TR C KHU N M XANH (Pseudomonas aeruginosa)
L ch s phát hi n
T đ u th k th 19, ng i ta đã th y hi n t ng nhu m màu xanh r đ ng c a các ch t ti t t m các v t th ng (Fordo, 1860)
- N m 1862, Liche phân l p đ c các v t th ng nh ng vi khu n có hình que và g i chúng là “vibrio”
- N m 1872, Schroeter phát hi n trong m xanh màu r đ ng m t lo i tr c khu n Gram âm và ông đ t tên cho vi khu n đó là Bacterium aeruginosum
- N m 1985, Migula đ ngh x p lo i vi khu n này vào gi ng Pseudomonas, do nó th ng nhi m vào v t th ng t o m xanh nên g i là Pseudomonas pyocyanea
- Sau đó ng i ta th ng nh t g i tên vi khu n này là Pseudomonas aeruginosa cho đ n ngày nay [4]
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Danh pháp
c đ i m sinh v t h c
Tr c khu n Gram (-), th ng hay h i cong, hình th thay đ i trong l a c y già, di đ ng, khụng bào t , kớch th c 0,6ì2àm, đ ng m t mình hay thành đôi hay thành chu i ng n [8]
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
(Ngu n trích: http://pixels.com/featured/pseudomonas-aeruginosa-bacteria-sem- spl.html)
Vi khuẩn hiếu khí tuyết đới thường sống trong các môi trường nuôi cấy như thạch dinh dưỡng, thạch máu và canh thang Nhiệt độ tối ưu cho sự phát triển của chúng là từ 37-42 độ C, với khoảng nhiệt độ có thể từ 5-42 độ C, và pH lý tưởng là 7,2-7,5 Vi khuẩn này thường có hình dạng lăn, trong suốt, bầu đầu hoặc không đầu, có thể có ánh kim loại, màu xám nhạt trên nền môi trường màu hồng xanh, với mùi thơm đặc trưng Ngoài ra, cũng có thể gặp loại vi khuẩn lạc xù xì hoặc nhầy.
- Tính ch t đ c tr ng c a tr c khu n m xanh là sinh s c t và ch t th m
- Trên môi tr ng nuôi c y có pepton, vi khu n có th ti t ra các lo i s c t sau:
Pyocyanin là một loại sắc tố phenazin có màu xanh lam, hòa tan trong nước và chloroform, tạo ra màu xanh cho môi trường nuôi cấy và khuẩn lạc Sắc tố này được sản xuất bởi vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa khi tiếp xúc với không khí Chỉ có vi khuẩn mang màu xanh mới có khả năng sinh ra pyocyanin.
Pyoverdin là một loại sắc tố huỳnh quang, phát sáng màu xanh khi tiếp xúc với tia cực tím có bước sóng 400nm Sắc tố này tan trong nước nhưng không tan trong cloroform Ngoài pyoverdin, còn có một số loài Pseudomonas khác cũng tạo ra sắc tố này.
Pyorubin: s c t màu h ng nh t, ch 1% s ch ng tr c khu n m xanh sinh ra s c t này
Pyomelanin: s c t màu nâu đen, ch 1-2% s ch ng tr c khu n m xanh sinh s c t này [15]
S d ng carbohydrat theo l i oxy hóa có sinh axit nh glucose, manitol, glycerol, arabinose…
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
- Không lên men đ ng Lactose
- Oxdase (+); Motility d ng tính (+); KIA đ /đ - không sinh H 2 S
- Idol âm tính(-), Citrat simmon d ng tính (+), LDC âm tính (-) [8]
P.aeruginosa có 2 lo i kháng nguyên
Kháng nguyên lông H: Kháng nguyên này chung cho c gi ng, d b phá h y b i nhi t đ
Kháng nguyên thân O: đ c hi u cho t ng typ B n ch t là Lipopolysaccharid, b n v i nhi t đ D a vào kháng nguyên này chia tr c khu n m xanh thành 12 nhóm [15]
Y u t đ c l c liên quan đ n t bào (cell-associated virulence factors)
- Tiêm mao (flagellum): ch u trách nhi m di đ ng là ch y u, c ng có th tác đ ng nh y u t bám dính lên b m t bi u mô
- Lông (Pili hay fimbriae) bám dính lên t bào bi u mô, t đó thúc đ y quá trình khu trú (colonization) c a vi khu n
Alginate là thành phần chính của biofilm, giúp vi khuẩn bám dính trên mô và tăng cường khả năng kháng lại kháng sinh cũng như các chất khử trùng Màng sinh học này đóng vai trò quan trọng trong quá trình hình thành và duy trì sự sống của vi khuẩn.
- Lipopolysaccharide (LPS): l p LPS c a P.aeruginosa có thành ph n lipid A là n i đ c t c a vi khu n, gây s t, tiêu ch y, phá h y h ng c u và d n đ n s c nguy hi m
Y u t đ c l c ngo i bào (extracellular virulence factors)
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
- Protease: g m 2 lo i là elastase và alkaline protease Elastase làm r i lo n bi u mô hô h p Alkaline protease ng n c n s hình thành fibrin và làm tan fibrin
- Hemolysins: g m phospholipase C và rhamnolipid, có th tác đ ng hi p l c đ phá v lipid và lecithin C hai tham gia quá trình xâm l n mô b ng các hi u ng gây đ c t bào
- Ngo i đ c t A (Exotoxin A): c ch quá trình sinh t ng h p protein, là nguyên nhân gây t n th ng mô c c b , s xâm l n c a vi khu n và có th c ch mi n d ch [4]
D ch t h c
Vi khuẩn P.aeruginosa thường hiện diện trên da của con người, đặc biệt là ở vùng nách và vùng hậu môn sinh dục, nhưng ít thấy trong phân của những người không sử dụng kháng sinh Trong hầu hết các trường hợp, P.aeruginosa là nguồn lây nhiễm không đặc hiệu, thường xuất hiện trên các vật thể thường xuyên tiếp xúc với bệnh nhân đang điều trị bằng kháng sinh Tuy nhiên, vi khuẩn này có thể gây nhiễm khuẩn tại các vị trí như phổi, da hoặc đường tiểu của bệnh nhân, thường xảy ra sau khi vi khuẩn gây bệnh ban đầu bị tiêu diệt bởi kháng sinh Nhiễm khuẩn nặng có thể xảy ra khi có sự kết hợp với tổn thương mô tại chỗ hoặc khi sức đề kháng của bệnh nhân giảm sút Mặc dù các chủng Pseudomonas có nhiều yếu tố đặc trưng, nhưng chúng ít khi gây bệnh ở những người khỏe mạnh.
Bệnh nhân mắc bệnh xơ nang (cystic fibrosis) có nguy cơ nhiễm khuẩn nặng do vi khuẩn mủ xanh Trẻ sinh non và trẻ có dị tật bẩm sinh thường dễ mắc bệnh Bệnh nhân xơ nang thường được điều trị bằng kháng sinh, glucocorticoid hoặc thuốc chống ung thư Tuy nhiên, người lớn mắc bệnh xơ nang có thể suy kiệt do nhiễm khuẩn Pseudomonas aeruginosa.
Ph n l n nhi m khu n này th ng hay x y ra môi tr ng b nh vi n nhi m khu n ngo i sinh do m c ph i vi khu n t ngu n lây khác Trong các b nh vi n, vi
Khóa luận tốt nghiệp của GVHD: TS.BS V Bảo Châu phân tích rằng vi khuẩn thường tồn tại ở nhiều nguồn khác nhau, bao gồm môi trường chung, dụng cụ sát trùng và các loại thuốc Vi khuẩn thường xuyên được phát hiện trong các bộ phận như tiểu, trên các ngón tay và trên bàn tay của nhân viên bệnh viện Trong một số dịch bệnh, nhiễm khuẩn đang gia tăng đáng kể.
