Đang tải... (xem toàn văn)
TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LIÊN BỘ MÔN HÓA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG THỜI METHYL PARABEN VÀ PROPYL PARABEN TRONG RƢỢU VANG BẰNG PHƢƠNG PHÁP UPLCUV GVHD ThS Nguyễn Mạnh Quân Học viên thực hiện Lê Văn Bẩy CH CK1 Kiểm nghiệm – Độc chất, Khóa 2020 2022 Cần Thơ 2022 TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LIÊN BỘ MÔN HÓA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG THỜI METHYL PARABEN VÀ P.
TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LIÊN BỘ MƠN HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG THỜI METHYL PARABEN VÀ PROPYL PARABEN TRONG RƢỢU VANG BẰNG PHƢƠNG PHÁP UPLC/UV GVHD: ThS Nguyễn Mạnh Quân Học viên thực hiện: Lê Văn Bẩy CH-CK1 Kiểm nghiệm – Độc chất, Khóa 2020 - 2022 Cần Thơ - 2022 TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LIÊN BỘ MƠN HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG THỜI METHYL PARABEN VÀ PROPYL PARABEN TRONG RƢỢU VANG BẰNG PHƢƠNG PHÁP UPLC/UV GVHD: Ths Nguyễn Mạnh Quân Học viên thực hiện: Lê Văn Bẩy MSHV: 20121010507 CH-CK1 Kiểm nghiệm – Độc chất, Khóa 2020 - 2022 Cần Thơ – 2022 i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan hợp chất paraben 1.1.1 Cơng thức phân tử tính chất lý hóa methyl paraben propyl paraben 1.1.2 Tác dụng kháng khuẩn paraben 1.1.3 Tác động paraben sức khỏe 1.2 Tình hình sử dụng paraben giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình giới 1.2.2 Tình hình Việt Nam 1.3 Tình hình kiểm sốt paraben 1.4 Các phƣơng pháp phân tích paraben 1.4.1 Phƣơng pháp điện di mao quản 1.4.2 Phƣơng pháp sắc ký 1.5 Một số nghiên cứu liên quan nƣớc 10 1.5.1 Nghiên cứu nƣớc 10 1.5.2 Nghiên cứu nƣớc 12 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 14 2.1.1 Đối tƣợng 14 2.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 14 2.1.3 Hóa chất, chất chuẩn, thiết bị, dụng cụ 14 2.1.3.1 Hóa chất, chất chuẩn, dung môi 14 2.1.3.2 Thiết bị, dụng cụ 14 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.2.1 Xây dựng quy trình định lƣợng đồng thời methyl paraben propyl paraben rƣợu vang phƣơng pháp HPLC/UV 15 2.2.1.1 Chuẩn bị mẫu 15 2.2.1.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 16 ii 2.2.1.3 Khảo sát xử lý mẫu 16 2.2.2 Thẩm định quy trình định lƣợng đồng thời methyl paraben propyl paraben rƣợu vang phƣơng pháp HPLC/UV 16 2.2.2.1 Tính tương thích hệ thống 16 2.2.2.2 Độ đặc hiệu 17 2.2.2.3 Tính tuyến tính 17 2.2.2.4 Độ xác ngày 18 2.2.2.5 Độ (tỷ lệ thu hồi %) 18 2.2.2.6 Xác định giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) 19 2.2.3 Ứng dụng quy trình định lƣợng thẩm định số mẫu rƣợu vang 20 Chƣơng 3: KẾT QUẢ 21 3.1 Khảo sát pha động bƣớc sóng phân tích 21 3.1.1 Kết khảo sát pha động 21 3.1.2 Kết khảo sát bƣớc sóng 23 3.1.3 Kết khảo sát xử lý mẫu 25 3.2 Kết thẩm định quy trình định lƣợng đồng thời methylparaben propylparaben rƣợu vang phƣơng pháp HPLC/UV 26 3.2.1 Tình tƣơng thích hệ thống 26 3.2.2 Độ đặc hiệu 27 3.2.3 Tính tuyến tính 28 3.2.4 Độ xác ngày 32 3.2.5 Độ đ ng 34 3.2.6 Giới hạn phát LOD giới hạn định lƣợng LOQ 39 3.3 Kết ứng dụng quy trình định lƣợng thẩm định số mẫu rƣợu vang 41 Chƣơng 4: BÀN LUẬN 42 KẾT LUẬN 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC 50 iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitril ADN Acid deoxyribonucleic BuP Butyl paraben