Có 3 th nghi m quan tr ng:
- ADC (th nghi m arginine decarboxylase)/ADH (th nghi m arginine dehydrolase).
- LDC (th nghi m Lysin decarboxylase).
- ODC (th nghi m Ornithine decarboxylase).
Các th nghi m decarboxylase dùng đ phân l ai và đ nh danh các l ai vi khu n thu c h đ ng ru t Enterobacteriacea.
Hình 2.9: Ph n ng decarboxylase
- Dùng pipet hút huy n d ch vi khu n nh vào ng nghi m ch a l n l t các môi tr ng ADH, LDC, ODC.
- Nh d u parafin vào ng nghi m.
- y n p ng nghi m nh ng không đ y ch t.
- 370C, 18/24h.
VI.4.2. c k t qu
- (+): vi sinh v t m c, mơi tr ng màu tím,đ c h n.
- (-): vi khu n m c, môi tr ng chuy n sang màu vàng hay vi khu n không m c, môi tr ng gi nguyên màu tím ban đ u.
VI.5. Urease_ Indol
Th nghi m Urease- Indole là m t trong nh ng th nghi m c n cho xác đ nh nhóm lồi vi khu n.
Th nghi m Urease: là đ c tr ng cho các loài Proteus spp và th ng đ c dùng đ phân bi t các d ng Proteus v i các vi khu n khác c a Enterobacteriacea.
Th nghi m indole: đ c dùng đ phân bi t E. coli (+) v i Klebsiella (-), Proteus(-) v i các l ai Proteus khác (+).
VI.5.1. Ti n hành
- B sung 2-3 ml dung d ch ure-phenol, pHả7,2.
- 370C, 18-24h.
VI.5.2. c k t qu
Th nghi m Ure:
- (+): phenol red chuy n t đ sang h ng cánh sen.
- (-): khơng đ i màu.
Hình 2.10: Ph n ng ure
h nghi m Indol.
- (+): xu t hi n màu đ trên b m t môi tr ng.
- (-): xu t hi n màu vàng trên b m t mơi tr ng.
Hình 2.12:K t qu testăsinhăhóaăđnh danh E.coli
T trái sang ph i: ng KIA: lên men gluocose, lactose, sinh h i, không sinh H2S; ng Manitol (+); ng Citrate (-); ng ADH (-); ng LDC (+); ng ODC (+); ng Ure (-); Indol (+)
VII. K THU Tă XỄCă NHă NH Y C M KHÁNG SINH C A E.COLI[16,17,24,25]
VII.1. Nguyên t c
Kháng sinh đ c t m vào đ a gi y theo n ng đ cho t ng lo i. Kháng sinh s khu ch tán chung quanh m t th ch môi tr ng nuôi c y. ng kính vịng vơ khu n b c ch di n đ t tính nh y c m c a vi khu n đ i v i kháng sinh.
VII.2. Cách ti n hành VII.2.1. Chu n b v t li u VII.2.1. Chu n b v t li u
- V t li u: đ a kháng sinh c a hãng Biorad.
- a kháng sinh là nh ng đ a gi y có đ ng kính 6mm đ c t m dung d ch kháng sinh v i n ng đ tiêu chu n.
- Các tiêu chu n chính đ l a ch n kháng sinh:
- Ch n kháng sinh đ i di n cho nhóm có cùng ph ho t đ ng.
- Tùy thu c vào lo i vi khu n th nghi m.
- Tùy thu c vào v trí nhi m khu n.
- Tùy theo chi n l c và chính sách s d ng kháng sinh t ng vùng, t ng đ a ph ng.
- Môi tr ng th c hi n kháng sinh đ :
- Th ch Mueller Hinton (MHA) c a hãng Biorad là môi tr ng t t nh t đ th c hi n kháng sinh đ th ng qui (đ i v i vi khu n d m c). Môi tr ng đ c b o qu n trong t l nh, tr c khi dùng ph i t m 370C trong vòng 2 – 3 gi .
VII.2.2. Chu n b huy n d ch vi khu n
- Pha huy n d ch vi khu n có n ng đ 0,5 McFarland. Huy n d ch vi khu n nh v y ch a 1-2×108t bào/ml.
- Trên m t th ch phân l p thu n khi t, ch n ít nh t 3 – 5 khóm vi khu n đi n hình cho vào trong n c mu i sinh lý NaCl 0,85 %. l c đ u b ng máy l c. i u ch nh huy n d ch vi khu n đ t đ đ c chu n 0.5 McFarland.
- So sánh đ đ c chu n MC Farland 0,5 ml ta đ c h n h p d ch vi khu n ch a 108 CFU/ml.
VII.2.3. Cácăb c ti n hành
Trong vòng 15’ sau khi pha huy n dich vi khu n ti n hành tràn d ch khu n trên m t th ch.
