Đang tải... (xem toàn văn)
TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ KHOA DƯỢC LBM HÓA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT O C O CHUY N ĐỀ SIMINAR PH N T CH DỤNG CỤ 1 TÌNH HÌNH SÀNG LỌC CÁC BỆNH LÝ RỐI LOẠN CHUYỂN HÓA Ở TRẺ SAU SINH TRÊN THẾ GIỚI VÀ TẠI VIỆT NAM; GIẢI PHÁP CAN THIỆP ĐIỀU TRỊ; VẤN ĐỀ Y ĐỨC TRONG THỰC HIỆN SÀNG LỌC NÀY TRÊN THẾ GIỚI VÀ TẠI VIỆT NAM 2 ỨNG DỤNG CỦA PHƯƠNG PH P LC MSMS (QUÁ TRÌNH LẤY MẪU MÁU GÓT CHÂN, XỬ LÝ MẪU, KIT PHÂN TÍCH, PHÂN TÍCH TRÊN HỆ THỐNG LC MSMS, GIẢI THÍCH KẾT QUẢ) TRONG SÀNG LỌC CÁC BỆNH L.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ KHOA DƯỢC LBM HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT O C O CHUY N ĐỀ SIMINAR PH N T CH DỤNG CỤ TÌNH HÌNH SÀNG LỌC CÁC BỆNH LÝ RỐI LOẠN CHUYỂN HÓA Ở TRẺ SAU SINH TRÊN THẾ GIỚI VÀ TẠI VIỆT NAM; GIẢI PHÁP CAN THIỆP ĐIỀU TRỊ; VẤN ĐỀ Y ĐỨC TRONG THỰC HIỆN SÀNG LỌC NÀY TRÊN THẾ GIỚI VÀ TẠI VIỆT NAM ỨNG DỤNG CỦA PHƯƠNG PH P LC-MS/MS (QUÁ TRÌNH LẤY MẪU MÁU GĨT CHÂN, XỬ LÝ MẪU, KIT PHÂN TÍCH, PHÂN TÍCH TRÊN HỆ THỐNG LC-MS/MS, GIẢI THÍCH KẾT QUẢ) TRONG SÀNG LỌC CÁC BỆNH LÝ RỐI LOẠN CHUYỂN HÓA ACID AMIN, ACID HỮU CƠ VÀ ACYLCARNITIN Ở TRẺ SAU SINH Giảng viên h Nh th ng hi n: n: PGS Đỗ C uM CK K ể Cầ T - 2021 ệ V T ọ 2020 -2022 TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ KHOA DƯỢC LBM HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT O C O CHUY N ĐỀ SIMINAR PH N T CH DỤNG CỤ t Chuyên khoa T u v t -2022 Lê Văn Bẩy 20121010507 Cầ T - 2021 100% LỜI CẢM ƠN Tr c hết, nh th y PGS Đỗ h u Minh V nh Th truyền đ t, h iến th thê báo áo huyên đề xin gửi lời ảm ơn h n th nh đến iến th ng n thật nhi t t nh bổ í h, đ ng thời t o điều ki n ho nh đ iv i n ph n tí h ng ng thông qua th , ập nhật hi n huyên đề Đ th hi n đ ợ vi h n, ung ấp t i i u th th hi n huyên đề nh ng th nh viên h hăn, v cho t nh b n giữ nh ng huyên đề nh đ n ng đ đ ợ s qu n t hảo ho nh th y thông qu nghiên u Trong hi o đ ợ t nh th n đo n ết, u n động viên, giúp đỡ, hỗ trợ ắ đ ho n th nh nhi vi nh , n nh u ùng giải v , đ ng thời qu đ ũng giúp th nh viên đ ợ th n thiết Trong tr nh th hi n hắ h ng tránh hỏi thiếu s t, ính nhận đ ợ s g p ý, nhận xét từ th y đ nh rút r đ ợ inh nghi ong quý báo v bổ í h u i ùng, xin ính hú th y nhiều s hỏe, th nh ng ng vi uộ s ng! Tr trọ v MỤC LỤC Đ T VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: T NH H NH SÀNG LỌC C C ỆNH L RỐI LOẠN CHUYỂN H A Ở TRẺ SƠ SINH TR N THẾ GIỚI VÀ TẠI VIỆT NAM GIẢI PH P CAN THIỆP ĐIỀU TRỊ VẤN ĐỀ Y ĐỨC TRONG THỰC HIỆN SÀNG LỌC SƠ SINH TR N THẾ GIỚI VÀ TẠI VIỆT NAM 1.1 Giải thí h từ ngữ 1.1.1 Sàng l c 1.1.2 R i lo n chuy n hóa trẻ sơ sinh 1.1.3 Chẩn đoán sơ sinh 1.1.4 Bất th ờng nhiễm sắc th 1.1.5 Dị tật bẩm sinh 1.2 Tình hình sàng l c b nh lý r i lo n chuy n hóa trẻ sơ sinh gi i t i Vi t Nam 1.2.1 Tình hình sàng l c b nh lý r i lo n chuy n hóa trẻ sơ sinh gi i 1.2.2 Tình hình sàng l c b nh lý r i lo n chuy n hóa trẻ sơ sinh Vi t N 1.3 Giải pháp can thi p, điều trị b nh ý iên qu n đến s ng trẻ sơ sinh 12 1.3.1 Thiếu men G6PD (Glucose-6-phosphatase dehydrogenase) 13 1.3.2 B nh thi u tuyến giáp bẩ sinh 17 1.3.3 B nh tăng sản tuyến th ợng thận bẩ 1.3.4 B nh r i o n huy n h sinh 19 sơ sinh 21 1.4 Vấn đề y đ c th c hi n sàng l sơ sinh gi i t i Vi t N CHƯƠNG II: HỆ THỐNG SẮC K LỎNG GH P HAI LẦN KHỐI PH SỬ DỤNG TRONG PH N T CH ỆNH L 24 RỐI LOẠN CHUYỂN H A ACID AMIN, ACID HỮU CƠ VÀ ACYLCARNITIN Ở TRẺ SƠ SINH 32 2.1 thuật ngữ 32 2.2 Tổng qu n h th ng sắ ý ỏng ghép đ u dò kh i phổ hai l n 37 2.2.1 Đ u dò hai l n kh i phổ (MSMS) 37 2.2.2 H th ng sắc ký lỏng ghép n i v i đ u h i phổ b n t c c (LC- MS/MS) 40 2.3 H th ng sắ ý ỏng ghép h i n h i phổ sử r i lo n chuy n hóa acid amin, acid hữu v 