EP Ethyl paraben DLLME Dispersive Liquid Liquid Micro-extraction (Phƣơng pháp chiết vi lƣợng lỏng-lỏng phân tán) GC-MS Gas Chromatography Mass Spectrometry Sắc ký khí ghép phối phổ UPLC/UV Ultra Performance Liquid Chromatography/ Ultra violet Array Sắc ký lỏng hiệu cao/Đầu dò iod) LOD Limit of detection (Giới hạn phát hiện) LOQ Limit of quantitation (Giới hạn định lƣợng LC-MS/MS Liquid Chromatography - Tandem Mass Spectrometry Sắc ký lỏng ghép phối phổ song song) MP Methyl paraben IPP Isopropyl palmitae IBP Isobutyl palmitae MeOH Methanol NaCl Natri clorid PrP Propyl paraben PSA Primary Secondary Amine RSD Relative standard deviation Sai số tƣơng đối SPE Solid Phase Extraction Chiết pha rắn UVB Ultraviolet black “Ánh sáng đen”, có bƣớc sóng 315-20nm) UV-VIS Ultraviolet-visible Quang phổ tử ngoại khả kiến iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các nghiên cứu parabens nƣớc Bảng 1.2 Các nghiên cứu parabens nƣớc Bảng 2.1 Độ lặp lại tối đa chấp nhận hàm lƣợng khác theo phụ lục F AOAC – trang [13] Bảng 2.2 Độ thu hồi chấp nhận hàm lƣợng khác theo AOAC Bảng 3.1 Kết tính tƣơng thích hệ thống mẫu thử giả lập Bảng 3.2 Bảng phân tích tuyến tính Metylparapen Bảng 3.3 Bảng phân tích tuyến tính Propyl parapen Bảng 3.4 Kết độ xác ngày quy trình phân tích Bảng 3.5 Kết thẩm định độ đ ng quy trình phân tích Metyl parapen Bảng 3.6 Kết thẩm định độ đ ng quy trình phân tích Propyl parapen Bảng 3.7 Kết phân tích methylparaben propylparaben số mẫu rƣợu vang thu thập thị trƣờng TP.Cần Thơ v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu tr c chung paraben Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo methylparaben Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo propylparaben Hình 1.4 Cơ chế gây hại ADN da parabens Hình 3.1 Các t lệ dung mơi pha động đƣợc khảo sát: a ACN - H2O 50 : 50; (b) ACN - H2O 40 : 60; (c) ACN - H2O 60 : 40 Hình 3.2 Sắc ký đồ h n hợp chuẩn parapen t lệ: a ACN - H2O (62 : 38); (b) ACN - H2O (63 : 37); (c) ACN - H2O (64 : 36); (d) ACN H2O (65 : 35); (e) ACN - H2O (66 : 34); (f) ACN - H2O (67 : 33) Hình 3.3 Sắc ký đồ h n hợp chuẩn parapen tốc độ dòng: a 1ml/ph t ; b 0.9ml/ph t Hình 3.4 Sắc ký đồ h n hợp chuẩn bƣớc sóng 210nm, 225nm, 254nm, 280nm Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu thử pha loãng 50 lần Hình 3.6 Sắc ký tƣơng thích hệ thống mẫu thử thêm chuẩn Hình 3.7 Sắc ký đồ tính đặc hiệu quy trình phân tích: a Dung mơi pha động; b Dung môi pha mẫu; c Mẫu thử; d Mẫu thử thêm chuẩn; e H n hợp chuẩn Hình 3.8 Sắc ký đồ tính tuyến tính Metylparapen Propylparapen Hình 3.9 Sắc ký đồ tính tuyến tính Metylparapen Hình 3.10 Đồ thị tính tuyến tính Metylparapen Hình 3.11 Sắc ký đồ tính tuyến tính Propyl parapen Hình 3.12 Đồ thị tính tuyến tính Propyl parapen Hình 3.13 Sắc ký đồ độ xác Metylparapen Hình 3.14 Sắc ký đồ độ xác Propylparapen vi Hình 3.15 Sắc ký đồ giới độ đ ng Metylparapen 80 Hình 3.16 Sắc ký đồ giới độ đ ng Metylparapen (100%) Hình 3.17 Sắc ký đồ giới độ đ ng Metylparapen 120 Hình 3.18 Sắc ký đồ giới độ đ ng Propylparapen 80 Hình 3.19 Sắc ký đồ giới độ đ ng Propylparapen 100 Hình 3.20 Sắc ký đồ giới độ đ ng Propyl parapen (120%) Hình 3.21 Sắc ký đồ giới hạn phát LOD Metyl parapen Hình 3.22 Sắc ký đồ giới hạn phát LOD Propyl parapen Hình 3.23 Chồng phổ sắc ký đồ 03 mẫu thử h n hợp chuẩn Hình 4.1 sắc ký đồ mẫu thử h n hợp mẫu