0340KHẢO SÁT TÍNH ĐÈ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA ESCHERICHIA COLI ĐƯỢC PHÂN LẬP TỪ CÁC MẪU BỆNH PHẢM MÁU VÀ NƯỚC TIỂU TẠI BỆNH VIỆN NHI ĐÔNG II

Că I M C A E.COLI

Ngu n g c E.coli

E coli, hay còn gọi là Escherichia coli, là một loại vi khuẩn phổ biến thuộc nhóm vi khuẩn, không phải là một vi khuẩn duy nhất Vi khuẩn E coli thường có mặt trong môi trường tự nhiên và trong ruột của các loài máu nóng như con người, gia súc, và động vật hoang dã, đóng vai trò quan trọng trong quá trình tiêu hóa thức ăn E coli được chia thành hai nhóm chính: nhóm vi khuẩn yếm khí sống trong môi trường ít oxy và nhóm vi khuẩn ưa khí phát triển trong môi trường có nhiều oxy, trong đó E coli chiếm đến 80% trong nhóm vi khuẩn ưa khí Vi khuẩn E coli cùng với các vi khuẩn khác trong hệ vi sinh đường ruột đóng góp vào nhiều chức năng quan trọng trong sự sống của con người.

 Ng n ch n s t n công c a các vi khu n xâm nh p vào h tiêu hóa

 Kích thích h mi n d ch c a c th

 S n xu t các ch t có l i cho c th , ví d vitamin K, biotin, folate

 Giúp chuy n hóa các ch t đ ng

E coli là loại vi khuẩn không có hại, thường sống trong hệ tiêu hóa của con người và đóng vai trò hỗ trợ sức khỏe Tuy nhiên, khi chúng xâm nhập vào các môi trường khác ngoài hệ tiêu hóa, chúng có thể gây ra bệnh.

Ví d E coli gây b nh nhi m trùng ti u, b nh viêm màng nưoầ Ngoài ra, có m t

Hình 1.1: K t qu nhu m gram E.coli

E.Coli b t màu gram âm màu đ ít loài E coli có th gây b nh do chúng đư ti p nh n các kh n ng gây b nh t nh ng vi khu n khác ó là các lo i E coli gây b nh đ ng ru t, trong đó nhóm c c k nguy hi m là nhóm E coli gây tiêu ch y ra máu (viêm đ i tràng xu t huy t), vi t t t theo ti ng Anh là EHEC (enterohemorrhagic Escherichia coli) Các ch ng EHEC- 0104 “siêu đ c” có th gây b nh tiêu ra máu d n đ n tán huy t (v h ng c u) và suy th n ch t ng i, nh v d ch đang x y ra t i Châu Âu t tháng 5 n m 2011 v a qua Nghiêm tr ng h n, nó còn ch a m t s gen kháng l i thu c kháng sinh.

I.2.ă c đi m hình thái và c u trúc

Vi khuẩn E.coli là vi khuẩn hình que, có kích thước dài từ 2 đến 3 µm Chúng di chuyển bằng lông và roi, mặc dù một số chủng có thể không di động E.coli không sinh nha bào và được phân loại là vi khuẩn gram âm.

Vi khuẩn sống trong đường tiêu hóa (ruột) có nhiều loại, trong đó một số loại gây bệnh tiêu chảy ở người Những vi khuẩn này có thể dẫn đến rối loạn máu, suy thận, thậm chí gây tử vong.

Vi khuẩn trong ruột đóng vai trò quan trọng trong quá trình tiêu hóa thức ăn, giúp hỗ trợ hệ tiêu hóa, sản xuất vitamin K và hấp thụ các chất dinh dưỡng cần thiết trong ruột già.

- Là vi khu n k khí tùy nghi, nhi t đ thích h p là 37 0 C, tuy nhiên có th t ng tr ng t 10 - 46 0 C

- M t s hóa ch t c ch s phát tri n c a E.coli nh chlorine và d n xu t, mu i m t, xanh briliant, sodium deoxycholate

- Trong môi tr ng l ng: sau 4 – 5 gi E.coli làm đ c nh môi tr ng, càng đ lâu càng đ c nhi u

- Trên môi tr ng MC, Uri Select 4: t o khóm h ng đ

- T o màu vàng/vàng (lên men đ ng glucose và lactose) trên môi tr ng KIA, có sinh h i, không sinh H2S

- ôi khi lên men đ ng saccharose, không lên men dextrin, glycerin

Trong môi trường có tryptophane, E coli sản xuất enzyme tryptophanase, giúp chuyển đổi tryptophane thành indol Sự hiện diện của indol có thể được phát hiện bằng cách sử dụng thuốc thử Kovacs, tạo ra màu đỏ đặc trưng khi phản ứng với indol.

- Ph n ng VP (Vosges Proskauer), citrate: âm tính

I.5.ăKhángănguyênăvƠăđ c t các vi khu n đ ng ru t ng i ta có th phân bi t:

- Các kháng nguyên thân ho c kháng nguyên O

- Các kháng nguyên lông ho c kháng nguyên H

- Các kháng nguyên b m t (v ho c màng b c) đ c g i là kháng nguyên K

Vi c nghiên c u các kháng nguyên khác nhau này cho phép phân chia các vi khu n thu c cùng m t loài ho c m t gi ng ra các type huy t thanh

E.coli có giáp mô (kháng nguyên K) gây ng đ c m nh h n loài không có giáp mô

Là kháng nguyên n m trong vách t bào vi khu n, b n ch t là lipopolysaccharide (LPS) bao g m:

Thành ph n protein làm cho ph c h p có tính ch t kháng nguyên

Thành ph n polysaccharide quy t đ nh tính đ c hi u c a kháng nguyên

Thành ph n lipid A ch u trách nhi m v tính đ c

Kháng nguyên O (LPS) là một yếu tố độc hại, khi tiêm vào động vật, nó kích thích các phản ứng miễn dịch, gây ra tình trạng sốt và nhiễm trùng Những phản ứng này thường liên quan đến bệnh nhân mắc bệnh truyền nhiễm và có thể dẫn đến những biến chứng nghiêm trọng.

C phản ứng xảy ra giữa kháng nguyên O và kháng thể O, dẫn đến sự hình thành phức hợp ngưng kết Kháng nguyên O khi gặp kháng thể tương ứng sẽ tạo ra hiện tượng ngưng kết, làm cho vi khuẩn ngưng kết lại với nhau và tạo thành các khối khó tan.

Kháng nguyên c a lông ch chứa các vi khuẩn di động và có bản chất là protein giống như myosin Kháng nguyên H kích thích cơ thể sản sinh kháng thể H, và khi chúng gặp nhau, sẽ xảy ra hiện tượng ngưng kết H Trong quá trình này, các vi khuẩn ngưng kết lại với nhau nhờ các lông kết dính, dẫn đến việc các hợp chất ngưng kết trở nên khó tan khi có mặt.

Các vi khu n di đ ng khi cho ti p xúc v i các kháng th H t ng ng thì chúng b b t đ ng

Tính ch t nuôi c y

- Là vi khu n k khí tùy nghi, nhi t đ thích h p là 37 0 C, tuy nhiên có th t ng tr ng t 10 - 46 0 C

- M t s hóa ch t c ch s phát tri n c a E.coli nh chlorine và d n xu t, mu i m t, xanh briliant, sodium deoxycholate

- Trong môi tr ng l ng: sau 4 – 5 gi E.coli làm đ c nh môi tr ng, càng đ lâu càng đ c nhi u

- Trên môi tr ng MC, Uri Select 4: t o khóm h ng đ

Tính ch t sinh v t hóa h c

- T o màu vàng/vàng (lên men đ ng glucose và lactose) trên môi tr ng KIA, có sinh h i, không sinh H2S

- ôi khi lên men đ ng saccharose, không lên men dextrin, glycerin

Trong môi trường có tryptophane, E.coli sản xuất enzyme tryptophanase, giúp phân giải tryptophane thành indol Sự hiện diện của indol có thể được phát hiện bằng cách sử dụng thuốc thử Kovacs, trong đó indol sẽ phản ứng và tạo ra màu đỏ đặc trưng.

- Ph n ng VP (Vosges Proskauer), citrate: âm tính.

ăKhángănguyênăvƠăđ c t

các vi khu n đ ng ru t ng i ta có th phân bi t:

- Các kháng nguyên thân ho c kháng nguyên O

- Các kháng nguyên lông ho c kháng nguyên H

- Các kháng nguyên b m t (v ho c màng b c) đ c g i là kháng nguyên K

Vi c nghiên c u các kháng nguyên khác nhau này cho phép phân chia các vi khu n thu c cùng m t loài ho c m t gi ng ra các type huy t thanh

E.coli có giáp mô (kháng nguyên K) gây ng đ c m nh h n loài không có giáp mô

Là kháng nguyên n m trong vách t bào vi khu n, b n ch t là lipopolysaccharide (LPS) bao g m:

Thành ph n protein làm cho ph c h p có tính ch t kháng nguyên

Thành ph n polysaccharide quy t đ nh tính đ c hi u c a kháng nguyên

Thành ph n lipid A ch u trách nhi m v tính đ c

Kháng nguyên O (LPS) là một yếu tố độc tố, khi tiêm vào động vật, nó kích thích các phản ứng gây viêm, sốt và nhiễm độc Những phản ứng này thường liên quan đến sự kích hoạt hệ thống miễn dịch và các biểu hiện lâm sàng đặc trưng.

C th ng i ho c đ ng v t đáp ng l i v i kháng nguyên O b ng kháng th O Khi kháng nguyên O gặp kháng th t ng ng, sẽ xảy ra phản ứng ng ng k t g i, dẫn đến hình thành ng ng k t O, là sự kết hợp giữa thân vi khuẩn và kháng th, tạo thành những hạt khó tan.

Kháng nguyên c a lông ch chứa các vi khuẩn di động và có bản chất là protein giống như myosin Kháng nguyên H kích thích cơ thể hình thành kháng thể H, và khi chúng gặp nhau, sẽ xảy ra hiện tượng ngưng kết H Trong quá trình này, các vi khuẩn ngưng kết lại với nhau nhờ các lông kết dính, dẫn đến sự hình thành các khối ngưng kết rắn, không tan trong dung dịch.

Các vi khu n di đ ng khi cho ti p xúc v i các kháng th H t ng ng thì chúng b b t đ ng

Kháng nguyên là thành phần bao quanh thân vi khuẩn, có thể quan sát được qua kính hiển vi, như kháng nguyên K của Klebsiella, hoặc là dạng màng bọc không thể nhìn thấy bằng kính hiển vi, ví dụ như kháng nguyên Vi của Salmonella typhi.

Ch năđoánăviăsinhăv t

Ch y u là ch n đoán tr c ti p phân l p vi khu n t b nh ph m

Trong ngành nuôi trồng thủy sản, việc chọn giống cá là yếu tố quan trọng quyết định thành công của việc nuôi cá Chọn giống cá chất lượng cao kết hợp với kỹ thuật nuôi trồng hiện đại sẽ giúp tăng năng suất và hiệu quả kinh tế cho người nuôi.

Phòng b nh và ch a b nh

Hi n nay ch a có vaccine đ c hi u Ch y u là phòng b nh chung mà ch y u là tôn tr ng các n i quy v v sinh

Nghiên cứu cho thấy một số chủng E Coli gây bệnh đã kháng lại nhiều loại kháng sinh phổ biến Vì vậy, việc xác định kháng sinh thích hợp trong điều trị bệnh là rất quan trọng dựa trên kết quả kháng sinh đồ.

M T S B NH DO NHI M E.COLI

Nhi m trùng ti u do E.coli gây ra

Nhiễm trùng tiểu là bệnh lý do sự xâm nhập của vi khuẩn vào đường tiết niệu, thường gặp nhất là vi khuẩn E coli Vi khuẩn E coli thuộc nhóm vi khuẩn đường tiêu hóa, có thể di chuyển từ ruột vào đường niệu, gây ra tình trạng nhiễm trùng.