P.aeruginosa là do ng i lành mang vi khu n làm lây truy n t b nh nhân này đ n b nh nhân khác Ng i ta đã thông báo nh ng v d ch t ng t x y ra trong s tr s sinh đ non các nhà s sinh, và ph bi n là nhi m khu n chéo trong phòng đi u tr b b ng Dù r ng ng i l n kh e m nh ng i ta tìm th y tr c khu n m xanh đ ng tiêu hóa ch có kho ng 5%, nh ng t l mang khu n gia t ng b nh nhân n m đi u tr t i b nh vi n [16]
Sinh b nh h c
Sự xuất hiện của vi khuẩn P.aeruginosa thay đổi tùy thuộc vào độ tuổi và tình trạng bệnh lý của bệnh nhân Ở trẻ em và người lớn, vi khuẩn thường khu trú ở da và các mô mềm Tuy nhiên, ở người già, tình trạng nhiễm trùng có thể phát triển nhanh chóng, đặc biệt là ở những vùng da bị loét Nhiễm trùng huyết do vi khuẩn này có thể dẫn đến tỷ lệ tử vong cao Vi khuẩn lây lan qua đường máu có thể gây tổn thương cho nhiều cơ quan như da, tim, phổi, thận và màng não Đặc điểm mô học của nhiễm trùng thường thấy là sự hình thành của hoại tử và xuất huyết Vi khuẩn P.aeruginosa sản sinh ra một lớp màng biofilm giàu carbohydrate, góp phần vào khả năng kháng nguyên của chúng Các kháng thể đặc hiệu có thể bảo vệ cơ thể chống lại các mầm bệnh nghiêm trọng, trong khi vi khuẩn này cũng sản sinh ra nhiều độc tố gây hại.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU khu n r t n ng do tr c khu n m xanh, n ng đ cao kháng th ch ng ngo i đ c t A t ng quan v i s gia t ng t l b nh nhân s ng [16]
Bi u hi n lâm sàng
Nhi m khu n do P.aeruginosa xu t hi n nhi u n i bao g m da, các mô d i da, x ng và kh p, m t, tai, x ng ch m và các xoang hàm, màng não và các van tim
Cần có sự chú ý đặc biệt khi phát hiện ra vi khuẩn huyết mà không tìm thấy vi khuẩn tiên phát, vì điều này có thể liên quan đến các thuốc tiêm tĩnh mạch, các dịch truyền tĩnh mạch hoặc các thuốc sát trùng được sử dụng trước đó Điều này đặc biệt quan trọng khi phân lập được các chủng P.aeruginosa khác ngoài vi khuẩn m xanh.
I.1.6.1 Nh ng y u t liên quân t i nhi m khu n Pseudomonas aeruginosa
Phá v hàng rào da và niêm m c
t ng đo áp l c t nh m ch trung tâm
Phá v h vi sinh th ng trú
i u tr kháng sinh ph r ng
Ti p xúc v i môi tr ng b nh vi n
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Suy gi m mi n d ch qua trung gian t bào
Nhi m P.aeruginosa th ng kh i đ u khi vi khu n bám và t o khu n l c trên b m t da, niêm m c và ti n t i xâm l n t i ch r i phá h y các mô bên d i
Nhiễm khuẩn có thể khu trú tại chỗ hoặc lan truyền trực tiếp đến các tổ chức lân cận Quá trình này có thể tiếp tục khi vi khuẩn xâm nhập vào máu, phân tán, gây ra phản ứng viêm toàn thân, suy đa cơ quan và cuối cùng dẫn đến tử vong Nhiễm khuẩn không chỉ gây nhiễm khuẩn tại chỗ bệnh nhân bị suy giảm miễn dịch mà còn có khả năng xâm nhập và lan tỏa trong dòng máu rất nhanh.
Vi khuẩn P.aeruginosa thường gây ra các biến chứng ngoài da như loét do phình tĩnh mạch và viêm nhiễm sau khi điều trị kháng sinh Các lỗ dò do lao hoặc viêm xương tủy có thể bị nhiễm khuẩn này Mặc dù P.aeruginosa có thể tồn tại trong cơ thể, nhưng nó không nhân lên sâu trong các mô da và không gây nhiễm khuẩn huyết Nhiễm khuẩn da thường xảy ra sau khi các mô chết được loại bỏ hoặc bong ra Vi khuẩn này cũng có thể làm móng tay chuyển sang màu xanh, đặc biệt ở những người ngâm tay lâu trong nước hoặc xà phòng P.aeruginosa có khả năng gây viêm da khi tiếp xúc với nhiệt độ cao Nhiễm khuẩn này thường nhẹ và tự nhiên.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
I.1.6.2 Các b nh lý nhi m trùng do Pseudomonas aeruginosa
Viêm phổi nguyên phát, hay viêm phổi không nhiễm khuẩn, xảy ra khi hít phải các chất độc hại từ đường hô hấp trên Tình trạng này thường gặp ở những bệnh nhân mắc bệnh phổi mãn tính, suy tim sung huyết hoặc HIV/AIDS.
Vãng khu P.aeruginosa có thể gây ra viêm phổi nguyên phát, dẫn đến sự xâm nhập của vi khuẩn vào máu và lan rộng ra các cơ quan khác Sự hiện diện của vi khuẩn này trong hệ hô hấp có thể gây tổn thương nghiêm trọng đến phổi và các bộ phận khác trong cơ thể.
- Nhi m khu n đ ng hô h p d i do P.aeruginosa th ng g p tr l n, thanh niên b x gan, ngoài ra còn g p b nh nhân AIDS
P.aeruginosa có m t nguyên nhân quan tr ng gây nhi m khu n huy t đe d a m ng s ng nh ng b nh nhân suy gi m mi n d ch Nhi m khu n huy t th ng do th y thu c và th ng g p nh ng b nh nhân n m vi n v i nhi u tình tr ng b nh khác nhau Nhi m khu n huy t có th là nguyên phát (không bi t rõ ngu n g c) ho c th phát do m t nhi m khu n nào đó
P.aeruginosa là tác nhân gây nhiễm khuẩn van tim chủ yếu ở những người tiêm chích ma túy và sử dụng bơm tiêm không an toàn Nguồn gốc nhiễm khuẩn thường gặp ở người nghiện là do việc lạm dụng thuốc tiêm Việc sử dụng heroin có thể gây tổn thương cho các lá van và màng trong thành tim, dẫn đến tình trạng viêm nhiễm và gia tăng nguy cơ nhiễm khuẩn van tim Van ba lá thường bị tổn thương, và tác động của vi khuẩn làm tăng tỉ lệ bệnh van tim ở những người tiêm chích ma túy.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
- Van đ ng m ch ph i, van hai lá, van đ ng m ch ch , màng trong thành c tim c a c hai tâm nh đ u có th b nh h ng trong viêm màng trong tim do
Nhiễm khuẩn P.aeruginosa có thể gây ra viêm màng não và áp xe não, với nguồn lây lan từ các cấu trúc lân cận như tai, xoang, và xương chẩm Nhiễm khuẩn có thể xảy ra trực tiếp qua xoang hoặc vào não thông qua chấn thương đầu, phẫu thuật, hoặc các thủ thuật chẩn đoán Ngoài ra, vi khuẩn cũng có thể lây truyền theo đường máu từ những nhiễm khuẩn ở vị trí xa.
Pseudomonas aeruginosa là vi khuẩn thường gây nhiễm trùng tai ngoài, đặc biệt trong điều kiện ẩm ướt và khi có tình trạng viêm Vi khuẩn này là nguyên nhân chính gây bệnh viêm tai ngoài, dẫn đến những triệu chứng như đau tai, cảm giác chèn ép và chảy mủ tai Người bệnh có thể cảm thấy đau khi kéo vành tai, trong khi ống tai ngoài sưng lên và chứa đầy ráy tai, gây khó khăn trong việc nhìn thấy màng nhĩ.
Pseudomonas aeruginosa xâm nhập qua lớp biểu mô che phủ, thâm nhập vào mô mềm bên dưới Quá trình này liên quan đến mô mềm, sụn và xương, dẫn đến tình trạng viêm tai ngoài ác tính với đặc điểm tổn thương phá hủy nghiêm trọng Đây là nguyên nhân chính gây ra các trường hợp viêm tai ngoài ác tính do Pseudomonas aeruginosa.
