TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LBM HÓA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ DƢỢC IỆU BÁO CÁO KIỂM NGHIỆM NGỤY TẠO DEXAMETHASON VÀ BETAMETHASON TRONG ĐÔNG DƢỢC G ƣ PGS TS M V T T ự ệ L Vă Bẩy L CKI K ể ệ T ố 2022 Cần Thơ, năm 2022 TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LBM HÓA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ DƢỢC IỆU BÁO CÁO KIỂM NGHIỆM NGỤY TẠO DEXAMETHASON VÀ BETAMETHASON TRONG ĐÔNG DƢỢC N t L C u v t 20 2022 H L Vă Bẩy 20121010507 Cần Thơ, năm 202.
TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LBM HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ DƢỢC IỆU BÁO CÁO KIỂM NGHIỆM NGỤY TẠO DEXAMETHASON VÀ BETAMETHASON TRONG ĐÔNG DƢỢC G T ự ƣ ệ L Vă Bẩy PGS TS L CKI K ể Cần Thơ, năm 2022 M V ệ T T ố -2022 TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LBM HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ DƢỢC IỆU BÁO CÁO KIỂM NGHIỆM NGỤY TẠO DEXAMETHASON VÀ BETAMETHASON TRONG ĐÔNG DƢỢC N L C H t u v t L Vă Bẩy Cần Thơ, năm 2022 20 -2022 20121010507 i LỜI CẢM ƠN Quyể b y đƣợc hoàn thành dựa tham khảo tài liệu nghiên cứu có liên quan, sách, báo chuyên ngành nhiều tác giả, đặc biệt ƣ ự n quý thầy cô ệ , hợp tác t t thành viên nhóm T ƣ c tiên, nhóm báo cáo chúng em xin gửi lời M PGS TS T ầy T ạo m yề đạt tận tình kiến công việc củ X V s đ ều kiện, tậ đƣợc ô ể để quan ệ sau l ô t viên, h trợ l n nhau, giải nhữ ƣ ng d n, ức quý báu kinh nghiệm bổ í i rèn luyện, nhằm nâng cao kỹ ă ƣờ Dƣợ s l sắ đến cô ă ú đỡ, đ ng ực Trong trình thực chắn khơng tránh khỏi thiếu sót, nhóm báo cáo kính mong nhậ đƣợc góp ý, nhận xét từ q Thầy để nhóm rút đƣợc kinh nghiệm quý báo bổ ích cho báo cáo Cuối cùng, nhóm báo cáo chúng em xin kính chúc q Thầy Cơ dồi nhiều sức khỏe, thành công công việc cu c sống Trân tr ng ! ii MỤC ỤC ỜI CẢM ƠN i MỤC ỤC ii DANH MỤC CH VI T TẮT v DANH MỤC CÁC H NH vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Tổng quan glucocorticoid (GC) 1.1.1.Nguồn gốc glucocorticoid 1.1.2.Tác dụng sinh lý glucocorticoid 1.1.3.Chỉ định glucocorticoid 1.1.4.Tác dụng phụ glucocorticoid 1.1.5.Tính ch t lý hóa glucocorticoid nghiên cứu 1.2.Thực trạng sử dụng thuốc đông dƣợc điều