0345KHẢO SÁT TÍNH ĐÈ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA NHÓM TRỰC KHUẨN GRAM ÂM: PSEUDOMONAS 4ERUGINOSA, KLEBSIELLA PNEUMONIAE ĐƯỢC PHÂN LẬP TỪ BỆNH PHẲẢM DỊCH ĐƯỜNG HÔ HÁP DƯỚI TẠI BỆNH VIỆN NHI ĐÔNG II

GIÁO D C VẨ ẨO T O B TR NG IH CM TP H CHÍ MINH  BÁO CÁO KHĨA LU N T T NGHI P Tên đ tài: KH O SỄT TệNH KHÁNG KHÁNG SINH C A NHÓM TR C KHU N GRAM ÂM: PSEUDOMONAS AERUGINOSA, KLEBSIELLA PNEUMONIAE PHÂN L P T D B NH PH M D CH I T I B NH VI N NHI THỄNG 11/2013 C NG HÔ H P NG II T N THÁNG 04/2014 KHOA CÔNG NGH SINH H C CHUYÊN NGHÀNH: VI SINH ậ SINH H C PHÂN T GVHD : ThS.BS Tr n Th Ng c Anh SVTH : Lê Th T Quyên MSSV : 1053010622 KHÓA : 2010-2014 Tp H Chí Minh, tháng 04, n m 2014 L IC M N L i đ u tiên, em xin g i l i c m n chơn thƠnh đ n cô Ths.BS Tr n Th Ng c Anh, tr ng khoa Vi sinh B nh vi n Nhi ng II, ng i đƣ t n tình h ng d n, ch b o, giúp đ em su t trình h c, th c hi n hoàn thành t t báo cáo th c t p t t nghi p Xin g i l i c m n đ n Ban Giám đ c b nh vi n Nhi ng II đƣ đ ng ý t o u ki n cho em th c t p t i khoa Vi sinh c a b nh vi n Em xin g i l i c m n chơn thƠnh đ n quý cô Nguy n Th Ánh H ng anh ch khoa Vi sinh B nh vi n Nhi ng II V i s h ng d n nhi t tình giúp đ , trao đ i kinh nghi m đƣ b sung nh ng ki n thúc chuyên môn cho em, giúp em có thêm nhi u ki n th c su t trình th c t p Em xin chân thành c m n Ban giám hi u nhƠ tr ng th y cô khoa Công ngh sinh h c đƣ truy n đ t cho em nh ng ki n th c quý báu t o u ki n cho em su t th i gian h c rèn luy n t i tr ng Cu i cùng, xin g i l i c m n đ n gia đình, th y cô, anh ch , b n bè đƣ giúp đ cho em trình th c t p t t nghi p t i b nh vi n Nhi đ ng II Em xin chân thành c m n! Tp H Chí Minh, Ngày 17 tháng 06 n m 2014 LÊ TH T QUYÊN NH N XÉT C A GI NG VIÊN Tp H Chí Minh, Ngày tháng (Ký ghi h tên) n m 2014 DANH M C M C TV N CH 1.1 CH NG T NG QUAN TÀI LI U TÌNH HÌNH NHI M TRỐNG NG HÔ H P D I 1.1.1 Trên th gi i 1.1.2 Vi t Nam 1.1.3 Các tri u ch ng lâm sàng 1.1.4 Các v n đ liên quan nhi m trùng đ IT 1.2 1.3 C ng hô h p d i NG VI KHU N NGHIÊN C U 1.2.1 Vi khu n Klebsiella pneumoniae 1.2.2 Vi khu n Pseudomonas aeruginosa 10 KHỄNG SINH VẨ KHÁNG KHÁNG SINH 11 1.3.1 Kháng sinh 11 1.3.2 kháng kháng sinh 15 NG C U I T NG, V T LI U VẨ PH NG PHỄP NGHIểN 21 2.1 TH I GIAN VẨ 2.2 V T LI U NGHIÊN C U 22 2.3 2.2.1 V t li u thí nghi m 22 2.2.2 Môi tr 2.2.3 Thi t b ậ d ng c 23 PH CH TH ng ậ sinh ph m 22 NG PHỄP NGHIểN C U 24 Phân l p đ nh danh vi khu n 24 2.3.1 2.4 A I M NGHIÊN C U 22 NGHI M KHỄNG SINH 38 2.4.1 Môi tr 2.4.2 Ph ng pháp th c hi n (theo ph 2.4.3 Ph ng pháp th nghi m kh n ng sinh ESBL 39 NG ng sinh ph m 38 ng pháp Kirby Bauer) 38 K T QU VÀ TH O LU N 41 SVTH: LÊ TH T QUYÊN i DANH M C 3.1 T L PHÂN L P NH