Xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng đồng thời rupatadin và chất bảo quản paraben trong siro bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KIM NGỌC ĐỨC XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI RUPATADIN VÀ CHẤT BẢO QUẢN PARABEN TRONG SIRO BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2022 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KIM NGỌC ĐỨC MÃ SINH VIÊN: 1701090 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI RUPATADIN VÀ CHẤT BẢO QUẢN PARABEN TRONG SIRO BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn 1.TS Nguyễn Lâm Hồng 2.TS Lê Quang Thảo Nơi thực Bộ mơn Hóa phân tích-Độc chất Viện Kiểm nghiệm thuốc TW HÀ NỘI – 2022 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo TS Nguyễn Lâm Hồng TS Lê Quang Thảo, người theo sát hướng dẫn, giúp đỡ động viên em trình học tập, nghiên cứu hịan thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô, anh chị kỹ thuật viên Bộ mơn Hóa phân tích - Độc chất ln tạo điều kiện cho em nghiên cứu giúp đỡ em q trình làm thực nghiệm mơn Em xin cảm ơn thầy cô anh chị công tác Viện Kiểm Nghiệm Thuốc TW tạo điều kiện cho em sử dụng thiết bị, hướng dẫn giúp đỡ em trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, thầy cô truyền đạt cho em tri thức quý báu trình học tập trường Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, anh, chị, em nhóm nghiên cứu ln bên cạnh quan tâm, động viên, giúp đỡ em vượt qua khó khăn sống học tập, động lực để em học tập, nghiên cứu rèn luyện Trường Đại học Dược Hà Nội Hà Nội, ngày tháng Sinh viên Kim Ngọc Đức năm 2022 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHẤT NGHIÊN CỨU 1.1.1 Tổng quan Rupatadin 1.1.2 Tổng quan chất bảo quản paraben 1.1.3 Một số phương pháp định lượng rupatadin, methyl paraben propyl paraben 1.2 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Nguyên tắc trình sắc ký 1.2.3 Sắc ký cột pha đảo hiệu cao 1.2.4 Các thông số đặc trưng sắc ký lỏng hiệu cao 1.3 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 12 1.3.1 Độ thích hợp hệ thống 12 1.3.2 Độ đặc hiệu 12 1.3.3 Khoảng tuyến tính 13 1.3.4 Độ 13 1.3.5 Độ lặp lại 14 1.3.6 Độ xác trung gian 14 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU DÙNG TRONG NGHIÊN CỨU 15 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.2 Hóa chất thiết bị 15 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 16 2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời rupatadin, methyl paraben propyl sắc ký lỏng hiệu cao 16 2.2.2 Thẩm định phương pháp định lượng 16 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.3.1 Xử lý chuẩn bị mẫu thử 16 2.3.2 Chuẩn bị dung dịch đối chiếu 16 2.3.3 Khảo sát xác định điều kiện sắc ký 17 2.3.4 Thẩm định phương pháp 18 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1 XỬ LÝ VÀ CHUẨN BỊ MẪU NGHIÊN CỨU 26 3.1.1 Chuẩn bị dung môi pha mẫu 26 3.1.2 Xử lý chuẩn bị mẫu thử 26 3.2 KHẢO SÁT VÀ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ 26 3.2.1 Lựa chọn cột sắc ký 26 3.2.2 Lựa chọn pha động 26 3.2.3 Lựa chọn bước sóng phát 29 3.3 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 30 3.3.1 Độ thích hợp hệ thống 30 3.3.2 Độ đặc hiệu 31 3.3.3 Khoảng tuyến tính 32 3.3.4 Độ 33 3.3.5 Độ lặp lại 35 3.3.6 Độ xác trung gian 37 3.4 BÀN LUẬN 44 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 45 KẾT LUẬN 45 ĐỀ XUẤT 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT DC Dược chất DĐVN V Dược điển Việt Nam V USP Dược điển Hoa Kỳ EP Dược điển châu Âu ACN Acetonitril CHH Chuẩn hỗn hợp GRP Chuẩn gốc rupatadin GMP Chuẩn gốc methyl paraben GPP Chuẩn gốc propyl paraben SKĐ Sắc kí đồ kl/kl Khối lượng/khối lượng tt/tt Thể tích/thể tích TCCS Tiêu chuẩn sở DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Một số phương pháp