2.3.1 Quy tr nh h n thiết bị v ph n y ng s ng b nh ý rnitin trẻ sơ sinh 41 ề 42 2.3.2 L a ch n chế độ thu thập li u (Fullscan so v i theo dõi phản ng ch n l c) 44 CHƯƠNG III: ỨNG DỤNG CỦA PHƯƠNG PH P LC-MSMS TRONG SÀNG LỌC C C ỆNH L RỐI LOẠN CHUYỂN H A ACID AMIN, ACID HỮU CƠ VÀ ACYLCARNITIN Ở TRẺ SỎ SINH 48 3.1 Các chất chuy n h đ ợ đo MS/MS đ phát hi n b nh lý r i lo n chuy n hóa acid amin, acid hữu v 3.2 Ứng d ng c y rnitin trẻ sơ sinh 48 ph ơng pháp L -MS/MS sàng l c b nh lý r i lo n chuy n hóa acid amin, acid hữu v 3.2.1 Quá trình lấy m u y rnitin trẻ sơ sinh 54 áu g t h n trẻ sơ sinh 54 3.2.2 Thu c thử, chuẩn nội, đ 67 3.2.3 Quy tr nh xử ý 3.2.4 Ph n tí h u 73 u đ xử ý h th ng L -MS/MS 78 3.2.5 Tính tốn, tiêu chí chấp nhận, báo áo, giải thí h ết ph n tí h 94 C KẾT LUẬN 104 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Từ nguyên 3MCC 3-methylcrotonyl-CoA carboxylase deficiency 3MGA 3-methylglutaconic aciduria ACMG American Collegeof Medical Genetics CBS Cystathionine beta-synthase CDC Centers for Disease Control and Prevention CID Collision-induced dissociation CUD Carnitine uptake defect CV Coefficient of variation Da Dalton DBS Driedblood spot DC Direct current EQA External quality assessment ESI Electrosprayionization FAO Fattyacid oxidation HRSA Health Resources and Services Administration ISO International Organization for Standardization IVA Isovaleric acidemia LC Liquid chromatography LoD Limit of detection MADD Multipleacyl-CoA dehydrogenase deficiency MCAD Mediumchain acyl-CoA dehydrogenase deficiency MCT Medium chain triglyceride MMA Methylmalonic aciduria MMADHC Methylmalonic aciduria and homocystinuria MRM Multiple reaction monitoring MS Mass spectrometry a Thiếu carboxylase 3-methylcrotonyl-CoA 3-methylglutaconic acid ni u Đ i h c di truyền y khoa Hoa Kỳ cystathionine beta-synthase Trung tâm Ki m soát Phòng ngừa dịch b nh Phân ly va ch m Khiếm khuyết hấp thu Carnitine H s biến thiên Dalton Đ m máu khô D ng n chiều Đánh giá hất ợng bên Ion h n tử Oxy hóa axit béo Quản lý tài nguyên dịch v y tế Tổ ch c Qu c tế Tiêu chuẩn hoá Thiếu máu isovaleric Sắc ký lỏng Gi i h n phát hi n Thiếu h t acyl-CoA dehydrogenase Thiếu h t acyl-CoA dehydrogenase chuỗi trung bình Triglyceride chuỗi trung bình axit ni u Methyl ni u acid ni u homocystin ni u Giá sát đ phản ng Kh i phổ MS / MS MSUD MTHF NICU Tandem massspectrometry/tandem mass spectrometer Maple syrupurine disease Methyltetrahydrofolate Neonatalintensivecare unit OA PA PEEK PT QA QC RF RRF SD SRM SUAC TAE TIC TPN UloL Organic acidemia Propionicacidemia Polyetheretherketone Proficiencytesting Qualityassurance Quality control Radiofrequency Relative response factor Standard deviation Selected reaction monitoring Succinylacetone Totalanalytical error Totalion chromatogram Totalparenteral nutrition Upper limitof linearity Kh i phổ kế song song K nh syrup phong ni u Methyltetrahydrofolate Tổ ch hă s đặc bi t dành cho trẻ sơ sinh Toan máu axit hữu Toan máu axit propionic Polyetheretherketone Ki m tra thành th o Đảm bảo chất ợng Ki m sốt chất ợng T n s vơ tuyến H s đáp ng t ơng đ i Độ l ch chuẩn Giám sát phản ng ch n l c Succinylacetone Tổng lỗi phân tích sắc ký ion tổng tổng ợng inh ỡng gi i h n c a tuyến tính DANH MỤC C C H NH Hình 1.1 Trẻ bị b i n o 14 Hình 1.2 ( ) Lá v ho y đậu tằ ; (b) H t v vỏ đậu tằ ; ( ) Quả đậu tằ s u thu ho h 14 Hình 1.3 Trẻ bị thi u tuyến giáp bẩ sinh 18 Hình 2.1 Sơ đ gi o i n ESI 38 Hình 2.2.Sơ đ kh i c đ u dị kh i phổ ba l n t c c 38 Hình 2.3 Sơ đ kh i c a ba t c c n i tiếp (Triple quadrupole) 39 Hình 2.4 Nă ph n quan tr ng vi c áp d ng MS/MS sàng l sơ sinh 41 Hình 3.1 B u áu g t h n trẻ sơ sinh 54 Hình 3.2 B u áu g t h n trẻ sơ sinh 55 Hình 