DANH KLEBSIELLA PNEUMONIAE VÀ PSEUDOMONAS AERUGINOSA TRONG M U B NH PH M HÔ H P 3.2 D I 42 T L NHI M KLEBSIELLA PNEUMONIAE VÀ PSEUDOMONAS AERUGINOSA THEO 3.3 T TU I 44 L KLEBSIELLA PNEUMONIAE VÀ PSEUDOMONAS AERUGINOSA C PHÂN L P THEO GI I TÍNH 45 3.4 NH Y C M KHÁNG SINH C A KLEBSIELLA PNEUMONIAE VÀ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 47 3.5 T L SINH ENZYME ESBL C A KLEBSIELLA PNEUMONIAE VÀ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 51 3.6 CH TH O LU N 52 NG K T LU N VÀ KI N NGH 58 4.1 K T LU N 59 4.2 NGH 59 TÀI LI U THAM KH O 61 PH L C 65 SVTH: LÊ TH T QUYÊN ii DANH M C DANH M C CH VI T T T ADH: Arginine decarboxylase AK: Amikacin AMP: Ampiciline AMS: Ampicillin ậ sulbactam AUG: Amoxcillin ậ clavulanic acid BA: Blood agar BCP: Bromocresol purpe agar CA: Chocolate agar CAZ: Ceftazidime CIP: Ciprofloxacine CTX: Cefotaxime CXM: Cefuroxime CFU: Colony forming unit CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute CS: Colistin DNA: Desoxyribonucleic acid E coli: Escherichia coli ESBL: Extended Spectrum Beta ậ Lactamases FEP: Cefepime FOX: Cefoxitine GN: Gentamycine IMI: Imipenem K pneumoniae: Klebsiella pneumoniae KIA: Kligler Iron Agar KS: Kháng sinh LEV: Levofloxacine LDC: Lysine decarboxylase LPS: Lipopolyshacharide SVTH: LÊ TH T QUYÊN iii DANH M C MRP: Meropenem MIC: Minimum Inhibitory Concentration MHA: Mueller Hinton agar ODC: Ornithine decarboxylase p ậ: para ậ p ậ DMABA: para ậ Dimethylaminobenzaldehyd P aeruginosa: Pseudomonas aeruginosa PABA: para ậ aminobenzoic acid PBP: Penicillin binding protein S pneumoniae Streptococcus pneumoniae SCF: Cefoperazone ậ sulbactam SXT: Trimethoprime ậ sulfamethoxazole TTC: Ticarcillin ậ clavulanic acid TZP: Piperacillin ậ tazobactam UNICEF: The United Nations Children's Fund  ậ: beta ậ SVTH: LÊ TH T QUYÊN iv DANH M C DANH M C CÁC B NG B ng 2.1 Thang m Barlett dùng đánh giá m u đƠm 29 B ng 2.2 Thang m Barlett dùng đánh giá m u hút qua m i (NTA), m u n i soi ph qu n (BW) 29 B ng 2.3 K t qu th nghi m sinh hoá: Klebsiella pneumoniae 37 B ng 2.4 K t qu th nghi m sinh hoá: Pseudomonas aeruginosa 38 B ng 3.1 S l ng vi khu n phân l p đ ct đ ng hô h p d i 42 B ng 3.2 T l Klebsiella pneumoniae chia theo đ tu i 44 B ng 3.3 T l Pseudomonas aeruginosa chia theo đ tu i 45 B ng 3.4 T l vi khu n đ c phân l p theo gi i tính 46 B ng 3.5 K t qu kháng sinh đ c a Klebsiella pneumoniae 47 B ng 3.6 K t qu kháng sinh đ c a Pseudomonas aeruginosa 49 B ng 3.7 T l vi khu n sinh ESBL 51 SVTH: LÊ TH T QUYÊN v DANH M C DANH M C CÁC HỊNH V Hình 1.1 C ch đ kháng kháng sinh 17 Hình 2.1 Quy trình ni c y phân l p vi khu n 24 Hình 2.2 S đ minh h a thƠnh t bƠo vi khu n Gram d ng (trái) vƠ Gram ơm (ph i) 26 Hình 2.3 C u khu n Gram d ng 26 Hình 2.4 Tr c khu n Gram âm 26 Hình 2.5 Quy trình nhu m Gram 28 Hình 2.6 Khu n l c Klebsiella pneumoniae mơi tr ng CA 30 Hình 2.7 Khu n l c Klebsiella pneumoniae môi tr ng BA 30 Hình 2.8 Khu n l c Klebsiella pneumoniae môi tr ng BCP 31 Hình 2.9 Khu n l c Pseudomonas aeruginosa mơi tr ng CA 31 Hình 2.10 Khu n l c Pseudomonas aeruginosa môi tr ng BA 31 Hình 2.11 S đ đ nh danh m t s vi khu n đ ng g p 32 ng ru t th Hình 2.12 S đ đ nh danh m t s tr c khu n Gram âm 33 Hình 2.13 K t qu th nghi m sinh hoá c a Klebsiella pneumoniae 37 Hình 2.14 Kháng sinh đ đ t cho Pseudomonas aeruginosa 39 Hình 2.15 Kh n ng sinh men ESBL c a vi khu n Klebsiella pneumoniae theo ph ng pháp 40 Hình 3.1 a kháng sinh đ đ t cho tr c khu n Gram âm k t qu sinh ESBL c a vi khu n 51 Hình 3.2 Pseudomonas aeruginosa sinh men  ậ lactamase type AmpC 52 SVTH: LÊ TH T QUYÊN vi DANH M C DANH M C CỄC I U Bi u đ 3.1 Bi u đ th hi n t l m u b nhi m vi khu n gây b nh t b nh ph m đ ng hô h p d i 42 Bi u đ 3.2 Bi u đ th hi n s l ng m u b nh ph m nhi m lo i vi khu n gây b nh 43 Bi u đ 3.3 Bi u đ th hi n t l nhi m Klebsiella pneumoniae đ tu i 44 Bi u đ 3.4 Bi u đ th hi n t l nhi m Pseudomonas aeruginosa Bi u đ 3.5 Bi u đ th hi n s l aeruginosa đ đ tu i 45 ng Klebsiella pneumoniae Pseudomonas c phân l p theo gi i tính 46 Bi u đ 3.6 Bi u đ th hi n tính đ kháng kháng sinh c a Klebsiella pneumoniae 48 Bi u đ 3.7 Bi u đ th hi n tính đ kháng kháng sinh c a Pseudomonas aeruginosa 50 SVTH: LÊ TH T QUYÊN vii K T U N VẨ KI N NGH CH NG K T U N VẨ KI N NGH SVTH: LÊ TH T QUYÊN 58 K T U N VẨ KI N NGH 4.1 K T U N Trong t ng s 3052 m u b nh ph m l y t đ m ud ng hô h p d i có đ n 1206 ng tính nhi m lo i vi khu n khác nhau, Klebsiella pneumoniae chi m t l cao nh t, ti p đ n tr c khu n Gram ơm khác nh Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli,… T rút đ b nh liên quan đ n đ ng hô h p d c r ng i có c n nguyên t ch ng tr c khu n Gram ơm, đ c bi t Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa T l m c b nh tr s sinh tr d i 12 tháng tu i r t cao c bi t tr suy gi m mi n d ch hay n m vi n th i gian dài hay có ti n s sinh non d n đ n tr ng h p viêm ph i kéo dài d dƠng tái phát đƣ đ c u tr T l nhi m Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa c a nam so v i n c ng có s chênh l ch rõ, t l nam nhi cao g p l n c Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa so v i n Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa thu c nhóm tr c khu n Gram âm kháng h u h t v i kháng sinh thu c nhóm cephalosporins, chúng nh y c m v i polymycin B colistin Klebsiella pneumoniae v n cịn nh y v i nhóm carbapenems, quinolones amikacin H u h t kháng sinh v n nh y c m v i Pseudomonas