TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LBM HÓA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC THU C CH A DƢỢC CHẤT ĐƢỢC MIỄN TH TƢƠNG ĐƢƠNG IN VIVO V QUY TR NH TH TƢƠNG ĐƢƠNG ĐỘ H A TAN IN VITRO GVHD PGS TS Nguyễn Thị Ngọc Vân Thực hiện CKI Kiểm nghiệm thuốc và Độc chất Khoá 2020 – 2022 Cần Thơ, năm 2022 TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LBM HÓA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC THU C CH A DƢỢC CHẤT ĐƢỢC MIỄN TH TƢƠNG ĐƢƠN.
TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LBM HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC THU C CH A DƢỢC CHẤT ĐƢỢC MIỄN TH ĐƢƠNG IN VIVO V QUY TR NH TH TƢƠNG TƢƠNG ĐƢƠNG ĐỘ H A TAN IN VITRO GVHD: PGS.TS Nguyễn Thị Ngọc Vân Thực hiện: CKI Kiểm nghiệm thuốc Độc chất Khoá: 2020 – 2022 Cần Thơ, năm 2022 TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LBM HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC THU C CH A DƢỢC CHẤT ĐƢỢC MIỄN TH ĐƢƠNG IN VIVO V QUY TR NH TH TƢƠNG TƢƠNG ĐƢƠNG ĐỘ H A TAN IN VITRO Th L I i Học viên: ghi hu hi v h t h Lê Văn Bẩy Cần Thơ, năm 2022 2020 -2022 20121010507 i LỜI CẢM ƠN Quyển báo cáo hoàn thành dựa tham khảo tài liệu nghiên cứu có liên quan, sách, báo chuyên ngành nhiều tác giả, đặc biệt tư vấn quý thầy cô hợp tác tất thành viên nhóm Trước tiên, nhóm báo cáo chúng em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô PGS TS Nguyễn Thị Ngọc Vân tạo điều kiện, tận tình hướng dẫn, Cơ truyền đạt tận tình kiến thức quý báu kinh nghiệm bổ ích để nhóm có hội rèn luyện, nhằm nâng cao kỹ có nhìn tổng quan công việc người Dược sĩ làm công tác nghiên cứu khoa học sau Xin cảm ơn tất thành viên nhóm ln giúp đỡ, động viên, hỗ trợ lẫn nhau, giải khó khăn q trình thực Trong q trình thực chắn khơng tránh khỏi thiếu sót, nhóm báo cáo kính mong nhận góp ý, nhận xét từ q Thầy Cơ để nhóm rút kinh nghiệm quý báo bổ ích cho báo cáo Cuối cùng, nhóm báo cáo chúng em xin kính chúc q Thầy Cơ dồi nhiều sức khỏe, thành công công việc sống Trân trọng cảm ơn! ii LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iii Đ T VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan tƣơng ƣơng sinh học 1.2 Tiêu chí xác ịnh trƣờng hợp ƣợc miễn thử lâm sàng Việt Nam trƣớc cấp phép lƣu hành 1.2.1 Điều 21, thông tư số: 32/2018/TT-BYT 1.2.2 Phụ lục V - Hướng dẫn thực nghiên cứu tương đương sinh học không yêu cầu nghiên cứu tương đương sinh học in vivo 1.3 Sinh khả dụng in vitro 14 1.4 Phụ lục II – Thử nghiệm ộ h t n – Hƣớng n nghiên c u BA BE-1 18 CHƢƠNG Đ I TƢỢNG V PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN C U 21 2.1 Đối tƣợng nghiên c u 21 2.2 Phƣơng pháp nghiên c u 21 2.2.1 Lựa chọn thẩm định phương pháp định lượng metformin 21 2.2.1.1 Ảnh hưởng giấy lọc 21 2.2.1.2 n h h h h n 22 2.2.1.3 Độ đặc hi u (Specificity/selectivity) 22 2.2.1.4 Tính tuyến tính 22 2.2.1.5 Độ đún 23 2.2.1.6 Độ xác 23 2.2.2 Đánh giá tương đương hòa tan in vitro Glucofine Glucophage 23 CHƢƠNG KẾT QUẢ V B N U N 25 3.1 Thuốc nghiên c u 25 3.2 Nghiên c u tƣơng ƣơng in vitro (thử nghiệm ộ hòa tan) 25 3.2.1 Kết đánh giá tương đương in vitro thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu: 26 3.2.1 So sánh độ hòa tan thuốc đối chiếu thuốc nghiên cứu 27 KẾT LU N 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT BA BE CP DĐVN FDA HPLC TĐSH USP UV - VIS Sinh khả dụng (bioavailability = BA = SKD) Tương đương sinh học (bioequivalence = BE = TĐSH) Dược điển Trung Quốc Dược điển Việt Nam Cục Quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ Sắc k lỏng hiệu cao Tương đương sinh học Dược điển m Quang phổ tử ngoại khả kiến Đ T VẤN ĐỀ Sau thuốc phát minh (là thuốc cấp phép đầu tiên, dựa liệu chất lượng, an toàn hiệu quả) hết thời hạn bảo hộ, đồng ý công ty sáng chế, cơng ty dược khác có quyền thể phát triển sản phẩm tương tự dạng bào chế hàm lượng với thuốc phát minh để lưu hành thị trường Các thuốc gọi thuốc generic Các thuốc generic cần đảm bảo an toàn hiệu tương tự thuốc phát minh (thuốc gốc) tương tự với thuốc lưu hành khẳng định an toàn, hiệu lâm sàng Để hạn chế thử nghiệm lâm sàng thuốc tốn nhiều chi phí mà đảm bảo tính hiệu an toàn thuốc generic tương tự thuốc gốc, nghiên cứu tương đương sinh học (TĐSH) tiến hành Nghiên cứu TĐSH nhằm chứng minh thuốc tương tự thông số dược động học chủ yếu Khi đảm bảo thông số dược động học tương tự (tức giá trị thông số dược động học nằm khoảng 80 – 125% giá trị thuốc so sánh), hai thuốc cho có hiệu an tồn tương tự lâm sàng Phương pháp đánh giá TĐSH so sánh thông số dược động học (Cmax, AUC, Tmax) thuốc nghiên cứu với thuốc đối chứng Thuốc đối chứng dùng để so sánh thường sử dụng chế phẩm phát minh (thuốc brand name), cấp phép lưu hành giới thuốc tương tự có chất lượng cao lưu hành thời điểm nghiên cứu Trong trường hợp đặc biệt, thuốc có nhiều hàm lượng, hàm lượng thấp miễn thử TĐSH in vivo công nhận tương đương sinh học với điều kiện: Đã chứng minh tương đương độ hòa tan in vitro theo quy định thử nghiệm TDSH dạng hàm lượng cao ác định Trong phạm vi báo cáo này, ch đề cập đến thuốc miễn thử TĐSH in vivo quy trình thử tương đương độ hịa tan in vitro theo số tài liệu công bố, nhằm làm r quy định thử nghiệm TDSH, miễn thử nghiệm TDSH phương pháp thử TĐSH in vitro CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng qu n tƣơng ƣơng sinh học Hiện khái niệm Tương đương sinh học (TĐSH) bao gồm: TĐSH in vitro thử nghiệm độ hòa tan TĐSH in vivo, cần phân biệt hai khái niệm để hiểu nghĩa TĐSH Trên thực tế, nhiều chế phẩm thuốc có hoạt chất, dạng bào chế tốc độ mức độ hấp thu vào máu lại khác Chất lượng nguyên liệu, thành phần tá dược kỹ thuật bào chế yếu tố có nhiều ảnh hưởng tới hấp thu thuốc Dựa vào kết đánh giá TĐSH, nhà sản uất tự khẳng định chất lượng đích thực cho sản phẩm mình; nhà quản l có thêm sở để em ét, thẩm định cấp phép lưu hành bác sĩ có thêm thơng tin dược động học để lựa chọn, thay thuốc điều trị Phương pháp đánh giá TĐSH so sánh thông số dược động học (Cma , AUC, Tma ) thuốc nghiên cứu với thuốc đối chứng Thuốc đối chứng dùng để so sánh thường sử dụng chế phẩm phát minh (thuốc brand name), cấp phép lưu hành giới thuốc tương tự có chất lượng cao lưu hành thời điểm nghiên cứu TĐSH thử nghiệm bắt buộc tất thuốc generic trước lưu hành nước phát triển (Mỹ, Úc, Cộng đồng Châu Âu…) Tuy nhiên nước ta, khái niệm ch phổ biến vài năm gần Theo thống kê, thị trường dược phẩm Việt Nam có 90% thuốc chưa thử TĐSH, vấn đề TĐSH ngày trở nên cấp bách góp phần thúc đẩy công nghiệp dược Việt Nam phát triển hội nhập giới Tại việt nam, có 12 loại dược chất bắt buộc phải thử TĐSH đăng k lưu hành quy định phụ lục III - Thông tư số: 32/2018/TT-BYT ngày 12 tháng 11 năm 