Nghiên Cứu Xây Dựng Quy Trình Phân Tích Dư Lượng Luralin Trong Sản Phẩm Thủy Sản

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THUỶ SẢN VÕ PHƯỚC THỌ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH DƯ LƯỢNG TRIFLURALIN TRONG SẢN PHẨM THỦY SẢN (CÁ TRA PANGASIUS HYPOPHTHALMUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CHẾ BIẾN THỦY SẢN 2010 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài luận văn với cố gắn giúp đỡ hết lịng thầy bè bạn Tơi xin chân thành gởi lời cảm ơn đến: Quý thầy cô môn Dinh Dưỡng Chế Biến Thủy Sản, khoa Thủy Sản, trường Đại Học Cần Thơ cho kiến thức quý giá tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Thầy Vương Thanh Tùng tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi lúc gặp khó khăn hoàn thành đề tài luận văn Anh Nguyễn Thanh Phong tạo điều kiện thuận lợi cho thực tập phịng thí nghiệm, cho tơi ý kiến quý giá lời khuyên hữu ích Và cuối cùng, xin chân thành cảm ơn ban động viên ủng hộ suốt trình thực đề tài luận văn Xin chân thành cảm ơn Cần Thơ, ngày tháng Võ Phước Thọ i năm TĨM LƯỢC Đồng Bằng Sơng Cửu Long ngày nay, việc nuôi chế biến thủy sản xuất đặc biệt cá tra tôm trở nên phổ biến xem nghề mang lại thu nhập cao cho người nuôi công ty chế biến thủy sản, nhiên nhiều năm qua ngành đem lại nhiều rủi ro gây nhiều hậu nghiêm trọng cho kinh tế nước nhà nói chung, người ni cơng ty chế biến thủy sản nói riêng Việc xuất thủy sản nước ta phải đối mặt với vấn đề khó khăn lớn, vấn đề dư lượng thuốc bảo vệ thực vật thủy sản sản phẩm thủy sản Thuốc bảo vệ thực vật tồn sản phẩm thủy sản có hại cho sức khỏe người kinh tế nước nhà Trong triflurain xem loại thuốc trừ cỏ có hại cho người đặc biệt động vật thủy sản Vì việc kiểm tra dư lượng trifluralin sản phẩm thủy sản mmotj yêu cầu cấp thiết nhằm để đảm bảo yêu cầu chất lượng thủy sản xuất Đề tài “Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích dư lượng Trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra - Pangasius hypophthalmus) phương pháp sắc ký” thực với mục đích tìm quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản thích hợp Đề tài thực với thí nghiệm sau: Thí nghiệm 1: Xác định nhiệt độ cột sắc ký quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) phương pháp sắc ký khí (Phân tích với dung dịch chuẩn trifluralin nồng độ 40 ppb) Thí nghiệm 2: xác định cột sắc ký quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) (phân tích với dung dịch chuẩn trifluralin nồng độ 200 ppb) Thí nghiệm 3: Xác định quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thuỷ sản (cá tra) thơng qua việc xác định hố chất trích ly phương pháp chạy sắc ký thích hợp: dư lượng trifluralin thủy sản ly trích dung dịch sau: acetonitril : nước (tỉ lệ 2: 1), methanol, ethylacetat, sau ly trích dung dịch trên, dịch trích cạn hồn lưu lạy 1ml methanol phân tích sắc ký lỏng cao áp (HPLC), 1ml n – hexane phân tích sắc ký khí (GC) Qua q trình khảo sát, kết quy trình li trích acetonitril : nước (tỉ lệ : 1) phân tích máy sắc ký khí (GC) đạt kết tốt nhất, cho hiệu suất thu hồi trung bình 71.9 % độ nhiễu thấp ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM LƯỢC ii MỤC LỤC iii DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vi CÁC TỪ VIẾT TẮT vii CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề: 1.2 Nội dung đề tài: 1.3 Mục tiêu nghiên cứu: 1.4 Thời gian thực đề tài: CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cá tra: .4 2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.1.2 Đặc điểm dinh dưỡng 2.1.3 Đặc điểm sinh trưởng 