trị thấp khớp, viêm khớp 1.2.1.Sơ lƣợc thuố đô ƣợ đ ều trị viêm kh p, th p kh p 1.2.2.Tình trạng tr n glucocorticoid vào thuố đô ƣợ đ ều trị viêm kh p, th p kh p Việt Nam 1.3.Các nghiên cứu phân tích định tính, định lƣợng glucocorticoid thuốc đông dƣợc điều trị viêm khớp thấp khớp í 1.3.1.Nghiên 1.3.2.Nghiên định í ƣơ đị lƣợng xử lý m u 11 1.4.Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 12 ƣơ 1.4.1 Nguyên tắc chung củ 1.4.2 M t số đạ lƣợ đặ ƣ sắc ký lỏng 14 sắc ký lỏng 15 1.4.3 Kỹ thuật HPLC v i detector D D y ứ 17 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1.Đối tƣợng nghiên cứu 19 2.2.Hóa chất, thuốc thử, chất chuẩn - trang thiết bị 19 iii 2.2.1.Hóa ch t, thuốc thử, ch t chuẩn: 19 2.2.2.Trang thiết bị - Dụng cụ 19 2.3.Phƣơng pháp nghiên cứu 20 2.3.1 Khả s đ ều kiện sắc ký tố ƣ 20 2.3.1.1 u 2.3.1.2 u 2.3.2 X 20 u u 20 định quy trình chiết xu t thích hợp 22 2.3.3 T ẩ sắ s đị ý lỏ y đị HPL đầ 2.3.3.1 Xá đ tí đặ 2.3.3.3 Tí tuyế tí 2.3.3.5 ộ BM, DXA bằ ƣơ tí t ố 24 u 24 25 át 2.3.3.4 đồ ò PDA 24 tươ 2.3.3.2 Tí lƣợ O v đ O 25 í xá 27 2.3.3.6 ộ đú 28 2.4 Phƣơng pháp xử lý số liệu 29 2.5 Đạo đức nghiên cứu 29 Chƣơng K T QUẢ NGHIÊN CỨU 30 3.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký 30 3.2 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu 32 3.3 Thẩm định phƣơng pháp 36 3.3.1 Tí ƣơ í ệ thống 36 3.3.2 Tí đặc hiệu 39 3.3.3 Tính tuyến tính 40 3.3.4 G 3.3.5 í 3.3.6 đú ệ LOD x đị lƣợ LOQ 42 y 43 46 Chƣơng BÀN LUẬN 44 4.1 Khảo sát dung môi pha động tỉ lệ pha động 46 4.2 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu 46 iv 4.3.Thẩm định quy trình định lƣợng 46 4.3.1 Tí ƣơ í ệ thống 48 4.3.2.Tính tuyến tính 48 4.3.3.Tí đặc hiệu 50 4.3.4 G 4.3.5 í 4.3.6 đú ệ LOD x đị lƣợ LOQ 50 y 51 51 K T LUẬN 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 PHỤ ỤC 54 v DANH MỤC CÁC TỪ VI T TẮT Chữ viết tắt ACN AOAC Tiếng Anh Acetonitril Association of Official Analytical Community Tiếng Việt Acetonitril Hệ í D VN DL GLP LOD LOQ MeOH RSD SD HPLC DAD ố ế Dƣợ đ ể V ệ N Dƣợ l ệ Good Laboratory Practice Limit of Detection Limit of Quantification Methanol Relative Standard Deviation Standard Deviation High Performance Liquid Chromatography Diods