2018 Bộ trưởng y tế Quy định đăng k lưu hành thuốc, nguyên liệu làm thuốc, bao gồm: Bảng 1.1 Danh mục dược chất bắt buộc phải thử TĐSH đăng k lưu hành STT Tên ƣợc chất Amlodipin Azithromycin Carbamazepin Nhà sản xuất (1) Thuốc ối ch ng (Nƣớc sản xuất Nƣớc (Dạng bào chế- Hàm lƣợng) cấp phép lƣu hành)(2) Amlor- Viên nang 5mg Pfizer PGM (Pháp) Zithromax- Bột pha hỗn dịch uống 200mg/5ml Tegretol- Viên nén 200mg Pfizer Italia (ý) Novatis Pharma S.p.A (ý) Oroken*- Viên nén bao phim 200mg; Bột Cefixim pha hỗn dịch uống 40mg/ 5ml 100mg/ 5ml ; Cốm pha hỗn dịch uống 40mg Famar Lyon (Pháp) 100mg Cefuroxim Axetil Zinnat- Viên nén bao phim 125mg, Glaxo Operation UK Ltd (Vơng quốc Anh) 500mg Klacid- Viên nén bao phim 250mg, Abbott Laboratories Ltd Clarithromycin (Vơng quốc Anh) 500mg Klacid- Cốm pha hỗn dịch uống PT 125mg/5ml Abbott Indonesia (Indonesia) Glibenclamid Daonil** - Viên nén 5mg Gliclazid Diamicron- Viên nén 80mg Metformin 10 Metoprolol Aventis Pharma (Nhật Bản) Les Laboratoires Servier Industrie (Pháp) Glưucophage- Viên nén bao phim 500mg, 850mg, 1000mg Betaloc- Viên nén 50mg Merck Sante s.a.s (Pháp) AstraZeneca (Philipin) R.P Scherer GmbH & 11 Nifedipin Adalat- Viên nang mềm 10mg Co Adalat - Viên nang mềm 5mg Bayer Health Care (Đức) * Rimactane*12 Rifampicin Viên nén nang Germany (Đức) (150mg, Novatis***; Sandoz *** 300mg) Rifadin- Viên nang (150mg; 300mg) Sanofi- Aventis *** Rifampicin- Viên nang (150mg; 300mg) Sandoz (Hà Lan) 1.2 Tiêu chí xác ịnh trƣờng hợp ƣợc miễn thử lâm sàng Việt N m trƣớc cấp phép lƣu hành 1.2.1 iều 21, thô g tư s 32/2018/ -BYT Thuốc generic có dược chất, hàm lượng, nồng độ, đường dùng, cách dùng, liều dùng, ch định, đối tượng bệnh nhân, dạng bào chế với thuốc khác cấp giấy đăng k lưu hành Thuốc (trừ vắc in) cấp phép lưu hành nước giới có đầy đủ liệu lâm sàng an toàn, hiệu theo quy định Điều 13, Điều 19 Thông tư Thuốc dược liệu cấp giấy đăng k lưu hành trước ngày Luật dược có hiệu lực khơng có ch định bệnh thuộc Danh mục bệnh Bộ trưởng Bộ Y tế ban hành Vắc in cấp phép lưu hành đáp ứng quy định điểm g khoản Điều 23 Thông tư này, sản xuất tồn cơng đoạn dây chuyền nước thành viên quy định khoản 10 Điều Thơng tư có đầy đủ liệu lâm sàng an toàn, hiệu theo quy định Điều 13 Thông tư 1.2.2 Phụ lục V - Hư ng dẫn th c hi n nghiên cứu tươ g đươ g si h học hông yêu cầu nghiên cứu tươ g đươ g si h học in vivo I Không yêu cầu nghiên cứu n đư n sinh họ in vivo đ i với công thức bào chế theo tỷ l : Các công thức bào chế theo tỷ lệ công thức bào chế hàm lượng khác thuốc (có dạng bào chế, sản xuất nhà sản xuất) đáp ứng điều kiện sau: a) Đối với thuốc dạng bào chế giải phóng ngay: Cơng thức bào chế hàm lượng khác có thành phần dược chất tá dược (khơng tính đến tá dược bao, vỏ nang, tá dược tạo màu, tạo mùi, chất bảo quản thành phần khơng có khả làm thay đổi sinh khả dụng thuốc) với tỷ lệ phối hợp dược chất tá dược dược chất chiếm tỷ lệ thấp 5% khối lượng cơng thức tổng tá dược công thức hàm lượng khác ch có lượng tá dược độn thay đổi theo thay đổi hàm lượng dược chất tổng lượng tá dược cịn lại cơng thức hàm lượng khác Nếu thuốc viên nén bao, khối lượng công thức tính theo khối lượng viên nhân Nếu thuốc viên nang, khối lượng cơng thức tính theo khối lượng thuốc đóng nang b) Đối với thuốc dạng bào chế bao tan ruột: - Khi thuốc viên nén bao tan