II.1.2 Các tri u ch ng

Nhiễm trùng tiểu là một bệnh khá thường gặp ở trẻ em, đặc biệt là ở trẻ gái, nhưng lại dễ bị bỏ sót vì triệu chứng khá mờ nhạt Đây cũng là một trong những nguyên nhân quan trọng gây ra sự phát triển kéo dài Nếu không được điều trị thích hợp, bệnh có thể gây ra những biến chứng nguy hiểm như nhiễm trùng huyết, suy thận, và cao huyết áp Ngoài ra, trẻ có sức đề kháng kém hoặc có dị dạng đường niệu cũng dễ mắc nhiễm trùng tiểu.

Bệnh nhiễm trùng tiểu ở bé gái thường phổ biến hơn bé trai do cấu trúc giải phẫu, với niệu đạo ngắn hơn, dễ dàng tiếp xúc với vi khuẩn từ bên ngoài Việc này có thể dẫn đến viêm bàng quang và nhiễm trùng thận Ngoài ra, nhiễm trùng vùng âm hộ cũng có thể gây ra nhiễm trùng tiểu vì sự gần gũi giữa hai khu vực này Thói quen vệ sinh không đúng cách, như lau từ sau ra trước, có thể vô tình mang vi khuẩn từ hậu môn vào niệu đạo Có ba nguyên nhân chính dẫn đến nhiễm trùng tiểu ở trẻ em.

- E Coli chi m 80% trong các nhi m trùng ti u không do th thu t ni u khoa, không do b t th ng gi i ph u h c h ni u và không do s i

Các vi khuẩn gram âm như Proteus, Klebsiella và Enterobacter là nguyên nhân chính gây ra các nhiễm trùng tiểu Tuy nhiên, sự hiện diện của chúng cùng với các vi khuẩn như Serratia hoặc Pseudomonas có thể làm gia tăng độ phức tạp của nhiễm trùng Điều này dẫn đến việc tái phát nhiễm trùng tiểu trở nên phổ biến hơn.

Staphylococcus saprophyticus là một loại vi khuẩn gram dương, chiếm khoảng 10-15% các ca nhiễm trùng đường tiểu cấp tính Ngoài ra, Enterococcus cũng thường gặp trong viêm bàng quang cấp tính Cả Enterococcus và Staphylococcus aureus đều có thể gây nhiễm trùng đường tiểu, với Staphylococcus aureus còn được phân lập trong nước tiểu Nhiễm trùng đường tiểu do bacteriemia cũng là một vấn đề đáng chú ý trong y học hiện đại.

- Ngoài ra, nh ng tr b giun kim không đ c đi u tr , chính giun kim là tác nhân đem vi khu n t h u môn ra phía tr c

Cắt bít, dặm mốc nhiễm trùng tiểu là những triệu chứng có thể báo hiệu nhiều vấn đề sức khỏe nghiêm trọng Đặc biệt, viêm niệu đạo và bàng quang có thể gây ra tình trạng tiểu buốt, tiểu rắt và đau khi đi tiểu Nếu không được điều trị kịp thời, các triệu chứng này có thể dẫn đến các biến chứng nghiêm trọng hơn, như viêm thận Việc soi bàng quang và thực hiện các xét nghiệm niệu khoa sẽ giúp chẩn đoán chính xác và đưa ra phương pháp điều trị hiệu quả.

- Vi c ch n đoán nhi m trùng ti u thì ch c ch n khi xét nghi m c y n c ti u th y có vi khu n gây b nh B ch c u c ng có th hi n di n trong n c ti u.

Nhi m trùng huy tăs ăsinhădoă E.coli gây ra

Nhiễm trùng huyết sau sinh là một bệnh lý nghiêm trọng, thường xảy ra trong tháng đầu sau khi sinh, với các tác nhân gây nhiễm chủ yếu là Streptococcus nhóm B, E coli và Listeria Vi khuẩn gây nhiễm trùng huyết có thể thay đổi tùy thuộc vào tình trạng chăm sóc, thường gặp là Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella và E coli.

 Sinh non, sinh nh cân

M có s t hay nhi m trùng tr c, trong và sau sinh

Có h i s c lúc sinh ho c dùng các th thu t xâm l n

- Khám: tìm các d u hi u c a nhi m trùng

 b.1 T ng quát: bú kém, s t ≥ 38 O C ho c h thân nhi t < 36,5 O C b.2 Các c quan

• Th n kinh: L đ , hôn mê hay t ng kích thích, co gi t, gi m ph n x nguyên phát, gi m hay t ng tr ng l c c , thóp ph ng, d u th n kinh khu trú

• Tiêu hoá: nôn ói, tiêu ch y, ch ng b ng, xu t huy t tiêu hoá, gan lách to

• Hô h p: tím tái, c n ng ng th > 20 giây ho c ng ng th > 20 giây kèm nh p tim ch m, th nhanh>60 l n/phút, th co lõm

• Tim m ch: nh p tim nhanh hay ch m, h huy t áp, da xanh, l nh, n i bông

• Da niêm: vàng da, xu t huy t da niêm, r n m , m da, c ng bì b.3 Tìm d u hi u n ng c a nhi m trùng

Sử dụng sản phẩm chăm sóc da có thành phần chống viêm và kháng khuẩn để bảo vệ da khỏi nhiễm trùng Điều này đặc biệt quan trọng trong việc điều trị các tình trạng như nhiễm trùng da, viêm tĩnh mạch do tiêm chích, và nhiễm trùng tiểu do đặt sond Thời gian phục hồi màu da thường kéo dài hơn 3 giây, vì vậy cần chú ý đến việc chăm sóc và vệ sinh da đúng cách.

- C y dch c th : phân, m da, d ch kh p khi c n

- Ch c dò t y s ng là đ ng tác b t bu c đ lo i tr viêm màng não m đi kèm khi có tri u ch ng th n kinh

- Ion đ , đ ng huy t, bilirubin (n u có vàng da)

- Khí máu đ ng m ch (nhi m trùng huy t n ng, suy hô h p) ông máu toàn b(nhi m trùng huy t n ng, có bi u hi n xu t huy t).

TÌNH HÌNH NHI M E.COLI

Trên th gi i

Châu Âu đang đối mặt với một đợt bùng phát nghiêm trọng của vi khuẩn E.coli, với 470 ca nhiễm được ghi nhận, trong đó có 16 ca tử vong Thời gian gần đây, báo cáo cho thấy có thêm 15 ca nhiễm và một người đã tử vong Một số quốc gia khác như Bỉ, Hà Lan, Anh và Tây Ban Nha cũng đã xác nhận có trường hợp nhiễm E.coli.

Vào ngày 19 tháng 8 năm 2012, Nhật Bản ghi nhận ít nhất 7 người tử vong và hơn 100 người phải nhập viện do nhiễm khuẩn E.coli Đây là trường hợp nhiễm E.coli gây tử vong cao nhất tại Nhật Bản trong vòng một thập kỷ qua.

B n có 9 ca t vong c ng do nhi m E.coli

Theo báo cáo của Cơ quan Kiểm soát và Phòng chống Dịch bệnh Quốc gia Robert Koch, trong năm 2011, đã ghi nhận 3.235 ca nhiễm E.coli, trong đó có 782 ca mắc hội chứng tan huyết uremic (HUS) với triệu chứng đe dọa tính mạng, phát sinh từ vi khuẩn E.coli.

Nhiễm trùng huyết là một tình trạng nghiêm trọng, thường gặp trong lâm sàng, đặc biệt là ở các bệnh viện và cơ sở y tế Tại Hoa Kỳ, có khoảng 750.000 ca nhiễm trùng huyết mỗi năm, dẫn đến 215.000 trường hợp tử vong, chiếm 9,3% tổng số tử vong Tỷ lệ tử vong do nhiễm trùng huyết cao hơn nhiều so với các nguyên nhân khác như AIDS và ung thư vú Nguyên nhân phổ biến gây nhiễm trùng huyết thường xuất phát từ các vi khuẩn gram âm, trong đó E coli là một trong những tác nhân chính.

- X p x 8 đ n 10 tri u ng i M m c NT T m i n m Ph n th ng d m c

NT T (Nhiễm Trùng Tử Cung) xảy ra với tỷ lệ khoảng 5% ở trẻ gái và 1-2% ở trẻ trai Tỷ lệ mắc NT T ở trẻ sơ sinh dao động từ 0,1-1% và có thể tăng lên đến 10% ở trẻ sơ sinh nhẹ cân Trong giai đoạn dưới 1 tuổi, trẻ trai thường có tỷ lệ mắc cao hơn trẻ gái, nhưng sau độ tuổi này, trẻ gái thường gặp NT T nhiều hơn so với trẻ trai.

Escherichia coli (E coli) là nguyên nhân gây ra 80% các trường hợp nhiễm trùng đường tiểu Vi khuẩn này thường hiện diện trong đại tràng và có thể xâm nhập vào niệu đạo từ vùng da xung quanh hậu môn và cơ quan sinh dục Nguồn lây nhiễm có thể đến từ việc niệu đạo tiếp xúc với vi khuẩn từ hậu môn hoặc âm đạo, tạo điều kiện cho vi khuẩn dễ dàng xâm nhập vào bàng quang.

E coli là loại vi khuẩn có khả năng phóng ra nhiều độc tố, gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến tim, thận và các cơ quan nội tạng khác, dẫn đến tình trạng choáng, nhiễm trùng huyết và có thể gây tử vong Do đó, loại vi khuẩn này được xem là rất nguy hiểm.

T i Vi t Nam

- Phân l p các tác nhân gây nhi m khu n huy t t i m t b nh vi n tuy n trung ng: t l d ng tính là 8% n m 2009 Các vi khu n th ng g p là:

Pseudomonas aeruginosa(5,9%) và Acinetobacter baumannii (4,4%) M c đ kháng kháng sinh l n l t là: K pneumoniae ESBL (+) 16,2%; E coli ESBL (+)

Theo báo cáo của Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương, tỷ lệ kháng thuốc của các chủng vi khuẩn gây bệnh trong giai đoạn 2008-2009 cho thấy S aureus kháng methicillin (MRSA) chiếm 21,5%, trong khi S aureus kháng trung gian vancomycin (VISA) và S aureus kháng vancomycin (VRSA) lần lượt là 13,6% và 6,1% Các vi khuẩn gây bệnh phổ biến nhất trong cùng thời kỳ bao gồm E coli (19,3%) và K pneumoniae (15,2%).

KHÁNG SINH

ă nhăngh a

Kháng sinh là những chất có khả năng chống lại sự sống của vi khuẩn, ngăn chặn sự phát triển của chúng bằng cách tác động vào các phân tử hoặc nhiều giai đoạn chuyển hóa cần thiết cho sự sống của vi khuẩn, hoặc can thiệp vào sự cân bằng lý hóa trong môi trường sống của chúng.

Phân lo i kháng sinh

- D a vào ngu n g c c a kháng sinh, ng i ta chia kháng sinh làm 3 lo i:

- Kháng sinh t nhiên (natural antibotic) là kháng sinh do vi sinh v t s n xu t ra r i đ c tinh khi t ( VD: Peniciline, Tetracyline )

Kháng sinh bán tổng hợp là loại kháng sinh được phát triển từ nguồn gốc kháng sinh tự nhiên, nhưng đã được cải tiến bằng cách thêm một hoặc vài nhóm hóa học để tăng cường khả năng kháng khuẩn hoặc dược lý Ví dụ điển hình của kháng sinh bán tổng hợp bao gồm Ampicilline và Mynocycline.