Các b c ti n hành nh sau
- L c đ u ng nghi m ch a huy n d ch vi khu n.
- Hé m n p h p, h l a ng nghi m, đ huy n d ch vào h p.
- L c nh h p th ch đ huy n dch tràn đ u m t th ch. Sau đó rút h t l ng huy n dch trong đó ra, đ h p th ch khô.
- t đ a kháng sinh theo t ng lo i vi khu n lên m t th ch đư tr i huy n d ch vi khu n sao cho m t c a khoanh gi y áp sát vào m t c a mơi tr ng, mép ngồi khoanh gi y cách thành trong c a đ a kho ng 15mm và khoanh n cách khoanh kia 20mm, đ n trong vịng 15 phút, sau đó đem s p h p th ch trong t m 370C.
VII.2.4. c và bi n lu n k t qu
- Sau khi 24 gi , vi khu n s m c thành nh ng khóm m n ti p h p nhau và vịng vơ khu n s là m t vòng tròn đ ng nh t.. N u vi khu n m c thành nh ng khóm riêng l thì m m c y quá loãng, ph i làm l i th nghi m.
- o đ ng kính vịng vơ khu n phía sau c a đ a th ch b ng th c có đ n v là mm, b ng compa tr t hay th c k tr t.
- ánh giá k t qu đ ng kính vịng vơ khu n đo đ c đ i chi u v i b ng gi i h n đ ng kính vịng c ch cho t ng lo i vi khu n d a theo tiêu chu n NCCLS và ghi nh n k t qu vi khu n nh y c m hay trung gian hay kháng đ i v i kháng sinh th nghi m.
VIII.K THU T TH NGHI M ESBLs[24,25]
VIII.1. Ngyên t c
-lactamase Inhibitor (clavulanic acid, sulbactamsầ) c ch ESBL nên làm gi m m c đ đ kháng c a cephalosporins và m r ng v ng vô khu n c a đ a kháng sinh cephalosporin th h 3 khi đ t g n m t đ a kháng sinh ch a -lactamase Inhibitor.
c đi m:
đ c hi u cao.
nh y thay đ i:
- Kh ang cách gi a hai lo i đ a kháng sinh tùy thu c vào t ng vi khu n.
- Ph thu c vào ki u ti t ESBL mà vi khu n ti t ra.
VIII.2. Th c hi n
a amoxicillin/clavulanate (20µg/10µg) đ c đ t trên trung tâm m t th ch Multer Hinton Agar (đư c y ch ng vi khu n thu n khi t), các đ a cephalosporin (30µm) đ c đ t xung quanh cách nhau 20mm và đ t m 350C/24 gi . Khi có s m r ng vịng vơ khu n c a đ a cephalosporin v phía ti p giáp v i đ a clavulanate, ch ng t vi khu n đó đư sinh ESBL.
IX. K THU T THU TH P VÀ X LÝ S LI U
Thu th p s li u: Thu th p và nh p d li u vào s và Excel. X lỦ k t qu b ng Excel.
Hình 2.14:ăăPh ngăphápăđ aăđơi k t h p Hình 2.15 : K t qu c aăph ngăphápăđ aă đôiăk t h p
CH NGă3
K T QU , BÀN LU N, K T LU NăVẨă
NGH
I. K T QU
I.1. K t qu chung v t l ni c yăd ngătínhăc a m u b nh ph m máu và
n c ti u
Trong th i gian th c t p b nh vi n t tháng 11/2013 đ n tháng 4/2014 th ng kê trên nh ng b nh ph m thu đ c t i b nh vi n Nhi đ ng II, Tp H Chí Minh đ c b ng v t l các loài vi khu n phân l p t m u máu và m u n c ti u.
M u máu
B ng 3.1: K t qu nuôi c y d ngătínhăc a m u b nh ph m máu
S l ng M u N ( ca b nh) % D ng tính 554 7.4% Ngo i nhi m 728 9.7% Âm tính 6220 82.9% T ng 7502 100%
Bi uăđ 3.1: K t qu nuôi c y d ngătínhăc a m u b nh ph m máu
Nh n xét:T bi u đ 1 cho ta th y trong 7250 m u b nh ph m nghiên c u thì cho k t qu d ng tính là 7.4% th p h n so v i k t qu âm tính là 82.9%, ngồi ra k t qu ngo i nhi m là 9.7%.T đó ta th y đ c k t qu âm tính cao h n k t qu d ng tính.
M uăn c ti u
B ng 3.2 : K t qu ni c y d ngătínhăc a m u b nh ph măn c ti u
7.4%
9.7%
82.9%
%
D ng tính Ngo i nhi m Âm tính
S l ng M u N (ca b nh) % D ng tính 155 12.8% Âm tính 1055 87.2% T ng 1210 100%
Bi uăđ 3.2: K t qu ni c y d ngătínhăc a m u b nh ph măn c ti u
Nh n xét: T bi u đ 2 cho ta th y trong 1210 m u b nh ph m nghiên c u thì cho k t qu d ng tính là 12.8% th p h n so v i k t qu âm tính là 87.2%.T đó ta th y đ c k t qu âm tính cao h n nhi u so v i k t qu d ng tính.