ruột: Công thức bào chế hàm lượng khác có thành phần dược chất tá dược (không tính đến tá dược tạo màu, tạo mùi, chất bảo quản thành phần khơng có khả làm thay đổi sinh khả dụng thuốc) với tỷ lệ phối hợp dược chất tá dược dược chất chiếm tỷ lệ thấp 5% khối lượng cơng thức tổng tá dược cơng thức viên nhân hàm lượng khác tỷ lệ khối lượng màng bao kháng acid/ diện tích bề mặt viên viên có hàm lượng khác (mg/cm2) phải - Khi thuốc viên nang chứa hạt bao tan ruột: Các hàm lượng khác sử dụng loại hạt bao tan ruột (được sản xuất từ quy trình sản xuất) khác hàm lượng dược chất nang đạt cách điều ch nh số lượng (hay khối lượng) hạt đóng nang c) Đối với thuốc dạng bào chế giải phóng kéo dài: - Các hàm lượng khác có chế giải phóng hoạt chất công thức bào chế hàm lượng khác có thành phần dược chất tá dược với tỷ lệ phối hợp dược chất tá dược dược chất chiếm tỷ lệ thấp 5% khối lượng cơng thức tổng tá dược cịn lại công thức hàm lượng khác ch có lượng tá dược độn thay đổi theo thay đổi hàm lượng dược chất cịn tổng lượng tá dược cịn lại cơng thức hàm lượng khác Nếu thuốc viên nén bao, khối lượng công thức tính theo khối lượng viên nhân Nếu thuốc viên nang, khối lượng cơng thức tính theo khối lượng thuốc đóng nang 15 • cốc đáy bán cầu, dung tích lít chứa mơi trường hồ tan, có nắp đậy để hạn chế bay nước • bể điều nhiệt có máy khuấy • giỏ quay chứa mẫu thử gắn với mô tơ quay b Máy 2: Máy cánh khuấy (paddle) Giống máy 1, ch khác thay giỏ quay cánh khuấy (hình 1.2) Việc dùng máy tuỳ thuộc vào tính chất dược chất dạng thuốc Nang cứng viên nén có t trọng thấp, rã chậm dùng máy để tránh mẫu thử lên mặt nước Máy dùng cho hầu hết loại viên nén Điều kiện thử hoà tan • Mơi trường hồ tan: thường nước cất 37°c ± 0,5°c loại khơng khí Tuỳ theo đặc điểm hồ tan dược chất, cần dùng hệ đệm phosphat pH – acid hydrocloric lỗng (0,001 – 0,1N) Dung tích thường dùng 500- 1000ml (không nhỏ lần nồng độ bão hoà dược chất) Một số chất làm tăng độ tan (như chất diện hoạt) cho thêm vào mơi trường hồ tan • Thời gian thử: thường 30 – 60 phút (± 2%) với lượng dược chất hồ tan nằm giới hạn 70 – 80% •Tốc độ khuấy-, thường 100 vòng/phút với máy loại (giỏ quay); 50 vòng/phút với máy loại (cánh khuấy) • Điếm lấy mẫu: nằm khoảng cách từ mặt cánh khuấy giỏ quay tới mặt nước cốc, cách thành cốc khơng 1cm • Phương pháp định lượng: hàm lượng dược chất môi trường hoà tan thấp nên thường dùng phương pháp đo quang phổ hấp thụ Máy đo quang nối với máy hoà tan để ác định trực tiếp hàm lượng dược chất cách tự động • Chuẩn hố máy: dùng viên chuẩn loại rã khơng rã Dược điển Mỹ (viên acid salicylic viên prednison) Cách thử đánh giá kết Cho môi trường hoà tan quy định vào cốc, đun nóng đến 37°c Cho mẫu thử vào cốc (chú ý tránh bọt khí bề mặt mẫu) cho máy chạy tốc độ 16 quy định Lấy mẫu thử (bổ sung mơi trường hồ tan cần) định lượng dược chất theo mô tả chuyên luận Cách đánh giá kết phụ thuộc vào tiêu chuẩn: • Tiêu chuẩn Dược điển: Trong Dược điển, người ta quy định giới hạn dược chất hoà tan tối thiểu (Q), sau khoảng thời gian định (30, 45, 60 phút) • Dược điển Việt Nam V quy định thử viên, khơng có viên giải phóng thấp 70% (Q) lượng dược chất quy định Nếu có viên khơng đạt thử tiếp lần với viên khác viên phải đạt yêu cầu • Dược điển Mỹ quy định thử giai đoạn đầu với viên, khơng đạt thử tiếp giai đoạn với viên khác tính