 258 Đồ án tốt nghiệp Bảng Bảng ANOVA ảnh hưởng nồng độ BA, NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy cuống ANOVA gram Sum of Squares df Mean Square Between Groups 028 44 001 Within Groups 082 180 000 Total 110 224 F 1.424 Sig .057 Bảng Bảng phân hạng ảnh hưởng nồng độ BA, NAA riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy cuống Gram Subset for alpha = 0.05 cuongla ba-naa a Duncan N 1 00900 00900 00900 00900 5 00900 10 00900 17 00900 18 00900 19 00900 20 00900 21 00900 22 00900 25 00900 26 00900 27 00900 28 00900 Đồ án tốt nghiệp 29 00900 30 00900 31 00900 32 00900 33 00900 34 00900 36 00900 37 00900 38 00900 39 00900 40 00900 41 00900 42 00900 43 00900 44 00900 45 00900 00960 24 00980 35 00990 23 01076 16 01080 01400 01400 01460 01460 14 02860 02860 02860 11 03780 03780 03780 12 03862 03862 03862 13 04200 04200 04200 04380 04380 15 Sig .05580 058 056 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 078 Đồ án tốt nghiệp a Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000 Bảng Bảng ANOVA ảnh hưởng nồng độ BA, TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy tử diệp ANOVA gram Sum of Squares df Mean Square Between Groups 142 24 006 Within Groups 498 200 002 Total 640 224 F 2.373 Sig .001 Bảng Bảng phân hạng ảnh hưởng nồng độ BA, TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy tử diệp gram ba- Subset for alpha = 0.05 tdztudie p a Duncan N 1 02834 03039 03556 17 04078 19 04111 25 04156 04456 15 04533 10 04556 23 04700 22 04789 20 04900 14 05000 9 05089 05400 06033 Đồ án tốt nghiệp 16 06500 06533 13 06733 24 06900 12 07456 07456 18 07533 07533 21 08233 08233 11 9 12344 12344 13600 Sig .070 058 594 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 9.000 Bảng Bảng ANOVA ảnh hưởng nồng độ BA, TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy non ANOVA gram Sum of Squares df Mean Square Between Groups 006 24 000 Within Groups 015 100 000 Total 021 124 F 1.632 Sig .049 Bảng Bảng phân hạng ảnh hưởng nồng độ BA, TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy non gram Subset for alpha = 0.05 laba-tdz a Duncan N 11 00600 12 00600 13 00600 14 00600 15 00600 Đồ án tốt nghiệp 16 00600 17 00600 18 00600 19 00600 20 00600 21 00600 22 00600 24 00600 25 00600 10 00620 00664 00960 23 01000 01280 01280 01380 01380 01920 01920 5 02100 02100 02360 02360 02400 02400 02800 Sig .066 094 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000 Bảng 11 Bảng ANOVA ảnh hưởng nồng độ BA, TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy cuống non ANOVA gram Sum of Squares df Mean Square Between Groups 007 24 000 Within Groups 009 100 000 Total 016 124 10 F 3.159 Sig .000 Đồ án tốt nghiệp Bảng 12 Bảng phân hạng ảnh hưởng nồng độ BA, TDZ riêng lẻ hay kết hợp lên phát sinh hình thái mẫu cấy cuống non gram Subset for alpha = 0.05 cuongb a-tdz a Duncan N 12 00900 13 00900 14 00900 15 00900 16 00900 17 00900 18 00900 19 00900 20 00900 22 00900 23 00900 24 00900 25 00900 00960 01100 21 01120 01540 01540 11 01560 01560 01860 01860 10 01900 01900 5 01940 01940 02080 02080 02500 02580 Sig .03860 118 143 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000 11 1.000 ... đến nguồn tự nhiên [18], [31], [45] Xuất phát từ vấn đề đề tài ? ?Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật nguồn mẫu lên phát sinh mô sẹo mẫu cấy Bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack) ”... sinh mơ sẹo từ mẫu bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack) [12] Đồ án tốt nghiệp Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật (chất ĐHSTTV) đến phát sinh mô sẹo. .. cịn có ảnh hưởng khác ảnh hưởng lên phát sinh hình thái (sự tạo chồi hay rễ), ảnh hưởng lên phát sinh phôi soma Nồng độ auxin môi trường cao ngăn cản phát sinh hình thái lại cảm ứng phát sinh phơi