- Kháng sinh t ng h p (antibiomimetic) là các hóa ch t đ c t ng h p hoàn toàn và có hi u qu c a kháng sinh (VD: Sulfonamide, Quinolonesầ)

- D a trên đ c đi m d c lí, các lo i thu c kháng sinh đ c phân lo i theo các h sau:

 M t s nhóm khác: sulfonamides, fusidic acid và m t s thu c ch ng lao, ch ng n m, ch ng virus

Hình 1.3:ăC ăch tácăđ ng c a kháng sinh

ăC ăch tácăđ ng

IV.3.1 c ch quá trình t ng h p vách

- Kháng sinh thu c nhóm này: Penicilline, bacitracine, vancomycine, cephalosporin, rostocetin, cycloserine

- Vách t bào có nhi m v gi hình d ng t bào đ c nguyên v n tr c áp l c th m th u cao bên trong t bào và b o v vi khu n tr c nh ng tác đ ng có h i

Thuốc kháng sinh tác động vào thụ thể PBPs (Protein liên kết penicillin) của tế bào, làm ức chế enzyme transpeptidase, một enzyme quan trọng trong quá trình tổng hợp mucopeptide Điều này dẫn đến sự ngăn cản tổng hợp peptidoglycan, thành phần thiết yếu của vách tế bào Mỗi loại thuốc kháng sinh có ái lực khác nhau đối với các thụ thể này, từ đó tạo ra tác động khác nhau trên từng loại vi khuẩn.

- Ho t hóa các enzyme t tiêu (autolytic enzymes)  ly gi i t bào môi tr ng đ ng tr ng (isotonic).

- M t thành ph n quan tr ng t o nên s b n v ng c a vách t bào là mucopeptide, peptidoglycan, murein

- Khi s t ng h p vách t bào b c ch do tác d ng kháng sinh:

 Vi khu n Gram d ng bi n thành d ng hình c u không có vách (proto-plast)

Vi khu n Gram âm có vách không hoàn ch nh (spheroplast)  t bào d v môi tr ng có tr ng l c bình th ng

IV.3.2 c ch ch căn ngăt bào

- Các kháng sinh thu c nhóm này: Colistin, polymyxin, gentamicin, amphoterricin

 Ki m soát các thành ph n bên trong màng t bào

- C ch : làm m t ch c n ng c a màng làm cho các phân t có kh i l ng l n và các ion b thoát ra ngoài

IV.3.3 c ch quá trình sinh t ng h p protein

- Kháng sinh thu c nhóm này: Chloramphenicol, macrolides (Erythromycine, oleandomycine), lincomycins (Lincomycine, clindamycine), tetracycines, aminoglycosides

IV.3.4 c ch sinh t ng h p acid nucleic

- Nhóm refamping n v i enzyme RNA polymerase ng n c n quá trình sao mã t o thành mRNA

- Nhóm quinolone c ch tác d ng c a enzyme DNA gyraselàm cho hai m ch đ n c a DNA không th du i xo n làm ng n c n quá trình nhân đôi c a DNA

- Nhóm sulfamide có c u trúc gi ng PABA (p-aminobenzonic acid) có tác d ng c nh tranh PABA và ng n c n quá trình t ng h p acid nucleotide

- NhómTrimethoprime tác đ ng vào enzyme xúc tác cho quá trình t o nhân purin làm c ch quá trình t o acid nucleic

M i ngày l i có r t nhi u lo i kháng sinh đ c các d c s bào ch ra b i vì quá trình kháng kháng sinhc a vi khu n ngày càng t ng

S đ kháng sinh

IV.4.1 Hi năt ngăđ kháng kháng sinh

Kháng kháng sinh là tình trạng khi vi khuẩn không bị tiêu diệt hoàn toàn bởi kháng sinh, dẫn đến việc một số vi khuẩn còn sống sót và phát triển khả năng kháng lại thuốc Hệ quả là kháng sinh sẽ không còn hiệu quả trong việc điều trị các bệnh nhiễm trùng do vi khuẩn này gây ra.

Vi khuẩn kháng kháng sinh là một vấn đề đáng lo ngại cho các nước trên thế giới, đặc biệt là các nước đang phát triển Tình trạng kháng kháng sinh đang trở thành mối nguy hiểm lớn đối với sức khỏe con người Vi khuẩn và gen kháng thuốc của chúng nhanh chóng lan truyền khắp nơi, không chỉ trong cộng đồng mà còn trong chăn nuôi.

Trong bối cảnh tỷ lệ kháng kháng sinh ngày càng gia tăng, việc nghiên cứu và phát triển các loại kháng sinh mới đang gặp nhiều khó khăn Vi khuẩn kháng thuốc ngày càng trở nên phổ biến, tạo ra khoảng cách giữa các loại vi khuẩn kháng thuốc và khả năng kiểm soát của con người Điều này dẫn đến việc thiếu hụt các biện pháp hiệu quả để giảm thiểu tình trạng kháng thuốc, khiến cho việc điều trị bằng kháng sinh trở nên ngày càng khó khăn.

Việt Nam là một quốc gia nhiệt đới, vì vậy bệnh nhiễm khuẩn luôn chiếm vị trí hàng đầu trong mô hình bệnh tật Khác với những năm 1990, hiện nay nhiễm khuẩn do các vi khuẩn Gram âm đang chiếm ưu thế so với các vi khuẩn Gram dương Nhiều nghiên cứu cho thấy đa số nguyên nhân nhiễm khuẩn huyết, cũng như nhiễm khuẩn, thậm chí bệnh nhân tử vong được xác định có hơn 70% là nhiễm trùng do vi khuẩn Gram âm Các vi khuẩn Gram âm gây bệnh thường gặp tại các bệnh viện bao gồm Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa và Acinetobacter baumannii.

- Liên quan đ n s khác bi t v c u trúc t bào vi khu n

- Di truy n qua trung gian nhi m s c th

- C th nh : K pneumoniae kháng t nhiên v i ampicilline, P.earuginosa kháng v i penicilline G, E.coli kháng v i erthromycine

- Do ti p xúc v i kháng sinh ho c vi khu n kháng kháng sinh

- Liên quan đ n đ t bi n nhi m s c th , thu nh n gen đ kháng t bên ngoài qua trung gian plasmid ho c transpon.

- t bi n có th t phát, không ph thu c vào kháng sinh Nh ng kháng sinh là nhân t ch n l c nh ng dòng vi khu n đ kháng.

- DNA d ng vòng n m ngoài nhi m s c th Có kh n ng sao chép đ c l p v i nhi m s c th Làm vi khu n có thêm tính tr ng do gene trên plasmid qui đ nh.

- Vi khu n kháng v i 2 hay nhi u lo i thu c khác có cùng c ch tác đ ng.

- Th ng g p nh ng thu c có thành ph n hóa h c g n gi ng nhau.

- Nh ng c ng có th th y gi a nh ng thu c không có liên h hóa h c nh Erthromycine – Lincomycine

IV.4.3.ăC ăch đ kháng kháng sinh

H kháng sinh Enzyme do vi khu n ti t ra

- Vi khu n thay đ i c u trúc đích làm gi m kh n ng g n k t c a kháng sinh nh ng v trí đích v n gi ch c n ng bình th ng.

- Vi khu n đ t bi n NST m t/ thay đ i protein đ c bi t trên ti u đ n v 30S  m t đi m g n c a aminoglycosides  đ kháng.

- Vi khu n m t/ thay đ i PBPs  đ kháng penicillins.

- Vi khu n thay đ i th th trên ti u đ n v 50S  đ kháng erythromycine.

- Ng n c n s v n chuy n kháng sinh qua vách ho c qua màng t bào

- Thay đ i kênh porin làm gi m kháng sinh đi vào t bào (E coli, S typhimurium)

- Kênh porin trên t bào ng n c n các -lactams k n c và cho phép các - lactams ái n c đi qua (Imipenem, ertapenem)

- T ng s v n chuy n c a kháng sinh ra kh i t bào

 Thayăđ iăconăđ ng bi năd ng

- kháng sulfonamides và trimethoprime: vi khu n còn c n PABA đ t ng h p acid folic  vi khu n s d ng acid folic có s n  đ kháng v i sulfonamides

- Enterococci kháng bactrim b ng s d ng đ c folic acid ch không c n t ng h p acid folic.

TỊNHăHỊNHă KHÁNG KHÁNG SINH C A E.COLI

Trên th gi i

- Theo th ng kê n m 2006 c a t ch c Y T Th Gi i (WHO), 5 vi khu n có t l kháng kháng sinh cao nh t hi n nay là Klebsiella (15,1%), E.coli (13,3%), P.aeruginosa (13,3%), Acinetobacter spp (9,9), S.aureus (9,3%)

Các vi khuẩn Gram âm như E coli, K pneumoniae, Enterobacter và các vi khuẩn không lên men như Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter là những tác nhân chính gây nhiễm khuẩn bệnh viện Những nhiễm trùng này bao gồm viêm phổi, nhiễm trùng huyết, nhiễm trùng tiểu và nhiễm trùng sau phẫu thuật vùng bụng Nhiễm trùng bệnh viện do vi khuẩn Gram âm thường có tỷ lệ tử vong cao, không chỉ do tính chất sinh bệnh phức tạp của chúng mà còn do khó khăn trong điều trị bằng kháng sinh, vì nhiều vi khuẩn này đã kháng với các loại thuốc Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng E coli, K pneumoniae và Enterobacter có thể được điều trị hiệu quả trong một số trường hợp.

Kháng sinh cephalosporin thế hệ 3 và 4 hiện nay không còn hiệu quả cao do vi khuẩn đã phát triển khả năng kháng, chủ yếu thông qua việc sản sinh men beta-lactamase phổ rộng (ESBL) Điều này khiến cho vi khuẩn kháng lại tất cả các kháng sinh cephalosporin từ thế hệ 1 đến thế hệ 4, cũng như các loại kháng sinh beta-lactam khác, ngoại trừ carbapenems và cephamycin (cefoxitin và cefotetan).

- Các nghiên c u c a SMART (Study for Monitoring Antimicrobioal Resistance

Từ năm 2002 đến 2004, nghiên cứu giám sát các xu hướng kháng kháng sinh cho thấy sự gia tăng đáng kể của các vi khuẩn mang gen ESBL trong các nhiễm khuẩn bệnh viện tại các quốc gia khu vực Châu Á-Thái Bình Dương Cụ thể, tỷ lệ vi khuẩn E Coli mang gen ESBL đã tăng từ 2% lên 25% và từ 36% lên 59%, trong khi đó K pneumonia cũng ghi nhận sự gia tăng từ 14% lên 32% và từ 38% lên 51%.

T i Vi t Nam

- T i Vi t Nam, theo th ng kê chính th c c a c a B Y t công b vào n m

Năm 2004, tỷ lệ vi khuẩn sản xuất beta-lactamase phổ rộng (ESBL) được ghi nhận là 8% đối với E.Coli, 20% đối với Enterobacter và 24% đối với K pneumonia Trong một nghiên cứu gần đây về E.Coli và K pneumonia, chúng tôi đã xác định tỷ lệ ti t ESBL của hai loài vi khuẩn này lần lượt là 35% và 42%.

- T i b nh vi n Nhi t i Tp HCM, nghiên c u trên các vi khu n nhi m khu n b nh vi n phân l p t n m 2002 đ n 2004 đư cho th y có đ n 38% E.Coli và 36% Klebsiella ti t ESBL [14]

Nghiên cứu tại Bệnh viện Việt Tiệp Hải Phòng cho thấy tỷ lệ E Coli và K pneumoniae sản xuất enzyme ESBL lần lượt là 34% và 35% trong các mẫu bệnh phẩm được xét nghiệm tại khoa vi sinh trong giai đoạn từ 06/2005 đến 07/2007.