3.3 B u áu g t h n trẻ sơ sinh 55 Hình 3.4 B u áu g t h n trẻ sơ sinh 56 Hình 3.5 B u áu g t h n trẻ sơ sinh 56 Hình 3.6 B u áu g t h n trẻ sơ sinh 57 Hình 3.7 B u áu g t h n trẻ sơ sinh 57 Hình 3.8 B u áu g t h n trẻ sơ sinh 58 Hình 3.9 B u áu g t h n trẻ sơ sinh 58 Hình 3.10 B 10 u áu g t h n trẻ sơ sinh 59 Hình 3.11 M u áu đ t chuẩn 59 Hình 3.12 L ợng m u h ng đ cho xét nghi m 60 Hình 3.13 M u máu thấm nham nhở giấy thấm 60 Hình 3.14 M u áu h ng h tr hi đe gửi b u n 61 Hình 3.15 M u có gi t máu thấm lan sang gi t khác 61 Hình 3.16 M u máu bị pha loãng, màu bị nhiễm bẩn 61 Hình 3.17 M u máu có vịng huyết 61 Hình 3.18 M u máu bị đ ng c t o thành l p 62 Hình 3.19 M u h ng áu 62 Hình 3.20 Miếng gấp tờ giấy lấy m u áu 67 Hình 3.21 Bộ it ph n tí h MSMS 76 Hình 3.22 Tiêm m u 20 µL v i t độ ng h ng đổi 100 µL / phút 81 Hình 3.23 Khoảng thời gian mở rộng c a tín hi u ổn định từ th tích tiêm 82 Hình 3.24 Ba phổ ion tiền chất c a Carnitine C16 d3-C16 hi n thị độ phân giải khác 84 Hình 3.25 Tính tốn LoD 88 DANH MỤC C C ẢNG ả 1.1 Ng y S ng bắt buộ h ơng tr nh s ng sơ sinh Ho Kỳ Bảng 1.2 Các lo i thu c c n tránh lo i thu c có th sử d ng ng ời bị thiếu men G6PD 15 Bảng 3.1 R i o n i hữu 48 Bảng 3.2 R i o n oxi h i béo 49 Bảng 3.3 R i o n oxi h i béo 51 Bảng 3.4 Bảng 3.5 i in 52 y rnitine 53 Bảng 3.6 tr ờng hợp v nguyên nh n th n đến u áu h ng đ t huẩn 60 Bảng 3.7 Ví d chuẩn thay 70 Bảng 3.8 Tóm tắt vỏ đ th ờng đ ợc sử d ng 72 Đ T VẤN ĐỀ Thành t u v đ i y h c c a kỷ XX đ sản xuất V đe t r đ ợc kháng sinh in đ điều trị phòng ch ng b nh gây nên vi khuẩn Nh ng a đến s c khoẻ on ng ời vi sinh mà cịn có mơi sinh Từ kỷ XX ng ời t đ qu n sát thấy có s b nh tật sinh s gi đ nh, ột đị ph ơng, ột ch ng tộc định Đ b nh lý phân tử, mang yếu t di truyền v gi đ nh, b nh lý r i lo n nội môi bên th c on ng ời Những r i lo n không gây chết ng ời ng y nh b nh cấp tính, nhiễm khuẩn nh ng tá h i to l n dến trình phát tri n v tr ởng on ng ời Nếu không kịp thời phát hi n, điều tiết, bổ sung kịp thời thành c khuyết tật mang tính bẩm sinh, d n đ a trẻ đến tàn phế, gánh nặng cho gi đ nh v x hội khơng nhỏ, s ng ời mắc b nh lý khơng cộng đ ng, có th âm th m lan truyền giòng h , ch ng tộc, ảnh h ởng đến chất ợng dân s Đ làm sàng l tiền đề đ ngành hă s s c khỏe gi i đề xuất bi n pháp sơ sinh, nhằm phát hi n s m, can thi p kịp thời b nh lý r i lo n nội tiết chuy n hoá di truyền ph ơng pháp thiết yếu đ phát hi n acid amin, acylcarnitin v hữu từ m u máu khô cách sử d ng kh i phổ song song đ đ ợc phát tri n v o đ u nă 1990 v đ ợ đ nhân h c thuật Đến nă v o th c hành lâm sàng phòng thí nghi t 2000, ph n tí h kh i phổ song song c a chất chuy n hóa đ ợ th ng qu đ sử d ng ba phịng thí nghi m y tế cơng cộng t i Hoa Kỳ Hi n nay, kỹ thuật đ l c toàn gi i, s rộng h u hết tất h ơng tr nh s ng ợng r i lo n chuy n h đ đ ợc phát hi n kh i phổ song song ph thuộ v o h ph n tí h đ ợc th c hi n, ph ơng pháp b n đ u có th phát hi n 60 m sinh h c Kh i phổ song song công ngh khác bi t so v i h th ng đ ợc sử d ng tr đ y h u hết phịng thí nghi m sàng l sơ sinh Đ y 93 Thiết lập tỷ l dươ t Một yếu t vi xá định xe ợng kết hợp hay không s Đ xá định tỷ l ng ỡng c a chất phân tích có phù ơng tính đ ợc t o ơng tính, ột m u DBS b nh th ờng khác (t i thi u 1000) nên đ ợc phân tích Từ li u kết hợp v i h 3.2.4.2.Ph n tiêu hí hấp nhận ết quả), có th (xem ng d n giải thích c tính s ợng kết ơng tính đ ợc t o Một s điều chỉnh ng ỡng phân tích phù hợp ợng kết s khơng có kết ng ỡng u tiên, lặp l i sàng l á lạ ơng tính đ ợc coi m ơng tính (giả (tăng ng ỡng) ng ỡng) Ngoài vi cc n thiết ki m tra xác nhận ột m c th h i (đ ờng biên gi i) có th đ ợc thiết lập đ đề nghị sơ sinh ưỡng Tr ờng hợp ng ỡng nên đ ợ đánh