TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LBM HÓA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÀI THU HOẠCH MÔN KIỂM NGHIỆM THỰC PHẨM KIỂM NGHIỆM CHẤT PHỤ GIA NATRI SACCHARIN TRONG THỰC PHẨM Họ vi n L Văn Bẩy MSHV 20121010507 Lớp CK I kiểm nghiệm thuố và độ hất Khóa 2020 – 2022 GVHD PGS TS Nguyễn Thị Ngọ Vân Cần Thơ – 2022 TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ KHOA DƢỢC LBM HÓA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÀI THU HOẠCH MÔN KIỂM NGHIỆM THỰC PHẨM KIỂM NGHIỆM CHẤT PHỤ GIA NATRI SACCHARIN TRONG THỰC PHẨM Họ vi.
T NG QU N
Tổng quan về chất phụ gia thực phẩm natri saccharin
Natri saccharin (C7H4NNaO3S.2H2O) là muối natri của saccharin (C7H5NO3S), được phát hiện vào năm 1879 bởi nhà hóa học Constantin Fahlberg trong khi làm việc tại phòng thí nghiệm của giáo sư Ira Remsen tại Đại học Johns Hopkins, Baltimore.
Vào giữa những năm 1880, Fahlberg phát hiện ra vị ngọt trên tay khi làm việc với benzoic sulfimide từ nhựa than đá và đã đặt tên cho hợp chất này là saccharin, dựa trên từ "saccharum" trong tiếng Latin có nghĩa là đường mía Ông cùng với Remsen đã phát triển quy trình tổng hợp saccharin từ toluen và công bố khám phá của họ ra thế giới Đến năm 1884, Fahlberg đã giành được bằng sáng chế và bắt đầu sản xuất saccharin ở quy mô công nghiệp.
Saccharin, đường hóa học đầu tiên được sử dụng như chất phụ gia thay thế cho đường trong thực phẩm dành cho bệnh nhân tiểu đường, đã xuất hiện từ năm 1907 Sự phổ biến của saccharin gia tăng trong Thế chiến thứ nhất do tình trạng thiếu đường Đến những năm 1960, saccharin được quảng cáo như một giải pháp giảm cân, nổi bật nhất với tên thương mại Sweet’n Low (Cumberland Packing Corp, Brooklyn).
Vào năm 1977, một nghiên cứu tại Canada chỉ ra rằng saccharin có thể gây ung thư bàng quang ở chuột, dẫn đến việc FDA cấm sử dụng saccharin trong thực phẩm và dược phẩm Tuy nhiên, do saccharin là chất ngọt nhân tạo duy nhất vào thời điểm đó và được nhiều người, đặc biệt là bệnh nhân tiểu đường, ưa chuộng, Quốc hội Mỹ đã phải cho phép sử dụng lại nhưng yêu cầu ghi rõ trên nhãn rằng sản phẩm có chứa saccharin có nguy cơ gây hại cho sức khỏe Sau hơn 30 nghiên cứu chứng minh saccharin an toàn cho con người, đến cuối năm 2000, FDA đã chính thức loại bỏ saccharin khỏi danh sách các chất gây ung thư và hủy bỏ yêu cầu ghi nhãn cảnh báo.
Mặc dù phải đối mặt với sự cạnh tranh từ các loại chất làm ngọt khác và có vị kim loại khi sử dụng ở nồng độ cao, saccharin vẫn giữ vị trí phổ biến trong thị trường hiện nay.
Tính chất của chất phụ gia thực phẩm natri saccharin
1.2.1 Tính chất lý hóa của natri saccharin
- Cảm quan: Dạng tinh thể hoặc bột tinh thể trắng, không mùi hoặc có mùi thơm nhẹ
- ộ ngọt: gấp khoảng 300 - 400 lần đường saccharose
- Tên hóa học: Muối natri dihydrat của 1,2-Benzisothiazolin-3(2H)- one-1,1-dioxid, 3-oxo-2,3-dihydrobenzo[d]isothiazole-1,1-dioxid; natri obenzosulfimid
- ADI: 0-5 mg/kg thể trọng
- Công thức hóa học: C7H4NNaO3S.2H2O
- Khối lƣợng phân tử: 241,19 g/mol
- ộ tan: dễ tan trong nước, ít tan trong ethanol [1], [2]
Hình 1 1 Công thức cấu tạo của natri saccharin
- Remsen và Fahlberg đã tổng hợp saccharin từ toluen nhƣng hiệu suất lúc đó rất thấp [6]
Hình 1 2 quy trình tổng hợp saccharin của Remsen và Fahlberg
Vào năm 1950, công ty hóa chất Maumee tại Toledo đã phát triển một phương pháp cải tiến để sản xuất saccharin Phương pháp này bao gồm việc cho acid anthranilic (NH2C6H4COOH) phản ứng với acid nitrơ (HNO2), SO2, Cl2 và sau đó là NH3.