Array Detertor T ự ố ò G G ạ đị lệ ẩ ý lỏ Tử ệ ệ lƣợ ƣơ lệ Sắ í đố ẩ ệ -K ả ă cao ế vi DANH MỤC CÁC H NH Hình 1.1 P ổ UV ủ ú Hình 1.2 ủ x s x s Hình 1.3 P ổ UV ủ b ú Hình 1.4 Hình 2.1 Hệ ố Sơ đồ H Sắ l s Hình 1.6 H s ủ b Hình 1.5 Sơ đồ l ệ ố UPL -MS/MS ả sắ ý lỏ ả s ý đồ - ƣ (DAD) ệ ă y HIT HI HPL đầ ò PD ế x s b s lệ l :30, (b) 50 :50, (c) 40 :60, (d) 30 :70 H Sắ ý đồ x H Sắ ý đồ ị H Sắ ý đồ ị s b ế s ố đ M OH, b M OH – ƣ l ạ bằ ƣ M , ắ ò Etyl acetat ả lậ , b M ả lậ H Sơ đồ H Sắ y xử lý ý đồ ị ắ ế ắ M ả lậ l ạ , (c) M ả lậ ƣ l ạ , ả lậ l ạ , b M H ợ ẩn H Q y xử lý H Sắ ý đồ H Sắ ý đồ H 10 Sắ H 11 H 12 ự ợ ẩ s ệ lầ ả lậ ẩ ý đồ í l ủ ị ƣơ ữ ồ ị ƣơ ữ ợ ẩ ƣơ s lầ đ ệ đ í ệ đ ủ b í ủ s x acetat H Sắ ý đồ ế Hình 3.14 Sắ ý đồ ủ H Sơ đồ y í ủ betamethason ị xử lý M dexamethasone acetat M – M6) ự ệ , s vii H Sắ ý đồ ị ắ ế M ả lậ l ạ , ắ ả lậ M ẩ s lầ ẩ H Sắ ý đồ H Sắ ý đồ ợ ả lậ s lầ ƣ l ạ , ả lậ l ạ , b M H ợ viii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thống kê thuố đô ƣợ , ƣợc liệ l y để kiểm tra ch lƣợng từ ă Bảng 1.2 Các thuố đô ô đạt ch lƣợng qua m u – 2013 ƣợc tr n trái phép hoạt ch ƣợc phát tỉnh Hậu Giang Bảng 1.3 S s đ ều kiện sắc ký tố ƣ ứu Bảng 1.4 So sánh quy trình xử lý m u tài liệu nghiên cứu Bả ế bị ự Bả lặp lại tố đ ệ lƣợ p nhận tạ theo phụ lục F AOAC Bả Bả thu hồi ch p nhận N ậ x đ sắ ò ý đồ l x s ú, l ú, Bảng 3.2: Bảng kết khả s í Bảng 3.3 Bảng kết khả s thêm chuẩ lƣợ ƣơ í b l í ƣơ đ O s ú, l ố ú ệ thống m u chuẩn í ệ thống m u thử ả lập l Bảng 3.4 Bảng phân tích tuyến tính betamethason Bảng 3.5 Bảng phân tích tuyến tính dexamethasone acetat Bả Kết khả s đ í x ủ B Bả Kết khả s đ í x ủ D x Bả Kết lƣợ Bả Kết lƣợ B s D x s s s y y ả lậ ả lậ 45 Bả SD 0.016 78029 0.77 RSD% 0.38 0.83 0.85 3.9 Kết lƣợ Diện tích đỉnh S (mAU) 8542728 ƣợng tìm thấy (%) Thời gian lƣu tR (ph t) 5.64 50 5.59 8561911 85.77 50 5.59 8510333 85.23 50 5.61 8587956 86.05 50 5.59 8616548 86.35 50 5.59 8762062 87.88 TB 5.60 8596923 86.14 SD 0.02 88766 0.93 RSD% 0.36 1.03 1.08 - Lƣợ y =9 ủ O O l ềđ đ %– T y 120% (60 y % ể ựđ ủ í s ầ ƣợng mẫu thêm vào (ppm) 50 Mẫu thử b y Dexamethasone acetate l để x s % – 110% ủ % ầ l ả í x í x , % ằ ằ b ệ 85.57 ửđ = ƣơ ả ự ế ầ ả lậ ả s đ x s % g/ml), 46 Chƣơng BÀN UẬN 4.1 Khảo sát dung môi pha động tỉ lệ pha động T ả ổbế í đả l CAN - H2O N đả G s ế ả s HPLC pha ệ dung môi ACN – H2O , ệ đẹ , đƣợ sử ụ ƣơ x , đ bằ l ẩ đố ƣơ Kế đồ ứ ả y BT, DX ô số sắ ý đề ầ Tố đ ò l ợ ú , 0.9ml ẩ BT, DX , , b s ầ y l ậ x ị ỉở ú s ú,ở ú đƣợ lƣ l ố đ ú, ệ sắ ý ố ƣ đƣợ lự ự ệ T để đị x , – ƣ x s ƣs l đ lƣợ x + Detector: DAD Bƣ s ệ UV T ể í μl Tố đ ò , T Nồ l í đ ú ú ẩ l l 4.2 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu Từ ế ả ự ệ , y xử lý đƣợ x y ự ể ả đ ô methason P ú , 0.7ml đố l 4.2 phú ặ ề ú , 0.8ml phân tích b ACN – H2O (70:30 l ố ƣ ợ đạ y y ệ T đ hệ ứ ƣs ủ 47 H Q 4.1 Sơ đồ ự ệ - L ạ bằ b ự ệ y: ƣ ế s í >9 % ắ x - Dị đ xử lý ểl ầ ế ả lậ ô ự ,l ề sạ - Dị ệ y ế đỉ ạ lƣ ủ s ủ x ò ả lậ ẩ s % – 110% ồ đ đ > % ằ lệ ệ í lầ lƣợ đố y đỉ s b ầ s ủ O ề 48 H 4.2 Sắ ắ ý đồ ị ế M ả lậ l ạ , (c) M ắ ả lậ ƣ l ạ , b M ả lậ l ạ , H ợ ẩ 4.3 Thẩm định quy trình định lƣợng 4.3.1 í Tí ƣơ í ợ đố RSD b ủ t í ủ ệ ố đƣợ x í sắ s ả lậ t ệ s x tươ ý lầ b Mẫu đị ự lƣ l ế s đ ủ lệ x s ị đ 100 ẩ ợ ẩ l đ 500 µg/ml uẩ ỗ ợ Bet et so v Dex et so et t Nhận xét: Kết cho th y: lƣ - RSD% thông số thờ - RSD% diệ í - Hệ số b đố - Số đ lý Kết luậ Q y đạ í % ƣơ TB = í % % TB = yế N > 7% 79% TB = ả Rs > - đỉ % ệ thố ẩ 49 H 4.3 Sắ Mẫu t ả l ý đồ ợ t ỗ ợ ẩ s Bet lầ et so v Dex et acetat Nhận xét: Từ bảng kết cho th y: lƣ - RSD% thơng số thờ í - RSD% diệ - Hệ số b đố ả Rs > - Số đ lý Kết luậ đỉ % 97% TB = 99 đạ í ƣơ H 4.4 Sắ ý đồ % % TB = yế N > Q y % TB = í ệ thố ả lậ s lầ ả lậ so 50 4.3.2 í Kế ắ đặ ả ự ả lậ ủ u ệ ô x ệ ẩ Sắ ả lậ ý đồ ủ đặ ề í ệ đả đƣợ ý đồ ủ ô ứ ế ả lậ ế sắ ế ƣơ lƣ í y ế ệ sắ í ý đồ , ý đồ ủ bả để í , ẩ ả lậ sắ đ ẩ x D đ , s ƣơ b s ả s 4.3.3 í tuyế tí -T ả ủ betamethason g/ml - 125g/ml đ x quan R2 lầ lƣợt l s ụ ệ í đ yế í ệ số ƣơ 9999 betamethason) v (dexamethasone acetat) - P ƣơ y ủ betamethason đƣợ b ể ễ l : y = 202855x + 270103, R2 = 0.9999 - P ƣơ y ủ x s đƣợ b ể ễ l y= 189884x + 418329, R2 = Sử ụ s F s x b ủ ƣơ T để đề í ƣơ ƣơ yế í , ệ số í ủ ệ số b ý át LOD v đ lệch chuẩn củ đ ẩ Gi i hạn phát hiệ betamethason y s 4.3.4 Dự ể đị ứng (S lượ E LOD dexamethasone acetat tính đƣợ LOQ đ dốc ủ đƣờ đị lƣợ LOQ ủ ƣs Betamethason Dexamethasone