giá i: * Thiết b phương pháp hoặ th y đổi chuẩn n i M i th y đổi thiết bị, ph ơng pháp chuẩn nội đ ợc sử d ng đ đo phân tích định đảm bảo đánh giá ột chất i ng ỡng Phải tuân th quy tr nh đ ợc sử d ng M c 3.2.3.5 (thiết lập thẩ định ng ỡng phân tích) * Thử nghiệm mẫu thường quy ng ỡng nên đ ợc theo dõi chặt chẽ v i tháng đ u thử nghi m th ng th ờng Sử d ng th ng kê ph n mềm tính tốn, tính tốn l i ng ỡng c a chất ph n tí h nh đ ợc nêu ph n tính tốn ng ỡng ph n tí h Điều chỉnh ng ỡng nên đ ợc xem xét s giả nhiều đ ợ xe ơng tính ong đợi Tá động đến tr ờng hợp h ng đ ợc phát hi n c n xét hi th y đổi ng ỡng v giảm kết ợng kết h ng nên th y đổi có h há đ ơng tính giả nh sử d ng chất phân tích tham chiếu khác thiết lập phân tích phản x (bậc hai) v i ph ơng pháp há 94 * Thông tin lâm sàng Vi c mở rộng sàng l xá định tr sơ sinh MS/MS phát hi n nhiều r i lo n đ đ ợc đ tri u ch ng s ng v s u đ hỉ s u hi đ a trẻ bị b nh thời gian Các cấp độ ph n tí h tr ờng hợp khơng có tri u ch ng có th h ng đ ợ xá định rõ ho đến hi đ tr ờng hợp đ ợ xá định kết lâm s ng xá định Điều chỉnh ng ỡng có th c n thiết đ xá định r i lo n c th hoặ đ giảm thi u phát hi n điều ki n lành tính Vi xá định r i lo n h ng đ ợc phát hi n (âm tính giả) g y r đánh giá tr nh s ng g c bao đánh giá i ng ỡng c a chất phân tích 3.2.5 T tố , t ậ , báo áo, t ết u â t 3.2.5.1 Tính tốn ết qu ( nh lượng) Vi xá định kết chất phân tích có th đ ợc th c hi n hai ki u Phổ biến chuẩn nội, đ đ m trích xuất máu ch a chuẩn nội (xem ph n ung ị h hiết) Một ph ơng pháp há ph n tí h đ ờng cong hi u chuẩn bên ngo i đ ợc chuẩn bị từ chất phân tích * Phương pháp d Nguyên tắ ờng độ c v ochuẩn n i c a tính tốn kết (định ợng) xá định tỷ l đ i c a chất phân tích quan tâm c a chất chuẩn nội Kết phân tí h đ ợ xá định cách nhân tỷ l v i n ng độ c a chất chuẩn nội Một s biến đ ợc bao g m tính tốn n ng độ chất ph n tí h đí h v biến phải đ ợc nhập vào ph n mềm tính tốn c a MS/MS Cơng th c tính tốn c a n ng độ chất ph n tí h nh s u, ùng v i biến liên quan: 95 Trong đ : Canalyte = n ng độ chất phân tích m c tiêu (µM) Ianalyte = ờng độ chất phân tích m c tiêu (s giây) Vex = th tích m u chiết (µL) CIS = n ng độ nội chuẩn (µM) VBS = th tí h áu đ m (ví d 3,1 µL cho 1/8 inch (3,2cm) 50% hematoxrit) IIS = ờng độ nội chuẩn (s giây) RRF = h s đáp ng t ơng qu n (hi u suất chiết) xấp xỉ * Phương pháp d v o ngo i huẩn Sử d ng ngo i chuẩn bao g m phân tích tập hợp DBS có m c ph n tí h đ ợ xá định tr c Hi n t i, vật li u khơng có sẵn thị tr ờng phải đ ợc chuẩn bị phịng thí nghi , t ơng t nh ợng m c phân tích t i thi u phải ba, mặ sốt S nă Nếu có th , hai huẩn bị m u ki m ù đề nghị i ng ỡng, g n ng ỡng, hai ng ỡng Điều bắt buộc ph m vi c a cấp độ phân tích nằm ph m vi tuyến tính c a định ợng Các m c th c tế c a chuẩn ngo i c n phải đ ợc xác nhận tr d ng Đ huyến cáo chuẩn đ ợc gửi đến phịng thí nghi c sử đ i chiếu đ ph n tí h, đặc bi t cho vi c chuẩn bị b n đ u Chấp thuận tiêu hí nên đ ợc thiết lập tr đ xá định xem có th sử d ng chuẩn hay khơng M c hi u chuẩn h ng đáp ng tiêu chí thành lập c n phải đ ợc chuẩn bị l i Sau xác nhận b n đ u c a m độ chất phân tích c a phịng thí nghi m tham chiếu, chế phẩm hi u chuẩn có th đ ợc xác nhận đ i v i thử nghi m ki m soát đ ợ ph n tí h th ờng xuyên Làm n o th ờng xuyên hi u chuẩn đ ợc phân tích ph thuộc phịng thí nghi Th ng th ờng hi u chuẩn đ ợc phân tích l n ch y (ví 96 d , nhóm m u đ ợc chuẩn bị đ phân tích lú ) v đ ờng cong hi u chuẩn đ ợc áp d ng cho nhiều đ 96 giếng Các kết ki m soát ch y th ờng l nh hi đ ờng cong hi u chuẩn c n phải tái phân tích Sử d ng ph ơng tr nh Y = Mx + b, độ d c c đ ờng hi u chuẩn có th đ ợ xá định (Y = n ng độ hi u chuẩn, M = độ d c, x = MS / MS s b = x-chặn) Khi độ d c chặn đ ợc biết, phản ng từ đ 96 giếng có th đ ợc thay v o ph ơng tr nh ho “x” v n ng độ chất ph n tí h đ ợ xá định cách giải ho “Y” 3.2.5.2 Ti u hí hấp nh n ết qu Phịng thí nghi m nên thiết lập tiêu hí đ chấp nhận kết m u c a l n ch y MS/MS Các tiêu chí chấp nhận phải bao g đánh giá ết từ m u QC m u b nh nh n th ờng quy Mẫu soát t lư (QC): - V t liệu QC: đ ợc sử d ng cho xét nghi m MS/MS có th đ ợc lấy từ ngu n th ơng i hoặ đ ợc chuẩn bị phòng thí nghi m Trong h i tr ờng hợp, vật li u phải có m u v i m u b nh phẩm DBS c a b nh nhân (ví d : tồn máu khơ giấy l c) + Nếu đ ợc cung cấp th ơng i, nhà cung cấp nên cung cấp m độ mong đợi ph m vi chấp nhận đ ợc cho chất phân tích vật li u Mặc dù cấp độ có th đ ợc sử d ng ho đến hi đ s ợng (t i thi u 20 quan sát) đ tính giá trị trung bình SD, phân tích m u ki m soát chất ẩn s l n ch y tr ợng i d ng c ch y m u th ờng nhật đ xác nhận m c chất phân tích nằm thơng s kỹ thuật c a nhà cung cấp + Nếu m u ki (huyết t ơng) soát đ ợc chuẩn bị phịng thí nghi m, huyết th đ ợc chuẩn bị v i phân tích có sẵn đ ợ đo MS/MS Các m c ki m sốt thích hợp có th đ ợc th c hi n cách pha loãng 97 thêm huyết thanh, thêm th tích c a tế bào h ng c u đ ợc chấm giấy l c - Số lượng mẫu QC: t i thi u đ 96 giếng hai Một m u ki m soát phải ch a n ng độ chất ph n tí h ng ỡng (ki sốt ơng) v n ng độ i ng ỡng (ki m soát âm) Ki m sốt th ba có th ki m sốt th hai phải nằ ch a n ng độ chất phân tích t i ng ỡng g n ng ỡng Nếu r i lo n đ ợc phát hi n m ơng v độ thấp c a chất phân tích (ví d : UD), s u đ đ ợ đảo ng ợ (ngh i ng ỡng u ki m soát ơng; m c ng ỡng bị âm) Lý t ởng vị trí c a Các m u Q đ phải cho hi u suất có th đ ợc theo dõi tồn đ tr ng ng d ng MS/MS đ 96 giếng Điều có th khơng quan 96 giếng ch a chuẩn nội m i th y đổi hi u suất xét nghi m giữ đ u cu i đ 96 giếng có th đ ợc tính theo chuẩn nội - ánh giá v t liệu ki m soát chất lượng (chuẩn b phịng thí nghiệm): Vật li u QC chuẩn bị phịng thí nghi m c n đ ợ đánh giá đ thiết lập đặc tính hi u suất tr c sử d ng th ờng quy xét nghi m M c tiêu thu thập t i thi u 20 m li u từ nhiều l n ch y v s u đ tính giá trị trung bình SD Vi c thu thập li u QC m i đ ợc chấp nhận ch y đáp ng tiêu chí chấp nhận QC hi n có Nếu phịng thí nghi m có nhiều thiết bị, li u QC có th kết hợp từ tất thiết bị kết từ thiết bị đ ợ xá định gi ng Nếu h ng, s u đ ph m vi ki m soát riêng bi t nên đ ợc thiết lập cho thiết bị - Thiết l p tiêu chí ki m sốt chất lượng giám sát Khi hoàn thành đánh giá i m sốt, phịng thí nghi m c n thiết lập ph m vi chấp nhận đ ợc cho chất ph n tí h đo Gi i h n ki m soát i th ờng giá trị trung bình c a chất phân tích cộng trừ s bội s c a SD Phòng xét nghi m sàng l sơ sinh sử d ng MS/MS th ờng sử d ng chất phân 98 tích trung bình ± SD ph m vi QC chấp nhận đ ợc Các kết cho chất phân tích QC phải đ ợc theo dõi bi u đ Levey-Jennings v đ ợc xem xét sở hàng ngày, hàng tu n hàng tháng Kết qu ki m soát ch t lư ng Các m u ki m soát bên li u quan tr ng vi li u MS/MS xá định đ ợc chấp nhận hay không Mặc dù quy tắc vi c chấp nhận ch y MS / MS d a li u ki m soát ch y, bi n pháp s u đ y cung cấp s h tình hu ng đ ng d n Ngay v i tiêu hí đ ợc thiết lập, có th tiêu hí hấp nhận ki m sốt có th h ng đ ợ đáp ng, nh ng h y (hoặc ch y ph n) có th đ ợc chấp nhận tình hu ng đ , ng ời giám sát phịng thí nghi m nên chấp thuận vi c ch y văn giải thích vi c chấp nhận ch y Giải thích c n phải đ ợc ký ghi ngày Thiết l p tiêu chí ngồi ph m vi Các quan sát phân tích ki m sốt nằm ngồi ph m vi chấp nhận đ ợc (xem Ph n thiết lập tiêu chí ki m sốt chất ợng giám sát) đ ợc xem nằm ph m vi, định phải đ ợ đ r đ chấp nhận không chấp nhận ho t động phân tích Các quy tắc Westgard có khơng phù hợp s ợng kết ki