I.2. T l các loài vi khu năđ c phân l p t b nh ph mămáuăvƠăn c ti u
Các m u b nh ph m máu và n c ti u d i sau quá trình kh o sát m u ban đ u, đ c đem đi c y trên các môi tr ng CA, BA, BCP, URI. Sau khi c y b nh ph m máu và n c ti u ta thu đ c t l các lo i vi khu n phân l p t 2 m u b nh ph m này trong t ng s m u b nh ph m t các khoa lâm sàng g i đ n khoa Vi sinh.
M u máu
B ng 3.3: T l các lo i vi khu năđ c phân l p t m u b nh ph m máu
STT Vi khu n N (Vi khu n) % 1 B.cepacia 168 30.3% 2 S.coagulase âm 133 24.0% 3 K.pneumoniae 41 7.4% 4 E.coli 29 5.2% 5 S.aureus 29 5.2% 6 Acinetobacter spp 42 7.6% 7 Khác 112 20.3% T ng 554 100% 12.8% 87.2% % D ng tính Âm tính
Bi uăđ 3.3:T l các lo i vi khu năđ c phân l p t m u b nh ph m máu
Nh n xét:T bi u đ trên ta th y đ c t l nhi m khu n B.cepacia và S.coagulase khá cao trong khi nhi m khu n E.coli l i th p ch có 5.2%.
N c ti u
B ng 3.4: T l các lo i vi khu năđ c phân l p t m u b nh ph măăn c ti u
STT Vi khu n N(vi khu n) % 1 E.faecium 41 26.5% 2 E.coli 73 47.1% 3 K.pneumoniae 17 11.0% 4 Khác 24 15.4% T ng 155 100%
Bi uăđ 3.4:T l các lo i vi khu năđ c phân l p t m u b nh ph măn c ti u
30.3%
24.0%
7.4% 5.2% 5.2% 7.6%
20.2%
T ăl căcácăloƠiăviăkhu nătrongăm uămáu
Nh n xét: Qua bi u đ ta th y đ c trong 155 m u phân l p có vi khu n thì E.coli chi m t l cao nhât 47.1% trong khi E.feacium và K. pneumoniae ch chi m 26.5% và 11%.
I.3. K t qu phân l p Escherichia coli t m u b nh ph mămáuăvƠăn c ti u
B ng 3.5: T l Escherichia coli phân l p t m uămáuăvƠăn c ti u
STT B nh ph m N (s l ng) %
1 M u máu 29 28.4%
2 N c ti u 73 71.6%
3 T ng 102 100%
E.faecium E.coli K.pneumoniae Khác
26.5%
47.1%
11.0% 15.5%
T ăl ăcácălo iăviăkhu nătrongăm uăn căti u
Bi uăđ 3.5: T l Escherichia coli phân l p t m uămáuăvƠăn c ti u
Nh n xét: d a vào bi u đ ta th y trong 2 lo i m u b nh ph m máu và n c ti u thì E.coli xu t hi n trong m u n c ti u chi m t l cao h n 71.6%
I.4. S phân b NTT, NTH do nhi m khu n E.coli theo tu i và gi i tính
M u máu
B ng 3.6: T l phân l p E.coli trong m uăămáuăvƠăn c ti uătheoăđ tu i
tu i M u máu M uăn c ti u N (ca b nh) % N( ca b nh) % <1 14 48.3% 20 27.4% 1_5 10 34.5% 43 58.9% ≥5 5 17.2% 10 13.7% T ng 29 100% 73 100% M u máu 28.4% N c ti u 71.6% %
Bi uăđ 3.6: T l phân l p E.coli trong m uăămáuăvƠăn c ti uătheoăđ tu i
Nh n xét: D a vào bi u đ ta th y t l nhi m khu n E.coli gi m d n khi đ tu i c a các bé t ng d n. T l bé d i 1 tu i nhi m E.coli chi m t l cao nh t 48.3%, nhóm tu i 1-5
là 34.5%, nhóm trên 5 tu i 17.2%. <1 48.3% 1_5 34.5% ≥5 17.2% M uămáu <1 27.4% 1_5 58.9% ≥5 13.7% N căti u
Nh n xét: D a vào bi u đ ta th y t l nhi m khu n E.coli gi m d n khi đ tu i c a các bé t ng d n. T l bé d i 1_5 tu i nhi m E.coli chi m t l cao nh t 58.9% nhóm tu i d i 1 là 27.4%, nhóm trên 5 tu i 13.7%.