aeruginosa, s chênh l ch gi a t l kháng nh y không cao Klebsiella pneumoniae vi khu n có kh n ng sinh enzyme ESBL r t cao, chúng kháng h u h t v i nhóm kháng sinh, carbapenem đ c coi s ch n l a thích h p đ u tr cho b nh nhân nhi m nh ng ch ng vi khu n 4.2 NGH Nghiên c u s l ng m u l n h n đ có kh o sát r ng h n v tình hình kháng kháng sinh c a vi khu n Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa T l phân l p đ c ch ng Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa ngày cao t m u b nh ph m, bi n pháp ng n ch n s lây lan SVTH: LÊ TH T QUYÊN 59 K T U N VẨ KI N NGH gen kháng kháng sinh Nghiên c u sơu h n m i liên quan v s lây truy n gen kháng kh n ng đ kháng kháng sinh Kh o sát kh n ng sinh men đ kháng kháng sinh đ pneumoniae Pseudomonas aeruginosa đ c Klebsiella c ti t giúp chúng có kh n ng kháng nhi u lo i kháng sinh th h m i Xác đ nh ki u gen đ kháng kháng sinh c a lo i vi khu n Gen kháng kháng sinh d n lan truy n t vi khu n sang vi khu n khác, đ h n ch s lây nhi m c n có nh ng nghiên c u sơu h n v gen c ng nh ngu n g c cách th c lây nhi m S sinh men phá h y nhóm carbapenems ngày lan r ng nên m t yêu c u c p thi t đ c đ t ph i xác đ nh ki u gen đ kháng v i nhóm kháng sinh t đ a bi n pháp ng n ng a vƠ u tr SVTH: LÊ TH T QUYÊN 60 TẨI I U THAM KH O TẨI I U THAM KH O TI NG VI T [1] B Y t , Vi khu n h c, ih cYD c ThƠnh ph H Chí Minh, tr 57 ậ 75 [2] B Y t (2008) , Vi sinh Y h c, Nhà xu t b n Giáo d c Hà N i [3] Nguy n Th Thu Ba (2011), “C ch đ kháng kháng sinh c a m t s vi khu n gây b nh kháng thu c”, T p đoƠn Y khoa HoƠn M [4] HoƠng Th Ph ng Dung, Nguy n Thanh B o, Võ Th Chi Mai (2010), Kh o sát tr c khu n Gram âm sinh men  – lactamase ph r ng t i b nh vi n ih cYD c Thành ph H Chí Minh, Y H c TP H Chí Minh, T p 14, Ph b n c a S 1, tr 486 ậ 489 [5] Nguy n Phú H ng Lan, Nguy n V n V nh Chơu, inh Nguy n Huy M n, Lê Th D ng, Nguy n Th Thu Y n, (2012), Kh o sát m c đ đ kháng kháng sinh c a Acinetobacter Pseudomonas phân l p t i B nh Vi n Nhi t i n m 2010, B nh vi n B nh Nhi t i ThƠnh ph H Chí Minh, Th i s Y h c 3/2012 ậ s 68 [6] Ngô Th Tuy t Lan, Lê Th Minh H ng (2013), “Nghiên c u y u t d ch t lâm sàng t l vi khu n gram âm viêm ph qu n ph i tr em”, t p chí Y – d c h c quân s s – 2013 [7] Tr n Linh Th c ( 2006), K thu t phân tích vi sinh v t n c, th c ph m, m ph m, Nhà xu t b n Giáo d c TI NG ANH [8] Ahmad M., Urban C., Mariano N., Bradford P A., Calgani E., Projan J S (1999), "Clinical characteristics and molecular epidemiology associated with imipenem – resistant Klebsiella pneumoniae" Clin Infect Dis (29), pp.352 – [9] Anne M Q., Barbara F., Colleen G., Ellyn W., Karen B (2004), "Effects of Inoculum and  – Lactamase Activity in AmpC– and