kết 12 viên Nếu giai đoạn chưa đạt thử giai đoạn tính kết 24 viên theo bảng sau: Bảng 1.2 Giới hạn hòa tan viên theo USP Gi i oạn Số ơn vị thử (viên) Giới hạn hoà t n Mỗi đơn vị > Q + (65%) Trung bình 12 đơn vị > Q Không đơn vị < Q – 15 (65%) 12 Trung bình 24 đơn vị > Q Khơng q đơn vị < Q – 15 (65%) Không đơn vị < Q – 25 (55%) • Dược điển Trung Quốc quy định thử viên; sau 45 phút đánh sau: Trong viên viên > Q (70%) + Nếu có – viên < Q không nhỏ Q – 10 mà trung bình viên > Q đạt + Nếu có viên < Q – 10 thử với viên khác + Nếu 12 viên có – viên < Q – 10 trung bình 12 viên > Q đạt 17 • Tiêu chuẩn nhà sản xuất: đăng ký thuốc, nhà sản xuất thường xây dựng đồ thị hòa tan dược chất theo thời gian Việc dùng đồ thị cho phép đánh giá cụ thể tốc độ hoà tan dược chất đồng viên thử nghĩa sinh khả dụng in vitro • SKD in vitro chưa phải Ịà SKD thực sự, chưa phản ánh đầy đủ hiệu lâm sàng chế phẩm thử Có trường hợp dược chất hoà tan nhanh, chưa hấp thu tốt Tuy SKD in vitro có bắt chước số điều kiện sinh học trình bày, a với điều kiện thực tế thể sống • SKD in vitro cơng cụ kiểm soát chất lượng dạng thuốc rắn để uống (viên nén, nang thuốc, thuốc bột, pellet,…), đặc biệt để đảm bảo đồng chất lượng lơ mẻ sản xuất, nhà sản xuất • SKD in vitro dùng để sàng lọc, định hướng cho đánh giá SKD in vivo: Việc đánh giá SKD in vivo đắt tiền, tốn kém, làm tràn lan trước hết phải dùng SKD in vitro sàng lọc, định hướng cho việc thử in vivo để giảm bớt chi phí, thời gian • SKD in vitro dùng thay cho SKD in vivo trường hợp chứng minh có tương quan đồng biến SKD in vitro in vivo với điều kiện cơng thức quy trình sản xuất khơng thay đổi Thực tốn nên SKD in vivo thường ch đánh giá lần lập hồ sơ in phép sản xuất: Từ sau phải dùng SKD invitro để kiểm sốt q trình sản xuất, đảm bảo tính ổn định cho SKD in vivo • SKD in vitro công cụ để xây dựng công thức, thiết kế dạng thuốc sở coi tỷ lệ hồ tan dược chất thơng số chất lượng đầu ra, từ lựa chọn dạng thuốc công thức bào chế tối ưu 18 1.4 Phụ lục II – Thử nghiệm ộ h t n – Hƣớng n nghiên c u BA/BE-1 Mỗi dạng thuốc gồm có dược chất tá dược Tỷ lệ dược chất – tá dược, loại tá dược, kỹ thuật bào chế lựa chọn dựa hàm lượng, tính chất hóa l tính chất chung thuốc đặc tính hấp thu Tồn yếu tố làm cho chế phẩm có đặc tính hịa tan riêng Khi phát triển chế phẩm thuốc, phép thử độ hòa tan dùng công cụ để ác định yếu tố bào chế ảnh hưởng quan trọng tới sinh khả dụng thuốc Khi thành phần phương pháp bào chế ác định phép thử độ hịa tan dùng kiểm tra chất lượng lô nâng cấp lô sản uất để đảm bảo đồng lơ biểu đồ hịa tan tương tự với độ hịa tan lơ thử lâm sàng Hơn nữa, phép thử độ hịa tan dùng để chứng minh cho sinh khả dụng thuốc mới, TĐSH chế phẩm tương đồng có thay đổi Do đó, nghiên cứu độ hịa tan dùng với mục đích sau: ả bảo h t lượ g + Để có thơng tin lơ thử dùng nghiên cứu SKD/ TĐSH nghiên cứu lâm sàng chủ yếu để cung cấp tiêu chuẩn chất lượng + Được dùng công cụ kiểm tra chất lượng để chứng minh ổn định sản uất + Để có thơng tin lơ thuốc đối chứng dùng nghiên cứu SKD/ TĐSH nghiên cứu lâm sàng h giá th y ho thử SH i vivo + Để chứng minh tương tự thuốc đối chứng nước thành viên ASEAN + Để chứng minh tương tự chế phẩm khác dược chất (bao gồm thuốc có thay đổi thuốc mới, thuốc tương đồng) thuốc đối chứng 19 + Để thu thập thông tin đồng lô chế phẩm (thử đối chứng) dùng sở cho việc lựa chọn lơ thích hợp nghiên cứu in vivo Phương pháp thử nên theo yêu cầu cuả dược điển trừ chứng tỏ không phù hợp Những PP thay em ét thuyết minh pp chuyên biệt phát khác biệt lơ chế phẩm có hiệu in vivo chấp nhận không chấp nhận Nếu dược chất coi có độ tan cao, dự đốn khơng gây vấn đề SKD, nữa, dạng thuốc hịa tan nhanh khoảng pH sinh l sau dùng Trong trường hợp này, miễn thử TĐSH, dựa trường hợp có tương tự biểu đồ hòa tan qua phép thử phân biệt miễn đáp ứng tiêu chí khác phần 5.1.1 tương tự cần thuyết minh biểu độ hịa tan bao gồm điểm, môi trường khác (thường từ khoảng pH – 6,8, trường hợp em ét khoảng pH – 8) Trong trường hợp thuốc tá dược không nhạy cảm với pH, ch cần thử mơi trường Nếu dược chất coi có độ tan thấp tính thấm cao, tốc độ hấp thu bị giới hạn tốc độ hòa tan dạng thuốc Đây trường hợp nhiều tá dược kiểm sốt phóng thích dược chất sau đến độ hịa tan dược chất Trong trường hợp này, thay đổi điều kiện thử khuyến cáo nên lấy đủ mẫu 90% thuốc hòa tan đạt đến tiệm cận Sự hiểu biết đặc tính hịa tan điều kiện khác pH, khuấy trộn, hàm lượng ion, chất diện hoạt, độ nhớt, áp suất thẩm thấu quan trọng biểu hệ rắn in vivo thiết yếu độ hịa tan thuốc khơng phụ thuộc vào đặc tính l hóa dược chất Một thiết kế thống kê thực nghiệm thích hợp dùng để nghiên cứu thông số tới hạn để tối ưu hóa điều kiện Bất pp để chứng minh tương tự biểu đồ hòa tan chấp nhận chúng thuyết minh 20 Mức độ tương tự so sánh pp mơ hình độc lập phụ thuộc ví dụ hồi qui tuyến tính phần trăm hịa tan thời điểm ác định, so sánh thống kê thông số hàm Weibull cách tính hệ số tương tự, ví dụ sau: f2 = 50 log [ + (1 n) ∑t= 1n (Rt - Tt)2]-0,5 100 Trong biểu thức f2 hệ số tương đương, n số thời điểm lấy mẫu, R(t) % trung bình thuốc hịa tan thuốc đối chứng T(t) trung bình % độ hòa tan thuốc thử thời điểm t Đánh giá tương đương dựa điều kiện của: - Tối thiểu điểm lấy mẫu (không bao gồm điểm không) - 12 giá trị cho điểm lấy mẫu thuốc - Không giá trị trung bình > 85% hịa tan cho thuốc - Độ lệch chuẩn trung bình thuốc cần phải nhỏ 10% từ điểm thứ đến điểm cuối - Giá trị f2 = 50 – 100 gợi cho thấy biểu đồ hòa tan tương tự Trong trường hợp 85% hai thuốc hòa tan vòng 15 phút, biểu đồ hịa tan chấp nhận tương tự mà không cần phải đánh giá thêm 21 CHƢƠNG Đ I TƢỢNG V PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 Đối tƣợng nghiên c u Chế phẩm thử: Glucofine viên nén 850 mg công ty cổ phần uất nhập y tế Đồng Tháp (Việt Nam) sản uất Chế phẩm đổi chiếu: Glucophage viên nén 850 mg công ty Merck Santé s.a.s (Pháp) sản uất 2.2 Phƣơng pháp nghiên c u 2.2.1 L họ v thẩ đị h hươ g há đị h lượ g etfor i - Lựa chọn phương pháp: tiến hành khảo sát lựa chọn phương pháp phù hợp với điều kiện thí nghiệm - Thẩm định phương pháp: tiến hành thẩm định đầy đủ phương pháp định lượng lựa chọn theo hướng dẫn TT quy định đăng k thuốc, Số 44/2014//TT-BYT bao gồm ch tiêu: + Ảnh hưởng giấy lọc + Tương thích hệ thống + Độ đặc hiệu + Tính tuyến tính + Độ + Độ ác 2.2.1.1 Ảnh hưởn iấy lọ Yêu cầu phép thử độ hòa tan: Thiết bị (giấy) lọc phải trơ, hấp thụ không đáng kể hoạt chất mẫu, không chứa chất bị chiết mơi trường hồ tan gây trở ngại cho qui trình phân tích ch dẫn, có cỡ lỗ ốp thích hợp Chứng minh giấy lọc khơng ảnh hưởng đến quy trình phân tích Phương pháp thử: Dung dịch chuẩn chia làm phần: Không lọc Lọc qua giấy lọc thường Lọc qua giấy lọc Whatman 22 Lọc qua màng lọc 0,45 µm PP HPLC: sắc k dd trên, ác định diện tích đ nh PP Quang phổ: đo độ hấp thu dung dịch Yêu ầu: sai khác diện tích đ nh (độ hấp thu) dd với dd không lọc < 2% 2.2.1.2 n h hh h n - HPLC: Tiêm > lần đánh giá thông số sắc k - UV-vis: đo độ hấp thu dd chuẩn lần Yêu ầu: RSD < 2% 2.2.1.3 Độ đặ hi u (Specificity/selectivity) Mụ đ h: Tính đặc hiệu quy trình phân tích nhằm chứng minh quy trình phân tích cho phép ác định ác đặc hiệu chất cần phân tích mà khơng bị ảnh hưởng có mặt chất khác có mẫu thử, phân biệt chất phân tích với mẫu với chất khác (tạp chất, sp phân hủy, chất nền) Cá h iến hành: Tiến hành phân tích loại mẫu sau theo phương pháp ác định: - Mẫu trắng: Dung mơi pha động/dung mơi hịa tan mẫu hay pha loãng mẫu - Mẫu chuẩn (hỗn hợp chuẩn) - Mẫu thử - Mẫu thử thêm chuẩn: mẫu cho thêm chuẩn nồng độ ác định + PP HPLC: sắc k dd trên, ác định thời gian lưu diện tích đ nh ( với đầu dị PDA cần ác định thêm độ tinh khiết pic) + PP Quang phổ: đo độ hấp thu dung dịch 2.2.1.4 nh uyến tính Định nghĩa: Là khả quy trình (trong khoảng ác định) thu kết thử tỷ lệ trực tiếp đến nồng độ chất phân tích mẫu thử Phương pháp: + Ít nồng độ chuẩn 23 + Pha loãng giai mẫu từ nồng độ mẹ cân riêng biệt nồng độ Yêu cầu: Correlation coefficient (r) ≥ 0,99 Xét tính thích hợp phương trình hồi quy Xét tính tương thích phương trình tuyến tính test F nghĩa hệ số test t 2.2.1.5 Độ đún Định nghĩa: mức độ sát gần giá trị tìm thấy với giá trị thực áp dụng qui trình đề uất mẫu thử làm đồng / điều kiện ác định - Độ phương pháp: biểu thị tỷ lệ hồi phục - Tỷ lệ hồi phục gần 100%, độ tốt Yêu ầu: Tỷ lệ thu hồi mức nồng độ: 95- 105%, RSD tỷ lệ thu hồi mức nồng độ ≤ 5% 2.2.1.6 Độ h nh xá Độ ác Cho biết mức độ sát gần kết thử riêng rẽ i với giá trị trung bình X thu áp dụng phương pháp đề uất cho mẫu thử đồng điều kiện ác định, gồm: - Độ lặp lại: + Thử mẫu thử độc lập ngày + Xác định lượng hoạt chất hòa tan, so sánh với dung dịch chuẩn phương trình hồi quy tuyến tính + Xác định RSD % kết hoạt chất hòa tan mẫu Yêu ầu: RSD < 6% (tùy theo chuyên luận cụ thể) - Độ ác trung gian: Tiến hành độ lặp lại khác ngày, khác kiểm nghiệm viên, khác thiết bị Yêu ầu: RSD < 6% (tùy theo chuyên luận cụ thể) 2.2.2 h giá tươ g đươ g hò t i vitro giữ Glu ofi e v Glucophage Tiến hành theo hướng dẫn chung hướng dẫn thử TĐSH ASEAN, phương pháp thử độ hòa tan ghi tiêu chuân sở thuốc nghiên cứu 24 hướng dẫn FDA Mỹ Xác định hệ số tương đồng f, hai chế phẩm mơi trường hịa tan Hai chế phẩm tương đương hòa tan f, đạt 50 Đánh giá tương đương dựa điều kiện của: - Tối thiểu điểm lấy mẫu (không bao gồm điểm không) - 12 giá trị cho điểm lấy mẫu thuốc - Không giá trị trung bình > 85% hịa tan cho thuốc - Độ lệch chuẩn trung bình thuốc cần phải nhỏ 10% từ điểm thứ đến điểm cuối - Giá trị f2 = 50 – 100 gợi cho thấy biểu đồ hòa tan tương tự Trong trường hợp 85% hai thuốc hòa tan vòng 15 phút, biểu đồ hịa tan chấp nhận tương tự mà không cần phải đánh giá thêm 25 CHƢƠNG KẾT QUẢ V B N U N Qua nghiên cứu Phan Quỳnh Lan cộng (Trường đại học y dược Hà Nội – 2010), cho kết sau: 3.1 Thuốc nghiên c u - Chế phẩm thử viên nén bao phim glucofine 850mg, Domesco sản xuất, SĐK: VD-0623-06, số lô 210907, NSX: 09/2007, HSD: 09/2010 - Chế phẩm đối chiếu: viên nén bao phim glucophage 