TÌM HIỂU TÌNH HÌNH NHIỄM KHUẢN VÀ KHẢO SÁT TÍNH ĐẺ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUÂN Psendomonas aeruginoss TRONG NƯỚC ĐÁ TẠI THÀNH PHÔ HỖ CHÍ MINH

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG ************ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP TÌM HIỂU TÌNH HÌNH NHIỄM KHUẨN VÀ KHẢO SÁT TÍNH ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN Pseudomonas aeruginosa TRONG NƯỚC ĐÁ TẠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Giảng viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: ThS PHẨM MINH THU NGUYỄN THỊ NGỌC PHƯỢNG Thành phố Hồ Chí Minh -2009- LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn đến: Ban Giám Hiệu trường Đại Học Tôn Đức Thắng tạo điều kiện cho em suốt thời gian em học trường Các Thầy Cô mơn Cơng Nghệ Sinh Học nhiệt tình truyền đạt nhiều kiến thức cho em suốt thời gian qua Ban Giám Đốc Viện Pasteur TP HCM tạo điều kiện thuận lợi cho em thực khóa luận tốt nghiệp Và đặc biệt, em xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến Cô ThS.Phẩm Minh Thu (Trưởng phịng kiểm nghiệm Hóa Lý Vi Sinh Thực Phẩm) ln tận tình dạy hướng dẫn cho em hồn thành tốt khóa luận suốt thời gian vừa qua Em muốn gởi lời cảm ơn đến Cơ, Anh, Chị phịng vi sinh thực phẩm luôn giúp đỡ, dẫn truyền đạt cho em nhiều kinh nghiệm suốt thời gian em thực tập thực khóa luận Sinh viên Nguyễn Thị Ngọc Phượng   i TÓM TẮT KHĨA LUẬN NGUYỄN THỊ NGỌC PHƯỢNG, Đại học Tơn Đức Thắng TP Hồ Chí Minh Tên đề tài “Tìm hiểu tình hình nhiễm khuẩn khảo sát tính đề kháng kháng sinh vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa nước đá Tp Hồ Chí Minh”, thực phịng vi sinh thực phẩm, Khoa LAM, Viện PASTEUR TP.Hồ Chí Minh từ 09/2009 đến 12/2009 Giảng viên hướng dẫn: ThS PHẨM MINH THU Vật liệu dùng để nghiên cứu nước đá phân thành hai loại: nước đá tinh khiết (15 mẫu) nước đá (15 mẫu) Chúng sử dụng phương pháp màng lọc để kiểm tra tiêu vi sinh nước đá theo quy định số 46-2007/QĐ-BYT làm kháng sinh đồ để kiểm tra tính đề kháng kháng sinh vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa phương pháp khuếch tán đĩa thạch theo tiêu chuẩn NCCLS/2009 CA-SFM/2004 Kết ghi nhận sau: Về tiêu vi sinh Tỉ lệ nước đá không đạt tiêu chiếm 53,33% cao nước đá tinh khiết 26,67% Trong tiêu vi sinh, tổng số vi khuẩn hiếu khí tiêu nhiễm nhiều chiếm tỉ lệ tối đa 100% tổng số 12 mẫu không đạt tiêu chuẩn, E coli 66,7% Coliform 41,6% Các vi khuẩn S aureus C perfringens khơng vượt q tiêu cho phép, Salmonella khơng có phát Trong tổng số 30 mẫu thử nghiệm, 100% (30/30) mẫu phát có diện vi khuẩn P aeruginosa 100 ml Về tính đề kháng kháng sinh P aeruginosa · FOS (80% - 86,7%), CFS (13% - 46,7%), TTC (13,3% - 33,3%) · ATM AN (13,3%) · CS (13,3% - 33,3%), CFP (6,7% - 20%), CIP (6,7%) · TM IPM (0%) Với tỉ lệ đa kháng P aeruginosa: kháng loại kháng sinh 33,3% - 40% kháng loại kháng sinh 13,33% - 20% ii SUMMARY NGUYEN THI NGOC PHUONG, Ton Đuc Thang University The thesis entitled “Understanding the situation of infections and antibiotic resistance of Pseudomonas aeruginosa bacteria in the ice in Ho Chi Minh city", done in the office