Hình 1 2 quy trình tổng hợp saccharin của công ty hóa chất Maumee
1.3 Độc tính và giới hạn cho phép của chất phụ gia thực phẩm natri saccharin
Saccharin là một chất tạo ngọt gấp 300 lần so với sucrose, thường được sử dụng trong nhiều loại thực phẩm như nước ngọt, bánh nướng, mứt và kẹo Trong cơ thể, saccharin không bị hấp thu qua hệ tiêu hóa, không ảnh hưởng đến hàm lượng insulin trong máu và không cung cấp năng lượng, do đó được xếp vào nhóm chất tạo ngọt không calo, phù hợp cho bệnh nhân tiểu đường, ung thư và tổn thương gan Nghiên cứu cho thấy saccharin có thể tương tác với thuốc và ảnh hưởng đến hoạt động của năm enzym cytochrom P450 (CYPs) ở chuột đực, nhưng không có ảnh hưởng đáng kể đến dược động học của bupropion khi sử dụng đồng thời Kết quả cho thấy saccharin an toàn với nguy cơ tương tác thuốc rất thấp, với LD50 là 17.500 mg/kg đối với chuột nhà và 14.200 mg/kg đối với chuột cống.
Theo Phụ lục 2 của Thông tư số 24/2019/TT-BT ngày 30 tháng 8 năm 2019, quy định về quản lý và sử dụng phụ gia thực phẩm, mức sử dụng tối đa của phụ gia nhóm saccharin, bao gồm natri saccharin, trong thực phẩm được phép sử dụng như sau [5].
Bảng 1 1 Mức sử dụng tối đa phụ gia nhóm saccharin
C C QU CHU N V NGHI N C U I N QU N ẾN CHẤT PHỤ GI TH C PH M N TRI S CCH RIN
Tại Việt Nam
Nhóm phụ gia thực phẩm saccharin, đặc biệt là natri saccharin, được sử dụng phổ biến trong thực phẩm tại Việt Nam Do đó, việc phân tích và kiểm soát hàm lượng chất phụ gia này trong thực phẩm đang được các cơ quan chức năng chú trọng, thể hiện qua việc ban hành các Quy chuẩn kỹ thuật Quốc gia và Tiêu chuẩn Quốc gia liên quan đến nhóm chất tạo ngọt tổng hợp này.
2.1.1 Quy chuẩn kỹ thuật Quốc gia đối với phụ gia thực phẩm natri saccharin, số QCVN 4-28:2020/BYT
Quy trình phân tích natri saccharin bằng phương pháp chuẩn độ thể tích được miêu tả cụ thể nhƣ sau:
Để xác định hàm lượng natri saccharin trong mẫu thử, cân chính xác 0,3 g mẫu đã sấy khô và hòa tan trong 20 ml dung dịch acid acetic băng Thêm 2 giọt dung dịch tím tinh thể 1% làm chất chỉ thị, sau đó chuẩn độ bằng acid percloric 0,1N Kết thúc quá trình chuẩn độ khi màu dung dịch chuyển từ tím sang xanh lá cây qua xanh nhạt Thực hiện song song với mẫu trắng và hiệu chỉnh nếu cần thiết Hàm lượng phần trăm natri saccharin trong mẫu thử (X) được tính theo công thức.