Nghiên cứu cho thấy vi khuẩn E Coli có tỷ lệ kháng cao đối với nhiều loại kháng sinh, bao gồm Tetracycline, chloramphenicol, cefuroxime, ampicillin, amoxicillin/clavulanic acid và cotrimoxazol Đặc biệt, tỷ lệ kháng đối với các cephalosporin thế hệ 3 như Cefotaxim (72%), Ceftriaxone (74%) và Ceftazidime (39%) cũng rất đáng lo ngại Hơn nữa, có đến 41% E Coli kháng với cephalosporin thế hệ 4, cefepime Vi khuẩn này cũng kháng levofloxacin với tỷ lệ 67% Một nghiên cứu của Tiến sĩ Phạm Hùng Vân cho thấy 64% E Coli mang gen beta-lactamase phân giải (ESBLs), cho thấy tình trạng kháng thuốc đang gia tăng E Coli cũng kháng cao với hơn 40% các kháng sinh thông dụng như gentamicin Tình trạng kháng thuốc này tập trung chủ yếu ở nhóm cephalosporin thế hệ 3 và 4, với tỷ lệ kháng từ 66% đến 83%, tiếp theo là nhóm aminosid và fluoroquinolon, điều này cho thấy sự cần thiết phải theo dõi và điều chỉnh việc sử dụng kháng sinh trong bệnh viện.

Từ năm 2006, tại bệnh viện Thống Nhất, đã ghi nhận 1.884 chủng vi khuẩn phân lập từ các bệnh phẩm, với sáu loại vi khuẩn gây bệnh thường gặp nhất bao gồm: Klebsiella spp (26,91%), P aeruginosa (25,47%), E coli (15,87%), Acinetobacter spp (10,19%), S aureus (7,27%) và Enterococci (3,45%) Đáng chú ý, các vi khuẩn này có sự kháng thuốc đa dạng, tuy nhiên mức độ kháng kháng sinh của chúng vẫn thấp hơn so với các trục khuẩn gram âm không lên men.

- T i khoa vi sinh b nh vi n Nhi ng II vào n m 2007 phân l p đ c 2738 ch ng vi khu n t các m u b nh ph m Các vi khu n th ng g p nh t là: 1 E.coli (14,6%), 2 K pneumoniae (11,7%), 3 S.aureus (11,4%) 4 P aeruginosa(5,1%),

Kháng sinh đối với vi khuẩn Escherichia coli cho thấy tỷ lệ kháng cao nhất là 14.57% Trong 399 trường hợp được nghiên cứu, E.coli có tỷ lệ kháng đáng kể với nhiều loại kháng sinh, đặc biệt là với Imipenem, Cephalosporin thế hệ 4, nhóm Betalactam và nhóm Aminoglycoside, cho thấy sự cần thiết phải theo dõi và điều chỉnh phác đồ điều trị.

>75%) M c đ kháng (R) cao nh t đ i v i kháng sinh Trimethoprim/sulfamethoxazol (79,95%) ti p đ n là Cefuroxime (61.3%), Cefotaxime (51.39%), Gentamycine ( 61,31%)

- Th ng kê t i b nh vi n đa khoa t nh Qu ng Nam t 1/2010 _9/2011 cho th y m c đ đ kháng kháng sinh c a E.coli Amikacine (12.50%), Amo + A.clavulanic (28.75%), Cefotaxim (21.25), Ciprofloxaxine (27.63), A nalidixic ( 30.00%),Ampicillin ( 50.00%) [26]

Khảo sát sự đề kháng kháng sinh của E.coli tại Bệnh viện nhân dân Gia đình cho thấy trong 106 chủng E.coli nghiên cứu, tỷ lệ đề kháng với các kháng sinh như sau: Nalidixic acid (47,18%), Augmentin (31,62%), Cotrimoxazole (50,94%), Ciprofloxacin (38,86%), Pefloxacine (25,47%), Cefotaxime (38,68%), Ceftriaxone (42,45%) và Imipenem (5,66%).

Hình1 6: T l kháng c a 4 lo i vi khu năGramăơmăđ i v i vài lo i kháng sinh th h m i

- Theo th ng kê trong “K ho ch hành đ ng qu c gia v ch ng kháng thu c giai đo n 2012-2020” thu đ c s đ kháng kháng sinh c a 4 lo i vi khu n th ng g p

- Nh v y, c n có chi n l c s d ng kháng sinh thích h p đ gi i h n s đ kháng kháng sinh c a vi khu n gây b nh.

ESBLs

Vài nét v l ch s phát hi n ESBLs

Vào những năm 1980, các kháng sinh beta-lactams, đặc biệt là cephalosporins thế hệ 2, thế hệ 3 và monobactams, đã được đưa vào điều trị các vi khuẩn kháng thuốc Cephalosporins thế hệ 3 được coi là một thành công lớn trong cuộc chiến chống lại các vi khuẩn gây bệnh như TEM-1, TEM-2 và SHV-1 Tuy nhiên, sự xuất hiện của enzyme beta-lactamase đã làm giảm hiệu quả của các cephalosporins thế hệ 2 và thế hệ 3.

3 và monobactams, có ngu n g c do TEM-1, TEM-2, SHV-1, đ t bi n thay đ i m t s amino acid g i là ESBLs đư xu t hi n.

N m 1983, c đư phát hi n ch ng K.ozaenae sinh enzyme beta- lactamase phân h y cefotaxime đ c đ t tên là SHV-2, đây là tr ng h p sinh ESBLs đ u tiên đ c ghi nh n.

Việc sử dụng các kháng sinh nhóm beta-lactam, đặc biệt là cephalosporin thế hệ 3, ngày càng gia tăng, dẫn đến sự xuất hiện nhiều vi khuẩn kháng sinh, đặc biệt là vi khuẩn sản sinh enzyme ESBLs Tình trạng này làm gia tăng tỷ lệ kháng kháng sinh và đặt ra thách thức lớn cho việc điều trị bằng kháng sinh.

Men ESBLs

ESBLs (Extended-Spectrum Beta-Lactamases) là các enzyme do vi khuẩn gram âm sản sinh, có khả năng phân hủy các kháng sinh thuộc nhóm beta-lactam Sự hiện diện của các enzyme này làm giảm hiệu quả của các loại kháng sinh, gây khó khăn trong việc điều trị nhiễm trùng do vi khuẩn kháng thuốc.

ESBLs (Extended-Spectrum Beta-Lactamases) là các enzym beta-lactamase có khả năng phân hủy nhiều loại kháng sinh beta-lactam Hai loại beta-lactamase đầu tiên được phát hiện là TEM và SHV TEM được đặt theo tên một cô gái người Hy Lạp, người đã tìm thấy chủng E coli đầu tiên mang beta-lactamase này.

Men này được mã hóa qua plasmid có kích thước khoảng 80kb, trên plasmid này chứa nhiều gen kháng kháng sinh khác, tạo thành một dòng kháng nguy hiểm Các kháng sinh mà dòng kháng này kháng lại bao gồm ESBLs, aminoglycosid, fluoroquinolon, tetracyclin, chloramphenicol và sulfamethoxazol-trimethoprim.

- B n ch t ho t l c c a ESBLs chính là kh n ng th y phân các cephalosporin tr cephamycin, các penicillin tr temocyllin, th y phân các aztreonam và monobactam

VI.3 C ăch ătácăđ ngăc aăESBLs

ESBLs s th y phân liên k t amide c a beta lactam, m vòng beta lactam làm m t tác d ng di t khu n c a kháng sinh h beta lactam.

IăT NG, V T LI UăVẨăPH NGăPHỄPă

A IăT NG VÀ V T LI U NGHIÊN C U

Vi khu n E.coli phân l p t các m u b nh ph m máu và n c ti u c a các b nh nhi các khoa lâm sàng g i đ n khoa Vi Sinh b nh vi n Nhi đ ng II t tháng 11-2013 đ n h t tháng 4 -2014

Vi khu n E.coli đ c phân l p t các m u b nh ph m máu và n c ti u thu đ c t các b nh nhi

III TH IăGIANăVẨă Aă I M NGHIÊN C U

Th i gian:t tháng 11 n m 2013 đ n h t tháng 4 n m 2014 a đi m: khoa vi sinh b nh vi n Nhi ng II, Tp H Chí Minh

M u b nh ph m máu, m u n c ti u c a b nh nhi đ c ch n đoán là nhi m trùng huy t hay nhi m trùng ti u

Hình 2.1:ăMôiătr ng nuôi c y phân l p: BCP,

Nuôi c y phân l p: BCP, BA, CA, SAD

Môi tr ng xác đ nh đ nh y c m c a vi khu n v i kháng sinh: MHA

Môi tr ng đnh danh: KIA, Manitol,

Citrate, ADH, LDC, ODC, Ure

Môi trường CA là môi trường giàu chất dinh dưỡng, thường được sử dụng để phân lập vi khuẩn như Haemophilus, S pneumoniae và các vi khuẩn khó phát triển khác Đây là môi trường sinh trưởng có chứa máu cừu, được bổ sung với các yếu tố như nicotinamid-adenin dinucleotic Môi trường được bảo quản ở nhiệt độ 4°C, trong khi đó, môi trường được ủ ở 35°C trong khí trường có 5% CO2, thời gian ủ từ 18-24 giờ, sau đó tiến hành quan sát sự phát triển của vi sinh vật.

Để chuẩn bị môi trường nuôi cấy, hòa tan 41g bột môi trường trong 1 lít nước cất, sau đó đun sôi ở 100°C trong 2-5 phút Tiếp theo, chuyển dung dịch vào bình chịu áp suất autoclave ở 121°C trong 15 phút Sau khi nguội xuống 45°C, thêm 10g máu cừu vào và phân phối vào đĩa petri.

V.1.2.ăMôiătr ng blood agar base (BA)

Môi trường thạch máu (Blood Agar) là môi trường thạch nguyện dùng để nuôi cấy các vi khuẩn không khó nuôi Môi trường này chủ yếu tập trung vào hai nhóm vi khuẩn chính là streptococci và staphylococci, đồng thời xem xét khả năng tiêu huyết của chúng Môi trường được pha chế từ triptic soy agar và được bổ sung thêm 5 – 10% máu tươi, bao gồm cả máu người, giúp phá vỡ sợi fibrin Sự kết hợp này không chỉ cung cấp chất dinh dưỡng cho vi khuẩn phát triển mà còn cho phép phát hiện tính tan máu của vi khuẩn.

V.1.3.ăMôiătr ng Bromocresol purple (BCP)

Môi trường BCP là môi trường dinh dưỡng đặc biệt, được thiết kế để phân lập các vi khuẩn Gram âm, bao gồm cả bacilli và cocci Môi trường này chứa thành phần chính là lactose, giúp xác định khả năng lên men của vi khuẩn.

N u có lên men thì ch y u là thu c h vi khu n đ ng ru t nh Enterobacter,

34.5 g b t môi tr ng +1 lít n c c t đun sôi hòa tan 100 0 C trong 2-5 phút ,sau đó cho vào bình c u s ch h p autoclave 121 0 C trong 15 phút Sau đó đ ngu i đ n

V.1.4.ăMôiătr ng Sabouraund agar (SAD)

Môi tr ng Sabouraund là m t môi tr ng có đ y đ ch t dinh d ng cho n m phát tri n, đây là m t môi tr ng dùng đ phân l p và nuôi c y tìm n m

 Thành ph n môi tr ng (g/l)

 Cách pha môi tr ng

42.5 g+1 lít n c c t, đem h n h p đun sôi hòa tan 100 0 C t 2-5 phút ,phân ph i vào tube (5ml/tube), h p autoclave 121 0 C trong 15 phút ,đ ngu i s d ng

V.2.1.ăMôiătr ng KIA (KLigler Iron Agar)

Môi trường KIA được sử dụng để nuôi cấy vi khuẩn Gram âm lên men đường glucose, đây là đặc điểm cơ bản trong phân loại các vi khuẩn Gram âm Môi trường này cũng có khả năng lên men đường lactose, sinh ra trong quá trình lên men carbohydrate và tạo ra H2S Khi cấy vi sinh vật vào môi trường này, có ba trạng thái xảy ra.