of food microbiology, Faculty of LAM, Pasteur Institute Ho Chi Minh City from September 2009 to December 2009 Guideline lecturer: Master PHAM MINH THU Materials used to study the ice is divided into two categories: pure water ice (15 samples) and ice plant (15 samples) We use membrane filtration method to test the target micro-organisms in drinking water in accordance with the number 46-2007/QDBYT, as antibiotic map to check for antibiotic resistant bacteria Pseudomonas aeruginosa amplification method counselor disk infussion standard NCCLS 2009 and CA-SFM in 2004 Results we noted were as follows: On microbiological Bacteria Rate of ice plant doesn’t meet the criteria constitute 53,33% higher than pure water ice is 26,67% In the target bacteria, total aerobic bacteria is an indicator accounts for most infections rates up to 100% of 12 samples weren’t acceptable, following by E coli is 66,7% and Coliform 41, 6% S aureus and C perfringens does not exceed the limite standard, Salmonella can not found In total 30 samples tested, 100% (30/30) samples were detected P aeruginosa in 100 ml Antibiotic resistance of P aeruginosa · FOS (80% - 86,7%), CFS (13% - 46,7%), TTC (13,3% - 33,3%) · ATM AN (13,3%) · CS (13,3% - 33,3%), CFP (6,7% - 20%), CIP (6,7%) · TM IPM (0%) With the rate of multidrug-resistant P aeruginosa: two antibiotic resistance is 33,3% - 40% and three antibiotic resistance is 13,33% - 20% iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN ⅰ TÓM TẮT KHÓA LUẬN ⅱ MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH SÁCH CÁC BẢNG, BIỂU ĐỒ, SƠ ĐỒ, HÌNH x Chương 1: MỞ ĐẦU 1.1．Đặt vấn đề 1.2．Mục tiêu phạm vi đề tài 1.3．Ý nghĩa đề tài Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1．Tình hình nhiễm khuẩn nước đá 2.2．Tình hình kháng kháng sinh Pseudomonas aeruginosa 2.2.1．Trong nước 2.2.2．Trên giới 2.3．Công nghệ sản xuất nước đá 2.3.1 Vai trò quan trọng nước đá đời sống sản xuất 2.3.2． Lịch sử phát triển 2.3.3． Phân loại nước đá thực phẩm 2.3.4．Quy trình công nghệ sản xuất nước đá 2.3.4.1． Quy trình sản xuất chung 2.3.4.2． Hệ thống thiết bị sản xuất nước đá 2.4．Tổng quan vi sinh vật 11 2.4.1．Hệ vi sinh vật có nước đá 11 2.4.1.1．Tổng số vi khuẩn hiếu khí 11 2.4.1.2． Coliform 12 2.4.1.3． E coli 12 iv 2.4.1.4． Staphylococcus aureus 13 2.4.1.5． Salmonella 16 2.4.1.6． Clostridium perfringens 17 2.4.2．Pseudomonas aeruginosa 19 2.4.3 Phòng bệnh 21 2.5．Kháng sinh tính kháng thuốc vi khuẩn 22 2.5.1 Thuốc kháng sinh 22 2.5.1.1． Định nghĩa 22 2.5.1.2． Tính chất 22 2.5.1.3． Phân loại 22 2.5.1.4．Cơ chế tác dụng kháng sinh 23 2.5.2 Sự đề kháng kháng sinh vi khuẩn 24 2.5.2.1． Tính kháng thuốc 24 2.5.2.2． Phân loại chế kháng thuốc 24 2.6．Kháng sinh đồ 26 2.6.1 Định nghĩa 26 2.6.2 Mục đích 26 2.6.3 Phân loại 26 Chương 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 27 3.1．Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm 27 3.1.1．Địa điểm tiến hành thí nghiệm 27 3.1.2．Thời gian 27 3.1.3 Địa điểm lấy mẫu 27 3.2．Nội dung nghiên cứu 27 3.3．Vật liệu thí nghiệm 27 3.3.1．Đối tượng nghiên cứu 27 3.3.2．Trang thiết bị thí nghiệm 27 3.3.3．Hóa chất mơi trường thí nghiệm 29 3.4．Phương pháp thí nghiệm 30 v 3.4.1．Phương pháp lấy mẫu 30 3.4.2．Xử lý số liệu 30 3.4.3．Đánh giá kết .30 3.4.4．Phương pháp kiểm nghiệm vi sinh vật có nước đá .31 3.4.4.1．Phát đếm tổng số vi khuẩn hiếu khí .31 3.4.4.2．Phát đếm vi khuẩn Coliforms Escherichia Coli .34 3.4.4.3．Phát đếm vi khuẩn Staphylococcus aureus 37 3.4.4.4．Phát đếm vi khuẩn Clostridium perfringens 39 3.4.4.5．Phát đếm vi khuẩn Salmonella 42 3.4.4.6．Phát đếm vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa .45 3.4.5．Phương pháp khuếch tán đĩa thạch Kirby-Bauer .48 3.4.5.1．Nguyên tắc 48 3.4.5.2．Các kháng sinh thử nghiệm .48 3.4.5.3．Chuẩn bị vật liệu 48 3.4.5.4．Cách tiến hành 49 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 52 4.1．Kết kiểm tra vi sinh nước đá quận Tp Hồ Chí Minh 52 4.1.1．Kết kiểm tra vi sinh nước đá tinh khiết bán quận Bình Thạnh 52 4.1.2．Kết kiểm tra vi sinh nước đá bán quận Bình Thạnh 53 4.1.3．Kết kiểm tra vi sinh nước đá tinh khiết bán quận .54 4.1.4．Kết kiểm tra vi sinh nước đá bán quận 55 4.1.5．Kết kiểm tra vi sinh nước đá tinh khiết bán quận 12 56 4.1.6．Kết kiểm tra vi sinh nước đá bán quận 12 .57 4.2． Tỉ lệ nhiễm khuẩn chung loại nước nước đá 59 4.2.1． So sánh nhóm nước đá 59 4.2.1.1．So sánh tỉ lệ không đạt tiêu vi sinh hai loại nước đá .59 4.2.1.2．So sánh tỉ lệ không đạt theo tiêu vi sinh hai loại nước đá .60 4.2.2．So sánh tiêu loại nước đá 61 vi 4.3． Tình hình nhiễm P aeruginosa nước đá 63 4.4．Tỉ lệ kháng kháng sinh P aeruginosa hai loại nước đá (%) 63 4.5．Tỉ lệ đa kháng thuốc P aeruginosa hai loại nước đá 66 4.6．Một số hình ảnh trình thử nghiệm .67 4.7 Tình hình nhiễm khuẩn nước đá 75 4.7.1 Tỉ lệ không đạt tiêu vi sinh nước đá tinh khiết nước đá 75 4.7.2 So sánh tiêu vi phạm nước đá tinh khiết nước đá .77 4.8．Tình hình nhiễm P aeruginosa nước đá 78 4.9．Tính đề kháng đa kháng sinh P aeruginosa 78 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 79 5.1．Kết luận .79 5.2．Đề nghị 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO 82 PHỤ LỤC vii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT µg microgram cm centimet g gam ml mililit mm milimet ATVSTP An toàn vệ sinh thực phẩm TP HCM Thành phố Hồ Chí Minh QĐ-BYT Quy định Bộ Y Tế TCVN Tiêu Chuẩn Việt Nam TTYTDP Trung tâm y tế dự phòng HĐND Hội đồng nhân dân CA-SFM Comité de L’Antibiogramme de la Societe Francaise de Microbiologie (Hội đồng kháng sinh – Hiệp hội vi sinh Pháp) NCCL Nation Committee for Clinical Laboratory Standards (Ủy ban quốc gia tiêu chuẩn phịng thí nghiệm lâm sàng) ISO International Standard Orgnization WHO World Health Orangization P aeruginosa Pseudomonas aeruginosa S.aureus, sau Staphylococcus aureus col Coliforms sal Salmonella S.typhi Salmonella typhi C perfringens, cpe Clotridium perfringens TSVKHK, tsvkhk Tổng số vi khuẩn hiếu khí EPEC Enteropathogenic E coli ETEC Enterotoxigenic E coli EIEC Enteroinvasive E coli viii UV Utra Violet CFU Colony Format Unites DNA Deoxyribonucleic RNA Ribonucleic Acid Stt Số thứ tự TK, C Đ KĐ Tinh khiết, Cây Đạt Không đạt CN Cetrimide Agar LDC Lysine Decacboxylase BHI Brain Heart Infusion PCA Plate Count