+ V là thể tích dung dịch acid percloric 0,1 N đã dùng để chuẩn độ, tính bằng mililit (ml);
+ 20,52 là số miligam (mg) natri saccharin tương đương với 1 ml dung dịch acid percloric 0,1 N;
+ W là khối lƣợng mẫu thử đã sấy khô, tính bằng gam (g);
+ 1000 là hệ số chuyển đổi từ miligam (mg) sang gam (g) [2]
2.1.2 Tiêu chuẩn Quốc gia số TCVN 10030:2013, Thực phẩm – Xác định saccharin trong chế phẩm tạo ngọt – phương pháp đo phổ
Để xác định hàm lượng natri saccharin, cần chuẩn bị dung dịch mẫu thử bằng cách hòa tan chế phẩm tạo ngọt trong dung dịch natri hydroxit Phân tích sẽ được thực hiện ở bước sóng 265 nm, nơi có độ hấp thụ cực đại của natri saccharin.
Dung dịch natri hydroxit c(NaOH) = 0,1 mol/l
Dung dịch gốc natri saccharin, p(NaC7H4NO3S) 1 g/l 2)
Nghiền nhỏ ít nhất 1,5 g natri saccharin chuẩn và cân chính xác khoảng 280 mg (m1) của chất chuẩn này chưa sấy, tương đương với khoảng 250 mg natri saccharin dạng khan hoặc 223 mg saccharin dạng imid tự do Sau đó, hòa tan trong dung dịch natri hydroxit trong bình định mức 250 ml và thêm dung dịch natri hydroxit đến vạch.
Bảo quản chất chuẩn natri saccharin đã nghiền nhỏ còn lại Tiến hành xác định ngay hao hụt khối lƣợng khi sấy
Tính nồng độ khối lƣợng, , của natri saccharin dạng khan, bằng miligam trên lít dung dịch gốc, theo Công thức (1):
Trong đó: m 1 là khối lƣợng chất chuẩn natri saccharin chƣa sấy, dùng để chuẩn bị dung dịch gốc, tính bằng miligam (mg);
L D là hao hụt khối lƣợng khi sấy, tính bằng phần trăm (%)
Dung dịch chuẩn natri saccharin
Sử dụng pipet để lấy 2,0 ml, 5,0 ml, 10,0 ml và 15,0 ml dung dịch gốc natri saccharin, sau đó cho vào các bình định mức 100 ml riêng biệt Tiếp theo, thêm dung dịch natri hydroxit đến vạch Mỗi lít dung dịch này sẽ chứa tương ứng khoảng 20 mg, 50 mg, 100 mg và 150 mg natri saccharin dạng khan.
CHÚ THÍCH: Có thể sử dụng thêm các dung dịch có nồng độ nằm trong dải tuyến tính để dựng đường chuẩn
Xác định khối lượng trung bình viên tạo ngọt
Xác định khối lƣợng của ít nhất 20 viên tạo ngọt, chính xác đến 0,1 mg, rồi tính khối lƣợng trung bình (m 2 ) của một viên
CHÚ THÍCH: ể tăng độ chính xác, nên sử dụng 100 viên tạo ngọt
Xác định hao hụt khối lượng của chất chuẩn khi sấy
Để chuẩn bị dung dịch gốc, cân khoảng 1,0 g natri saccharin đã nghiền nhỏ với độ chính xác 0,1 mg Sau đó, sấy chất chuẩn này ở nhiệt độ 105 °C ± 2 °C cho đến khi đạt khối lượng không đổi Cuối cùng, cân lại để xác định hao hụt khối lượng khi sấy (L D) và tính toán kết quả theo phần trăm.
Chuẩn bị dung dịch mẫu thử
Hòa tan 35 mg natri saccharin đã nghiền nhỏ (m 0), cân chính xác đến 0,1 mg, trong dung dịch natri hydroxit trong bình định mức 50 ml, sau đó thêm dung dịch natri hydroxit cho đến vạch định mức.
Dùng pipet lấy 20,0 ml dung dịch này cho vào bình định mức 100 ml, thêm dung dịch natri hydroxit đến vạch
Dung dịch chuẩn natri saccharin chứa khoảng 100 mg natri saccharin khan trong 1.000 ml có phổ hấp thụ trong khoảng bước sóng 230 nm đến 300 nm Sử dụng cuvet thạch anh và dung dịch natri hydroxit làm dung dịch so sánh, bước sóng có độ hấp thụ cực đại được xác định là khoảng 265 nm.