Pseudomonas aeruginosa là nguyên nhân chính gây ra viêm giác mạc, loét giác mạc và viêm nội nhãn Viêm giác mạc do P.aeruginosa xảy ra khi vi khuẩn xâm nhập vào lớp mô đệm bên dưới, làm tổn thương lớp biểu mô bảo vệ Loét giác mạc thường phát sinh từ việc sử dụng kính áp tròng trong thời gian dài Triệu chứng viêm giác mạc do P.aeruginosa thường bắt đầu bằng cảm giác đau và khó chịu ở mắt.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU loét nh trung tâm r i lan đ ng tâm ra ph n l n giác m c, c ng m c, mô đ m bên d i, có th gây th ng giác m c phía sau
- Viêm n i nhãn do P.aeruginosa đi n hình là m t tình tr ng đe d a ch c n ng th giác, ti n tri n nhanh, ph i đòi h i can thi p đi u tr ngay l p t c
Nhi m khu n x ng và kh p
- Viêm t y x ng c t s ng do P.aeruginosa liên quan t i nhi m khu n đ ng ni u có bi n ch ng, s d ng d ng c hay ph u thu t đ ng ni u, và s d ng thu c đ ng tiêm
Mối liên quan giữa Pseudomonas aeruginosa và nhiễm trùng do tiêm chích là một vấn đề đáng chú ý trong y học Nhiễm trùng này thường xảy ra khi sử dụng thuốc bằng đường tiêm, và trong một số trường hợp, nó có thể đi kèm với viêm màng trong tim do P.aeruginosa, mặc dù tình trạng này khá hiếm gặp.
- Nhi m kh p m do P.aeruginosa th ng do ph u thu t vùng x ng ch u và s d ng thu c theo đ ng tiêm
Viêm sưng bàn chân do vi khuẩn P.aeruginosa thường xảy ra sau những vết thương xuyên thấu, đặc biệt là ở trẻ em Vi khuẩn này gây nhiễm trùng tại các khu vực như ngón chân, khớp ngón chân, sưng bàn chân, cổ chân và gót chân.
Pseudomonas aeruginosa là một trong những tác nhân chính gây bệnh thường gặp, liên quan đến nhiều hội chứng ít được hiểu rõ, đặc biệt trong các nhiễm khuẩn xương và khớp không do động máu Bệnh lý này thường biểu hiện qua viêm tủy xương mãn tính, ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe của bệnh nhân.
P.aeruginosa là m t trong nh ng nguyên nhân th ng g p nh t gây nhi m khu n đ ng ti u b nh vi n và có bi n ch ng Có th do đ t ng thông hay d ng c đ ng ni u, ph u thu t hay do t c ngh n đ ng ti u, chúng có th xu t phát t m t c đnh và có th là m n tính hay th phát
Nhi m khu n da và mô m m
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
NHI M TRÙNG B NH VI N [2]
nh ngh a
Nhiễm trùng bệnh viện (Nosocomial Infection) là loại nhiễm trùng xảy ra trong thời gian nằm viện, thường xuất hiện từ 48 đến 72 giờ sau khi bệnh nhân nhập viện và trong vòng 10 ngày sau khi xuất viện Thời gian này có thể thay đổi đối với những nhiễm trùng có thời gian ủ bệnh ngắn hơn 48-72 giờ.
Nhiễm trùng vết mổ (Surgical Site Infection) được định nghĩa là nhiễm trùng xảy ra tại vùng phẫu thuật, xuất hiện trong vòng 30 ngày sau phẫu thuật hoặc trong vòng 1 năm nếu có vật liệu y khoa được cấy ghép.
Nhiễm trùng có thể lây lan trong bệnh viện, với thời gian ủ bệnh khác nhau trước khi bệnh nhân nhiễm bệnh Những vi khuẩn gây nhiễm trùng này có thể được mang vào bệnh viện và trở thành nguồn lây nhiễm cho các bệnh nhân khác cũng như nhân viên y tế.
Nhiễm trùng tái phát thường xảy ra ở bệnh nhân suy giảm sức đề kháng, đặc biệt là những người lớn tuổi, trẻ em và những người có vấn đề về sinh lý hoặc rối loạn chuyển hóa.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Ngu n lây nhi m
- Ngo i sinh (exogenous source): t m t b nh nhân khác hay chính nhân viên y t ho c t môi tr ng bên ngoài vào, ho c qua trung gian các d ng c y t ch a đ c thanh trùng đúng m c
- N i sinh (endogenous source): t m t vi khu n m t n i khác trên cùng c th đó
Ngu n nhi m trùng trong các b nh vi n có th là:
Các bệnh nhân có thể bao gồm những người khác hoặc nhân viên y tế, hoặc có thể là người tham gia vào quá trình điều trị Họ có thể là những người đang nhiễm khuẩn, đang trong thời gian điều trị bệnh hoặc những người đã hồi phục nhưng vẫn mang mầm bệnh.
Môi trường bao gồm các nguồn nhiễm có thể là động vật, thực phẩm, nước và không khí, trong đó ô nhiễm vi sinh vật là một vấn đề nghiêm trọng Các nguồn ô nhiễm này có thể bị ô nhiễm từ các chất vi khuẩn bên ngoài môi trường Nhiễm trùng vi sinh vật lây lan qua các giọt nhỏ và các hạt bụi li ti trong không khí.
ng lây nhi m
Nhiễm trùng bệnh viện có thể lây lan qua đường không khí hoặc do tiếp xúc với các dụng cụ y tế trong bệnh viện Vi khuẩn này có khả năng lây lan qua nhiều con đường khác nhau, gây ra nguy cơ cho sức khỏe cộng đồng.
Nhi m trùng b nh vi n ph thu c vào các y u t :
Vi khu n gây b nh: s l ng, đ c tính, ho t l c
Ký sinh trùng đóng vai trò quan trọng trong các bệnh nhiễm trùng, đặc biệt tại bệnh viện, nơi tập trung nhiều bệnh nhân có sức đề kháng chống nhiễm trùng thấp.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Sự lây lan của các vi khuẩn gây nhiễm trùng đến các ký sinh trùng mới có thể dẫn đến sự thích ứng và nảy nở của các vi khuẩn qua các nhiễm trùng phát sinh trên một bề mặt đa dạng, có thể gây ra các bệnh cảnh lâm sàng rõ ràng và thậm chí dẫn đến tử vong.
Các nhi m trùng b nh vi n th ng g p
Các nhi m trùng b nh vi n th ng g p có th là:
Nhi m trùng v t th ng ngo i khoa
H u qu c a nhi m trùng b nh vi n
Nhi m trùng b nh vi n có th d n đ n h u qu sau:
Làm cho b nh n ng h n ho c t vong
Làm kéo dài th i gian n m vi n gi m kh n ng lao đ ng
B nh nhân nhi m khu n s tr thành m t ngu n nhi m nguy hi m cho nh ng ng i khác t i b nh vi n và c ng đ ng
Sử dụng kháng sinh trong điều trị không chỉ làm tăng chi phí mà còn đẩy bệnh nhân vào nguy cơ nhiễm trùng, dẫn đến áp lực chọn lọc kháng thuốc cho các dòng vi khuẩn gây bệnh Điều này góp phần hình thành những dòng vi khuẩn kháng thuốc mạnh hơn, gây khó khăn trong việc điều trị bằng kháng sinh.
Các bi n pháp phòng ng a
Theo h ng d n c a Trung tâm ki m soát và phòng b nh Hoa Kì:
Nhân viên y tế phải thường xuyên rửa tay bằng xà phòng đúng quy cách trước và sau khi xử lý vật dụng cho bệnh nhân.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Nhân viên y t ph i mang g ng tay khi ti p xúc v i máu, d ch, ch t ti t, ch t th i và nh ng đ v t nhi m trùng
Bệnh viện phải đảm bảo vệ sinh môi trường, bao gồm việc lau chùi các bề mặt, giường bệnh, bàn ghế và vật dụng cần thiết Cần xử lý, vận chuyển và tiêu hủy đúng cách các chất thải như máu, dịch, chất thải sinh học, nhằm tránh ô nhiễm ra da, niêm mạc, quần áo, cũng như không lây lan vi sinh vật đến bệnh nhân khác hoặc ra ngoài môi trường.