Agar TSC Sunfit Tryptose Cyloserine MKTTn Muller Kauffmann tetrathionate novobocin HE Hektoen Agar XLD Xylose lysine deoxycholate agar MHA Muller Hinton Agar KIA Kliger Iron Agar VP Vosges Proskauer MR Methyl Red TCC CFP Ticarcillin/a.clavulanic Cefoperazone CFS Cefsulodin IPM Imipenem ATM Aztreonam TM Tobramycin AN Amikacin CS Colistin CIP FOS Ciprofloxacin Fosfomycin ix TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Nguyễn Hoàng Thu Trang (2007) Khảo sát tình hình nhiễm khuẩn tính đề kháng kháng sinh vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa nước uống, Luận văn Cử nhân sinh học, Trường Đại học Nơng Lâm Tp.Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Phương Nhi (2006) Kiểm tra độ nhiễm khuẩn kem tươi số điểm bán TP.HCM, Luận văn tốt nghiệp cử nhân sinh học chuyên ngành vi sinh, Trường Đại Học Mở Bán Cơng Tp.Hồ Chí Minh Trần Linh Thước Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mĩ phẩm Nhà xuất giáo dục, 2007, tr 79-149 Vi khuẩn học Nhà xuất Y học, 2008, tr 57-205 Vi sinh vật học (Tài liệu dùng trường trung học y tế) Nhà xuất Y học - Hà Nội, 2004,tr 75-136 Nguyễn Đức Lượng, Phan Thị Huyền, Nguyễn Ánh Tuyết Thí nghiệm cơng nghệ sinh học tập - Thí nghiệm vi sinh vật học Nhà xuất Đại Học Quốc Gia, TP.HCM, 2006, tr 130-214 Lê Văn Việt Mẫn, Lại Mai Hương Thí nghiệm vi sinh học thực phẩm Nhà xuất Đại Học Quốc Gia, TP.HCM, 2008, tr 61-110 Lê Đình Hùng Đại cương phương pháp kiểm tra vi sinh thực phẩm Quatest 3-Trung tâm kỹ thuật tiêu chuẩn đo lường chất lượng 3, 1997, tr 55-114 BS CKII Trần Bình Bài giảng vi sinh y học Trung tâm đào tạo & bồi dưỡng cán y tế TP.HCM, tr 61-134, 194 10 Vệ sinh an toàn thực phẩm - Chỉ tiêu vi sinh SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR 11 Lương Đức Phẩm Vi sinh vật học an toàn vệ sinh thực phẩm Nhà xuất Nông nghiệp , 2000 12 GS TS Nguyễn Khang Kháng sinh học ứng dụng Nhà xuất Y học Hà Nội, 2005 82 13 Bộ môn vi sinh Thực tập vi sinh miễn dịch Đại Học Y Dược TP.HCM, 2008, tr 15-17 14 Hồ Việt Mỹ cộng Nghiên cứu tình trạng nhiễm khuẩn bệnh viện; đề xuất , áp dụng đánh giá biện pháp phòng chống bệnh viện đa khoa tỉnh bệnh viện đa khoa khu vực Bồng Sơn từ năm 2003-2004 Sở Y tế Bình Định 15 Lê Bảo Huy, Lê Đức Thắng Khảo sát tác nhân gây viêm phổi bệnh viện tình hình kháng sinh khoa ICU bệnh viện Thống Nhất Tài liệu hội thảo khoa học 16 Trần Ðình Tuấn, Ðào Xuân Vinh, Nguyễn Thị Tuyết Vân Cs* - Tìm hiểu độ nhạy cảm với kháng sinh số chủng tụ cầu vàng taphulococcus aureus trực khuẩn mủ xanh Pseudomonas aeruginosa phân lập Đắc Lắc, 2000 17 Võ Thị Chi Mai Nhận xét tính kháng thuốc in vitro bệnh viện Chợ Rẫy Tài liệu hội thảo khoa học, 1997 18 Th.S Nguyễn Tấn Dũng (Chủ biên), TS.Trịnh Văn Dũng, Th.S Trấn Ngọc Hào, PGS TSKH Trần Đức Ba Công Nghệ Lạnh Ứng dụng sản xuât nước đá, đá khô nước giải khát Nhà xuất Đại Học Quốc Gia TP.Hồ Chí Minh, 2008, tr 155-2004 19 Nguyễn Duy Thanh Kháng sinh liệu pháp bịnh học nhiễm khuẩn truyền nhiễm Nhà xuất Tổng hợp Hậu Giang, 1990, tr 9-11 20 Lê Huy Chính (Chủ biên) Vi sinh Y học Nhà xuất Y học, 2007, tr 138139 21 Bộ Y Tế Vi khuẩn, virut, ký sinh