- Dựng đường chuẩn bằng cách đo độ hấp thụ của các dung dịch chuẩn natri saccharin ở bước sóng có độ hấp thụ cực đại 265nm
- o phổ hấp thụ của dung dịch mẫu thử theo quy định rồi xác định độ hấp thụ ở bước sóng có độ hấp thụ cực đại 265nm
Nếu đồ thị của dung dịch mẫu thử không giống với đồ thị của dung dịch chuẩn, điều này có thể chỉ ra sự hiện diện của chất gây nhiễu Trong trường hợp này, phương pháp phân tích này sẽ không thể được áp dụng.
Để kiểm tra khả năng áp dụng của phương pháp, cần xác định độ hấp thụ ở các bước sóng trên và dưới 15 nm so với bước sóng có độ hấp thụ cực đại khoảng 265 nm Tỷ số độ hấp thụ giữa các giá trị này phải tương đồng với tỷ số thu được khi sử dụng dung dịch chuẩn natri saccharin.
Để xây dựng đường chuẩn cho giá trị độ hấp thụ của dung dịch chuẩn natri saccharin (4.4), cần xác định các nồng độ natri saccharin tính bằng miligam trên lít Đường chuẩn phải có tính tuyến tính, cho phép xác định nồng độ natri saccharin, x, tương ứng với độ hấp thụ của dung dịch mẫu thử, cũng được tính bằng miligam trên lít.
Có thể dùng cách tính khác sử dụng đường hồi quy
- Tính phần khối lƣợng, w 1, của natri saccharin dạng khan, bằng miligam trên kilogam chế phẩm tạo ngọt, theo Công thức (2):
Nồng độ natri saccharin dạng khan trong dung dịch mẫu thử, ký hiệu là x, được đo từ đường chuẩn và tính bằng miligam trên lít (mg/l) Khối lượng mẫu ban đầu, ký hiệu là m0, được tính bằng miligam (mg).
- Tính phần khối lƣợng, w 2, của natri saccharin dạng khan, bằng miligam trên viên, theo Công thức (3):
Trong đó: m 2 khối lƣợng trung bình viên tạo ngọt (xem 6.1), tính bằng miligam (mg); x, m 0 xem Công thức (2)
- Tính phần khối lượng, w 3, của natri saccharin ngậm hai phân tử nước, bằng miligam trên kilogam chế phẩm tạo ngọt, theo Công thức (4): w 3 = w 1 x 1,175 (4)
- Tính phần khối lƣợng, w 4 , của saccharin, bằng miligam trên kilogam chế phẩm tạo ngọt, theo Công thức (5): w 4= w 1 x 0,893 (5)
Báo cáo kết quả phải tuân thủ quy định hiện hành và được trình bày bằng một trong các giá trị thu được từ 7.2.1 đến 7.2.4, sau khi đã làm tròn đến một chữ số thập phân.
Các ví dụ về phổ hấp thụ của dung dịch chuẩn natri saccharin
Dải bước sóng Từ 200 nm đến 300 nm
Hình 2 1 phổ hấp thụ của dung dịch chuẩn natri saccharin Các giá trị tối đa hoặc tối thiểu đƣợc công nhận:
1: Bước sóng = 226 nm ộ hấp thụ = 2,502197
2: Bước sóng = 246 nm ộ hấp thụ = 0,498856
3: Bước sóng = 270 nm ộ hấp thụ = 0,750565
Dải bước sóng Từ 246 nm đến 300 nm
Hình 2 2 phổ hấp thụ của dung dịch mẫu có natri saccharin Giá trị tối đa đƣợc công nhận:
1 : Bước sóng = 270 nm ộ hấp thụ = 0,750565
2.1.3 Tiêu chuẩn Quốc gia số TCVN 10033:2013, Thực phẩm – xác định cyclamate và saccharin trong các chế phẩm tạo ngọt dạng lỏng – phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao
Natri cyclamate, saccharin và axit sorbic được xác định trong dịch pha loãng của chế phẩm tạo ngọt dạng lỏng bằng phương pháp HP C, kết hợp với đo quang trong dải UV Quá trình nhận diện dựa vào thời gian lưu, trong khi định lượng được thực hiện bằng phương pháp ngoại chuẩn thông qua diện tích hoặc chiều cao pic.