Nhân viên y t ph i c n th n khi s d ng kim tiêm, dao m và d ng c bén nh n
B nh vi n ph i đ m b o v t d ng dùng l i: ng n i soi, ng xông, ng th … đã đ c ti t trùng đúng m c Ph i đ m b o vi c th i b d ng c dùng m t l n.
Tình hình nhi m trùng b nh vi n c a P.aeruginosa
Nhiễm trùng bệnh viện là một vấn đề nghiêm trọng trong ngành y tế toàn cầu, với nhiều nghiên cứu chỉ ra rằng nó làm tăng tỷ lệ tử vong, kéo dài thời gian nằm viện và tăng chi phí điều trị Sự xuất hiện của nhiều bệnh nhân mắc các bệnh do vi sinh vật kháng thuốc và các tác nhân gây bệnh mới khiến tình hình trở nên phức tạp hơn Trong số đó, Pseudomonas aeruginosa là một trong những tác nhân gây nhiễm trùng bệnh viện nguy hiểm và phổ biến nhất hiện nay.
Theo thống kê, tỷ lệ nhiễm trùng bệnh viện trên toàn thế giới dao động từ 3,5% đến 10% tổng số bệnh nhân, với khoảng 1,4 triệu người mắc nhiễm trùng bệnh viện ở bất kỳ thời điểm nào.
Theo nghiên c u Kh o sát tình hình đ kháng kháng sinh c a vi khu n t i khoa
H i s c tích c c và Ch ng đ c B nh vi n h i s c c p c u Tr ng V ng nh n th y 5 vi khu n hàng đ u gây nhi m trùng b nh vi n là: Acinetobacter baumennii (32.3%),
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Staphylococcus aureus (15,4%), Klebsiella spp (13,8%), E.coli (9,7%) và
Nghiên cứu tại Bệnh viện Nhân dân Gia định cho thấy các tác nhân gây nhiễm khuẩn bệnh viện phổ biến bao gồm E.coli (29,7%), Klebsiella spp (26%), P.aeruginosa (13,7%), Staphylococcus aureus (6%) và Acinetobacter spp (5%).
KHÁNG SINH
nh ngh a
Kháng sinh là các chất có khả năng ức chế sự sinh sôi của vi khuẩn bằng cách tác động vào các quá trình sinh hóa thiết yếu của chúng, từ đó giúp ngăn chặn sự phát triển và duy trì sự cân bằng sinh thái vi khuẩn.
Phân lo i kháng sinh
Có nhi u cách đ phân lo i kháng sinh nh phân lo i theo ph tác d ng, ph ng th c tác d ng…
- Phân lo i theo ph tác d ng: có hai nhóm là kháng sinh có ho t ph r ng và kháng sinh có ho t ph ch n l c
+ Kháng sinh có ho t ph r ng: M t kháng sinh có tác d ng trên nhi u lo i vi khu n, c Gram (+) và Gram (-)
Nhóm Aminoglycosid: streptomycin, gentamycin, amikacin…
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
+ Kháng sinh có ho t ph ch n l c: M t kháng sinh ch có tác d ng trên m t ho c m t s lo i vi khu n nh t đnh Ví d :
Nhóm Macrolid: có tác d ng trên vi khu n Gram (+) và m t s tr c khu n Gram (-) nh erythromycin, roxythromycin, azithromycin…
Nhóm Polymycin ho c Acid nalidixic: ch có tác d ng trên tr c khu n Gram (-)
Nhóm Penicilin: tác d ng đ i v i vi khu n Gram (+), b penicilinase phân h y
Nhóm Methycilin: tác d ng đ i v i vi khu n gram (+), không b penicilinase phân h y Ví d : Cloxacilin, Nafcilin…
Nhóm Ampicilin: ho t ph r ng, b penicilinase phân h y Ví d Ampicilin, Amocilin, Pivampicilin…
Nhóm Cefalosporin: ph r ng, b penicilinase phân h y
- Phân lo i theo ph ng th c tác d ng :
Kháng sinh được chia thành hai loại chính: kháng sinh có tác dụng kiềm khuẩn và kháng sinh có tác dụng diệt khuẩn Tuy nhiên, ranh giới giữa hai loại này không rõ ràng, vì một số kháng sinh kiềm khuẩn ở nồng độ cao vẫn có thể phát huy tác dụng diệt khuẩn.
+ Kháng sinh có tác d ng ki m khu n: Acid nalidixic, Lincomycin, Erythromycin, Sufamid, Tetracyclin, Trymethoprim…
+ Kháng sinh có tác d ng di t khu n: Aminoglycosid, Cephalosporin, Nitroimidazol, Penicilin, Vancomycin, Rifampicin…
C ch tác đ ng c a kháng sinh
Sau khi vào c th , kháng sinh t i đích tác đ ng s tác d ng b ng cách:
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
- c ch sinh t ng h p vách t bào vi khu n: vi khu n sinh ra s không có vách do đó d b tiêu diêt Ví d kháng sinh nhóm beta-lactam, vancomycin…
- Gây r i lo n ch c n ng màng nguyên t ng, đ t bi t là ch c n ng th m th u ch n l c, làm cho các thành ph n (ion) bên trong t bào b thoát ra ngoài Ví d polymicin…
- c ch sinh t ng h p protein : đi m tác đ ng là ribosome 70S c a vi khu n, k t qu là các phân t protein không đ c hình thành ho c không có ho t tính sinh h c
- c ch sinh t ng h p acid nucleid G m có:
+ Ng n c n s sao chép c a DNA t o DNA con Ví d nhóm quinolon c ch enzyme gyrase làm cho phân t DNA không m đ c vòng xo n
+ C n tr sinh t ng h p RNA nh rifampicin g n v i RNA-polymerase l thu c DNA
- c ch sinh t ng h p các ch t chuy n hóa c n thi t cho t bào
Ví d : sufamid và trimothoprim c ch quá trình chuy n hóa t o acid folic, m t co-enzyme c n cho vi c t ng h p m t s acid amin và các purin, pyrimidin.
kháng kháng sinh: [14]
I.3.4.1 Hi n t ng đ kháng kháng sinh: kháng kháng sinh là nói đ n kh n ng c a vi khu n ho c các tác nhân gây b nh d ng vi khu n khác kháng l i hi u qu c a thu c kháng sinh Kháng thu c kháng sinh x y ra khi vi khu n thay đ i theo m t cách m i đ làm gi m ho c lo i b hi u qu c a thu c, hóa ch t hay các tác nhân khác đ c dùng cho vi c ch a b nh ho c ng n ng a viêm nhi m M t khi kháng thu c, virus, vi khu n không ch t mà v n t n t i và ti p t c nhân lên, gây ra nhi u tác h i khác
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Kháng thuốc kháng sinh đang trở thành một vấn đề nghiêm trọng, thu hút sự quan tâm của cộng đồng y tế Tình trạng này dẫn đến sự xuất hiện của các dòng vi khuẩn kháng thuốc, làm gia tăng nguy cơ lây lan dịch bệnh nhanh chóng và khó chữa trị Đặc biệt, nhóm người dễ bị tổn thương như người già, trẻ em và những người có sức khỏe yếu đang phải đối mặt với rủi ro cao hơn, thậm chí là tử vong.
I.3.4.2 Nguyên nhân vi khu n kháng thu c kháng sinh:
Sử dụng kháng sinh là nguyên nhân chính dẫn đến tình trạng vi khuẩn kháng thuốc Mỗi khi thuốc được sử dụng, vi khuẩn nhạy cảm sẽ bị tiêu diệt, trong khi những vi khuẩn kháng thuốc còn lại sẽ phát triển và nhân rộng.
Sử dụng thuốc kháng sinh không đúng cách, như lạm dụng hoặc thiếu khoa học, có thể dẫn đến tình trạng kháng thuốc Thuốc kháng sinh chỉ hiệu quả trong việc điều trị nhiễm trùng do vi khuẩn, và không có tác dụng đối với các bệnh do virus gây ra, như cảm lạnh, viêm họng hay cúm.
S d ng thu c kháng sinh thông minh chính là chìa khóa đ ki m soát, h n ch tình tr ng kháng thu c
I.3.4.3 C ch kháng thu c kháng sinh c a vi khu n
Kháng thuốc kháng sinh xảy ra khi vi khuẩn thay đổi một số cách hoạt động của nó, dẫn đến việc giảm hiệu quả của thuốc, hóa chất và các tác nhân dùng để điều trị bệnh hoặc ngăn ngừa nhiễm trùng Sau khi tồn tại, vi khuẩn tiếp tục nhân rộng và tạo ra những mối nguy hiểm mới so với khi chưa kháng thuốc.
Vi khuẩn có khả năng kháng thuốc rất đa dạng, ví dụ như một số vi khuẩn phát triển khả năng trung hòa thuốc, có thể loại bỏ hoặc thay đổi cấu trúc của thuốc kháng sinh mà không làm ảnh hưởng đến chức năng sống còn của chúng Hơn nữa, vi khuẩn cũng có thể kháng lại nhiều loại kháng sinh khác nhau thông qua các đột biến di truyền, hoặc bằng cách chiếm đoạt các đoạn DNA mã hóa từ các vi khuẩn khác.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
I.3.4.4 Tình hình đ kháng kháng sinh c a Pseudomonas aeruginosa hi n nay
Vùng kháng kháng sinh là một vấn đề nghiêm trọng, gây ra nhiều thách thức cho các nhà thuốc trong và ngoài nước Nguyên nhân dẫn đến hiện tượng này chủ yếu là do việc sử dụng kháng sinh không hợp lý Theo thông tin từ Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), tại Việt Nam, hơn 70% bệnh nhân được chỉ định kháng sinh với liều lượng không thích hợp.
P.aeruginosa là m t trong nh ng tác nhân kháng thu c th ng g p hi n nay
Việc điều trị các bệnh nhiễm trùng do tác nhân này gây ra ngày càng trở nên khó khăn và tốn kém, bởi vì nó có tính kháng kháng sinh mạnh, đặc biệt là kháng nhiều kháng sinh cùng một lúc (đa kháng).
Tình hình kháng kháng sinh c a P.aeruginosa trên th gi i
Theo thống kê tại Canada, hàng năm có khoảng 25 triệu đơn thuốc kháng sinh được kê, trong đó hơn 50% là không hợp lý, dẫn đến tình hình phát triển kháng thuốc của vi khuẩn ngày càng nghiêm trọng Báo cáo từ hệ thống giám sát nhiễm khuẩn quốc gia (NNIS) cho thấy tỷ lệ kháng kháng sinh của P.aeruginosa gia tăng: năm 2000, tỷ lệ kháng Imipenem là 17,7%, Quinolon 27,3%, và Cephalosporin thế hệ 3 là 26,4% Đến năm 2002, tỷ lệ kháng với các kháng sinh này đã tăng lên, cụ thể kháng Imipenem là 23,3%, Quinolon 32,8%, và Cephalosporin thế hệ 3 là 30,2%.
Tình hình kháng kháng sinh của Pseudomonas aeruginosa tại Việt Nam đang trở nên nghiêm trọng, đặc biệt trong các nhiễm khuẩn bệnh viện Việc điều trị các nhiễm khuẩn do P.aeruginosa gặp nhiều khó khăn do vi khuẩn này kháng lại hầu hết các loại kháng sinh, bao gồm cả các kháng sinh đặc trị và kháng sinh nhóm carbapenem như Imipenem và Meropenem.
P.aeruginosa có đ c tính kháng thu c t nhiên v i nhi u lo i kháng sinh Các kháng sinh chính dùng đ đi u tr nhi m khu n do P.aeruginosa thu c nhóm beta- lactam, aminoglycoside, Fluoroquinolon… nh ng m c đ đ kháng v i các kháng sinh này t ng đ i cao Trong nghiên c u c a Lê c M n, các kháng sinh thu c nhóm
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Cefapim và Cefalosporin th h m i c ng b đ kháng m c cao, ch còn nh y c m v i Imipenem
Theo nghiên cứu đa trung tâm của Phạm Hùng Vân và nhóm nghiên cứu MIDAS, tình hình kháng kháng sinh Imipenem và Meropenem ở các chủng vi khuẩn Gram âm được khảo sát tại 16 bệnh viện trên toàn quốc từ tháng 5/2008 đến tháng 11/2009 cho thấy có 1.602 chủng vi khuẩn Gram âm đã được nghiên cứu.
Kết quả nghiên cứu cho thấy có 15,4% Pseudomonas aeruginosa kháng Meropenem, trong khi tỷ lệ kháng Imipenem lên đến 20,7% Đáng chú ý, trong số này, 27,5% và 10,7% là các chủng nhạy cảm và nhạy vừa với Meropenem Tình hình kháng kháng sinh của P.aeruginosa tại bệnh viện Bạch Mai trong giai đoạn 2008-2010 cho thấy tỷ lệ kháng Imipenem dao động từ 26,1% đến 31,9%.
Theo kết quả của chương trình “Giám sát sự kháng kháng sinh của vi khuẩn gây bệnh thông thường ở Việt Nam 2005”, Pseudomonas aeruginosa đã cho thấy mức độ kháng thuốc cao đối với nhiều loại kháng sinh, với tỷ lệ kháng Imipenem tăng từ 12,5% vào năm 2003 lên 15,5% vào năm 2004 và 18,4% vào năm 2005.
Theo H i ngh khoa h c k thu t B nh vi n Ch R y 2010, t l kháng Imipenem 25% (2008), 27% (2009)
Theo nghiên c u c a Tr n Th Ng c Anh (2007) v S đ kháng kháng sinh c a vi khu n gây b nh th ng g p t i b nh vi n Nhi ng 2, h u h t các ch ng P.aeruginosa thì nh y c m v i CAZ (79,83%), CIP (89,42%), TCC (89,17%), IPM
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
I T NG, V T LI U VÀ PH NG
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
I T NG NGHIÊN C U
M u b nh ph m t b nh nhân đ c nh n vào đi u tr t i b nh vi n 175
- B nh ph m là m c a các v t th ng b b i nhi m, ch t d ch ph qu n, n c ti u, d ch màng ph i…
- B nh ph m máu c a b nh nhân nghi ng b nhi m khu n huy t.
A I M VÀ TH I GIAN NGHIÊN C U
V T LI U NGHIÊN C U
Môi tr ng, hóa ch t đ nuôi c y vi khu n
- Môi tr ng t ng sinh: canh thang BHI (Brain Heart Infusion)
- Môi tr ng c y máu: chai c y máu ch a môi tr ng BHI
- Môi tr ng nuôi c y, phân l p: th ch máu BA, Uriselect 4
- Môi tr ng làm kháng sinh đ : MHA (Mueller Hinton Agar)
- Các đa gi y kháng sinh c a hãng Bio Mesrieux
- N c mu i sinh lý 9 o / oo vô trùng.
D ng c , trang thi t b
+ ng nghi m, giá đ ng ng nghi m
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
+ Máy đo n ng đ Mc Farland c a hãng Bio Meriuex
PH NG PHÁP VÀ K THU T NGHIÊN C U
Ph ng pháp nghiên c u
- X lý s li u b ng th ng kê y-sinh h c
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
K thu t nghiên c u
- B nh ph m đ c l y vô khu n t i các khoa c a b nh vi n và chuy n ngay v phòng xét nghi m vi sinh đ ti n hành nuôi c y, phân l p thích h p
- Thông tin b nh nhân nh đ tu i, gi i tính, chu n đoán lâm sàn đ c ghi vào phi u xét nghi m vi sinh
- nh danh b ng môi tr ng BA, Uriselect 4, các th sinh hóa đ c tr ng c a vi khu n
Phương pháp Kirby Bauer được sử dụng để kiểm tra tính nhạy cảm của vi khuẩn đối với kháng sinh thông qua việc làm kháng sinh đồ trên môi trường thạch Kết quả được ghi nhận dựa trên đường kính vòng ức chế, theo tiêu chuẩn NCCLS, nhằm xác định vi khuẩn nhạy cảm, trung gian hoặc kháng với các loại kháng sinh đã thử nghiệm.