Extended– Spectrum  – Lactamase (ESBL) – SVTH: LÊ TH T QUYÊN Producing Escherichia coli and Klebsiella 61 TẨI I U THAM KH O pneumoniae Clinical Isolates Tested by Using NCCLS ESBL Methodology", Journal of Clinical Microbiology, pp 269 ậ 275 [10] Avorn J L., Barrett J F., Davey P G., McEwen S A., O’Brien T F., Levy S B (2001), "Organisation mondiale de la santé (OMS) Antibiotic resistance: synthesis of recommendations by expert policy groups: alliance for the prudent use of antibiotics" [11] Classen D C., Evans R S., Pestonik S L., Horn S D., Menlove R L., Burke J P (1992), "The timing of prophylactic administration of antibiotics and the risk of surgicalwound infections" N Engl J Med 326, pp.281 – [12] Jones R N (2001), "Resistance patterns among nosocomial pathogens: trends over the past few years", Chest 119 (2), pp.397 – 404 [13] Joshua T F., Jessica N., Eva G., Aedrey T., May D A., Gary N M., Sally A K (2013), "Predictor of hospital surface contaminationwwith Extended – Spectrum  – lactamase producing E coli and K pneumoniae patient and organison factor", Antimicrobial Resistance and infection control 2014, pp.3 – [14] Jvo S., Product M M "Detection identification differentiation and cultivation of Pseudomonas species", JCM [15] J Vandepitte., Engbaek K., Rohner P., Piot P., Heuck C C (2003), "Basic laboratory procedures in clinical bacteriology", Second edition, World Health Organization Geneva, p.45 [16] K F Anderson, Lonsway D R., Rasheed J K., Biddle J., Jensen B., Mcdougal L K., Carey R B., Thompson A., Stocker S., Limbago B., Patel J B (2007), "Evaluation of methods to identify the Klebsiella pneumoniae carbapenemase in Enterobacteriaceae", Journal of clinical microbiology, pp 2723 ậ 2725 [17] Laghawe A R., Jaitly N K., Thombare V R (2012), "Prevalence of AmpC beta ậ lactamase in Gram ậ negative bacilli", Journal of pharmaceutical and biomedical sciencse 20 (07) SVTH: LÊ TH T QUYÊN 62 TẨI I U THAM KH O [18] Maria K., Eleanna D., Apostolos L., Eleni J., Efthimia P., Evangelos D A., Iris S., Myrto C "Spread of Multidrug ậ Resistant Pseudomonas aeruginosa Clones in a University Hospital", JCM [19] M Kolar, Bardon J., Chroma M., Hricova K., Stosova T., Sauer P., Koukalova D (2010), "ESBL and AmpC beta ậ lactamase ậ producing Enterobacteriaceae in poultry in the Czech Republic", Veterinarni Medicina, 55 (3), pp.119 ậ 124 [20] Parveen R M., Harish B N., Parija S C (2012), "Molecular description of plasmid ậ mediated AmpC ậ lactamases among nosocomial isolates of Escherichia coli & Klebsiella pneumoniae from six different hospitals in India", Indian J Med Res 135, pp.114 ậ 119 [21] Patrick R M., Ellen J B., James H J., Marie L L., Michael A P (2007), "Manual