2.1.4 Thành phần hoá học cá tra .5 2.2 Giới thiệu thuốc trừ cỏ trifluralin: .5 2.2.1 Tên gọi: 2.2.2 Tính chất vật lý hóa học: (Theo qppl.quangngai.gov.vn) 2.2.3 Việc sử dụng Trifluralin: 2.2.4 Độc tính trifluralin: 2.2.5 Sự nhiễm độc Trifluralin: .10 2.2.6 Nguyên nhân nhiễm trifluralin thủy sản (cá tra): .11 2.3 Giới thiệu phương pháp sắc ký: 11 2.3.1 Lịch sử phát triển phương pháp sắc ký: 11 2.3.2 Khái niệm phương pháp sắc ký: .12 2.4 Quy trình phân tích: 21 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 Phương tiện nghiên cứu: 22 3.1.1 Địa điểm nghiên cứu: 22 3.1.2 Nguyên liệu nghiên cứu: 22 3.1.3 Thiết bị: .22 3.1.4 Hóa chất: 22 3.2 Phương pháp nghiên cứu: 23 3.2.1 Thí nghiệm 1: Xác định nhiệt độ cột sắc ký quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) phương pháp sắc ký khí 23 iii 3.2.2 Thí nghiệm 2: xác định cột sắc ký quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 25 3.2.3 Thí nghiệm 3: Xác định quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thuỷ sản (cá tra) thơng qua việc xác định hố chất trích ly phương pháp chạy sắc ký thích hợp: 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .31 4.1 Kết thí nghiệm 1: xác định phương pháp phân tích thiết bị sắc ký khí (GC) quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) 31 4.2 Kết thí nghiệm 2: xác định cột sắc ký quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) phương pháp sắc ký lỏng cao áp 33 4.3 Kết thí nghiệm 3: xác định quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thuỷ sản (cá tra) thông qua việc xác định hố chất trích ly phương pháp chạy sắc ký thích hợp: 35 4.3.1.Xây dựng dường chuẩn cho GC HPLC 35 4.3.2.Cách tính nồng độ trifluralin thật (lượng trifluralin chuẩn vào mẫu), nồng độ thu hồi, hiệu suất thu hồi hiệu suất thu hồi trung bình trifluralin sau ly trích: 37 4.3.3 Kết thí nghiệm 3: xác định quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thuỷ sản (cá tra) thơng qua việc xác định hố chất trích ly phương pháp chạy sắc ký thích hợp: 39 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 5.1 Kết luận 43 5.2 Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC 47 PHỤ LỤC 49 PHỤ LỤC 51 iv DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1: Thành phần hoá học cá tra Bảng 2.2 Thành phần hóa học cá tra fillet Bảng 2.3 Độ hịa tan trifluralin dung mơi 250C: Bảng 2.4 Mức độc hại cấp tính số động vật thủy sản bảng sau: 10 Bảng 3.1 Chương trình chạy gradient cho cột gemini C18 26 Bảng 3.2 Chương trình chạy gradient cho cột STR – ODS – II .26 Bảng 4.1 Kết chạy sắc ký khí với dung dịch chuẩn nồng độ 40 ppb theo chương trình chạy đẳng nhiệt 800C, 1500C, 2000C chương trình nhiệt độ 31 Bảng 4.2 Kết chạy sắc ký lỏng cao áp với dung dịch chuẩn 200ppb áp dụng với cột sắc ký khác 33 Bảng 4.3 Dãy tín hiệu (diện tích peak) dung dịch chuẩn trifluralin nồng độ khác 35 Bảng 4.4 Dãy tín hiệu (diện tích peak) dung dịch chuẩn trifluralin nồng độ khác 36 Bảng 4.5 Hiệu suất thu hồi trung bình phương pháp ly trích phân tích với sắc ký khí (GC) áp dụng chương trình nhiệt độ 39 Bảng 4.6 Hiệu suất thu hồi trung bình phương pháp ly trích phân tích với sắc ký lỏng cao áp (HPLC) với cột STR – ODS - II 40 v DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1 Cá tra (Pangasius hypophthalmus) .1 Hình 2.2 Cơng thức cấu tạo trifluralin Hình 2.3 Hệ thống sắc ký khí (GC) 13 Hình 2.4 cấu tạo đầu dò ECD 15 Hình 2.5 Hệ thống sắc ký lỏng cao áp (HPLC) 17 Hình 2.6 quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) 21 Hình 3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 24 Hình 3.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 26 Hình 3.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 29 Hình 4.1 đồ thị biểu thị diện tích peak sắc ký (tín hiệu) dung dịch chuẩn trifluralin nồng độ 40 ppb chạy sắc ký khí chương trình nhiệt độ cột khác .31 Hình 4.2 đồ thị biểu thị diện tích peak (tín hiệu) trifluralin chạy với cột sắc ký lỏng cao áp (HPLC) nồng độ 200 ppb .34 Hình 4.3 Đồ thị đường chuẩn trifluralin chạy sắc ký khí (GC) nồng độ khác 36 Hình 4.4 Đồ thị đường chuẩn trifluralin chạy sắc ký lỏng cao áp (HPLC) nồng độ khác 37 Hình 4.5 Đồ thị biểu thị hiệu suất thu hồi trifluralin áp dụng phương pháp ly trích từ mẫu cá tra phân tích sắc ký khí (GC) sắc ký lỏng cao áp (HPLC) .40 Hình 4.6 Sắc đồ trifluralin ly trích methanol phân tích sắc ký khí (GC) .41 Hình 4.7 Sắc đồ trifluralin ly trích dung dịch acetonitril : nước (tỉ lệ : 1) phân tích sắc ký khí (GC) 42 Hình 5.1 Quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) sắc ký khí (GC) 44 vi CÁC TỪ VIẾT TẮT WTO Tổ chức Thương mại Thế giới (World Trade Organization) EU Liên Minh Châu Âu (European Union) Nafiqad Cục quản lý chất lượng nông lâm sản thuỷ sản DN Doanh nghiệp LD50 Nồng độ gây chết 50% cá thể ECD Đầu dò bắt điện tử (electron capture detection) FID Đầu dò ion hóa lửa (flame ionization detector) GC Hệ thống sắc ký khí (Gas chromatograph) HPLC Hệ thống sắc ký lỏng cao áp (high performent liquid chrogratomaphy) UV – VIS Quang phổ vùng tử ngoại (UV) – vùng khả kiến (VIS) WHO Tổ chức Y Tế Thế Giới (World Health Organization) vii Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề: Bước vào sân chơi WTO, ngành thủy sản Việt Nam (cũng số ngành khác Cà phê, Hạt điều, Gạo…) cịn có nhiều hội để vươn thị trường giới, góp phần đẩy kinh tế nhanh dự kiến có phải chủ quan khâu quản lý từ nhà sản xuất (công ty) nước đến quan chức thương mại, kiểm dịch…tự đánh giá trị thương hiệu bị từ chối bị cấm nhập trường hợp số hàng thủy hải sản Trung quốc xuất sang Hoa Kỳ Người dân nước tiên tiến cảnh báo nguy phơi nhiễm hóa chất độc hại lương thực, từ mặt hàng thủy sản nuôi trồng (Tôm, Lươn, Cá Basa…) Chloramphinecol, Nitrofuran, thuốc bảo vệ thực vật sang thể người ảnh hưởng nghiêm trọng đến hệ miễn nhiễm, khả kháng thuốc tích tụ lâu ngày có khả gây đột biến, rối loạn nội tiết Trong trifuralin loại thuốc trừ cỏ dể bị nhiễm vào thủy sản suốt q trình ni, xem chất độc gây phá vỡ hệ nội tiết, ảnh hưởng đến khả sinh sản đặc biệt bị nghi ngờ chất gây ung thư Theo Nafiqad, năm 2009, Hoa Kỳ EU cảnh báo số lô hàng cá tra xuất VN phát dư lượng thuốc bảo vệ thực vật Trifluralin Nafiqad có đề xuất với số giải pháp nhằm giảm thiểu dư lượng Trifluralin sản phẩm nông lâm thủy sản, đồng thời khuyến cáo DN chế biến cá tra chủ động thực kiểm soát dư lượng Trifluralin cá tra nguyên liệu trước đưa vào chế biến xuất Mấy năm gần (cuối năm 2004) thủy sản xuất Việt Nam bị trả bị phát hóa chất độc hại, thời gian gần theo phản ánh số DN (doanh nghiệp) chế biến thủy sản, kết tự kiểm tra dư lượng Trifluralin cá tra nguyên liệu DN cho thấy tỷ lệ mẫu nhiễm Trifluralin cao, từ 25-30% tổng số mẫu kiểm tra Bên cạnh đó, số nhà nhập nước ngồi đề nghị áp dụng biện pháp kiểm soát Trifluralin sản xuất kinh doanh cá tra nhằm ngăn ngừa phản ánh tiêu cực từ phía thị trường nhập ảnh hưởng xấu tới ngành sản xuất cá tra VN Ngày 15/03/2010 vừa qua Cục Quản lý Chất lượng Nơng lâm sản Thủy sản (NAFIQAD) có buối làm việc với Cục Y dược Thực phẩm Bộ Y tế, Lao động Phúc lợi Nhật Bản an toàn vệ sinh thực phẩm