 Ch s d ng đ ng glucose: acid (màu vàng) ph n đ ng và ki m (màu đ ) ph n nghiêng c a môi tr ng

 S d ng c glucose và lactose: acid (màu vàng) ph n đ ng và acid (màu vàng) ph n nghiêng c a môi tr ng

 Không s d ng glucose, lactose: ki m (màu đ ) ph n đ ng và ki m (màu đ ) ph n nghiêng môi tr ng Vi sinh v t bi n d ng peptone đ thu l y n ng l ng v t ch t cho s t ng tr ng

 Kh n ng sinh H2S: do trong môi tr ng có sodium thiosulfat, vi sinh v t kh sulfat có th kh ch t này, nh có enzyme thiosulfat reductase đ gi i phóng H 2 S,

H 2 S s ph n ng v i ion Fe 2+ c a ch th ferric ammonium citrate t o k t t a màu đen FeS.

 N u có s lên men đ ng t o s n ph m khí, thì s k t t thành b t khí trong ng nghi m, môi tr ng b chia c t ho c đ y môi tr ng lên kh i đáy ng

 Thành ph n môi tr ng(g/l)

 Cách pha môi tr ng

Để tiến hành thí nghiệm, chuẩn bị 53,5g bột môi trường và hòa tan trong 1 lít nước cất Đun sôi hỗn hợp ở nhiệt độ 1000C trong khoảng thời gian 2-5 phút Sau đó, tiến hành phân lập vào 100 ống nghiệm, mỗi ống khoảng 5ml Tiếp theo, thực hiện khử trùng trong thiết bị autoclave ở 1210C trong 15 phút, rồi đem ra nguội ở nhiệt độ 200C.

Thí nghiệm manitol cho thấy vi khuẩn sử dụng đường này trong môi trường lên men, dẫn đến sự sản sinh acid Acid được tạo ra sẽ làm thay đổi màu phenol red từ đỏ sang vàng.

Thí nghiệm di động cho thấy vi khuẩn di động có cấu trúc protein gắn liền với tiêm mao, bao gồm nhiều vi khuẩn hình que và một số vi khuẩn hình cầu Khả năng di động của vi khuẩn có thể quan sát được khi chúng di chuyển vào bên trong môi trường thạch mềm.

 Cách pha môi tr ng

 22g b t môi tr ng +1 lít n c c t đun sôi h n h p cho đ n khi hóa tan 100 0 C ,ph n ph i vào tube h p autoclave 121 0 C trong 15 phút đ ngu i s d ng

V.2.3.ăMôiătr ng Citrate Simmons Agar

Vi sinh vật có khả năng sử dụng citrate làm nguồn carbon nhờ enzyme citrate permease, khi đó giải phóng ion Na+ vào môi trường, làm tăng pH Đồng thời, vi sinh vật cũng có khả năng sử dụng muối amoni vô cơ NH4H2PO4 để tạo ra nitơ dưới dạng NH3, góp phần kiềm hóa môi trường Sự thay đổi pH này được nhận biết thông qua sự biến đổi màu sắc của chỉ thị bromothymol blue.

 24,2 g b t môi tr ng +1 lít n c c t đun sôi h n h p cho đ n khi hóa tan 100 0 C ,ph n ph i vào tube (kho ng 3ml/tube)h p autoclave 121 0 C trong 15 phút đ ngu i s d ng

V.2.4.ăMôiătr ng ADH (L_ Agarinine monohydro chloride)

Tìm kiếm enzyme decarboxylase từ vi khuẩn lên men sử dụng glucose sẽ tạo ra môi trường acid và chuyển màu vàng Nếu vi khuẩn có khả năng sản xuất enzyme phân hủy amino acid và các amine kiềm, môi trường sẽ chuyển sang màu tím, cho thấy quá trình kiềm hóa diễn ra.

Môi trường ADH được sử dụng để kiểm tra khả năng lên men của các vi sinh vật, với L-arginine là nguồn carbon duy nhất Hai loài vi khuẩn chính được phân biệt trong môi trường này là Enterobacter và Salmonella.

 5g Nacl +3 g Extrait de levure +1g glucose +5 g ADH +1 lít n c c t sau đó cho thêm 12 gi t bromo cresol(pha BC 1,6g trong 100ml /Alcool0.ch nh PH=7 b ng

NaOH ,ch nh b ng gi y quì ,có PH=7 thì nh thêm vài gi t BC đ đnh màu tím chu n ,phân ph i vào tube 9khoangr 4ml/tube),h p autoclave 121 0 C trong 15 phút

V.2.5.ăăMôiătr ng LDC(L_ Lysine monohydro chloride)

Môi trường LDC được cấu thành từ môi trường ADH, trong đó có sự phát triển của các chủng vi sinh vật có khả năng sử dụng L-lysin như nguồn carbon duy nhất Hai loài vi sinh vật chủ yếu được phân biệt trong môi trường này là Enterobacter và Salmonella.

IăT NG VÀ V T LI U NGHIÊN C U

IăT NG NGHIÊN C U

Vi khu n E.coli phân l p t các m u b nh ph m máu và n c ti u c a các b nh nhi các khoa lâm sàng g i đ n khoa Vi Sinh b nh vi n Nhi đ ng II t tháng 11-2013 đ n h t tháng 4 -2014.

VI KHU N NGHIÊN C U

Vi khu n E.coli đ c phân l p t các m u b nh ph m máu và n c ti u thu đ c t các b nh nhi.

TH IăGIANăVẨă Aă I M NGHIÊN C U

Th i gian:t tháng 11 n m 2013 đ n h t tháng 4 n m 2014 a đi m: khoa vi sinh b nh vi n Nhi ng II, Tp H Chí Minh.

B NH PH M

M u b nh ph m máu, m u n c ti u c a b nh nhi đ c ch n đoán là nhi m trùng huy t hay nhi m trùng ti u

Hình 2.1:ăMôiătr ng nuôi c y phân l p: BCP,

MỌIăTR NG

Nuôi c y phân l p: BCP, BA, CA, SAD

Môi tr ng xác đ nh đ nh y c m c a vi khu n v i kháng sinh: MHA

Môi tr ng đnh danh: KIA, Manitol,

Citrate, ADH, LDC, ODC, Ure

Môi trường CA là môi trường giàu chất dinh dưỡng, thường được sử dụng để phân lập vi khuẩn như Haemophilus và S.pneumoniae, cùng các vi khuẩn khó phát triển khác Đây là môi trường sinh trưởng đặc biệt, trong đó máu cừu được bổ sung vào môi trường cơ bản dưới điều kiện nhiệt độ 37 độ C, giúp kích thích sự phát triển của vi khuẩn Môi trường này được ủ ở 40°C, trong khi môi trường được duy trì ở nhiệt độ 35°C trong khí trường có 5% CO2 trong khoảng thời gian 18-24 giờ, sau đó tiến hành quan sát sự phát triển của vi sinh vật.

Để chuẩn bị môi trường nuôi cấy, hòa tan 41g bột môi trường trong 1 lít nước, đun sôi ở 100°C trong 2-5 phút Tiếp theo, cho dung dịch vào bình chịu áp suất và tiệt trùng ở 121°C trong 15 phút Sau đó, làm nguội đến 45°C và thêm 10g máu cừu vào, rồi phân phối dung dịch ra đĩa petri.

V.1.2.ăMôiătr ng blood agar base (BA)

Môi trường thạch máu (Blood Agar) là môi trường nuôi cấy vi khuẩn không khó tính, chủ yếu dành cho hai nhóm vi khuẩn chính là streptococci và staphylococci, đồng thời giúp quan sát khả năng tiêu huyết của chúng Môi trường này được pha chế từ triptic soy agar và được bổ sung thêm 5 – 10% máu tươi, thường là máu người để đảm bảo dinh dưỡng cho vi khuẩn phát triển Sự kết hợp của máu không chỉ cung cấp chất dinh dưỡng cần thiết mà còn cho phép phát hiện tính tan máu của vi khuẩn.

V.1.3.ăMôiătr ng Bromocresol purple (BCP)

Môi trường BCP là môi trường dinh dưỡng đặc biệt, được thiết kế để phân lập các vi khuẩn thuộc nhóm bacilli và cocci, với khả năng phát hiện mốc độc Môi trường này chứa thành phần chính là lactose, giúp theo dõi quá trình lên men của vi khuẩn.

N u có lên men thì ch y u là thu c h vi khu n đ ng ru t nh Enterobacter,

34.5 g b t môi tr ng +1 lít n c c t đun sôi hòa tan 100 0 C trong 2-5 phút ,sau đó cho vào bình c u s ch h p autoclave 121 0 C trong 15 phút Sau đó đ ngu i đ n

V.1.4.ăMôiătr ng Sabouraund agar (SAD)

Môi tr ng Sabouraund là m t môi tr ng có đ y đ ch t dinh d ng cho n m phát tri n, đây là m t môi tr ng dùng đ phân l p và nuôi c y tìm n m

 Thành ph n môi tr ng (g/l)

 Cách pha môi tr ng

42.5 g+1 lít n c c t, đem h n h p đun sôi hòa tan 100 0 C t 2-5 phút ,phân ph i vào tube (5ml/tube), h p autoclave 121 0 C trong 15 phút ,đ ngu i s d ng

V.2.1.ăMôiătr ng KIA (KLigler Iron Agar)

Môi trường KIA được sử dụng để nuôi cấy trực tiếp cho các vi khuẩn Gram âm lên men đường glucose, đây là đặc điểm cơ bản trong phân loại các vi khuẩn Gram âm Môi trường này cũng có khả năng lên men lactose, sinh khí H2S trong quá trình lên men carbohydrate Khi cấy vi sinh vật vào môi trường này, có ba trạng thái xảy ra.

 Ch s d ng đ ng glucose: acid (màu vàng) ph n đ ng và ki m (màu đ ) ph n nghiêng c a môi tr ng

 S d ng c glucose và lactose: acid (màu vàng) ph n đ ng và acid (màu vàng) ph n nghiêng c a môi tr ng

 Không s d ng glucose, lactose: ki m (màu đ ) ph n đ ng và ki m (màu đ ) ph n nghiêng môi tr ng Vi sinh v t bi n d ng peptone đ thu l y n ng l ng v t ch t cho s t ng tr ng

 Kh n ng sinh H2S: do trong môi tr ng có sodium thiosulfat, vi sinh v t kh sulfat có th kh ch t này, nh có enzyme thiosulfat reductase đ gi i phóng H 2 S,

H 2 S s ph n ng v i ion Fe 2+ c a ch th ferric ammonium citrate t o k t t a màu đen FeS.

 N u có s lên men đ ng t o s n ph m khí, thì s k t t thành b t khí trong ng nghi m, môi tr ng b chia c t ho c đ y môi tr ng lên kh i đáy ng

 Thành ph n môi tr ng(g/l)

 Cách pha môi tr ng

Để tiến hành phân lập mẫu, hòa tan 53,5g bột môi trường trong 1 lít nước cất, đun sôi hỗn hợp ở nhiệt độ 1000C trong khoảng 2-5 phút Sau đó, tiến hành phân lập vào 100 ống nghiệm (mỗi ống khoảng 5ml) Tiếp theo, khử trùng hỗn hợp trong thiết bị autoclave ở 1210C trong 15 phút, rồi để nguội và bảo quản ở 20C.