đinh lượng rupatadin, methyl paraben propyl paraben Bảng 1: Thành phần hàm lượng mẫu thử, mẫu placebo (1), mẫu placebo (2), mẫu placebo (3), mẫu placebo (4) 100ml siro Bảng 2 : Chuẩn bị dung dịch đo khoảng tuyến tính Bảng 1: Các hệ pha động tiến hành khảo sát Bảng 2: Kết độ thích hợp hệ thống Bảng 3: Kết khảo sát độ đặc hiệu dung dịch placebo, chuẩn, thử Bảng 4: Kết khảo sát tuyến tính Bảng 5: Kết khảo sát độ rupatadin Bảng : Kết khảo sát độ methyl paraben Bảng 7: Kết khảo sát độ propyl paraben Bảng 8: Kết khảo sát độ lặp lại Bảng 9: Tương đồng hai chuẩn hỗn hợp Bảng 10: Kết độ xác trung gian Bảng 11: Tóm tắt kết thẩm định DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình 1: Cơng thức cấu tạo rupatadin Hình 2: Cơng thức cấu tạo methyl paraben Hình 3: Cơng thức cấu tạo propyl paraben Hình 1: Sắc ký đồ dung dịch thử hệ pha động Hình 2: Sắc ký đồ dung dịch thử hệ pha động Hình 3: Sắc ký đồ dung dịch thử hệ pha động Hình 4: Sắc ký đồ dung dịch thử hệ pha động Hình 5: Hình ảnh quét phổ dung dịch chuẩn mẫu rupatadin (pic 2- xanh dương), methyl paraben (pic 1- đỏ) propyl paraben (pic - xanh lam) Hình 6: Chồng phổ định tính chất rupatadin, methyl paraben propyl paraben ĐẶT VẤN ĐỀ Rupatadin thuốc kháng histamine H1 hệ có hiệu việc điều trị dứt điểm triệu chứng dị ứng gây thường bào chế dạng viến nén, dung dịch uống siro uống Tất yếu cần phải có phương pháp kiểm nghiệm nguyên liệu dạng chế phẩm Tuy nhiên, qua tổng quan chuyên luận dược điển nước quốc tế chưa có chuyên luận riêng định lượng nguyên liệu dạng chế phẩm chứa rupatadin Với dạng chế phẩm phổ biến viên nén, giới có nhiều nghiên cứu xây dựng chương trình định lượng hoạt chất rupatadin dạng chế phẩm Cịn với dạng chế phẩm siro uống chưa có nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng dược chất Hiện dạng siro sử dụng rộng dãi với nhiều ưu điểm khả hấp thu nhanh, dễ dàng sử dụng cho trẻ em che dấu mùi vị dược chất.Trong cơng thức siro thường có chứa hàm lượng đường cao, điều kiện thuận lợi để vi sinh vật xâm nhập phát triển Do đó, cơng thức địi hỏi phải có thêm thành phần chất bảo quản Các chất bảo quản paraben chất bảo quản sử dụng rộng rãi mỹ phẩm, thực phẩm dược phẩm Cụ thể methyl paraben sử dụng với hàm lượng 0,015-0,2% với propyl paraben 0,02-0,06% chế phẩm thuốc uống [26] Trong công thức siro rupatadin có thị trường, chất paraben sử dụng để bảo quản chế phẩm Theo FDA khuyến nghị nên kiểm tra hàm lượng, giới hạn chất bảo quản chế phẩm siro để đảm bảo chất lượng bảo vệ người tiêu dùng[16] Qua tổng quan tài liệu nước số tài liệu nước ngồi, chưa có nhiều tài liệu định lượng đồng thời ba chất quy trình cịn phức tạp[1] Vì vậy, cần thiết xây dựng phương pháp định lượng đồng thời chất này, phù hợp với điều kiện nước, tiết kiệm chi phí kiểm định chất lượng Từ sở trên, khoá luận tốt nghiệp dược sĩ đại học:“ Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng đồng thời rupatadin chất bảo quản paraben siro sắc ký lỏng hiệu cao” tiến hành với hai mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời rupatadin methyl paraben propyl paraben sắc ký lỏng hiệu cao Thẩm định phương pháp phân tích xây dựng ... học:“ Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng đồng thời rupatadin chất bảo quản paraben siro sắc ký lỏng hiệu cao? ?? tiến hành với hai mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời rupatadin. .. NGỌC ĐỨC MÃ SINH VIÊN: 1701090 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI RUPATADIN VÀ CHẤT BẢO QUẢN PARABEN TRONG SIRO BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ... 16 2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời rupatadin, methyl paraben propyl sắc ký lỏng hiệu cao 16 2.2.2 Thẩm định phương pháp định lượng 16 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN