2.4.1 Môi tr ng và sinh ph m
Môi tr ng MHA
M c đích: th c hi n th nghi m kháng sinh đ nh m đánh giá tính nh y
c m v i kháng sinh c a vi khu n gây b nh đ giúp các th y thu c s d ng kháng sinh phù h p đ ch a tr cho b nh nhơn. ng th i đánh giá
tình hình kháng thu c c a vi khu n đ đ a ra các bi n pháp kh ng ch tình hình lây lan các ch ng vi khu n kháng thu c.
Nguyên t c: kháng sinh đ c t m s n vƠo các đ a gi y v i n ng đ thích h p s khu ch tán trên m t th ch có ch a vi khu n th nghi m. ng kính vịng vơ khu n giúp ta bi t đ c tính nh y c m c a vi khu n đ i v i
lo i kháng sinh đó.
2.4.2 Ph ng pháp th c hi n (theo ph ng pháp Kirby Bauer)
B c 1: Ghi thông tin c a ch ng vi khu n đ c phân l p t m u b nh ph m
lên đ a môi tr ng MHA vƠ tube n c mu i sinh lý.
B c 2: Pha huy n d ch vi khu n: dùng pipet Pasteur l y khóm trung hồ vào ng n c mu i trên. Vortex th t k cho vi khu n phơn tán đ u. So sánh v i đ đ c chu n 0,5 Mc Facland, sau đó pha loƣng đ có đ c huy n d ch t bào vi khu n
đ t m t đ 106 CFU/ mL.
B c 3: Láng huy n d ch vi khu n v a đ c pha loƣng lên môi tr ng
2.4.3 Ph ng pháp th nghi m kh n ng sinh ESBL
2.4.3.1 Ph ng pháp đ a đôi (double– disk diffusion test) [20][22]
ậ lactamase inhibitor (clavulanic acid, sulbactamsầ) c ch ESBL nên
làm gi m m c đ đ kháng c a cephalosporins và m r ng vịng vơ khu n c a đ a
kháng sinh cephalosporin th h 3 khi đ t g n m t đ a kháng sinh ch a ậ
lactamase inhibitor.
Cách th c hi n: đa amoxicillin/ clavulanate (20 µg/ 10 µg) đ c đ t trên trung tâm m t th ch MHA (đƣ c y ch ng vi khu n thu n khi t), các đ a
cephalosporin (30 µm) đ c đ t xung quanh cách nhau 20 mm vƠ đ t m 35oC/ 24 gi . Khi có s m r ng vịng vơ khu n c a đ a cephalosporin v phía ti p giáp
v i đ a clavulanate, ch ng t vi khu n đó đƣ sinh ESBL.
2.4.3.2 Ph ng pháp đ a k t h p (combination dics)
D a trên tính hi p l c c a đ a kháng sinh cephalosporin th h 3 so v i đ a
kháng sinh cephalosporin th h 3/ ậ lactamase inhibitor.
M t s vi khu n sinh AmpC, là m t ậ lactamase nh ng không lƠ ESBL
c ng xu t hi n gia t ng đ ng kính vịng vơ khu n khi có s hi n di n c a
clavulanic acid, vƠ gơy d ng tính gi .
Cách th c hi n: đa kháng sinh ch ch a m t lo i kháng sinh trong h cephalosporin (ceftazidime, cefotaxime, 30µg) và m t đ a ph i h p ceftazidime / clavulanate, cefotaxime/ clavulanate. ESBL (+) khi có s chênh l ch đ ng kính vịng vơ khu n ≥ 5 mm v i đ a t ng ng khơng có clavulanate.
Hình 2.15. Kh n ng sinh men ES c a vi khu n K. pneumoniae theo 2 ph ng pháp
Bên c nh vi c th nghi m kh n ng sinh enzyme ESBL, s sinh men ậ
lactamase type AmpC ngày càng ph bi n dù tr c đó các nghiên c u cho th y gen sinh men ậ lactamase type AmpC là r t ít. Vi c đ t các đ a kháng sinh nh m phát hi n kh n ng sinh enzyme ESBL c ng đ ng th i phát hi n kh n ng sinh enzyme
ậ lactamase type AmpC, ph ng pháp ki m tra kh n ng sinh enzyme ậ
lactamase type AmpC b ng cách s d ng các cephalosporines th h th 3 khác nhau và cefoxitin, vi khu n đ i kháng v i cefoxitin và gi m nh y c m v i cephalosporines th h th 3. [17][26]
2.4.3.3 Ph ng pháp thu nh n và x lý s li u
Thu th p s li u t ng ngày, ghi nh n và t ng h p nh ng thông tin c n thi t. X lý s li u theo ph ng pháp th ng kê, x d ng ph n m m Microsoft Excel xây d ng các bi u đ có liên quan.
Ph ng pháp
k t h p
Ph ng pháp đ a đôi
CH NG 3. K T QU VÀ TH O LU N