Thí nghiệm manitol cho thấy vi khuẩn sử dụng đường này trong môi trường lên men, dẫn đến sự sản sinh acid Acid được tạo ra sẽ làm thay đổi màu phenol red từ đỏ sang vàng.

Thí nghiệm di động cho thấy vi khuẩn di động có cấu trúc protein gợi ý là tiêm mao, với nhiều vi khuẩn hình que và một số vi khuẩn hình cầu Khả năng di động của vi khuẩn có thể quan sát được thông qua sự tương tác và di chuyển của chúng vào bên trong môi trường chất lỏng.

 Cách pha môi tr ng

 22g b t môi tr ng +1 lít n c c t đun sôi h n h p cho đ n khi hóa tan 100 0 C ,ph n ph i vào tube h p autoclave 121 0 C trong 15 phút đ ngu i s d ng

V.2.3.ăMôiătr ng Citrate Simmons Agar

Vi sinh vật có khả năng sử dụng citrate làm nguồn carbon nhờ enzyme citrate permease, khi đó chúng giải phóng ion Na+ vào môi trường, dẫn đến sự tăng pH Đồng thời, vi sinh vật cũng có khả năng sử dụng muối amoni vô cơ NH4H2PO4 để tạo ra nitơ dưới dạng NH3, góp phần kiềm hóa môi trường và làm thay đổi pH, được nhận biết qua sự biến đổi màu sắc của chỉ thị bromothymol blue.

 24,2 g b t môi tr ng +1 lít n c c t đun sôi h n h p cho đ n khi hóa tan 100 0 C ,ph n ph i vào tube (kho ng 3ml/tube)h p autoclave 121 0 C trong 15 phút đ ngu i s d ng

V.2.4.ăMôiătr ng ADH (L_ Agarinine monohydro chloride)

Tìm kiếm enzyme decarboxylase từ vi khuẩn có khả năng phân giải các amino acid là ưu tiên hàng đầu Vi khuẩn lên men sử dụng glucose sẽ acid hóa môi trường, dẫn đến sự chuyển màu vàng Nếu vi khuẩn có khả năng sản xuất enzyme phân giải amino acid và các amin kiềm, môi trường sẽ chuyển sang màu tím, cho thấy quá trình khử carboxyl hóa đã diễn ra.

Môi trường ADH được sử dụng để kiểm tra sự lên men của các vi sinh vật, với L-arginine là nguồn carbon duy nhất Hai loài vi sinh vật chủ yếu được phân biệt trong môi trường này là Enterobacter và Salmonella.

 5g Nacl +3 g Extrait de levure +1g glucose +5 g ADH +1 lít n c c t sau đó cho thêm 12 gi t bromo cresol(pha BC 1,6g trong 100ml /Alcool0.ch nh PH=7 b ng

NaOH ,ch nh b ng gi y quì ,có PH=7 thì nh thêm vài gi t BC đ đnh màu tím chu n ,phân ph i vào tube 9khoangr 4ml/tube),h p autoclave 121 0 C trong 15 phút

V.2.5.ăăMôiătr ng LDC(L_ Lysine monohydro chloride)

Môi trường LDC chứa các thành phần môi trường ADH và được sử dụng để nuôi cấy vi sinh vật, đặc biệt là các chủng có khả năng sử dụng L-lysin như nguồn carbon duy nhất Trong đó, hai loài vi khuẩn chủ yếu được phân biệt là Enterobacter và Salmonella.

Chuẩn bị dung dịch với 5g NaCl, 3g chiết xuất men, 1g glucose, 5g LDC và 1 lít nước cất Sau đó, thêm 12 giọt bromo cresol (pha 1,6g BC trong 100ml ethanol 0,1%, điều chỉnh pH=7 bằng NaOH, kiểm tra pH bằng giấy quỳ; nếu pH=7 thì thêm vài giọt BC để đạt màu tím chuẩn) Phân phối vào ống nghiệm 4ml mỗi ống và hấp tiệt trùng ở 121°C trong 15 phút.

Môi trường ODC được sử dụng để quan sát quá trình lên men của các chủng vi sinh vật, trong đó L-ornithine đóng vai trò là nguồn carbon duy nhất Nghiên cứu này tập trung vào hai loài vi khuẩn chủ yếu là Enterobacter và Salmonella.

5g Nacl +3 g Extra de levure +1g glucose +5 g ODC +1 lít n c c t sau đó cho thêm

Để chuẩn bị dung dịch Bromo Cresol (pha BC 1,6g trong 100ml, pH=7), cần thêm NaOH để điều chỉnh pH Khi dung dịch có pH=7, thêm vài giọt BC để tạo màu tím chuẩn Sau đó, phân phối vào các ống nghiệm với thể tích 4ml mỗi ống và tiến hành hấp tiệt trùng ở nhiệt độ 121°C trong 15 phút.

V.2.7 Môi tr ng Ure_ Indol

SINH PH M

 Hóa ch t: dùng đ pha môi tr ng, n c c t, n c mu i sinh lý

- S d ng đ a kháng sinh c a hãng Biorad

- Các đ a kháng sinh đ t cho Escherichia coli:

THI T B

TRANG THI T B KHÁC

Gi y lau v t kính hi n vi

G ng tay, kh u trang, nón, áo choàng, dung d ch kh khu n

Phân lập và đánh giá các vi khuẩn Escherichia coli trong môi trường chuyên biệt là một quy trình quan trọng Dựa vào khả năng sinh trưởng và các phản ứng sinh hóa đặc trưng, chúng ta có thể xác định chính xác các chủng vi khuẩn này.

Xác đnh m c đ kháng kháng sinh c a các vi khu n phân l p đ c b ng ph ng pháp Kirby-Bauer theo h ng d n c a NCCLS – 2006 (Hoa k )

Môi tr ng, sinh ph m và đ a kháng sinh c a hãng Bio-Rad

Thu th p và nh p d li u vào s và Excel

K t qu nhu m gram, c y c và nh n d ng khóm trùng nh danh b ng test sinh hóa, làm kháng sinh đ môi tr ng đư c y CA,BA 35- 37 0 C,5% CO2/18- 24h

SAD: 1 ng t 0 phòng,1 ng t m c phân tích k t qu Hoàn t t báo cáo Tr k t qu cho lâm sàng

Báo k t qu s kh i cho lâm sàng hình d ng, màu gram, cách s p x p

C u khu n đôi chu i đ t Optochin, Bactritracin trên BA

Tr c khu n nh Gram âm vach 1 đ ng S.aureus trên BA

Nhu m gram th y n m thì c y trên SAD

Soi t i Nhu m gram C y trên môi tr ng CA, BA, BCP

Qui trình nuôi c y phân l p và xác vi khu n trong m u máu

C y phân l p đ nh l ng trên BA và URI

BA 35- 37 0 C,5% CO2/18-24h URI 35- 37 0 C/18-24h. nh danh b ng test sinh hóa, làm kháng sinh đ c phân tích k t qu Hoàn thành báo cáo Tr k t qu cho lâm sàng

Có Vi khu n nhi u h n 2 lo i hình th vi khu n rõ ràng

K t q a nhu m Gram, c y c và nh n d ng khóm trùng Âm tính Ngo i nhi m

Qui trình nuôi c y phân l p và xác vi khu n trong m uăn c ti u

- Càng giai đo n s m c a b nh càng t t Ngh a là ti n hành l y m u ngay sau khi có chu n đoán lâm sàng.

- Nên l y m u tr c khi b nh nhân dùng kháng sinh h th ng

- i v i m u máu t t nh t là khi b nh nhân đang n l nh ho c l nh run tr c khi s t ho c đang c n s t

- Chai c y máu đ nhi t đ phòng 15’ tr c khi b m máu vào Sát trùng chai b ng c n 70% Ch n gòn t m c n 70% lên trên

- Ch n t nh m ch rõ nh t ch n dây garo phía trên cách ch đ nh l y máu 5cm

Để sát khuẩn vùng da trước khi tiến hành thủ thuật, bạn nên sử dụng bông gòn nhúng vào dung dịch sát khuẩn (như dung dịch Dpovidine 3.5% hoặc dung dịch Chlohexine) Lau theo vòng tròn đồng tâm từ trong ra ngoài cho đến khi dung dịch khô Sau đó, tiếp tục lau sạch bằng bông gòn thấm cồn 70%.

- Làm l i l n sát khu n nh trên, đ i cho dd sát khu n khô (n u đ t b m t da s là nguyên nhân gây ngo i nhi m)

- L u Ủ: sau khi sát khu n n i l y máu, không l y ngón tay s n n tìm m ch,vì nh v y s làm vùng da l y máu s b nhi m khu n tr l i

- Tiêm kim tiêm vào t nh m ch, kéo lui nòng nh nhàng và l y đ l ng máu c n thi t , tránh t o b t khí

- Tháo dây garo, rút kim tiêm ra, ép nh bong thâm c n 70% vào ch tiêm B gòn trên chai c y máu ch khô

- B m ngay m u máu vào chai c y máu, thao tác b m nh nhàng tránh tán huy t

Kh trùng l i nút đ y chai c y máu sau khi l y tiêm ra

- Cho b nh nhân v sinh tay, quy đ u và vùng sinh d c

- Khi l y kéo bao quy đ u lên n u d ng v t b ph kín

- Cho b nh nhân đi ti u, b đi m t ít n c ti u đ u dòng, sau đó nh n l i Dùng l vô khu n h ng n c ti u vào l kho ng 3 –5ml, sau đó cho b nh nhân ti u b hoàn toàn

- Ng i l y m u nên r a tay b ng xà phòng, lau khô b ng kh n s ch

- R a b ph n sinh d c ngoài b ng xà phòng th t s ch, th m khô b ng g c vô khu n, gi cho các môi c a âm đ o tách bi t Dùng l vô khu n l y n c ti u gi ng cách c a bé trai

- M u máu: yêu c u 2_5ml đ i v i tr em, 1_2 ml đ i v i tr s sinh.Cho vào trong chai c y máu Bactec

- i v i m u máu: máu s đ c l y vào chai c y máu Bactec

- i v i n c ti u: n c ti u s đ c l y vào l vô trùng

Lấy mẫu bệnh phẩm càng sớm càng tốt ngay sau khi có chuẩn đoán lâm sàng và trước khi sử dụng kháng sinh Nếu vì lý do nào đó không thể khảo sát ngay, có thể bảo quản mẫu bệnh phẩm trong tủ lạnh ở nhiệt độ 2-3 độ C, nhưng không quá 2 giờ sau khi lấy mẫu.

II K THU T NH NăVẨă NGăKệăM U [9,24,25]

- B nh ph m là m u máu đ c ch a trong chai c y máu Bactec đ c g i t các khoa lâm sàng t i b nh vi n nhi ng II t tháng 11/2013 đ n tháng 4/2014

- Thông tin v đ tu i, gi i tính đ c ghi vào phi u xét nghi m Có s liên h ch t ch gi a khoa đi u tr và phòng vi sinh đ ghi nh n thông tin đ y đ và chính xác

Các chai BACTEC được sử dụng trong máy cấy máu BACTEC sẽ tự động kiểm tra mẫu Thiết bị áp dụng phương pháp theo dõi huỳnh quang, với môi trường được thiết kế để chứa tối đa 5 ml máu Thể tích mẫu càng lớn thì khả năng phát hiện càng cao và thời gian phát hiện cũng nhanh hơn cho mỗi chai.

Máy có gắn cảm biến nhạy cảm với nồng độ CO2 do vi sinh vật sinh ra trong quá trình trao đổi chất và lượng O2 tiêu thụ do sự sinh trưởng của vi sinh vật Sử dụng tín hiệu huỳnh quang, cảm biến phát ra tín hiệu mỗi 10 phút, cung cấp thông tin về nồng độ CO2 và O2 trong chai máu Kết quả đo đạc cho thấy sự hiện diện của vi khuẩn trong chai máu.