II.4.2.1 i v i b nh ph m là m d ch, ch t d ch ph qu n, n c ti u, d ch màng ph i, phân…
Bệnh phẩm được lấy cho vào ngồi học bình đựng chuyên dụng, dán nhãn ghi rõ họ tên người bệnh và ngày lấy mẫu, sau đó chuyển ngay đến khoa vi sinh vật để tiến hành xét nghiệm.
Bệnh phẩm được lấy ngay trên môi trường phân lập BA, sử dụng Uriselect 4: di chuyển xoay tròn tăm bông chứa bệnh phẩm vào góc đĩa thí nghiệm, sau đó dùng que cấy vô trùng ria nh trên mặt thí nghiệm theo kỹ thuật cấy phân vùng.
- đa th ch đã c y vào t m 37 0 C/24h
- C y d phòng vào ng BHI, đ ng th i v i các đa th ch c y phân l p N u trên h p th ch không có vi kh n m c mà ng BHI đ c thì c y phân l p l i t ng môi tr ng này
Quan sát h p th ch và ng BHI:
- N u không có vi khu n m c và ng BHI không đ c: tr l i k t qu âm tính
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Chọn các khu vực lân cận có màu xanh lá, xám, nhạt, hoặc ánh kim, phát ra mùi thơm giống khoai môn hoặc nho Trên môi trường thích hợp, có sự xuất hiện của tiêu huyết.
+ Ti p t c d nh danh: th nghi m các test sinh hóa đ xác đnh
P.aeruginose và làm kháng sinh đ
- N u không th y vi khu n m c mà ng BHI đ c: c y phân l p l i t ng môi tr ng này, sau đó đa th ch này 37 0 C/24h Quan sát n u th y vikhu n
P.aeruginosa m c thì ti p t c ti n hành đnh danh làm th nghi m sinh hóa đ xác đnh và làm kháng sinh đ
- Tr l i k t qu đnh danh và kháng sinh đ
- Nh ng b nh nhân có tri u ch ng nhi m khu n huy t lâm sàng đ c bác s ch đnh c y máu
Máu ph i đ c c y tr c khi b nh nhân đang điều trị kháng sinh Trong trường hợp bệnh nhân có triệu chứng nhiễm trùng huyết nhưng không thuyên giảm, cần thực hiện xét nghiệm máu để xác định tác nhân gây nhiễm trùng.
- Máu đ c l y t i gi ng b nh và b m tr c ti p vào chai l y c y máu ch a BHI vô trùng
- Ghi tên b nh nhân, ngày gi c y máu trên nhãn chai c y máu
Nuôi cấy và phân lập vi khuẩn mủ có thể được thực hiện bằng cách đặt chai cấy máu ở nhiệt độ 37°C trong vòng 5-7 ngày để quan sát sự phát triển của vi khuẩn Các dấu hiệu cho thấy sự hiện diện của vi khuẩn mủ bao gồm sự hình thành hạt đóng trên mặt huyết thanh, có mủ ở đầu hoặc có màng, cũng như hiện tượng tan huyết và đông huyết tạng.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
- Khi có d u hi u vi khu n m c thì ti n hành c y truy n sang BA và Uriselect 4,
37 o C/24h, ch n khu n l c nghi ng P.aeruginosa, ti p t c làm th nghi m sinh hóa đ xác đ nh P aeruginosa và làm kháng sinh đ
+ Tr l i k t qu đ nh danh và kháng sinh đ
Trả lời xét nghiệm âm tính: Sau 5 ngày nếu vẫn không phát hiện vi khuẩn mốc, ta có thể truyền máu vào môi trường BA Điều này nhằm đảm bảo rằng không có vi khuẩn mốc trước khi thực hiện xét nghiệm máu âm tính.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
S đ 1: S đ nghiên c u phân l p, đ nh danh và làm kháng sinh đ c a
Canh thang trong sau 7 ngày
Không có d u hi u vi khu n m c
M d ch, đ àm, d ch não t y Máu
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
PH NG PHÁP NH DANH P.AERUGINOSA
Kh o sát khóm khu n trên th ch BA
Có tiêu huy t hay không tiêu huy t Ki u tiêu huy t , hay
Khóm to hay nh , đ c hay trong, khô hay t
P.aeruginosa trên th ch BA có ki u tiêu huy t , khóm to và đ c
Hình 2: P.aeruginosa tiêu huy t trên môi tr ng BA (Ngu n trích: https://www.flickr.com/photos/microbeworld/4888319912/)
nh danh b ng môi tr ng Uriselect 4
- Là môi tr ng giàu ch t dinh d ng, nhi u lo i pepton
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
- Hai lo i ch t màu (chromogenic substrates) có kh n ng phát hi n s ho t đ ng c a các enzym đ c hi u
- Phát hi n indol nh tryptophan trong th ch
- Có ch t c ch m c lan c a Proteus
Pseudomonas aeruginosa trên thí nghiệm Uriselect 4 có thể xuất hiện dưới dạng khuẩn lạc trong suốt hoặc không trong, có thể có ánh kim loại, màu xám nhạt hoặc xanh lục trên nền môi trường màu hồi xanh, với mùi thối Khuẩn lạc cũng có thể có hình dạng xù xì hoặc nhầy.
Hình 3: P.aeruginosa trên môi tr ng Uriselect 4 (Ngu n trích: http://did.it/contenuti/biorad/UriSelect.pdf)
Kh o sát khu n l c b ng ph ng pháp nhu m gram
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Vi khuẩn gram dương có cấu trúc vách tế bào đặc biệt, cho phép chúng giữ lại phẩm màu tím Gentians-iod trong quá trình nhuộm gram, trong khi vi khuẩn gram âm không giữ được màu này Kết quả là, vi khuẩn gram dương sẽ có màu tím của Gentian, trong khi vi khuẩn gram âm sẽ có màu hồng do phẩm màu safranin hoặc fuchsin.
Hàm lượng vi khuẩn trên bề mặt kính của đèn cồn có thể bị ảnh hưởng bởi môi trường xung quanh Khi sử dụng que cấy để lấy mẫu vi khuẩn, nhóm vi khuẩn riêng lẻ sẽ được đưa vào giếng NaCl trên lam kính, sau đó được dàn mỏng và để khô tự nhiên hoặc nhanh chóng qua ánh sáng của đèn cồn.
- t lame trên giá nh m, nh dung d ch crytal violet lên ph t vi khu n, đ yên trong 1 phút, sau đó r a n c d i vòi n c ch y r t nh
- t lame trên giá nh m, nh dung d ch lugol ph đ u trên ph t vi khu n, đ yên trong 1 phút, r a n c
- T y c n b ng cách c m nghiêng tiêu b n, cho c n 96 o ch y t t mép trên phi n kính Quan sát mép d i cho đ n khi gi t c n v a m t màu tím Sau đó r a nh lame d i vòi n c ch y nh
- Ph dung d ch safarin lên ph t nh m, đ yên trong 1 phút Sau đó r a n c th m khô, sau đó đ lame khô hoàn toàn ngoài không khí
- Quan sát tiêu b n nhu m b ng kính hi n vi, xác đnh hình thái và cách b t màu c a vi khu n:
Quan sát ph t nhu m gram qua kính hi n vi, d i v t kính d u, vi khu n
P.aeruginosa có d ng hình que, d ng r i, b t màu Gram (-)
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Hình 4: Hình nh nhu m Gram P.aeruginosa (Ngu n trích: https://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Pseudomonas_aeruginosa)
Th nghi m Oxidase
Nguyên t c: Phát hi n kh n ng sinh enzym cytochrome oxidase c a vi khu n
- Dùng n c mu i sinh lý th m v a đ t gi y th oxidase
- Dùng vòng c y vô trùng qu t khu n l c vi khu n lên đa gi y th oxidase
- Quan sát s đ i màu c a đa gi y th trong 10 giây đ n 1 phút
- Oxidase (+): đa gi y th đ i sang màu tím
- Oxidase (-): đ a gi y th không đ i màu
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
P.aeruginosa có ph n ng d ng tính v i th nghi m oxidase: đ a gi y có màu tím Do P.aeruginosa có kh n ng sinh enzyme cytochrome oxidase
Hình 5: P.aeruginosa d ng tính v i oxidase (Ngu n trích: https://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Pseudomonas_aeruginosa)
K THU T KHÁNG SINH THEO PH NG PHÁP KIRBY-BAUER
Nguyên t c
Kháng sinh được phân loại dựa trên khả năng ức chế sự phát triển của vi khuẩn Chúng có thể khuếch tán ra môi trường xung quanh và ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn nhờ vào tính nhạy cảm của chúng đối với thuốc kháng sinh Nếu không có vòng kháng, vi khuẩn sẽ kháng lại thuốc Phương pháp này đã được Ban Quốc Gia và Các Chuẩn Mực Phòng Thí Nghiệm Lâm Sàng (NCCLS) công nhận và biên soạn.