vật (Tài liệu huấn luyện cán y tế trung học) Nhà xuất Y học, 1979, tr 162-164 22 Lê Việt Mẫn Công nghệ sản xuất sản phẩm từ sữa thức uống tập – công nghệ sản xuất nước uống Nhà xuất Đại Học Quốc Gia, TP.HCM, 2006, tr 79-102 23 Nguyễn Lân Dũng người khác Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học T.3 Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, 1978 24 Trần Đức Ba, Nguyễn Văn Tài Công nghệ lạnh thủy sản Nhà xuất Đại học Quốc gia T.P Hồ Chí Minh, 2004 25 Vi sinh vật học an tồn vệ sinh thực phẩm Nhà xt nơng nghiệp, 2000 83 26 PGS TS Đỗ Văn Dũng - Căn sát xuất sinh thống kê Khoa Y tế Công Cộng, Đại Học Y Dược, TP.HCM, 2008, tr 62-65 27 TCVN 1687-1:1999 Chất lượng nước - Phát đếm vi khuẩn Colifrom, vi khuẩn Colifrom chịu nhiệt Escherichia coli giả định 28 TCVN 4830_1:2005 Chất lượng thực phẩm - Định lượng Staphylococcus coagulase dương tính đĩa thạch 29 TCVN 4991:2005 Định lượng Clostridium perfringens đĩa thạch 30 TCVN 4829:2005 Phát Salmonella đĩa thạch 31 TCVN 4884:2005 Phát đếm tổng số vi khuẩn hiếu khí Tiếng Anh 32 ISO 16266:2006 (E) Water quality - Dectection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa - Method by membrane filtration International Standard Organization, 2006 33 Gales, A C., R N Jones, 1J Turnidge, R Rannie, anh R Ramphal Characterization of Pseudomonas aeruginosa Isolates: Occurrence rates, antimicrobial susceptibility patterns, and molecular typing in the global SENTRY antimicrobial surveillance program, 1997-1999 Clinicol Infectious Diaeases, 2001, 32(Suppl 2): S146-55 34 Lateef A*, Oloke J K., Gueguimkana E B The prevalence of bacterial resistance in clinical, food, water and some environmental samples in Southwest Nigeria Environmental Monitoring and Assessment, 2005, 100: 5969 35 Mirakhur A., Gallagher M.J., Ledson M.J., Hart C.A., Walshaw M.J Fosfomycin therapy for multiresistant Pseudomonas aeruginosa in cystic fibrosis J Cyst Fibros., 2003 Mar, 2(1): 19-24 36 Monden K., Ando E., Iida M., Kumon H Role of fosfomycin in a synergistic combination with ofloxacin againt Pseudomonas aeruginosa growing in a biofilm J Infect Chemother., 2002 Sep, 8(3): 218-26 84 37 Nation Committee for Clinnical Laboratory Standards, Performance standards for Anmicrobial Susceptibility Testing; Nineteenth Informtional Supplement, 2009 38 Oguntibeju OO1& Nwobu RAU2, Occurrence of Pseudomonas aeruginosa in post-operative wound infection, Park J Med Sci July-September 2004, Vol 20 No 3: 187-191 39 Rusin PA, Rose JB, Hass CN, Gerba CP Risk assessment of opportunistic bacterial pathogens in drinking water Rev Environ Contam Toxicol., 1997, 152:57-83 40 Baumgartner A, Grand M Bacteriological quality of drinking water fro dispensers (cooler) and possible control measures J Food Prot., 2006, Dec; 69(12):3043-6 Internet 41 http://suckhoedoisong.vn - Chất lượng trà đá…coi chừng! 