Dung dịch kali dihydro orthorphosphat c(KH 2 PO 4 ) = 0,0125 mol/l
Trộn 70 phần thể tích dung dịch kali dihydro orthorphosphat với 30 phần thể tích metanol, rồi chỉnh pH đến 4,5 bằng axit phosphoric Loại bỏ phần hạt bằng bộ lọc màng
Sau khi áp dụng phương pháp này, cần tiến hành bơm nước qua thiết bị HP C để ngăn ngừa hiện tượng ăn mòn do tiếp xúc lâu dài với các chất rửa giải chứa phosphat, đồng thời tránh tình trạng tắc nghẽn do sự kết tủa của phosphat.
Dung dịch gốc natri cyclamate , (C 6 H 11 NHSO 3 Na) 4 mg/ml
Trên thế giới
Việc định lượng saccharin và các muối của nó đã thu hút sự chú ý toàn cầu, với nhiều phương pháp phân tích được áp dụng, từ những kỹ thuật đơn giản như đo quang và tạo dẫn xuất N-bromo đến các phương pháp hiện đại như HPLC kết hợp với đầu dò tán xạ bay hơi (ESD) và đầu dò CAD Quy trình xử lý mẫu có thể đơn giản như chiết lỏng-lỏng hoặc phức tạp hơn, tùy thuộc vào loại mẫu phân tích như nước ngọt, bánh kẹo, nước trái cây hay yaourt Nghiên cứu thường tập trung vào việc phân tích đồng thời natri saccharin và các phụ gia thực phẩm khác như aspartame, acesulfame-K, sucralose, natri benzoate, và axit citric, phản ánh xu hướng sử dụng nhiều chất phụ gia trong thực phẩm hiện nay.
Chương III PHƯƠNG PH P L MẪU VÀ PH N T CH CHẤT PHỤ
GIA NATRI SACCHARIN 3.1 Phương pháp xử lý mẫu
Do sự phức tạp của chất nền trong mẫu thực phẩm, quá trình định lượng các chất phụ gia thực phẩm thường yêu cầu bước xử lý mẫu trước khi phân tích Các mẫu thực phẩm có thể chứa carbohydrate, protein, lipid, khoáng chất, chất bảo quản, màu, chất làm đặc và vitamin, tất cả đều có thể ảnh hưởng đến việc xác định saccharin Quy trình xử lý mẫu bao gồm ba bước chính: đầu tiên, mẫu cần được làm đồng nhất; thứ hai, saccharin được chiết xuất từ nền mẫu thực phẩm; và thứ ba, dịch chiết cần được làm sạch trước khi phân tích Nếu cần, bước cuối cùng có thể là cô đặc dịch chiết và pha loãng lại với dung môi thích hợp.
Một số phương pháp làm sạch mẫu phổ biến bao gồm chiết pha rắn (SPE), thẩm tách, chiết lỏng-lỏng (LLE), kết tủa và lọc Trong đó, SPE là một trong những phương pháp được ưa chuộng nhất hiện nay, giúp phân đoạn các hợp chất dựa trên ái lực của chúng với pha tĩnh Quy trình chiết pha rắn bao gồm bốn bước chính: nhồi và cân bằng cột, nạp dịch chiết thực phẩm, rửa giải các chất nhiễu và cuối cùng là rửa giải các chất phân tích bằng dung môi thích hợp Các thông số quan trọng cần lưu ý trong quá trình này bao gồm loại pha rắn, dung môi, độ pH và tốc độ rửa giải.
Trong các nghiên cứu về saccharin, nhiều loại mẫu thực phẩm đã được xử lý trước khi phân tích, như nước giải khát Cola thường được khử khí bằng siêu âm Tương tự, hầu hết các đồ uống có ga cũng trải qua quy trình khử khí bằng siêu âm, sục khí nitơ hoặc trong môi trường chân không Các mẫu kẹo cao su được chiết xuất bằng hỗn hợp axit axetic băng, nước và cloroform, trong khi các mẫu kẹo cứng hoặc mềm được hòa tan trong nước Sữa và sản phẩm từ sữa được đồng nhất và pha loãng với nước cất trước khi phân tích Đối với mứt ăn kiêng, saccharin được xác định bằng cách trộn với nước, đun sôi, pha loãng và lọc Mẫu trái cây đã qua xử lý được xay nhuyễn, đồng nhất, thêm nước và chiết xuất bằng sóng siêu âm Khi phân tích nước trái cây, cần thực hiện ly tâm trước khi lọc Các mẫu đơn giản như chất làm ngọt lỏng chỉ cần pha loãng hoặc hòa tan trong nước khử ion hoặc dung dịch đệm thích hợp.