of Clinical Microbiology", Washington, DC: ASM Press, pp 652:655, 664 [22] Patrice N., Laurent D., Laurent P., "Rapid Detection of Extended ậ Spectrum ậ  ậ Lactamase ậ Producing Enterobacteriaceae", JCM [23] Pestotnik S L (2005), "Expert clinical decision support systems to enhance antimicrobial stewardship programs: insights from the society of infectious diseases pharmacists", Pharmacotherapy 25, pp.1116 ậ 25 [24] Shehani T., Sui M L (2013), "Isolation of Extended Spectrum  – lactamase (ESBL) producing Bacteria from Urban Surface Water in Malaysia", Malays J Med Sci 20(3), pp.12 ậ 14 [25] Trevor W., Patrice C (2011), "Expert Systems in Clinical Microbiology", Clinical Microbiology Reviews, pp 515 ậ 556 [26] Yagi T., Wachino J., Kurokawa H., Suzuki S., Yamane K., Doi Y., Shibata N., Kato H., Shibayama K., Arakawa Y (2005), "Practical methods using boronic acid compounds for identification of class C beta – lactamase producing Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli", Journal of Clinical Microbiology, (43), pp.2551 ậ 2558 SVTH: LÊ TH T QUYÊN 63 TẨI I U THAM KH O [27] Simonsen G S., Tapsall J W., Allegranzi B., Talbot E A., Lazzari S (2004), "The antimicrobial resistance containment and surveillance approach ậ a public health tool", Bulletin of World Health Organization (82) pp.928 – 34 WEBSITE [28] http://vinacare.vn/component/dctdt/?view=detail&catid=45&id=11 [29] http://www.vnpharma.com.vn/index.php/tin-hoat-dong-nganh/143-de-khangkhang-sinh-cua-vi-khuan-p2.html [30] http://www.hmu.edu.vn/thuvien/Baithuochay/Y%20hoc%20GD/ chuong23.htm [31] http://www.benhviennhi.org.vn/news/detail/3405/viem-tieu-phe-quan.html [32] http://ycao.vn/tin-y-cao/Nhi-khoa/Ho-hap/Viem-tieu-phe-quan-mot-benh-ly- viem-cap-tinh-duong-ho-hap-duoi [33] http://www.dhsphue.edu.vn/ [34] http://uv-vietnam.com.vn/ SVTH: LÊ TH T QUYÊN 64 PH PH Thành ph n c a môi tr Môi tr C C1 ng nuôi c y ng BCP Thành ph n lý thuy t (g/ L n c c t): Casitone 7,5 Yeast extract Lactose 10 Agar 25 Bromocresol purple 0,02 Chu n b môi tr ng: ng nh t thành ph n bình ch a Thêm 29 gam mơi tr trog m t lít n ng v a đ c vô trùng Tr n đ u cho đ n h n h p đ ng nh t un sôi vƠ l c th ch nh pH 6,9 vƠ đ ng xuyên cho đ n thu đ c kh trùng c dug d ch đ ng nh t, u 121oC 15 phút sau phơn chia vƠo đ a petri Môi tr ng BA c b n Thành ph n lý thuy t (g/ L n c c t): Proteose peptone 15 Meat extract 2,5 Yeast extract 2,5 Sodium chloride Agar 14 Chu n b môi tr ng: ng nh t thành ph n bình ch a Thêm 40 gam mơi tr m t lít n ng v a đ c vô trùng Tr n đ u cho đ n h n h p đ ng nh t un sôi vƠ l c th ch nh pH 7,3 vƠ đ ng xuyên cho đ n thu đ c kh trùng c dug d ch đ ng nh t, u 121oC 15 phút sau phơn chia vƠo đ a petri SVTH: LÊ TH T QUYÊN 65 PH C i: Thêm – 10% máu ng a ho c máu c u vào, làm l nh Th ch máu t xu ng kho ng 45oC L c nh tránh t o b t, phân ph i vƠo đ a petri Th ch chocolate: Thêm 10% máu ng a vƠo môi tr 80oC cho đ n có màu nâu Phân ph i vƠo đ a petri h p kho ng 10 phút Môi tr ng c b n L c nh h n ng CA (b sung PVS) Thành ph n lý thuy t (g/ L n c c t): Pancreatic digest of casein 7,5 Meat peptic digest 7,5 Maize starch Dipotassium phosphate Sodium chloride Haemoglobin 10 Agar 15 PVS Thành ph n lý thuy t (g/ L n Môi tr c c t): Cysteine hydrochloride 43,17 L – cystine 1,83 Guanine hydrochloride 0,05 Thiamine hydrochloride 0,005 Co – Carboxylase 0,17 NAD 0,42 Para – aminobenzoic acid 0,022 Adenine 1,67 L – glutamine 16,67 Vitamine B12 0,0167 ng KIA Thành ph n lý thuy t (g/ L n c c t): Pastone 15 Beef extract Yeast extract SVTH: LÊ TH T QUYÊN 66 PH Meat peptone Sodium chloride Ferrous sulphate 0,2 Sodium thiosulphate 0,3 Lactose 10 Glucose Phenol red 0,024 Agar 13 Chu n b môi tr ng: ng nh t thành ph n bình ch a Thêm 40 gam mơi tr m t lít n ng xuyên cho đ n thu đ 121oC 15 phút tr Môi tr ng v a đ c vô trùng Tr n đ u cho đ n h n h p đ ng nh t un nh l c th trùng C c dug d ch đ ng nh t, kh c phân chia vào tube ng ODC ậ ADH ậ LDC Thành ph n lý thuy t (g/ L n c c t): ODC Medium ADH Medium LDC Medium - - - - - - Yeast extract 3 NaCl 5 Glucose 1 0,042 0,042 0,042 L-ornithine (hydrochloride) L-arginine (hydrochloride) L-lysine (hydrochloride) Bromocresol purple Môi tr ng mannitol motility nitrate Thành ph n lý thuy t (g/ L n Casein SVTH: LÊ TH T c c t): 9,7 QUYÊN 67 PH Peptone 4,3 Potassium nitrate 2,3 Mannitol Phenol red 0,04 Agar 2,7 Chu n b môi tr ng: ng nh t thành ph n bình ch a Thêm 22 gam mơi tr m t lít n c vơ trùng i phút cho môi tr ng v a đ ng đ ng nh t, đun nh l c đ u i u ch nh pH đ n 7,6 phân ph i vào tube kh trùng Môi tr C 120oC 15 phút ng Mueller Hinton Thành ph n lý thuy t (g/ L n c c t): Dehydrated meat infusion Casein hydrolysate 17,5 Starch 1,5 pH 7,3 ± 0,1 Ca2+ 20 ậ 25 mg/ mL Mg2+ 10 ậ 12,5 mg/ mL Chu n b môi tr ng: ng nh t thành ph n bình ch a Tr n 25 gam mơi tr m t lít n c vơ trùng Kh trùng ng v a đ 121oC ± 1oC 15 phút Phân ph i vào tube Môi tr ng urea indole Thành ph n lý thuy t (g/ L n c c t): L – Tryptophan KH2PO4 K2HPO4 Sodium chloride Urea 20 95% ethanol 10 mL Phenol red 0,05 SVTH: LÊ TH T QUYÊN 68 PH PH C C2 Hình nh m t s thi t b phịng xét nghi m: Hình T c y Hình Kính hi n vi Hình Máy đo PH Hình Lị viba Hình T l nh Hình T m Hình Máy l c SVTH: LÊ TH T QUYÊN 69 PH C PH L C M u đ c k t qu kháng sinh đ theo CLSI 2012 KHU CH TỄN TÊN KHÁNG A MIC (mg/ml) K T QU SINH S: Nh y N NG A NG I: Trung KÍNH gian KHÁNG VỊNG VƠ R: Kháng SINH KHU N NS: S≤ R≥ S≥ I ≤R Khơng