- B nh ph m là: n c ti u đ c g i t các khoa lâm sàng t i b nh vi n nhi ng II t tháng 11/2013 đ n tháng 4/2014

- Thông tin v đ tu i, gi i tính đ c ghi vào phi u xét nghi m Có s liên h ch t ch gi a khoa đi u tr và phòng vi sinh đ ghi nh n thông tin đ y đ và chính xác

III K THU T KH OăSỄTă Că I M M U [9,24,25]

- Khi máy c y máu báo có m u ch ng d ng l y các chai d ng ra kh i máy c y.(ki m tra mã code trên chai máu và phi u xét nghi m)

- Sát khu n đ u chai máu BACTEC b ng c n, đ khô L c đ u h đ u chai trên ng n l a đèn gas

- Dùng ng chích vô trùng l y 1 l ng máu nh : 1 gi t lên lam s ch

- Ti n hành soi tr c ti p v t kính 10x và 40x đ xem hình d ng vi khu n, tính di đ ng c a vi khu n và xem có n m hay không

III.1.2 Kh o sát vi th

- Khi máy c y máu báo có m u ch ng d ng l y các chai d ng ra kh i máy c y.(ki m tra mã code trên chai máu và phi u xét nghi m)

- Sát khu n đ u chai máu BACTEC b ng c n, đ khô L c đ u h đ u chai trên ng n l a đèn gas

- Dùng ng chích vô trùng l y 1 l ng máu nh : 1 gi t lên lam s ch, tr i thành m t ph t kho ng 2_3 cm, đ khô t nhiê,c đ nh b ng nhi t

- Ti n hành nhu m gram đ xác đnh l i hình d ng vi khu n cách b t màu gram âm hay gram d ng

- L c đ u n c ti u dùng Pipette paster l y l ng ít n c ti u nh 1 gi t 0,05ml, không dàn đ u, đ khô t nhiên, c đnh b ng nhi t

- Ti n hành nhu m gram đ xem s hi n di n c a vi khu n, n m và b ch c u đa nhân

- c k t qu nhu m soi ghi nh n s l ng b ch c u và vi khu n đư soi:

- N u có < 1 b ch c u/ vi tr ng: k t lu n không nhi m khu n ni u

- N u có 1_3 b ch c u/ vi tr ng: k t lu n nghi ng nhi m khu n ni u

- N u > ho c = 3 b ch c u/vi tr ng : k t lu n nhi m khu n ni u

- N u > ho c = 1 vi khu n/ vi tr ng: k t lu n nhi m vi khu n ni u( >ho c 5 vi khu n/ ml

- N u ho c = 3 b ch c u/vi tr ng : k t lu n nhi m khu n ni u

- N u > ho c = 1 vi khu n/ vi tr ng: k t lu n nhi m vi khu n ni u( >ho c 5 vi khu n/ ml

- N u qua đó ta th y t l kháng CXM t ng qua các n m T l kháng FOX n m 2012 (28.9%), n m 2013(27.6%) => t l kháng FOX không có s thay đ i

Tỷ lệ kháng của E coli đối với các kháng sinh nhóm cephalosporins thế hệ III đang có xu hướng tăng cao, đặc biệt là với Cefotaxime (CTX) đạt 86.2% và Ceftazidime (CAZ) đạt 48.3% So sánh với các năm 2007, 2012 và 2013, tỷ lệ kháng CTX lần lượt là 51.4%, 73.4% và 78.9%, trong khi tỷ lệ kháng CAZ là 25.9%, 57.5% và 44.58% Sự gia tăng này cho thấy mối lo ngại về khả năng kháng thuốc của E coli trong thời gian qua.

Cefepime FEP là một loại kháng sinh thuộc nhóm cephalosporins thế hệ IV Theo khảo sát, tỷ lệ E.coli kháng Cefepime hiện là 31.0%, tăng so với 28.1% vào năm 2007 và 22.8% vào năm 2013, cho thấy sự gia tăng đáng kể trong tính kháng của vi khuẩn này đối với kháng sinh.

Sự kháng thuốc ngày càng gia tăng đối với các kháng sinh thuộc nhóm cephalosporins và β-lactams là do E.coli có khả năng sản xuất enzyme ESBL, dẫn đến tình trạng kháng thuốc cao hơn.

 T l kháng đ i v i các lo i kháng sinh -lactams/ c ch -lactamase:

- E.coli kháng y u Ampi-sul SAM (34.5%) tuy nhiên l i kháng m nh v i Amoxcillin AMC(72.4%)

- Ticar TTC (41.4%) Pipe-tazoTZP (35.3%) t l kháng này t ng nhanh qua các n m i u đó đ c ch ng minh, trong n m 2007 t l kháng v i TTC (6.78%) TZP (3.3%), n m 2012 t l kháng TTC (40.2% ) TZP (12.6% ); n m 2013 t l kháng TTC ( 39.7%) TZP ( 20.3%)

T l kháng c a các lo i kháng sinh -lactams/ c ch -lactamase ngày càng t ng qua các n m.

 i v i các kháng sinh nhóm Carbapenem thu c h -lactams: t l kháng

ImipenemIMI (34.5%) Mero MER (13.8%) So sánh v i n m 2007, t l kháng IMI (0.52%), n m 2012 t l kháng IMI(1.52) MER( 1.51), n m 2013 t l kháng IMI(11% ) MER(12% ) i u đó ch ng minh t l kháng kháng sinh IMI t ng m nh

Tình trạng kháng kháng sinh của nhóm carbapenem, thuộc họ β-lactams, đang ngày càng gia tăng Kháng sinh carbapenem có hiệu quả đối với cả vi khuẩn Gram âm, Gram dương, và một số vi khuẩn kỵ khí, nhưng lại gặp khó khăn trong việc đối phó với các vi khuẩn sản sinh carbapenemase Hiện nay, sự xuất hiện của men này ngày càng phổ biến, làm tăng thêm thách thức trong điều trị nhiễm khuẩn.

 i v i các kháng sinh nhóm Aminoglycosides thu c h -lactams:

- T l kháng Genta CN (48.3%) So sánh v i n m 2007 (47.5.%) n m 2012 t l kháng CN(46.8%), n m 2013 t l kháng CN(43.2%) T l kháng CN không có s u thay đ i qua các n m.

- T l kháng Amikacine AK (27.6 %) So sánh v i n m 2007 ( 7.5 %), n m

2012 (1.375 ), n m 2013 (7.4% )T l kháng t ng m nh qua các n m.

- T l kháng Cipro CIP (76.5%), so sánh v i n m 2007 (42.41%), n m 2012 (53.83%) n m 2013 (64.69% ) T l kháng t ng so v i các n m tr c

Trong n m 2007 CIP là m t trong nh ng l a ch n trong tr ng h p b nhi m E.coli

- T l kháng Levo LEV (79.3%) so sánh v i s li u các n m 2012 (54.2%) n m 2013(69.1%) => t l đ kháng kháng sinh có s thay đ i qua các n m

Kháng sinh này có pH kháng khuẩn rất mạnh, chủ yếu tác động lên vi khuẩn Gram âm Tỷ lệ thành công cao khiến nó trở thành lựa chọn hàng đầu cho bác sĩ trong điều trị nhiễm E.coli, tuy nhiên, kháng sinh này cũng thường gây ra tác dụng phụ trong quá trình điều trị.

 T l kháng v i kháng sinh Trime-sul SXT là 79.3% so v i n m 2007 (79.95%), n m 2012 (57.5% ), n m 2013 (72.87% )T l kháng SXT c a E.coli thay đ i qua các n m. b) M uăn c ti u

 Nh y c m 100 % v i các kháng sinh Colistin, Imipenem, Meropenem

 E.coli kháng 100 % v i kháng sinh AMP

 i v i các kháng sinh thu c nhóm cephalosporins h -lactams :

Tỷ lệ kháng Cefuroxime (CXM) đạt 86.3%, trong khi tỷ lệ kháng Cefoxitime (FOX) là 32.9% So sánh với các năm trước, tỷ lệ kháng CXM đã tăng từ 61.3% năm 2007 lên 72.5% năm 2012 và 79.6% năm 2013, cho thấy xu hướng gia tăng kháng thuốc Ngược lại, tỷ lệ kháng FOX không có sự thay đổi đáng kể, với 28.9% năm 2012 và 27.6% năm 2013.

Tỷ lệ kháng của E coli đối với các kháng sinh thuộc nhóm cephalosporins thế hệ III đang gia tăng, với tỷ lệ kháng Cefotaxime (CTX) đạt 86.3% và Ceftazidime (CAZ) đạt 58.9% So với các năm 2007, 2012 và 2013, tỷ lệ kháng này có xu hướng tăng lên, cụ thể: năm 2007 tỷ lệ kháng CTX là 51.4% và CAZ là 25.9%; năm 2012 tỷ lệ kháng CTX là 73.4% và CAZ là 57.5%; năm 2013 tỷ lệ kháng CTX là 78.9% và CAZ là 44.58%.

Cefepime (FEP) là một loại kháng sinh thuộc nhóm cephalosporins thế hệ IV Theo khảo sát, tỷ lệ E.coli kháng cefepime hiện nay là 37.0%, tăng so với năm 2007 (28.1%) và năm 2013 (22.8%) Điều này cho thấy tình trạng kháng thuốc đối với cefepime đang gia tăng.

Sự gia tăng kháng kháng sinh nhóm cephalosporins h-lactams đang trở thành một vấn đề nghiêm trọng, chủ yếu do E.coli có khả năng sản xuất enzyme ESBL, dẫn đến khả năng kháng lại các loại kháng sinh này.

 T l kháng đ i v i các lo i kháng sinh -lactams/ c ch -lactamase:

- E.coli kháng y u Ampi-sul SAM (26.0%) tuy nhiên l i kháng m nh v i

Amoxcillin AMC(76.7%) , so v i s li u 2011 AMC (16%) T l kháng AMC t ng m nh

- Ticar TTC (37.0%) Pipe-tazoTZP (16.4%) t l kháng này t ng nhanh qua các n m i u đó đ c ch ng minh, trong n m 2007 t l kháng v i TTC (6.78%) TZP (3.3%), n m 2012 t l kháng TTC (40.2% ) TZP (12.6% ); n m 2013 t l kháng TTC ( 39.7%) TZP ( 20.3%)

T l kháng c a các lo i kháng sinh -lactams/ c ch -lactamase ngày càng t ng qua các n m.

 i v i các kháng sinh nhóm Aminoglycosides thu c h -lactams:

- T l kháng Genta CN (45.2%) So sánh v i n m 2007 (47.5.%) n m 2012 t l kháng CN(46.8%), n m 2013 t l kháng CN(43.2%) T l kháng CN không có s u thay đ i qua các n m.

- T l kháng Amikacine AK (8.2%) So sánh v i n m 2007 ( 7.5 %), n m

2012 (1.375 ), n m 2013 (7.4% )T l kháng AK không có s thay đ i qua các n m.

- T l kháng Cipro CIP (57.5%), so sánh v i n m 2007 (42.41%) so sánh v i n m 2007 (42.41%), n m 2012 (53.83%) n m 2013 (64.69% ) T l kháng t ng so v i các n m tr c Trong n m 2007 CIP là m t trong nh ng l a ch n trong tr ng h p b nhi m E.coli

- T l kháng Levo LEV (57.5%) so sánh v i s li u các n m 2012 (54.2%) n m 2013(69.1%) => t l đ kháng kháng sinh có s u thay đ i qua các n m

Kháng sinh này có pH kháng khuẩn rất mạnh, chủ yếu tác động lên vi khuẩn Gram âm Với khả năng tác dụng cao, nó là một trong những lựa chọn hàng đầu cho bác sĩ trong điều trị nhiễm E.coli Tuy nhiên, kháng sinh này thường gây ra tác dụng phụ trong quá trình điều trị.