V t li u và ph ng pháp
Là những ống đa dạng có đường kính 6mm, được sử dụng để thu thập mẫu dung dịch kháng sinh và các môi trường tiêu chuẩn Các ống kháng sinh phải được bảo quản trong các ngăn chứa có nhiệt độ từ -4 độ C Khi chuẩn bị sử dụng, cần đảm bảo nhiệt độ phòng đạt yêu cầu.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU đ n 2h Tiêu chu n l a ch n kháng sinh th nghi m th c hi n theo h ng d n c a B
Y T - Ban t v n s d ng kháng sinh Các tiêu chu n chính là:
- Ch n kháng sinh đ i di n cho nhóm có cùng ph ho t đ ng
- Tùy thu c vào lo i vi khu n th nghi m
- Tùy thu c vào lo i v trí nhi m khu n
- Tùy theo sách l c và chính sách s d ng kháng sinh t ng vùng t ng đa ph ng
Th ch Mueller Hinton Agar (MHA) là môi tr ng t t nh t đ th nghi m kháng sinh đ th ng quy (đ i v i vi khu n d m c) vì các lí do sau:
- Cho k t qu có tính l p l i cao khi th nghi m kháng sinh đ v i các lo i môi tr ng
- Ít ch t c ch v i các Sulfonamide, Trimethprim và Tetracycline
- Thích h p t ng c ng cho h u h t v i các lo i vi khu n d m c
- M t s l ng l n các d li u và kinh nghi m là có t kháng sinh đ th c hi n trên môi tr ng này
- Chu n b huy n d ch vi khu n
Trên mặt thạch phân lập thuần khiết, cần ít nhất 3-5 khóm khuẩn gần nhau và tách riêng để truyền vào ng nghiêm chứa 3-5 ml nước muối sinh lý vô trùng Sau đó, mẫu được đo độ đục bằng máy đo độ đục, điều chỉnh đạt độ đục tương đương 0,5 Mc Farland Huyền dịch vi khuẩn cần được sử dụng ngay sau khi chuẩn độ đục được thực hiện.
- Tr i d ch khu n lên m t th ch:
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Trong vòng 15 phút sau khi pha huyền dịch vi khuẩn, hãy sử dụng một que gòn vô khuẩn nhúng vào huyền dịch và nhẹ nhàng ép nh để xoay que gòn lên thành ống nghiệm Thao tác này sẽ loại bỏ bớt lượng huyền dịch vi khuẩn thừa trên que gòn.
Trị vi khuẩn tụ cầu vàng trên mặt thịt MHA là một quy trình quan trọng Đầu tiên, cần cấy vi khuẩn tụ cầu vàng lên mặt thịt, sau đó xoay mặt thịt 60 độ để cấy vi khuẩn đều Tiếp tục nhúng mặt thịt vào môi trường MHA để đảm bảo điều kiện phát triển tối ưu Cuối cùng, cần để khô mặt thịt trước khi áp dụng kháng sinh lên bề mặt để đạt hiệu quả điều trị tốt nhất.
L U Ý: Tránh tr i m m c y quá dày Tuy t đ i không c y vi khu n t canh c y vi khu n qua đêm không pha loãng hay không đúng đ đ c chu n
- t đa kháng sinh lên m t th ch đã tr i vi khu n
Xác định loại kháng sinh nào đã được thử nghiệm trên một chủng vi khuẩn là rất quan trọng Khi tiến hành thử nghiệm, cần phải đảm bảo rằng các kháng sinh được đặt cách nhau một khoảng cách nhất định, cụ thể là không dưới 24 mm và cách mép đĩa Petri từ 2,5-3 cm Điều này giúp đảm bảo độ chính xác trong việc đánh giá khả năng kháng thuốc của vi khuẩn.
Kháng sinh khu ch tán ngay sau khi đa kháng sinh ch m m t th ch, vì v y không nên d i ch các đa kháng sinh sau khi đã đ t trên m t th ch
Sau khi 16-18 giờ, đếm khuẩn lạc là cần thiết Nếu mâm thí nghiệm được xử lý với khuẩn đúng cách, vi khuẩn sẽ phát triển thành các khóm mịn, kết hợp với nhau tạo thành vòng vô khuẩn đồng nhất Ngược lại, nếu vi khuẩn hình thành các khóm riêng lẻ, môi trường sẽ quá loãng và cần phải làm lại thí nghiệm Đường kính vòng vô khuẩn là một vòng tròn, không có đường kính của đa kháng sinh, hoàn toàn không thấy vi khuẩn mà chỉ thấy được bằng một thang đo.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Chu vi vòng vô khu n là một vòng mà chỉ có thể thấy bằng mắt thường, không thể nhìn thấy vi khu n m c Các khóm vi khu n m c bên trong vòng này không thể quan sát được bằng mắt thường mà chỉ có thể nhìn thấy qua kính lúp Tuy nhiên, các khóm vi khu n này cần được xác định, đánh giá và thử nghiệm kỹ lưỡng.
Bi n lu n đ ng kính vòng vô khu n d a theo tiêu chu n NCCLS và ghi nh n k t qu vi khu n nh y c m hay trung gian hay đ i kháng v i kháng sinh th nghi m
- L ng vi khu n l y quá nhi u ho c quá ít
- a môi tr ng quá khô
- Thao tác lúc c y không c n th n b nhi m khu n
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
B ng 1: B ng ký hi u các kháng sinh làm kháng sinh đ cho P.aeruginose
Cỏc đ a gi y khỏng sinh Kớ hi u N ng đ (àg)
Ceftazidime CAZ 30 Cefotaxime CTX 30 Ciprofloxacin CIP 5 Imipenem IPM 10 Nitrofurantoin FT 300
Meropenem MEM 10 Pristinamycin PT 15 Tobramycin TM 10
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
K T QU PHÂN L P NH DANH
T l nhi m P.aeruginosa t m u b nh ph m
Theo k t qu th ng kê t i khoa Vi sinh v t B nh vi n 175 t tháng 10/2013 –
4/2014 có t ng s 724 ca c y khu n d ng tính trong t ng s 1283 m u b nh ph m thu nh n đ c C c u các loài vi khu n phân l p đ c t các m u b nh ph m đ c chúng tôi th ng kê b ng sau:
B ng 2: C c u các loài vi khu n gây b nh phân l p đ c
Theo k i các vi khu nh vi n P. i m khu n d
Bi u đ 1: k t qu phân u n gây b n aeruginosa do các vi kh
CDC (trung t i các b n ùng b nh vi
T l các l n l p đ c, nh khác tron a làvi khu n hu n khác g g tâm ki m nh vi n M n thì loài n
13.9 loài vi khu t l nhi m ng t ng s m n nhi m b gây ra nhi m m soát b n
GV n gây b nh m P.aerugin m u b nh p nh c h i m khu n b nh t t c a ình kho ng t i 10,1% [
VHD: TS.BS h phân l p đ nosa không ph m nhi m góp ph n nh vi n
S V B O đ c cao l m (2 m b nh phân cùng v i c nhi m tr n trong các
2,9%) so n l p t i các lo i rùng do c tr ng
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
T l phân l p đ c P.aeruginosa t các m u b nh ph m
B ng 3: K t qu nhi m P.aeruginosa theo t ng m u b nh ph m
Trên th t các ng th
N T T NGH u đ 2: K t các b nh p t là b nh p h c t , các , ng d n ch N
HI P t qu nhi m h m xét ng h m máu ( nhi m khu ti u ho c n c ti u
2.6 m P.aerugin ghi m, t l (12,5%), ti u n huy t d nhi m t các
GV osa theo t b nh ph m p theo là m do P.aerugin c v t b ng,
0 VHD: TS.BS ng m u b n m nhi m P m d ch (2 nosa có th v t m …
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
K t qu nhi m P.aeruginosa theo gi i tính
B ng 4: T l nhi m P.aeruginosa theo gi i tính:
Theo k t qu th ng kê, p > 0.05 nên t l nhi m P.aeruginosa theo gi i tính không có s khác bi t v m t th ng kê
Theo nghiên cứu của các tác giả, tỷ lệ phân lập P.aeruginosa trên các loại bệnh phẩm nằm cao hơn so với nguyên nhân do tỉ lệ chọn thăm dò, vật thể ngẫu nhiên do lao động, sinh hoạt, tài nạn Kết quả của chúng tôi cho thấy tỷ lệ nhiễm P.aeruginosa nằm cao hơn chỉ 3,7%.