nh y PENICILLINS Penicilline 10 µg 29 28 0.12 - 0.25 Oxacilline (S aureus + 30 µg 22 21 Cefoxi 4 Cefoxi cefoxitin ludnensis) Oxacilline (SCN) 10 µg Ampicilline ậLACTAMS/ 25 24 0.25 Oxa 0.5 17 13 16 32 ậLACTAMASE C CH 20/10 µg 18 13 8/4 16/8 32/16 Ampicilline-sulbactam 10/10 µg 15 11 8/4 16/8 32/16 Piperacilline- tazobactam 100/10 µg 21 17 16/4 32/4- 128/4 Amoxcilline-clavulanic acid 64/4 Piperacilline- tazobactam 100/10 µg 21 14 16/4 32/4- 128/4 64/4 (P aeruginosa) 75/10 µg Ticarcilline-clavulanic 20 14 16/2 32/4- 128/4 64/2 acid Ticarcilline-clavulanic (P 75/10 µg 24 15 16/2 32/4- 128/4 64/2 aeruginosa) Cefoperazone-sulbactam 75/30 µg 21 15 30 µg 18 14 CEPHEMS Cephalothin SVTH: LÊ TH T QUYÊN 16 32 70 PH C Cefuroxime (tiêm) 30 µg 18 14 16 32 Cefuroxime (u ng) 30 µg 23 14 8-16 32 Cefoperazone 75 µg 21 15 16 32 64 Cefotaxime 30 µg 26 22 Cefotaxime 30 µg 23 14 16-32 64 Ceftriaxone 30 µg 23 19 Ceftriaxone 30 µg 21 13 16-32 64 Ceftazidime 30 µg 21 17 16 Ceftazidime(P 30 µg 18 14 16 32 Ceftazidime (B cepacia) 30 µg 21 17 16 32 Cefepime 30 µg 18 14 16 32 Cefotetan 30 µg 16 12 16 32 64 Cefoxitine 30 µg 18 14 16 32 Cefixime µg 19 15 30 µg 30 µg 21 22 17 15 8 16 16 32 10 µg 10 µg 10 µg 23 19 16 19 15 13 4 8 16 10 µg 10 µg 23 19 19 15 2 4 10 µg 16 13 16 10 µg 10 µg 20 22 15 18 0.5 16 ≥2 10 µg 30 µg 30 µg 30 µg 15 17 15 19 12 14 11 14 16 4 32 8 16 64 16 16 (Acinetobacter spp) (Acinetobacter spp) aeruginosa+ Acinetobacter spp) MONOBACTAMS Aztreonam Aztreonam aeruginosa) CARBAPENEMS (P Imipenem Imipenem (P aeruginosa) Imipenem (Acinetobacter +Aeromonas) Meropenem Meropenem (P aeruginosa) Meropenem (Acinetobacter +Aeromonas) Meropenem (B cepacia) Ertapenem AMINOGLYCOSIDES Gentamycine Amikacine Tetracycline Tetracycline (Staphylococci + Vibrio) FLOUROQUINOLONES SVTH: LÊ TH T QUYÊN 71 PH C Ciprofloacine Ciprofloacine (S typhi + Salmonella spp ngồi ru t) µg µg 21 31 15 20 ≤ 0.06 0.120.5 ≥1 Levofloxacine µg 17 13 Levofloxacine (Staphylococci) Norfloxacine µg 19 15 10 µg 17 12 16 Ofloxacine µg 16 12 Ofloxacine (Staphylococci) QUINOLONES µg 18 14 Nalidixic acid 30 µg 19 13 16 - 32 1.25/23.75 µg 30 µg 16 10 2/38 - 4/76 18 12 16 32 Azithromycine 15 µg 18 13 Erythromycine 15 µg 23 13 0.5 1-4 Rifamycine µg 20 16 Vancomycine (S aureus) 30 µg - - 4-8 16 Vancomycine coagulase negative) 30 µg - - 8-16 32 Clindamycine µg 21 14 0.5 1-2 Nitrofurantoin 300 µg 17 14 32 64 128 Linezolid 30 µg 21 20 - Fosfomycin 200 µg 16 12 64 128 256 Colistin (P aeruginosa) 10 µg 11 10 Colistin ( Acinetobacter) - - - - (P 300 đv 12 11 B - - - - FOLATE PATHWAY INHIBITORS Trimethoprimesulfamethoxazole Chloramphenicol MACROLIDES Polymycin B aeruginosa) Polymycin (Acinetobacter) SVTH: LÊ TH T (S QUYÊN 72