42 http://www.sapuwa.com.vn - Đá tinh khiết: Nói mà vậy! 43 http://www.tuoitre.com.vn - Nhiều sở sản xuất nước đá không đảm bảo vệ sinh 44 http://www.nguoidaibieu.com.vn - Nguy nhiễn tả từ nước đá bẩn 45 http://www.giaoducsuckhoe.net - Sẽ tổng kiểm tra nước đá, nước uống đóng chai 46 http://www.toquoc.gov.vn - Nước đá tinh khiết bị nhiễm khuẩn 47 http://www.tinmoi.info - TPHCM: 60% sở nước uống đóng chai nước đá vệ sinh 48 http://carehub.vn - Thanh tra sở sản xuất nước đá, nước tinh khiết 85 PHỤ LỤC Phụ lục A: Xử lý số liệu thống kê A1 Tỉ lệ nhiễm khuẩn nước đá tinh khiết đá Nước đá tinh khiết Số quan sát Số mẫu đạt Số mẫu không đạt Tổng số Vọng trị Nước đá Tổng 11 12 18 15 15 9 30 P = 0,1 > 0,05 Khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê A2 So sánh tiêu vi phạm nước đá tinh khiết đá Tổng số vi khuẩn hiếu khí Nước đá tinh khiết Nước đá Số quan sát Số mẫu đạt Số mẫu không đạt Tổng số Vọng trị Tổng 11 12 18 15 15 9 30 P = 0,1 > 0,05 Khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê E coli Nước đá tinh khiết Nước đá Số quan sát Số mẫu đạt Số mẫu không đạt Tổng số Vọng trị Tổng 13 22 15 15 11 11 P = 0,1 > 0,05 Khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê 30 Coliform Nước đá tinh khiết Số quan sát Số mẫu đạt Số mẫu không đạt Tổng số Vọng trị Nước đá Tổng 13 12 26 15 15 12,5 2,5 12,5 2,5 P = 0,5 > 0,05 Khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê 30 Phụ lục B: Thành phần loại môi trường Nước muối sinh lý (0,85 %) NaCl Nước cất vừa đủ 8,5g 1000 ml Hòa tan NaCl nước cất Hấp tiệt trùng 121 0C 15 phút Làm nguội đế nhiệt độ phịng Mơi trường thạch Plante Count Agar (PCA) Peptone 5g Glucose 1g Cao nấm men 2,5g Agar 15g Nước cất 1000 ml pH cuối 7,2 ± 0,2 Đun nhẹ để hòa tan thành phần Cho vào ống hay bình thích hợp Hấp tiệt trùng 1210C 15 phút Cho khoảng 20-25 mm vào đĩa petri vơ khuẩn đường kính 90 mm Môi trường Lactose TTC +Tergitol Môi trường Lactose 20 g Pepton 10 g Cao men 6g Canh thịt 5g Bromothymol blue 0,05 g Thạch agar 16-25 g Nước cất 1000 ml Dung dịch TTC 2, 3, – Tryphenol – tertrazolium clorua (TTC) Nước cất 0,05 g 100 ml Dung dịch Tergitol Tergitol Nước cất 0,2 g 100 ml Mơi trường hồn chỉnh Môi trường 100 ml Dung dịch TTC ml Dung dịch Tergitol 7ml Môi trường nước Pepton lactose Pepton Natri clorua 10 ml ml Lactose 10 ml Phenol đỏ (hoặc Andrad) 2,5 ml (10 ml) Nước cất 1000 ml Môi trường nước Trypton Trypton Natri clorua Nước cất 20 g 5g 1000 ml Thạch dinh dưỡng GO Cao thịt 1g Pepton 1g Natri clorua 5g Thạch agar 15 g Thuốc thử Kovac’s p-dimetyllaminbenzandehyt Amyl alcol (không chứa gốc hữu Axit clohydric (ρ=1,18 g/ml) 5g 75 g 25 ml Môi trường Baird Parker (BP) Môi trường Tryptone 10 g Cao thịt 5g Cao nấm men 1g Sodium pyruvate 10 g Glycine 12 g Lithium chloride.6H2O 5g Agar 20 g Nước cất 1000 ml pH cuối 6,8 ± 0,2 Hấp 121 0C 15 phút Nếu muốn sử dụng ngay, giữ mơi trường nóng chảy 48500C trước thêm Bacto EY tellurite enrichment (lòng đỏ trứng) Ngược lại, giữ môi trường rắn 40C ± 10C tháng Làm nóng chảy trước sử dụng Mơi trường hồn chỉnh Thêm cách vơ trùng ml Bacto EY tellurite enrichment (lòng đỏ trứng) làm ấm (45-500C) vào 95 ml môi trường làm nóng chảy Trộn tránh tạo bọt khí đổ 15-18 ml vào hộp đĩa petri 15 x 90 mm vô trùng Môi trường phải đục, làm khô đĩa trước sử dụng Có thể giữ đĩa chuẩn bị 20-25 0C đến ngày Mơi trường Brain Heart Infusion (BHI) Chất chiết óc bê 12,5 g Chất chiết tim bò 5g Proteose peptone 10 g Glucose (Dextrose) 2g NaCl 5g Disodium phosphate (Na2HPO4) 2,5 g Nước cất 1000 ml pH cuối 6,8 ± 0,2 Tiệt trùng môi trường 1210C thời gian 15 phút 10 Môi trường TSC (+ D-Cycloserine) Tryptose 15g Peptone đậu nành 5g Cao nấm men 5g Sodium metabisulfite (Na2SO5) 1g Ferric ammonium citrate (Fe3+) 1g D-cycloserine Agar Nước cất 400mg 14g 1000 ml pH cuối 7,6 ± 0,2 Hòa tan tất thành phần nói vào lít nước (trừ D-cycloserine) Hấp mơi trường 1210C thời gian 15 phút Sau đó, làm nguội 500C bổ sung Dcycloserine vào khuấy hỗn hợp 11 Môi trường Thioglycollate Cao nấm men 5g Tryptone 15g Glucose 5,5g Sodium thioglycollate 0,5g NaCl 2,5g L-cystine 0,5g Resazurin 0,001g Agar 0,75g Nước cất vừa đủ 1000 ml pH cuối 7,1 ± 0,2 Tiệt trùng môi trường 1210C thời gian 15 phút 12 Môi trường Tetrathionate Muller Kauffmann (MKTTn) Cao thịt 4,3 g Enzymatic digest casein 8,6 g NaCl 2,6 g CaCO3 38,7 g NaS2O3.5H2O 47,8 g Bile 4,78 g Brilliant Xanh Nước cất 0,0096 g 1000 ml Hòa tan thành phần nước cách đun sôi nhẹ phút tan hồn tịan chỉnh pH =8,2 ± 0,2 250C Bảo quản tuần ± oC Dung dịch Iodine-iodide sodium Iodine 20,0 g KI 25,0 g Nước 100 ml Hòa Iodine KI vào 10 ml nước cho tan hịan tịan, sau thêm đủ 100 ml Dung dịch Novobiocin Novobiocin sodium salt 0,04 g Nuớc ml Hòa Novobiocin sodium salt nước lọc vô trùng Bảo quản tuần 30C Môi trường KMTTn hịan chỉnh Mơi trường (MKTTn) 1000 ml Dung dịch Iodine-iodide sodium 20 ml Dung dịch Novobiocin ml 13 Môi trường Xylose Lysin Desoxycholate agar (XLD) Cao nấm men 3,0 g L-Lysin HCl 5,0 g Xylose 3,75 g Lactose 7,5 g Sucrose 7,5 g Sodium desoxycholate 1,0 g NaCl 5,0 g Na2S2O5 6,8 g Ammonium ferrous (II) citrate 0,8 g Phenol red 0,08 g Agar 18,0 g Nước cất 1000 ml Hòa tan thành phần nước cách đun nhẹ vừa đun vừa khuấy tan hòan tòan, chỉnh pH =7,4 0,2 25 0C Đổ đĩa, bảo quản ngày (3 – 2)0C Khi sử dụng làm khô nhẹ mặt thạch nhiệt độ từ (37-55)0C Nếu bột khan pha chế theo hướng dẫn nhà sản xuất 14 Môi trường Hektoen Entric Agar (HE) Proteose peptone 12,0 g Extrait de levure 3,0 g Thiosulfate de sodium 5,0 g Chlorure de sodium 5,0 g Sels biliaires 9,0 g Citrate de fer ammoniacal 1,5 g Salicine 2,0 g Lactose 12,0 g Saccharose 12,0 g Fuchsine acide Bromothymol blue Agar Nước cất 0,1 g 0,065 g 13,0 g 1000 ml Hòa tan thành phần vào 12 lít nước, đun khuấy nhẹ tan hòan tòan, chỉnh pH =7,5 ± 0,2 250C.Tiệt trùng lò hấp 1210C/15 phút Nếu môi trường bột khan pha chế theo hướng dẫn nhà sản xuất 15 Môi trường Kligler Iron Agar (KIA) Extrait de viande 3,0 g Extrait de levure 3,0 g Digestat enzymetique de caseine(pepton) 20,0 g Lactose 10,0 g Dextrose 1.0 g NaCl 5,0 g Ammonium ferric citrat 0,5 g Na2S2O3.5H2O 0,5 g Phenol red 0,025 g Agar 12-18 g Nước cất 1000 ml Hòa tan thành phần vào 1lít nước, đun khuấy nhẹ tan hòan tòan, chỉnh pH =7,5± 0,2 250C Phân 10 ml môi trường vào ống nghiệm 16mm x 160mm Tiệt trùng lò hấp 121 0C ± 10C/10 phút Sau tiệt trùng để nghiêng cho phần đứng khoảng 2,5 cm (đặt ống nghiệm góc 20 độ) 16 Mơi trường Ure Phenol Red Broth canh Tryptone (Ure-Indol) Ure Phenol Red Broth