acetate ; Tuy nhiên, ệ x đị LOD, LOQ sử ụ ị l ã 51 đ ả ầ , để x đị đ ứ ủ ế bị ƣờ đƣợ yế í Q lệ ự ẩ ệ ƣơ 4.3.6 y: P ƣơ đố RSD ủ ị acetate ệ ủ ủ ƣơ í O O ,đ Dexamethasone 1.03%) y x ềđ ầ s ằ ả x x Bethamethasone % í betamethasone ệ í t u betamethasone = 90.36% ầ đ í 7.3% ( - Lƣợ y y xác 3.3.5 ửđ % – 110% C ủ % x cao, = 86.14% ằ O ể ựđ đ l 80% – 110% dexamethasone acetat T y đ í g/ml), 120% (60 ầ l để ả l ự ế ả 52 K T UẬN Q ự ệ đƣợ ế ảđ ứ đƣợ ụ nghiên ứ - X y b s đầ cao đƣợ , x ƣ í ụ í bằ đị bằ -T y ểứ s đị s DAD đạ đị đị ƣơ lƣợ sắ ý lỏ đồ ệ ă ò DAD - T ẩ x ự ƣơ ủ , s yđ , ầ để í í , đị sắ đồ b ý lỏ ệ ă ỉ ò ƣ ỉ ƣơ cao s , đầ O ự lƣợ ệ ự ế số để ệ , ò ò 53 TÀI IỆU THAM KHẢO N yễ ứ ứ T ă ,X bằ HPL , T ầ T ị D ệ O ẩ đị ƣơ ý lỏ ƣơ sắ y , T ị Q y, l HPL ”, Tạ íKể ệ ẩ ,N ứ x y ự ế s ẩ ệ Y ƣợ , “X y ự ă ƣợ l ệ ”, T ý lỏ ự H ẩ ụy T ị s Dƣợ H N sắ L ậ l số , N ô Vă T y , Tô M ế T ầ N đị í đồ í Y ọ quâ sự, Số í ƣợ đ ề ă đầ ị số bằ ò U -Vis, L ậ ă ầ T Sơ , “N ứ ệ ố đô ƣợ bằ ƣơ T ố , Tậ số , số -17 AOAC International (2016), Guidelines for Standard Method Performance Requirements, AOAC Official Methods of Analysis, pp 1-18 54 PHỤ ỤC PHỤ LỤ H PL H PL DỮ LIỆU KIỂM TR TÍNH TƢƠNG THÍ H HỆ THỐNG Sắ Sắ ý đồ ý đồ ể í ể TTHT í TTHT ợ ẩ ả lậ 55 PHỤ LỤ DỮ LIỆU KIỂM TR TÍNH TUYẾN TÍNH H PL Sắ ý đồ ể í yế í Hình PL 2.2 Sắ ý đồ ể í yế í 56 PHỤ LỤ KẾT QUẢ X Y DỰNG QUY TR NH X Hình PL 3.1 Sắ H PL Sắ ý đồ ý đồ ả s ả s ô y L M U ế l ạ 57 Hình PL 3.3 Sắ Hình PL 3.4 Sắ ý đồ ý đồ ắ l ạp ả lậ l ạ 58 Hình PL 3.6 Sắ ý đồ PHỤ LỤ KẾT QUẢ Hình PL 4.1 Sắ ả lậ l ạ HIỆU ý đồ ả s đ đặ ệ 59 PHỤ LỤ KẾT QUẢ Hình PL 5.2 Sắ HÍNH XÁ ý đồ ả s đ í x ... đ ều trị viêm kh p, th p kh p Việt Nam 1.3.Các nghiên cứu phân tích định tính, định lƣợng glucocorticoid thuốc đơng dƣợc điều trị viêm khớp thấp khớp í 1.3.1 .Nghiên 1.3.2 .Nghiên. .. lƣợng xử lý m u 11 1.4.Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 12 ƣơ 1.4.1 Nguyên tắc chung củ 1.4.2 M t số đạ lƣợ đặ ƣ sắc ký lỏng 14 sắc ký lỏng 15 1.4.3 Kỹ thuật HPLC v i... đƣợ ự ệ ằ ế phép vào ƣờ ẩ yêu ầ đề ầ ị viêm ế B , PDA? ?? ụ ằ sau: ươ ể l ậ “N pháp s để ƣợ đ phân tích Dexamethason acetat bethamethason đ u tr t ấ ụ số đô dexamethason acetat bethamethason ầ ế