3.2 Phương pháp phân tí h hất phụ gia natri saccharin
Ba tham số chính và quan trọng nhất để lựa chọn phương pháp phân tích :
- Thuốc thử và thiết bị sử dụng phải sẵn có và có giá thành thấp;
- Phương pháp đủ độ nhạy với giới hạn phát hiện thấp, vì các chất tạo ngọt thường tồn tại trong thực phẩm với nồng độ vi lượng;
- Lượng mẫu và thuốc thử sử dụng phải tương đối thấp
Một số kỹ thuật phân tích natri saccharin đáp ứng các yêu cầu trên bao gồm cảm biến sinh học, đo quang phổ, sắc k , phân tích điện
Cảm biến sinh học cho phép phát triển phương pháp sàng lọc nhanh saccharin với chi phí thấp, sử dụng màng lipid để phát hiện và theo dõi nhiều hợp chất trong thực phẩm Để loại bỏ sự nhiễu từ protein, dung dịch chất mang được điều chế nhằm ngăn chặn sự hấp phụ các hợp chất này trong màng lipid kép Một phương pháp đo độ dẫn điện dựa trên màng lipid kép ổn định bề mặt (s-BLM) đã được phát triển, cho phép theo dõi saccharin và các chất tạo ngọt khác với tín hiệu dòng ion điện hóa gia tăng trong vài giây Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng cảm biến màng nanohybrid (BLM nhân tạo) cho kết quả ổn định cao hơn so với màng lipid kép ổn định bề mặt (s-BLM).
Phép đo quang phổ là một kỹ thuật phổ biến để xác định chất tạo ngọt, nhưng nó gặp khó khăn do nhạy cảm với nhiễu trong mẫu thực phẩm Để khắc phục vấn đề này, một số phương pháp đã được đề xuất, bao gồm việc tạo dẫn xuất với Nile Blue (Cordoba và cộng sự, 1985), kết hợp với hệ thống FIA (Phân tích dòng chảy) (Capitán-Vallvey và cộng sự, 2006), và phương pháp quang phổ dựa trên phản ứng oxy hóa của saccharin với KMnO4 (Ni và cộng sự, 2009).
Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) là phương pháp phổ biến để phân tích saccharin trong thực phẩm, cho phép tiêm mẫu lỏng vào cột sau khi lọc Nghiên cứu của Lawrence và Charbonneau (1988) đã sử dụng cột C8 với kích thước hạt nhồi 5 μm, kích thước 150 mm x 4,6 mm, và áp dụng pha động gradient từ 3% acetonitril trong 0,02M KH2PO4 (pH 5) đến 20% acetonitril trong 0,02M KH2PO4 (pH 3,5) với tốc độ dòng 1,0 mL/phút và bước sóng phát hiện 210 nm Bên cạnh HPLC, điện di mao quản (CE) cũng là một giải pháp thay thế hiệu quả với khả năng phân tích tương đương, trong đó có các kỹ thuật như sắc ký điện động vi sao (MEKC) và điện di mao quản (CITP).
Natri saccharin, một loại phụ gia thực phẩm tạo ngọt, đã được chứng minh là an toàn cho người dùng khi sử dụng ở nồng độ khuyến cáo (ADI: 0-5 mg/kg thể trọng) Tuy nhiên, việc sử dụng phổ biến có thể dẫn đến lạm dụng hoặc quá liều trong cuộc sống hàng ngày, do đó, kiểm soát hàm lượng natri saccharin là điều cần thiết.
Việc xác định saccharin và các chất tạo ngọt khác trong thực phẩm là rất quan trọng để đảm bảo an toàn cho người tiêu dùng Các phương pháp phân tích hiện nay được phát triển với độ nhạy cao, đơn giản, nhanh chóng và chi phí thấp, trong đó HPLC là phương pháp ưu tiên do khả năng đa phân tích, tính tương thích với các đặc tính hóa lý của chất tạo ngọt, cùng với độ nhạy và độ bền cao Ngoài ra, kỹ thuật cảm biến sinh học cũng được áp dụng cho các mẫu đơn giản hơn với giá thành rẻ và quy trình chuẩn bị mẫu dễ dàng Trong tương lai, nhu cầu về các phương pháp thay thế để xác định saccharin ngày càng tăng, dẫn đến việc áp dụng các kỹ thuật hiện đại như phương pháp khối phổ hoặc khối phổ song song đang được kỳ vọng.