B ng 3.7: T l phân l p E.coli trong m uăămáuăăvƠăn c ti u theo gi i tính
Gi i tính M u máu M uăn c ti u
N( ca b nh) % N(ca b nh) %
N 13 44.8% 38 52.1%
Nam 16 55.2% 35 47.9%
T ng 29 100% 73 100%
Bi uăđ 3.7: T l phân l p E.coli trong m uăămáuăăvƠăn c ti u theo gi i tính
Nam 55.2% N
44.8%
Nh n xét: D a vào bi u đ ta th y t l nhi m khu n E.coli bé trai(55.2%) cao h n so
v i bé gái(44.8%)
Nh n xét:: D a vào bi u đ ta th y t l nhi m khu n E.coli bé trai (47.9%) th p h n so v i bé gái (51.2%) nh ng t l này không th p h n nhi u.
I.5. S phân b NTT, NTH do nhi m khu n E.coli theo khoa
B ng 3.8: T l phân l p E.coli trong m u b nh ph m máu theo khoa
Khoa N(ca b nh) % S sinh 11 37.9% Ung b u huy t h c 7 24.1% N i t ng h p 3 10.3% C p c u l u 3 10.3% Khác 5 17.4% T ng 29 100% Nam 47.9% N 52.1% N căti u
Bi uăđ 3.8: T l phân l p E.coli trong m u b nh ph m máu theo khoa
Nh n xét: T l nhi m khu n E.coli trong m u máu c a khóa s sinh chi m t l cao nh t 37.9%
B ng 3.9: T l phân l p E.coli trong m u b nh ph m n c ti u theo khoa
khoa N( ca b nh) % Th n n i tiêt 20 27.4% N i t ng h p 18 24.7% Ni u 8 11.0% D ch v 2 6 8.2% Ngo i th n kinh 4 5.5% Tiêu hóa 3 4.1% Khác 14 19.2% T ng 29 100%
s sinh UBHH n i t ng h p c p c u l u khoa khác
37.9%
24.1%
10.3% 10.3%
17.2% %
Bi uăđ 3.9: T l phân l p E.coli trong m u b nh ph m n c ti u theo khoa
Nh n xét: T l nhi m khu n E.coli trong m u n c ti u c a khóa th n n i tiêt chi m t l cao nh t 27.4%
I.6. M căđ nh y c m c aăkhángăsinhăđ i v i E.coli
Trong th c tr ng s d ng kháng sinh không theo ch đnh c a bác s , d n đ n tình tr ng kháng kháng sinh hay có m t s lo i vi khu n kháng đa kháng sinh gây r t nhi u khó kh n cho ngành y t nói riêng và c ng là m t v n đ xã h i nan gi i. Vì th vi c đnh danh, làm kháng sinh đ đ xác đnh vi khu n nh y c m hay đ kháng v i nh ng lo i kháng sinh nào là m t công vi c r t quan tr ng và c n thi t giúp đ các bác s có th đ a ra pháp đ đi u tr phù h p.
Qua th ng kê, thu đ c t l đ kháng kháng sinh c a E.coli phân l p trên b nh ph m máu và n c ti u t i b nh vi n Nhi đ ng II, Tp H Chí Minh.
th n- n i ti t n i t ng h p ni u d ch v 2 ngoai th n kinh tiêu hóa khác 27.4% 24.7% 11.0% 8.2% 5.5% 4.1% 19.2% %
M u máu
B ng 3.10: M căđ nh y kháng sinh c a E.coli phân l p trên b nh ph m máu
STT Kháng sinh T ng s đ a đ t Nh y (S) Trung gian (I) Kháng (R) T ng N % N % N % N % 1 Ampiciline (AMP) 29 0 0.0 0 0 29 100 29 100 2 Amoxcillin- sulbactam(AMC) 29 4 13.8 4 13.8 21 72.4 29 100 3 Ampicillin- sulbactam (SAM) 29 15 51.7 4 13.8 10 34.5 29 100 4 Piperacillin- tazobactam (TZP) 29 18 62.1 2 6.9 9 31 29 100 5 Ticarcillin- clavulanic acid (TTC) 29 8 27.6 9 31.0 12 41.4 29 100 6 Cefuroxime (CXM) 29 3 23.1 0 0 10 76.9 29 100 7 Cefotaxime (CTX) 29 4 13.8 0 0 25 86.2 29 100 8 Ceftazidime (CAZ) 29 11 37.9 4 13.8 14 48.3 29 100 9 Cefepime (FEP) 29 18 62.1 2 6.9 9 31 29 100 10 Cefoxitine (FOX) 29 21 72.4 0 0 8 27.6 29 100 11 Imipenem (IMI) 29 19 65.5 0 0 10 34.5 29 100 12 Meropenem (MRP) 29 23 79.3 2 6.9 4 13.8 29 100