chuẩn ĐẶT VẤN ĐỀ Chất bảo quản hóa chất tự nhiên hay tổng hợp đƣợc thêm vào thực phẩm, dƣợc phẩm, mẫu phẩm sinh học, để ngăn ngừa làm chậm lại thối rữa, hƣ hỏng gây phát triển vi sinh vật, hay thay đổi không mong muốn mặt hóa học sản phẩm Parabens tên gọi chung nhóm chất bảo quản hóa học, đƣợc sử dụng phổ biến lâu đời Parabens có tính chất kháng khuẩn kháng nấm nên đƣợc dùng làm chất bảo quản để ngăn ngừa nhiễm khuẩn nấm vi khuẩn hạn chế phân hủy hoạt chất dẫn đến giảm hiệu dƣợc phẩm, thực phẩm, mỹ phẩm Gần có nhiều nghiên cứu cho thấy, hợp chất parabens hoạt động tƣơng tự nhƣ hormone oestrogen tế bào thể Các hoạt động có liên quan định đến bệnh ung thƣ v Những thông tin làm cho nhiều phụ nữ lo lắng, ngƣời tiêu dùng đƣợc khuyến cáo hạn chế sử dụng loại mỹ phẩm xung quanh cánh tay, ngực vùng da nhạy cảm Parabens gây dị ứng da ngƣời có địa dị ứng hay q mẫn cảm Ngồi cịn có thơng tin việc parabens làm th c đẩy q trình lão hóa da dƣới tác động ánh nắng mặt trời Trƣớc chứng tác hại parabens sức khỏe ngƣời, việc kiểm soát chất bảo quản parabens cần thiết Do đó, nhóm ch ng tơi thực đề tài “Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời methyl paraben propyl paraben rượu vang phương pháp UHPLC” với hai mục tiêu: Nghiên cứu xây dựng thẩm định quy trình định lƣợng đồng thời hai loại paraben phổ biến methyl paraben propyl paraben rƣợu vang phƣơng pháp HPLC/UV Ứng dụng quy trình thẩm định phân tích số mẫu rƣợu vang thu thập thực tế thị trƣờng Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan hợp chất paraben Về cấu tr c hóa học, paraben ester acid para-hydrobenzoic với nhóm alkyl khác Cấu tr c hóa học chung paraben para – hydroxybenzoat R nhóm alkyl hay aryl Hình 1.1 Cấu tr c chung paraben Parabens đƣợc sử dụng rộng rãi làm chất bảo quản dƣợc phẩm từ năm 1920 đƣợc sử dụng rộng rãi thực phẩm mỹ phẩm thời gian ngắn sau Đƣợc sử dụng phổ biến hợp chất methylparaben propylparaben Ch ng thƣờng đƣợc dùng kết hợp với sản phẩm Một số parabens đƣợc tìm thấy tự nhiên, nhiên tất parabens đƣợc sử dụng thƣơng mại đểu đƣợc sản xuất tổng hợp Ch ng đƣợc sản xuất phản ứng este hóa para-hydroxybenzoic acid rƣợu thích hợp, ví dụ methanol, ethanol, n-propanol, có mặt chất x c tác thích hợp ví dụ acid sulfuric đậm đặc acid p-toluenesulfonic) [11] 50 PHỤ LỤC PHỤ LUC 1: Sắc ký đồ khảo sát dung môi pha động 51 52 PHỤ LUC 2: Sắc ký đồ khảo sát tốc độ dòng PHỤ LUC 3: Sắc ký đồ khảo sát bƣớc sóng 53 PHỤ LUC 4: Sắc ký đồ khảo sát mẫu thử 54 PHỤ LUC 5: Sắc ký đồ thẩm định tính tƣơng thích hệ thống 55 PHỤ LUC 6: Sắc ký đồ thẩm định độ đặc hiệu 56 57 PHỤ LUC 7: Sắc ký đồ thẩm định tính tuyến tính 58 59 PHỤ LUC 8: Sắc ký đồ thẩm định độ xác 60 PHỤ LUC 9: Sắc ký đồ thẩm định độ đ ng 61 62 63 PHỤ LUC 10: Sắc ký đồ Giới hạn phát giới hạn định lƣợng 64 ... cứu xây dựng thẩm định quy trình định lƣợng đồng thời hai loại paraben phổ biến methyl paraben propyl paraben rƣợu vang phƣơng pháp HPLC/UV Ứng dụng quy trình thẩm định phân tích số mẫu rƣợu vang. .. soát chất bảo quản parabens cần thiết Do đó, nhóm ch ng tơi thực đề tài ? ?Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời methyl paraben propyl paraben rượu vang phương pháp UHPLC? ?? với hai mục... HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG THỜI METHYL PARABEN VÀ PROPYL PARABEN TRONG RƢỢU VANG BẰNG PHƢƠNG PHÁP UPLC/UV GVHD: Ths Nguyễn Mạnh Quân