Việc xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cho từng chất phân tích cần phải đánh giá khả năng của đơn vị để đảm bảo tính khả thi, đồng thời phải đáp ứng yêu cầu bằng hoặc cao hơn các kỹ thuật phân tích trong tài liệu chính thức Ngoài ra, phương pháp cũng cần được thẩm định theo hướng dẫn sau khi phát triển.
Chúng tôi đề xuất một phương pháp xác định chất phụ gia thực phẩm natri saccharin trong mẫu nước ngọt có ga bằng cách sử dụng hệ thống HP C kết hợp với đầu dò PD.
- Cột: Thermo Hypersil C18 (150 4,6 mm ID, 5 m) hoặc tương đương
- Pha động: nước – methanol, điều chỉnh ở các tỷ lệ khác nhau
- Detector: PD , bước sóng 210 nm
- Tốc độ dòng: 0,8 ml/phút
- Thể tớch tiờm mẫu: 20 àl
- Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng
- Dung môi pha mẫu: nước tinh khiết đạt chuẩn sắc ký
Mẫu nước ngọt có ga được loại khí trong bể siêu âm trong 30 phút (nhiệt độ phòng) và pha loãng với nước dung môi pha mẫu ở tỷ lệ 1:10
* Pha dung dịch đối chiếu:
Cân chính xác khoảng 25 mg chuẩn natri saccharin cho vào bình định mức
Để chuẩn bị dung dịch, cần bổ sung 100 ml dung môi pha mẫu Dung dịch này sẽ được pha loãng liên tiếp với dung môi để đạt nồng độ mong muốn Tất cả các dung dịch cần được bảo quản ở nơi tối và mát mẻ khi không sử dụng, và các mẫu không nên được lưu trữ quá 14 ngày.
- Triển khai hệ thống sắc ký hoạt động ổn định
Để kiểm tra tính tương thích hệ thống trên dung dịch đối chiếu, cần đảm bảo rằng độ lệch chuẩn tương đối của diện tích pic natri saccharin trong 6 lần tiêm lặp lại mẫu đối chiếu không vượt quá 2,0% Đồng thời, số đĩa lý thuyết phải lớn hơn 2000 và hệ số bất đối phải thỏa mãn điều kiện 0,8 < As.
- Tiến hành sắc ký lần lƣợt với dung dịch đối chiếu và dung dịch thử
Tài liệu tham khảo tiếng việt
1 QCVN 4-8:2010/BYT – Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia về phụ gia thực phẩm – chất ngọt tổng hợp
2 QCVN 4-28:2010/BYT – Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia về phụ gia thực phẩm natri saccharin
3 TCVN 10030:2013 – Thực phẩm - xác định saccharin trong các chế phẩm tạo ngọt - phương pháp đo phổ
4 TCVN 10033:2013 – Thực phẩm - xác định cyclamate và saccharin trong các chế phẩm tạo ngọt dạng lỏng – phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao
5 Thông tƣ 24/2019/TT-BYT - Quy định về quản lý và sử dụng phụ gia thực phẩm
Tài liệu tiếng nướ ngoài
6 Ammar A.Razzak Mahmood, Sahar B Al-Juboori A review: Saccharin discovery, synthesis, and application Ibn Al-Haitham Jour for Pure & Appl
7 Biemer T.A 1989 Analysis of saccharin, acesulfame-K and sodium cyclamate by high performance ion chromatography J Chromatogr 463:463-
8 Boyce M.C 1999 Simultaneous determination of antioxidants, preservatives and sweeteners permitted as additives in food by mixed micellar electrokinetic chromatography J Chromatogr A 847:369-75
9 Capitán-Vallvey L.F., Valencia M.C., Nicolás E Arana, et al 2006.Resolution of an intense sweetener mixture by use of a flow injection sensor with on-line solid-phase extraction-Application to saccharin and aspartame in sweets and drinks Anal Bioanal Chem 385: 385–91.