 T l kháng v i kháng sinh Trime-sul SXT là (79.5%) so v i n m 2007 (79.95%), n m 2012 (57.5% ), n m 2013 (72.87% )T l kháng SXT c a E.coli thay đ i qua các n m.

 T l kháng kháng sinh Norfloxacine( 63.0%) t ng so v i 2011 NOR( 45%), kháng m nh v i Cephalothin (90.4%

Bi uăđ 3.14: T l đ kháng kháng sinh c a E.coli so v i s li u 2012 và 2013

K T LU N

Qua k t qu kh o sát 7502 m u b nh ph m máu và 1210 m u n c ti u t i B nh vi n Nhi đ ng II t ngày 1/11/2013 đ n ngày 4/2014 có th đ a ra k t lu n:

 Trong 87502 m u máu có 554 m u cho k t qu d ng tính chi m 7.4% trong đó s m u d ng E.coli chi m 5.2% Còn trong 1210 m u n c ti u có 155 m u d ng tính chi m 12.8% trong đó s m u d ng E.coli chi m 47.1%

Nhiễm trùng E.coli trong máu có sự chênh lệch giới tính rõ rệt, với tỷ lệ nam giới là 55.2% và nữ giới là 44.8% Trong khi đó, nhiễm khuẩn E.coli trong máu não lại có tỷ lệ tương đối cân bằng hơn, với nam giới chiếm 47.9% và nữ giới 51.1%.

Theo thống kê, tỷ lệ nhiễm khuẩn E.coli ở trẻ em dưới 5 tuổi là rất cao, với 48.2% trẻ mắc bệnh tiêu chảy và 27.4% trẻ bị nhiễm khuẩn đường tiêu hóa Đặc biệt, trẻ trong độ tuổi từ 1-5 có tỷ lệ nhiễm khuẩn cao nhất, lên đến 58.9%.

 Th ng kê cho th y t l nhi m khu n E.coli các khoa nh s sinh, th n n i ti t, UBHH, n i t ng h p chi m t l cao

Xét v m c đ nh y c m c a kháng sinh v i Escherichia coli

Escherichia coli kháng đa kháng sinh đang gia tăng, với tỷ lệ kháng cao đối với các kháng sinh nhóm cephalosporin và β-lactams, đặc biệt là FEP với tỷ lệ kháng lên tới 31.0% Các kháng sinh nhóm β-lactams/cơ chế β-lactamase cũng cho thấy tỷ lệ kháng đáng kể Trong khi đó, tỷ lệ kháng với nhóm Carbapenem vẫn ở mức thấp, với IMI đạt 34.5% và MER là 13.8% Tình trạng kháng đa kháng sinh của E.coli chủ yếu do sự phát triển của enzym ESBL, dẫn đến kháng các kháng sinh nhóm Cephalosporin, tuy nhiên kháng với nhóm Carbapenem vẫn ở mức thấp do sự hiện diện của enzym carbapenemase.

Escherichia coli kháng đa kháng sinh đang gia tăng, đặc biệt là với các kháng sinh thuộc nhóm cephalosporin và β-lactams, với tỷ lệ kháng cao và có xu hướng gia tăng theo thời gian Tỷ lệ kháng thuốc đối với cephalosporin FEP đạt 37.0% Các kháng sinh thuộc nhóm β-lactams/β-lactamase cũng cho thấy tỷ lệ kháng cao, trong khi đó, tỷ lệ kháng đối với các kháng sinh nhóm Carbapenem như IMI đạt 98.6% và MER là 100%.

Tình hình kháng đa kháng sinh của E coli đang gia tăng, đặc biệt là do sự xuất hiện của enzyme ESBL, khiến vi khuẩn này kháng lại các kháng sinh nhóm Cephalosporin Tuy nhiên, mức độ kháng với các kháng sinh nhóm Carbapenem vẫn còn thấp do sự sản sinh enzyme carbapenemase.

NGH

Nghiên cứu tiềm năng của các điều kiện thí nghiệm chuyên sâu cho thấy sự ảnh hưởng của vi khuẩn Gram âm đến sức khỏe của trẻ em Các quy định chất lượng và cách ly mẫu cần được thực hiện nghiêm ngặt để đảm bảo đánh giá toàn diện về vấn đề nhiễm khuẩn.

Từ kết quả khảo sát trên, chúng ta nhận thấy tỷ lệ vi khuẩn Gram âm kháng đa kháng sinh ngày càng tăng do sự hiện diện của enzym ESBL Để ngăn chặn tình trạng gia tăng sự kháng kháng sinh, tôi xin đề nghị các biện pháp phòng ngừa hiệu quả.

- C n đ cao các bi n pháp kh trùng và tránh tình tr ng “nhi m khu n chéo”.

- Duy trì li u l ng thu c đ cao trong mô đ c ch nh ng vi khu n ban đ u và nh ng vi khu n đ t bi n b c đ u

- Ph i h p thu c: s d ng đ ng th i 2 lo i thu c không có ph n ng chéo

M i lo i s gi m thi u nh ng ch ng đ t bi n đ i v i lo i thu c kia.

- H n ch s d ng: tránh không cho vi khu n quen thu c.

- Ch s d ng kháng sinh khi c n thi t

- S d ng kháng sinh đúng li u l ng

- Giám sát s đ kháng kháng sinh c a tr c khu n Gram âm

- Tìm ki m các k thu t m i đnh danh và phát hi n vi khu n nhanh chóng và chính xác, h tr vi c đi u tr

Tr c khu n Gram âm là tác nhân chính gây nhi m trùng b nh vi n, c n có nh ng bi n pháp ch t ch trong phòng ch ng nhi m khu n b nh vi n

1 Tr n Th Ng c Anh(2007), S đ kháng kháng sinh c a vi khu n gây b nh th ng g p t i b nh vi n Nhi đ ng II, n m 2007

2 Nguy n Thái Bình(2012), Giáo trình Vi sinh v t gây b nh, i h c M Tp H Chí Minh

3 Nguy n Thanh B o(2003), Vi khu n hoc, HYD Tp.HCM - B môn vi sinh

4 Bùi Th Lý Hoa, T ng Phi Khanh, Nguy n Th Hoa, ào Th Chín, Tr ng Quang Vinh, Vi sinh h c Y khoa th c hành, HYD Tp.HCM-b y t

5 B môn xét nghi m, Vi sinh h c y khoa, Tr ng i h c Y d c Thành ph H Chí Minh

6 B Y t (2000), Tài li u t p hu n Vi sinh lâm sàng, Hà N i

7 Lê ng Hà và c ng s (03/2000), Tài li u t p hu n vi sinh lâm sàng, Hà N i

8 Nhà Xu t B n Y H c (2006), K thu t xét nghi m vi sinh lâm sàng, Ph m Hùng Vân

9 Ph m Hùng Vân (2004), C m nang xét nghi m vi sinh lâm sàng, Tài li u n i b

10.Ph m Hùng Vân (1999), K thu t l y chuyên ch và làm các b nh ph m kh o sát vi sinh lâm sàng, HYD Tp.HCM.

Nghiên cứu của Hùng Vân, Thái Bình, Lê Th Kim Anh và V Th Châu H i (2009) đã tiến hành khảo sát đa trung tâm về tình hình kháng kháng sinh của các vi khuẩn Gram âm gây nhiễm khuẩn bệnh viện từ tháng 01/2007 đến tháng 5/2008 Kết quả nghiên cứu được công bố trong tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, tập 13, số 2.

12.B Y t - V đi u tr (2005), H i ngh t ng k t ho t đ ng H i đ ng thu c và đi u tr n m 2005, Hà N i 4-2004

13.C.T Nga, H.D M ch (2007), T l sinh Beeta Lactamase ph r ng ESBL các ch ng Klebsiella, E.coli và Enterobacter phân l p t i b nh vi n Vi t Ti p H i Phòng t 1-7-2005 đ n 31-6-2006, T p chí y h c Vi t Nam s 11 k 1

Nghiên cứu của Xuân, Châu và Tùng (2005) đã đánh giá tình hình kháng kháng sinh của vi khuẩn Gram âm sản sinh beta-lactamases tại bệnh viện Nhi đồng ở Thành phố Hồ Chí Minh trong khoảng thời gian từ tháng 5/2002 đến tháng 2/2004 Kết quả nghiên cứu được công bố trong Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, tập 9, trang 172-177.

15.S kháng thu c c a vi khu n gây b nh th ng g p t i b nh vi n Th ng Nh t, n m 2006” c a Cao Minh Nga

16.D ng Nh t Linh(2008), Giáo trình th c t p vi sinh gây b nh, i h c M Tp H Chí Minh

17.D ng Nh t Linh, Giáo trình Vi sinh v t gây b nh, i h c M Tp H Chí Minh

18.Nguy n V n Minh, D ng Nh t Linh(2008), Giáo trình th c t p vi sinh c s , i h c M Tp H Chí Minh

19.Nhà Xu t B n Y H c (2006), K thu t xét nghi m vi sinh lâm sàng, Ph m Hùng Vân

20.Ph m Hùng Vân, Vi khu n Gram âm đ kháng kháng sinh th c tr ng t i Vi t Nam và các đi m m i v chu n m c bi n lu n đ kháng.

21.Tr n Linh Th c(2010), “Ph ng pháp phân tích vi sinh v t trong n c, th c ph m và m ph m”, NXB Giáo d c Vi t Nam, Hà N i

22 Nguy n Th Vinh, Nguy n c Hi n, oàn Mai Ph ng, Võ Th Chi Mai, ng Thu H ng, Ngô Th Thi, Chu Th Nga, oàn Th H ng H nh, Bùi V n T o,

Nguy n Th Nam Liên, Nguy n Th Ng c Hu , Phan V n Bé B y và c ng s

(2006), “ Giám sát s đ kháng kháng sinh c a vi khu n gây b nh th ng g p

Vi t Nam n m 2005”, T p chí nghiên c u Y h c, 46(6), tr 87-91

23.Tài li u h ng d n và qui trình xét nghi m lâm sàng đ i v i b nh ph m n c ti u c a khoa vi sinh b nh vi n Nhi ng 2.

24.Tài li u h ng d n và qui trình xét nghi m lâm sàng đ i v i b nh ph m máu c a khoa vi sinh b nh vi n Nhi ng 2.

25.KTV Tr n Th Kim Loan “S đ kháng kháng sinh c a E.coli trên invitro t i b nh vi n đa khoa Qu ng Nam” t tháng 1/2010 _9/2011

Nghiên cứu của các bác sĩ Bích, Nguyễn S Minh Tuyết, Võ Thị Trà An và Nguyễn Thanh Tùng đã khảo sát sự kháng kháng sinh của vi khuẩn Escherichia coli tại Bệnh viện Nhân dân Gia Định.

27.Bradford PA (2001), Extended-spectrum -lactamases in the 21 st century: characterization, epidemiology, and detection of this important resistance threat, Clin Microbiol Rev.14: 933-951

Ph l c 1: M u đ c k t qu kháng sinh đ theo CLSI 2012

Ampicilline 10 àg 17 13 8 16 32 ăậLACTAMS/ C CH ăậLACTAMASE

(S typhi + Salmonella spp ngoài ru t)

B NH VI N NHI NG 2 S :ầầầầ

- H và tên ng i b nh:ầầầầầầầầầầ Tu i:ầầầầầNam/N

- Khoa: ầầầầầầầầầầầầầầầầ Bu ng:ầầầ.Gi ng:ầ

YÊU C U XÉT NGHI M K T QU XÉT NGHI M

BÁC S I U TR TR NG KHOA XÉT NGHI M

Hình 2.4: Kính hi n vi Hình 2.5: Máy vortex

Ph l c 3:Hình nh trang thi t b