soát đ ợc t o l n ch y MS/MS, s thiếu xác c a lấy m u (DBS) v ph ơng pháp MS/MS Một s sách ho t động đ ợc chấp nhận văn c n đ ợc thiết lập đ xá định l h v xu h ng kết ki m soát có th iên qu n đến thiết bị vấn đề ph ơng pháp phân tích Tiêu chí chấp nh n ch y Các tiêu chí chấp nhận ch y bảo th chấp nhận ch y tất phân tích ki m sốt nằm ph vi đ nêu (ví : ph m vi ± SD) Điều có th có vấn đề s lý bao g m s th y đổi c a n ng độ chất phân tích vật li u đ i ch ng, kết giả chất lỏng ch biến th th ng kê (Nếu ph vi đ ợ đặt m a MS/MS, trung b nh ± SD, ng ời ta mong 99 đợi kết ki m soát s 100 đ đ ợc khỏi ph m vi Ở m c trung bình ± SD, ng ời t ong đợi kết ki m soát s 100 đ đ ợc khỏi ph m vi) Theo dõi kết ph ph n tí h đ ợ đo vi o th y đổi th ng kê vấn đề s ợng ột l n ch y định h u hết h th ng máy tính khơng tinh vi đ đ giữ thông tin n tử thơng báo xác có s th y đổi th ng kê vi ph m Tiêu chí chấp nh n cho chất ki m soát phân tích riêng lẻ Một cách khác thiết lập tiêu chí chấp nhận ch y đ ợc chấp nhận nhiều phân tích nằm ngồi ph m vi chất ki m sốt phân tích riêng lẻ, giả sử có t i thi u 20 phân tích ki m sốt S ợng xác c a phân tích ngồi ph thí nghi vi đ ợc chấp nhận ph thuộc phòng , nh ng nên đ ợc giữ m c t i thi u (h i đến nă giả sử 20 ph n tí h đo) Bởi có th có nhiều ki hai l n ch y, s u đ xe xét có tất phân tích ph ho sốt ỗi ki m soát, c t i thi u đ đ ợc th c hi n có ki m soát phải vi đ ợc chấp nhận đ ch y Tiêu chí chấp nh n bao g m nhi u ki m soát Nếu ki m soát phân tích nằm ngồi ph m vi c a tất ki sốt đ 96 giếng ch y MS/MS nên đ ợc coi thất b i phải lặp l i Nếu có nhiều h i i sốt đ ợc phân tích đ 96 giếng, s chấp nhận sách có th đ ợc thiết lập cho vi c ch y đ ợc chấp nhận có phân tích ngồi ph m vi quan sát Khuyến cáo chấp nhận quan sát ph m vi cho chất ki m sốt phân tích Ví d : ch y bao g m ba ki m soát đ đ 96 giếng ba phenylalanine nằm ph m vi, sau n ch y ch y có th đ ợc chấp nhận T ơng t , l n ch y bao g m b n ki m soát, l n vi c ch y có th đ ợc chấp nhận b n phenylalanine quan sát nằm ph m vi 100 3.2.5.3.Báo áo ết qu v gi i thí h Giải thích kết đ ợc liên kết chặt chẽ v i vi c thiết lập ng ỡng (xe 3.2.3.5 Thiết lập thẩ s nh định ng ỡng phân tích) thơng báo cho bác c a b nh Các thành ph n thiết yếu vi c giải thích acylcarnitine kết acid in nh s u: Thiết lập hồ sơ báo áo Sàng l sơ sinh ph ơng pháp h i phổ không phù hợp v i mơ hình c a chất phân tích cho r i lo n Một dấu hi u riêng lẻ có th nhiều ột r i lo n di truyền r i lo n c th có th đặ tr ng nhiều ột marker Th ờng m u phân tích bất th ờng quan tr ng độ cao c a marker Tr c ki gia chuy n h tr định kỳ, phịng thí nghi m, nhân viên theo dõi, chuyên nên xe xét ng ỡng đ thiết lập v đ r định r i lo n chất ph n tí h iên qu n đến v th ng p (giải thí h) n o nên đ ợc cung cấp cho nhà cung cấp dịch v hă s hính hi ết sàng l ơng tính đ ợc báo cáo Một bảng (hoặc nhiều bảng) chất ph n tí h iên qu n đến r i lo n nên đ ợc thành lập Ví d bảng nh đ ợc trình bày 3.1(Các chất chuy n h đ ợ đo MS/MS đ phát hi n b nh lý r i lo n chuy n hóa acid amin, acid hữu v Một h y rnitin trẻ sau sinh) ng d n nên đ ợc phát tri n b nh c th v i tài li u tham khảo phân tích Giải thích nên d a n ng độ chất phân tích chính, n ng độ chất phân tích th cấp, tỷ l (nếu thích hợp) thơng tin lâm sàng thích hợp (ví d : TPN, truyền máu kháng sinh) H ng d n nên xe th c a trẻ sơ sinh đ ợc phân bi t v i trẻ l n ( n Tất báo cáo, cho dù sàng l tính h y tiêu chí chung định Báo cáo nên bao g m: o Tên b nh nhân nhận d ng khác xét ng ỡng tuổi c ột tu n tuổi tác) ơng tính, phải đáp ng 101 o Tên v địa c a phịng thí nghi m o Ngày lấy m u o Ngày m u vật đ ợc nhận đ thử nghi m o Ngày báo cáo thử nghi m, kết thử nghi m v i đơn vị đo o Khoảng tham chiếu o