850mg, Merck Santé s.a.s (Pháp) sản xuất, SĐK VN-1928-06, số lô 106951, NSX: 07/2006, HSD: 07/2011 Các lô thuốc hai chế phẩm đưa vào nghiên cứu có phiếu kiểm nghiệm đạt tiêu chuẩn định lượng, độ đồng khối lượng, độ hoà tan theo tiêu chuẩn qui định 3.2 Nghiên c u tƣơng ƣơng in vitro (thử nghiệm ộ hòa tan) Thử nghiệm độ hòa tan hai chế phẩm thực với thiết bị loại l (giỏ quay), tốc độ 100 vịng/phút, ba mơi trường có pH 1,2; 4,5 6,8; thể tích nhiệt độ mơi trường hịa tan tương ứng 900 ml 37°C + 0,5 °C Ở môi trường, thử nghiệm thực song song với 12 viên thuốc chế phẩm thử đối chứng Lấy dịch hòa tan thời điểm định (5, 10, 15 20 phút), lọc định lượng metformin hydrochlorid mơi trường hồ tan phương pháp đo quang phổ tử ngoại khả kiến bước sóng 233 nm Phương pháp phân tích thẩm định với ch tiêu độ đúng: độ xác; giới hạn định lượng; độ lặp lai ngày khác ngày; khoảng tuyến tính 26 3.2.1 Kết đá h giá tươ g đươ g i vitro thu c nghiên cứu thu đ i chiếu: Bảng 3.9 Độ hịa tan metformin HCl mơi trường hòa tan (n = 12) Thuốc nghiên c u Thuốc ối chiếu Thời iểm % TB hòa tan phút 32,19 6,37 30,53 9,11 Metformin 10 phút Hydroclorid 15 phút (pH 1,2) 20 phút 48,12 2,23 50,34 6,26 88,84 3,49 89,38 5,25 97,14 2,83 100,27 4,37 Dƣợc chất RSD (%) % TB hòa tan RSD (%) So sánh f2 = 87,50 Thuốc nghiên c u Thuốc ối chiếu Thời iểm % TB hòa tan phút 32,26 3,28 28,02 5,11 Metformin 10 phút Hydroclorid 15 phút (pH 4.5) 20 phút 47,53 1,85 47,71 5,20 85,97 4,85 86,02 4,46 99,42 3,87 102,99 2,41 Dƣợc chất RSD (%) % TB hòa tan RSD (%) So sánh f2 = 91,95 Thuốc nghiên c u Thuốc ối chiếu Thời iểm % TB hòa tan phút 31,43 6,48 28,51 7,48 Metformin 10 phút Hydroclorid 15 phút (pH 6,8) 20 phút 47,93 7,55 46,59 5,91 85,55 5,32 85,63 6,61 97,27 1,72 99,20 2,95 Dƣợc chất RSD (%) % TB hòa tan So sánh f2 = 93,19 RSD (%) 27 3.2.2 So sá h đ hòa tan thu đ i chiếu thu c nghiên cứu Việc tiến hành đánh giá tương đương in vitro thuốc nghiên cứu với thuốc đối chiếu ba môi trường pH 1,2; 4,5 6,8 định lượng hoạt chất phương pháp quang phổ thẩm định Từ kết thực nghiệm, cho thấy: Hệ số tương đồng f2 hai chế phẩm môi trường pH 1,2; 4,5 6,8 87.5; 91,95 93,19 (tất lớn 50) Ngoài ra, tất thời điểm lấy mẫu, RSD không 10% theo quy định hướng dẫn ASEAN/FDA Như vậy, chế phẩm viên nén bao phim glucofine 850mg viên nén bao phim glucophage 850mg em tương đương in vitro ba mơi trường hịa tan pH 1,2; 4,5 6,8 Ngồi ra, sử dụng công cụ f2 để so sánh khả phóng thích metformin hydroclorid cặp mơi trường, nhận thấy chế phẩm nghiên cứu phóng thích metformin hydroclorid khơng phụ thuộc vào mơi trường hịa tan, cho phép thuốc hấp thu suốt theo chiều dài ống tiêu hóa Tóm lại, từ kết độ hịa tan, dự đốn mơ hình phóng thích hoạt chất chế phẩm nghiên cứu thuốc đối chiếu ống tiêu hóa tương tự nhau, làm sở ban đầu cho tương đồng trình hấp thu thuốc vào máu để đạt hiệu trị liệu thuốc nghiên cứu với thuốc đối chiếu 28 KẾT U N Nghiên cứu đánh giá độ hòa tan thực nhằm hai mục đích: đảm bảo chất lượng đánh giá thay cho thử TĐSH in vivo Chính vậy, bước đề đảnh giá so sánh chất lượng Glucofine Glucophage, thử nghiệm so sánh độ hòa tan hai chế phầm thực Kết cho thấy, ba mơi trường có pH khác nhau, hai chế phẩm hòa tan nhanh (trên 85% hoạt chất hòa tan vòng 15 phút), hệ số tương đồng f2 đạt giá trị lớn 50, độ lệch chuẩn tương đối (RSD) tỷ lệ hòa tan thời điểm