3.7 nhi m P.ae sa theo đ t nhi m P.ae
GV eruginosa t tu i eruginosa th
VHD: TS.BS theo gi i tín heo đ tu i
Bi u đ lý thuy t, k v i th i gia i t 20-60 h ng do la là r t cao i >60, s c p, kh n n nghiên c u 4,3%
Tình trạng ô nhiễm môi trường lao động đang ngày càng gia tăng, ảnh hưởng trực tiếp đến sức khỏe và chất lượng cuộc sống của người lao động Sự hiện diện của vi khuẩn P.aeruginosa trong môi trường làm việc có thể gây ra nhiều bệnh lý nghiêm trọng, đe dọa đến khả năng sinh tồn và sức đề kháng của con người Việc cải thiện điều kiện lao động và giảm thiểu ô nhiễm là điều cần thiết để bảo vệ sức khỏe cộng đồng.
GV m P.aerugino eruginosa th t l ngh ch ng bên ng i p xúc nhi các ho t đ u đi, th n n gi m, vì nhi m b n
VHD: TS.BS osa theo t n heo đ tu i h v i s c đ goài i u v i bên ng khác V ng m c các th kh n nh đ tu
S V B O ng nhóm tu kháng c a n ngoài, d
Vì v y t l c b nh lý m ng m c b i này là c
O CHÂU u i a c th g p các nhi m mãn tính nh cao cao nh t
K t qu nhi m P.aeruginosa theo đ tu i
- tu i 0.05 nên t l nhi m theo gi i tính không có s khác bi t v m t th ng kê
P.aeruginosa gây nhi m b nh cao nhóm tu i >60 (4,3%), p >0.05 nên t l nhi m theo nhóm tu i không có s khác bi t v m t th ng kê
P.aeruginosa đã kháng h u h t các kháng sinh nh Meropenem (90.48%), Ceftazidime (85.72%), Cefotaxime (85.71%) và còn nh y v i Imipenem (4.76%), Ciprofloxacin (23.81%).
NGH : 54 TÀI LI U THAM KH O
D a trên k t qu nghiên c u, chúng tôi xin có ki n ngh sau:
- Nên theo dõi tình hình gây b nh và đ kháng kháng sinh c a P.aeruginosa th ng xuyên đ có th có m t chi n l t s d ng kháng sinh h p lý và hi u qu
Việc giám sát vệ sinh khoa phòng là rất quan trọng, đặc biệt là ở khu vực xung quanh phòng vi sinh, khu vực bệnh nhân và nhà vệ sinh Cần thực hiện nghiêm ngặt các biện pháp an toàn, bao gồm việc rửa tay với dung dịch sát khuẩn, nhằm giảm thiểu sự tồn tại của vi khuẩn P.aeruginosa trong môi trường bệnh viện.
- Có nh ng bi n pháp tuyên truy n t i ng i dân v vi c nhi m khu n và vi c s d ng kháng sinh m t cách h p lý, đúng cách đúng li u
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Do thời gian làm khóa luận ngắn, kết quả của chúng tôi chưa phản ánh đầy đủ tình hình gây bệnh và kháng kháng sinh của P aeruginosa Cần theo dõi thêm để có kết quả chính xác hơn.
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
1 Tr n Th Ng c Anh (2007), S đ kháng kháng sinh c a vi khu n gây b nh th ng g p t i b nh vi n Nhi ng 2, Y h c TP HCM
2 Nguy n Thanh B o (2006), Vi khu n h c, Khoa Y, B môn vi sinh, i h c Y D c tp HCM
3 Thân c D ng (2007), Tác nhân vi khu n th ng g p trong nhi m trùng b nh vi n,
H i th o Nhi khoa Vi t Nam- an M ch
4 T Th c Linh, (2007), Kh o sát đnh l ng và s nh y c m kháng sinh c a
Pseudomonas aeruginosa trong nhi m trùng hô h p b nh vi n t i b nh vi n Ch R y t tháng 03/2007-08/2007, lu n v n c nhân – Tr ng H M Tp HCM
5 ùi ình Ngh a, Ph m Anh Tu n, Ph m Th Hu nh Giao, Nguy n H ng Tr ng, Nguy n Thiên Bình, Nguy n Th Ph ng Lan, Nguy n Anh Trí, Nguy n Ph c Huy,
(2010), Kh o sát tình hình đ kháng kháng sinh c a vi khu n t i khoa H i s c tích c c và Ch ng đ c b nh vi n h i s c c p c u Tr ng V ng
6 Tr n V n Ng c (2008), S đ kháng kháng sinh c a vi khu n gây b nh viêm ph i b nh vi n và ph ng pháp đi u tr thích h p trong giai đo n hi n nay H Y D c TP HCM
7 Nguy n V n Minh, Th c t p vi sinh c s tr ng H M Tp HCM
8 Nguy n V n Minh, D ng Nh t Linh (2008), Th c t p vi sinh gây b nh H M Tp HCM
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
9 Hu nh Ph ng Trang (2008), Nhi m trùng huy t do Pseudomonas spp và tính kháng kháng sinh c a Pseudomonas spp b nh vi n Nhi ng 2 t 1/2007- 4/2008, lu n v n c nhân – Tr ng H M Tp HCM
10 Nguy n S Minh Tuy t, V Th Châu H i, Tr ng Anh D ng, Lê Th Tuy t Nga
(2009), Kh o sát vi khu n gây nhi m khu n b nh vi n t i b nh viên Nhân dân Gia nh
11 Ph m Hùng Vân và nhóm nghiên c u MIDAS “Nghiên c u đa trung tâm v tình hình đ kháng Imepenem và Meropenem c a tr c khu n Gram (-) d m c k t qu trên
16 b nh vi n Vi t Nam” Phòng thí nghi m NK-BIOTEK và n v Vi sinh B nh viên Nguy n Tri Ph ng, i H c Y D c Tp HCM
12 WHO(2001), “WHO Global Strategy for Containment of Antimicrobial
13 CDC (2001) National Nosocomial Infection Surveillance (NNIS) system report, data summary from January 1992 June 2002, Am I infect control
14 http://glomedvn.vn/vn/san-pham.aspx?cate#&thuoc- tiem&drugs2&meropenem-500-glomed-bot-pha-tiem.html
15.http://idoc.vn/tai-lieu/giao-trinh-truc-khuan-mu-xanh.html
16.http://idoc.vn/tai-lieu/nhiem-khuan-do-pseudomonas.html
17.http://tudu.vn/vn/thong-tin-y-hoc/y-hoc-cho-moi-nguoi/y-hoc-thuong-thuc/nhiem- trung-benh-vien/
KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU
Enzymatic Digest of Animal Tissue 4 g
Công th c có th đ c đi u ch nh và / ho c b sung theo yêu c u đ đáp ng k thu t th c hi n
Công th c có th đ c đi u ch nh và / ho c b sung theo yêu c u đ đáp ng k thu t th c hi n.