Ph ơng pháp xá định giá trị ơng a sàng l c ờng 102 Báo cáo kết qu sàng lọc âm tính Báo cáo kết tính đ ợc th c hi n theo h i h v th ờng đ ợc yêu c u h ơng tr nh t vấn khả báo áo h th ng thơng tin phịng thí nghi m Kết có th đ ợc báo cáo d a r i lo n sàng l c chất ph n tí h đo Trong h i tr ờng hợp, nhà cung cấp dịch v hă s hính đ ợc thơng báo báo cáo văn đ ợc gửi qu th , f x gửi n tử Nếu định đ ợ đ r đ báo cáo r i lo n, báo cáo nên li t kê r i lo n đ ợc sàng l c, chất ph n tí h đo, c ng ỡng giải thích bình th ờng (ví d : âm gi i h n) Trong nhiều phịng thí nghi m, r i lo n FAO OA riêng lẻ th ờng đ ợc báo cáo hai nhóm (oxy hóa acid béo acid hữu ơ) Nếu định báo cáo chất phân tích, báo cáo phải li t kê chất ph n tí h đ ợ đo MS/MS v ng ỡng liên quan c a Báo cáo kết qu sàng lọc dươ t Ngo i th ng tin đ ợc li t kê cho kết sàng l c âm tính, kết ơng tính nên b o g m kết ki sàng l tr , ng ỡng phù hợp, giải thích kết quả, khuyến nghị cho theo dõi thêm, thông tin liên l c Tất r i lo n tiề di n nên đ ợc li t kê Ví d : ột kết bất th ờng định có th đ i tăng th đ i di n cho thiếu IVA 2- methylbutyryl-CoA dehydrogenase (2 MBG) Một danh sách dấu hi u r i lo n tiề đ ợ tr nh b y 3.1 (Các chất chuy n h đ ợ đo MS/MS đ phát hi n b nh lý r i lo n chuy n hóa acid amin, acid hữu v acylcarnitin trẻ sau sinh) Vi c giải thí h ũng yếu t khác có th gây kết n cung cấp thơng tin ơng tính bên c nh b nh chuy n hóa (ví d , trẻ sơ sinh non tháng, đ ng ùng TPN kháng sinh hoặ đ đ ợc truyền máu) Báo cáo sàng l thêm H u hết ơng tính nên b o g m khuyến nghị đ theo dõi h ơng tr nh h i o i kết bất th ờng v i khuyến nghị 103 khác Danh m đ u tiên đ ờng biên kết quả, đ ết không cho thấy nguy r i lo n cao Trong tr ờng hợp n y, đề nghị có th đ ợc lặp l i sàng l sơ sinh Lo i th hai bao g m kết đ nguy o bị r i lo n Trong tr ờng hợp này, khuyến nghị có th thử nghi m xác nhận th c hi n MG đ phát tri n tr ng tính “ s m t t T” (www nhiều r i lo n đ ợc phát hi n MS/MS Những tờ “ g.net) ho T” i t kê hành động lập t c mà bá s nên th c hi n phải đ i mặt v i kết bất th ờng Đ i v i kết cung cấp dịch v hă hi ho n th nh thử nghi s ơng tính thấy nguy r i lo n tiềm tàng cao, nhà hính n đ ợc liên l c lập t Trong tình hu ng n y, n báo áo ng ời iên h , ng y v thời gi n, u th i (qu n tho i) thí h hợp đ i t ê 104 CHƯƠNG IV KẾT LUẬN Nh đí h h ơng tr nh s ng sơ sinh đ phát hi n s b nh lý r i lo n nội tiết - chuy n hóa – di truyền bẩm sinh nhằm đ giải pháp r n thi p hoặ điều trị thí h hợp tránh tử vong hoặ h n chế t i đa hậu b nh lý gây ra.V i ả Vi t N đ đ ( h ơng tr nh s ng r đí h n y h ơng tr nh sàng l sơ sinh) v nhiều n sơ sinh g gi i b nh tiêu b nh bổ sung ( h ơng tr nh s ng rộng) Đ ng thời v i s sẵn ng ngh i, hẳng h n nh ph n tí h h i phổ song song (MS/MS) v ph n tí h DN , đ rộng đáng s ợng s ng i truyền th đ ợ sơ sinh, b o g hẩn đoán th ng qu h ơng tr nh ả b nh h ng th điều trị v ph ng ngừ , hoặ b nh hỉ bi u hi n s u n y uộ s ng, hoặ xá định nguy Điều n y đ đ ođ iên qu n đến t o r s tr nh qu n đ i nhiều qu ỗi qu có ích ho đ cho ho h gi ph n tră s ng trẻ sơ sinh Vấn đề n y đ ỗi qu gi đặ ng h ơng tr nh s ng h ng g y h i đ i v i trẻ v trẻ,quyền t u i ùng Hi p hội Đ ị h sử, sơ sinh phải s h đ o ẹ, phải s đ ng ý/ h ng đ ng ý (tr o quyền ng x hội ho h ỹ thuật ph n tí h s ng h i phổ song song v i độ nh y, độ hính xá ết vấn đề sơ sinh V đ giải vấn đề đ o h nh y tế ẹ) v o t p Wi son-Jungner v b n nguyên Ng y n y v i tiến sơ sinh nh gi hi x y ời tiêu hí sở th ợng v s ph h ơng tr nh s ng há nh u s ng n y th đ tăng s nh n ơng tính giả đ giả rõ r t Do đ nă ođ ho tỷ 2002, Ủy b n Kho Nhi v Thiếu niên (Deutsche Gesells-chaft für 105 Kinder- und Jugendmedizin, DGKJ) quy định h h i phổ song song nên đ ợ sử nh ng