Cao nấm men 0,1 g KH2PO4 9,1 g Na2HPO4 9.5 g Urea 20,0 g Phenol Red 0,08 g Nước cất 1000 ml Canh Tryptone Tryptone trypticcase Nước cất 20 g 1000 ml 17 Môi trường Lysine Decarboxylase Broth (LDC) Pepton 5,0 g Cao nấm men 3,0 g Dextrose 1,0 g L-Lysine HCl 5,0 g Ferric (II) ammonium citrate 0,5 g Na2S2O5 0,04 g Bromocresol purple 0,016 g Nước cất 1000 ml Hòa tan thành phần váo 1lít nước, đun khuấy nhẹ tan hòan tòan, chỉnh pH =6,8 ± 0,2 250C.Phân ml vào ống nghiệm12mm x 120mm Tiệt trùng lò hấp 1210C ± 0C/15 phút 18 Thuốc thử Nitrit p-Dimethylaminobenzaldehyde (p-DMABA) 5,0 g Isoamyl alcohol 75,0 ml HCl đậm đặc 25,0 ml Hòa tan p-DMABA dung môi, bổ sung khuấy thành phần nhỏ HCl đến đủ lượng Thuốc thử chứa chai màu tối tránh ánh sáng 40C.Có thể thay isoamyl alcohol amyl alcohol butanol 19 Môi trường Pseudomonas agar Gelatin peptone 16g Casein hydrolysate 10g Potassium sulphate 10g Magnesium chloride 1,4g Agar 11g Cetrimide 200mg Sodium nalidixate 15mg Nước cất vừa đủ 1000 ml pH cuối 7,1 ± 0,2 Hòa tan thành phần trừ cetrimide sodium nalidixate Tiệt trùng môi trường 1210C thời gian 15 phút, sau làm nguội 500C Hòa tan cetrimide sodium nalidixate vào 4ml hỗn hợp nước vô khuẩn ethanol (tỷ lệ 1/1) Sau bổ sung hỗn hợp vào mơi trường 500C khuấy đem đổ hộp Petri 20 Môi trường Acetamid Môi trường KH2PO4 0,5M K2HPO4 0,5M Agar Nước cất vừa đủ 0,5g 400 ml Dung dịch acetamide 1% Acetamide Nước cất vừa đủ 1g 100 ml Giữ CHCl3 chai có nắp vặn Ổn định khơng giới hạn nhiệt độ phịng PR-CV (nồng độ 500X) Phenol Red Crystal violet Nước cất vừa đủ Thêm NaOH 5N thành phần hịa tan 2g 0,2g 200 ml Mơi trường cuối Cho 0,8 ml môi trường vào ống nghiệm, thêm vào 0,2 ml dung dịch acetamid 1% Hấp 1000C tring 10 phút, làm nguội 21 Môi trường King’B Peptone 20g Agar tinh khiết 12g Glycerol 10g K2HPO4 (khan) 1,5g MgSO4.7H2O 1,5g Ph cuối 7,2 Cho vào tất thành phần ngoại trừ MgSO4 Làm nóng lắc để hòa tan agar.Thêm từ từMgSO4 trộn Phân phối 4ml vào ống nghiệm Hấp 1210C 15 phút 22 Thuốc thử Nessler KI 0g HgI2 Dung dịch NaOH 50% 15g 80 ml Nước cất loại CO2, thêm đến 500 ml Hòa tan 10g KI 15 ml nước cất, thêm 15g HgI2, khuấy cẩn thận thêm 80 ml dung dịch NaOH 50% Khuấy đều, thêm nước cất vào đếm 500 ml Để đêm phịng, lọc qua bơng thủy tinh, thu lấy phần dịch 23 Môi trường Mueller Hinton Chất chiết thịt bò 300 g Acidicase peptone (BBL) hay casamino acids (Difco) 17,5 g Tinh bột 1,5 g Thạch 17 g Nước cất 1000 ml pH cuối 7,3 ± 0,2 Đun đến sôi phút Hấp tiệt trùng 1160C 15 phút ... tryptophan, indol (-) , urease (-) , H2S (+), khử nitrat (+), lên men gluxit (+), biến dưỡng citrate (-) , catalase (+), LDC (+), VP (-) , MR (+), ONPG (-) , ODC ( + /-) ∗ Sức đề kháng Có thể tồn rau - 10 ngày,... aeruginosa · FOS (80% - 86,7%), CFS (13% - 46,7%), TTC (13,3% - 33,3%) · ATM AN (13,3%) · CS (13,3% - 33,3%), CFP (6,7% - 20%), CIP (6,7%) · TM IPM (0%) With the rate of multidrug-resistant P aeruginosa:... độ 1 0-1 Thực tương tự với nồng độ pha loãng dần 1 0-2 , 1 0-3 , 1 0-4 ,… Hút ml độ pha loãng vào đĩa petri vô trùng Lần lượt đổ khoảng 15 - 20 ml môi trường PCA 470C vào đĩa petri cấy mẫu, lắc - Ủ 300C/72