th y v ỹ thuật tiêu huẩn ho s ng huẩn bị u đ ợ đơn giản h thời gi n huẩn bị u v định h ng t o ợng h sử ho ỹ thuật h i phổ song song ng y trẻ sơ sinh đ n ên v i uộ s ng b nh th ờng phú v t ơng i ho h ng tri u trẻ e ph ng qu n tr ng v i s nh tr Guthrie v áp ng ng it ph n tí h MSMS Đ u, h ng inh hi u to v phát tri n h ơng tr nh đ đe gi i; hoẻ ộng đ ng n xuất, giúp rút ngắn ng đ ợ tin ậy S u g n nử ỷ hởi động, nghiên giúp đ i n s ng huy n h Đ ng thời v i quy tr nh vi rộng, đến n y ph ơng pháp s ng ng n, n i h nh ột bi n pháp hiến ợ 106 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y Tế (2015), D th o Thông tư n h nh quy trình s ng lọc chuẩn đốn trướ sinh v sơ sinh, Hà Nội Bộ Y Tế (2017), Thông tư 34/2017/TT-BYT- hướng dẫn tư vấn s ng lọ hẩn đoán u tr trướ sinh v sơ sinh,H Nội Bộ Y Tế (2019), Thông tư số 30/2019/TT-BYT - v việ sử đổi u ổ sung m t số Thông tư 34/2017/TT-BYT hướng dẫn tư vấn s ng lọ hẩn đoán u tr trướ sinh v sơ sinh,H Nội Nguyễn Viết Nhân (2010), Tài liệu hướng dẫn sàng lọ sơ sinh, Tr ờng Đ i h Y D ợc Huế Tiếng Anh Fingerhut, R., Silva Polanco, M L., Silva Arevalo, G D J., & Swiderska, M A (2014), “First experien e with fu y uto te extr tion syste for simultaneous on‐ line direct tandem mass spectrometric analysis of amino acids and (acyl‐ ) carnitines in newborn s reening setting”, Rapid Communications in Mass Spectrometry, 28(8), 965-973 H r s, E., & O ge ö er, B (2011), “Neon t s reening for et bo i n en o rine isor ers”, Deutsches Ärzteblatt International, 108(1-2), 11 Orzalesi, M., & D nh ive, O (2009), “Ethi prob e s with neon t s reening”, Annali dell'Istituto superiore di sanita, 45(3), 325-330 P i , D., & Therre , B L (2007), “Newborn s reening in the si P ifi region”, Journal of Inherited Metabolic Disease: Official Journal of the Society for the Study of Inborn Errors of Metabolism, 30(4), 490-506 107 Taylor-Phillips (2014), The Ethical, Social And Legal Issues With Expanding the Newborn Blood Spot Test, Warwick Medical School 10 Therrell, B L., & Ad s, J (2007), “Newborn s reening in North eri ”, Journal of Inherited Metabolic Disease: Official Journal of the Society for the Study of Inborn Errors of Metabolism, 30(4), 447-465 11 The Journal of Pediatric.U.S Newborn Screening System Followw-up of children, Diagnosis, management and Evaluation.October 2000 – Volumn 137 No 12 Report of 4th Asian Pacific Regional Meeting of Intenational Sociaety for Neanatal Screening October 19 – 2001 13 Regional Program for the National Neonatal Screening for Congenital Hypothyroidism in East Asia Báo cáo t i H i ngh u phối viên khu v c thiên tân, Trung Quốc tháng 12 – 2002 C sở liệu tra cứu 14 https://newbornscreening.perkinelmer.com/files/584/MSMSoBase2_BRO_lowres_October2018_1599-9812-3.pdf 15 https://www.chromsystems.com/media/dialog/Dialog_2008_1_E.pdf 16 http://benhviennhitrunguong.org.vn/sang-loc-so-sinh-bien-phap-de-phat-hiensom-benh-ly-roi-loan-noi-tiet-chuyen-hoa-va-di-truyen.html 17 http://baochinhphu.vn/Chi-dao-quyet-dinh-cua-Chinh-phu-Thu-tuong-Chinhphu/Phe-duyet-Chuong-trinh-mo-rong-tam-soat-mot-so-benh-sosinh/416445.vgp 18 https://www.g6pd.org/ ... ơng pháp L -MS/MS sàng l c b nh lý r i lo n chuy n hóa acid amin, acid hữu v y rnitin trẻ sau sinh 3 CHƯƠNG I TÌNH HÌNH SÀNG LỌC CÁC BỆNH LÝ RỐI LOẠN CHUYỂN HĨA Ở TRẺ SƠ SINH TRÊN THẾ GIỚI VÀ TẠI... THẾ GIỚI VÀ TẠI VIỆT NAM; GIẢI PHÁP CAN THIỆP ĐIỀU TRỊ; VẤN ĐỀ Y ĐỨC TRONG THỰC HIỆN SÀNG LỌC SƠ SINH TRÊN THẾ GIỚI VÀ TẠI VIỆT NAM 1.1 G ả t c từ 1.1.1 S ữ lọ Là vi c sử d ng bi n pháp thă xá t... P CAN THIỆP ĐIỀU TRỊ VẤN ĐỀ Y ĐỨC TRONG THỰC HIỆN SÀNG LỌC SƠ SINH TR N THẾ GIỚI VÀ TẠI VIỆT NAM 1.1 Giải thí h từ ngữ 1.1.1 Sàng l c 1.1.2 R i lo n chuy n hóa trẻ sơ