thủy GVHD: Vương Thanh Tùng SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ sản, phía Nhật yêu cầu Việt Nam hợp tác kiểm tra, tra hệ thống đảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm thủy sản Việt Nam từ ngày 14 – 19/3, tập trung đánh giá hoạt động quản lý phân phối thuốc thú y kiểm sốt dư lượng hóa chất, kháng sinh cấm thủy sản Việt Nam xuất vào Nhật Bản Nhật Bản bắt đầu áp dụng chế độ kiểm tra tăng cường theo mức kiểm 30% số lô hàng cá tra nhập từ Việt Nam cho tiêu Trifluralin vịng 30 lơ tiếp có lô không đạt bị chuyển thành chế độ đặc biệt kiểm 100% lơ hàng Vì việc xác định dư lượng trifluralin sản phẩm thủy sản yêu cầu cấp thiết để dảm bảo yêu cầu chất lượng thủy sản xuất Vì đề tài “Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích dư lượng Trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra - Pangasius hypophthalmus) phương pháp sắc ký” sinh viên Võ Phước Thọ thực hướng dẫn thầy Vương Thanh Tùng nhằm mục đích tìm quy trình phân tích trifluralin thích hợp để phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) 1.2 Nội dung đề tài: - Nghiên cứu quy trình trích ly Trifluralin sản phẩm thủy sản (cá Tra) - So sánh hai phương pháp sắc ký (sắc ký lỏng sắc ký khí) thơng qua hiều suất thu hồi phương quy trình phân tích chất cần phân tích hai phương pháp sắc ký (sắc ký lỏng cao áp sắc ký khí) từ xây dựng quy trình phân tích thuốc trừ cỏ Trifluralin sản phẩm thủy sản (cá Tra) phù hợp 1.3 Mục tiêu nghiên cứu: Nhằm nghiên cứu tìm quy trình phân tích thuốc trừ cỏ Trifluralin phù hợp phương pháp săc ký 1.4 Thời gian thực đề tài: Thời gian thực đề tài: 15 tuần Chuẩn bị: tuần − Nhận đề tài − Sưu tầm tài liệu b Thực tập phịng thí nghiệm viết báo cáo: 12 tuần GVHD: Vương Thanh Tùng SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ A1(%) + A2(%) + A2(%) Atb (%) = Hiệu suất thu hồi trung bình Với AGC(%): Hiệu suất thu hồi trifluralin phân tích sắc ký khí AHP(%): Hiệu suất thu hồi trifluralin phân tích sắc ký lỏng cao áp (HPLC) 4.3.3 Kết thí nghiệm 3: xác định quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thuỷ sản (cá tra) thơng qua việc xác định hố chất trích ly phương pháp chạy sắc ký thích hợp: Một quy trình phân tích thích hợp quy trình phân tích hợp lý, dể thực hiện, tốn thời gian, chi phí hiệu suất thu hồi phải đạt từ 70% trở lên Bảng 4.5 Hiệu suất thu hồi trung bình phương pháp ly trích phân tích với sắc ký khí (GC) với chương trình nhiệt độ Dung dich ly trích C1 C2 C3 Nồng độ thật XGC (ppb) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 Diện tích peak 72004.30 64186.00 71584.87 60339.20 59275.90 57971.70 100044.1 124317.4 107324.7 GVHD: Vương Thanh Tùng Nồng độ thu hồi xGC (ppb) 74.85 66.58 74.4 62.51 61.39 60.01 59.73 74.23 64.08 39 Hiệu suất thu hồi AGC (%) 74.85 66.58 74.4 62.51 61.39 60.54 59.73 74.23 64.08 Hiệu suất thu hồi trung bình Atb(%) 71.94 ± 4.65a 61.48 ± 0.988 bc 66.01 ± 7.44c SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ Bảng 4.6 Hiệu suất thu hồi trung bình phương pháp ly trích phân tích với sắc ký lỏng cao áp (HPLC) với cột sắc ký STR – ODS – II Dung Nồng độ dich thật ly XHP(ppb) trích C1 C2 C3 100 100 100 100 100 100 667 667 667 Diện tích peak 129563.70 146390.00 140837.30 38789.50 57775.30 49651.90 300513.80 324611.60 319640.00 Nồng độ thu hồi xHP(ppb) Hiệu suất thu hồi AHP(%) 19.63 22.41 21.49 4.64 7.78 6.44 45.39 49.03 48.28 19.63 22.41 21.49 4.64 7.78 6.44 6.81 7.35 7.24 Hiệu suất thu hồi trung bình Atb(%) 21.18 ± 1.42d 6.28 ± 1.58ef 7.13 ± 0.29f Đồ thị biểu thị diện tích peak (tín hiệu) trifluralin ly trích từ mẫu cá tra phân tích sắc ký lỏng cao áp sắc ký khí Diện tích peak (tín hiệu) 75 60 45 GC HPLC 30 15 Phương pháp ly trích C1 C2 C3 Hình 4.5 Đồ thị biểu thị hiệu suất thu hồi trifluralin áp dụng phương pháp ly trích từ mẫu cá tra phân tích sắc ký khí (GC) sắc ký lỏng cao áp (HPLC) Từ bảng 11 bảng 12 ta thấy, việc chọn phương pháp phân tích sắc ký vấn đề quan trọng, phân tích với máy sắc ký lỏng cao áp (HPLC) cho hiệu suất thu hồi thấp phân tích với máy sắc kí khí (GC) điều kiện ly trích, điều do: GVHD: Vương Thanh Tùng 40 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ + Phương pháp ly trích trifluralin từ mẫu cá khơng phù hợp để phân tích sắc ký lỏng cao áp phương pháp ly trích trifluralin từ thịt thủy sản (cá tra) phù hợp cho chạy sắc ký khí + Đầu dị UV – VIS hệ thống máy sắc ký lỏng cao áp (HPLC) ghi nhận khơng tốt tín hiệu trifluralin mẫu ly trích từ thịt cá tra có nhiều tạp chất gây ảnh hưởng đến khả ghi nhận lại tín hiệu dầu dị UV – VIS Đồng thời phân tích sắc ký lỏng cao áp (HPLC) tốn phân tích sắc ký khí dùng nhiều pha động (acetonitril nước) đắt tiền Giới hạn phát máy sắc ký lỏng cao áp (HPLC) 10ppb cao gới hạn phát máy sắc ký khí (GC) (2ppb) Vì vậy, phân tích trifluralin từ mẫu thủy sản (cá tra) sắc ký lỏng cao áp không chọn phương pháp tốt nhất, khơng chọn làm phương pháp phân tích trifluralin thủy sản (cá tra) Peak trifluralin Hình 4.6 Sắc đồ trifluralin ly trích methanol phân tích sắc ký khí (GC) GVHD: Vương Thanh Tùng 41 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ Peak trifluralin Hình 4.7 Sắc đồ trifluralin ly trích dung dịch acetonitril : nước (tỉ lệ : 1) phân tích sắc ký khí (GC) Ngồi chạy sắc ký khí (GC), ta thấy dùng dung dịch acetonitril : nước (với tỉ lệ : 1) để ly trích trifluralin từ mẫu thủy sản (cá tra) cho hiệu suất thu hồi tốt (71.94%), hiệu suất thu hồi phương pháp ly trích methanol (66.01%) cuối hiệu suất thu hồi phương pháp ly trích ethylacetat (61.48%) Sắc đồ phương pháp ly trích trifluralin methanol chạy sắc ký khí khơng ổn định sắc đồ phương pháp ly trích acetonitril : nước (với tỉ lệ : 1) chạy sắc ký khí tín hiệu (peak) trifluralin bị ảnh hưởng peak lạ điều phương pháp li trích trifluralin methanol khơng thích hợp để ly trích trifluralin thuỷ sản chưa có phương pháp làm hiệu Sắc đồ phương pháp ly trích acetonitril : nước (tỉ lệ : 1) chạy sắc ký khí ổn định khơng bị ảnh hưởng peak lạ (hình 16) So với phương pháp xem tối ưu phải có hiệu suất thu hồi 70% trở lên, độ nhiễu thấp (hoặc bị trơi nền) tín hiệu thu tốt (khơng bị ảnh hưởng tín hiệu (peak) lạ phương pháp ly trích acetonitril : nước (tỉ lệ : 1) chạy sắc ký khí (GC) đạt yêu cầu v Kết luận: Vậy, phương pháp ly trích acetonitril : nước (tỉ lệ : 1) phân tích sắc ký khí (GC) quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) tốt thích hợp GVHD: Vương Thanh Tùng 42 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Việc phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) ngồi việc dịi hỏi phương pháp phân tích nhanh chóng điều quan trọng hiệu suất thu hồi phải đạt từ 70% trở lên độ nhiễu thấp cho kết xác Qua thời gian nghiên cứu học hỏi, chọn phương pháp phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) tốt nhất, phương pháp li trích dung dịch acetonitril : nước (tỉ lệ : 1) chạy sắc ký khí với chương trình nhiệt độ Phương pháp đáp ứng yêu cầu hiệu suất thu hồi cao (71,94%) độ nhiễu thấp Phương pháp thực sau: phần dư lượng trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) trích ml acetonitril : nước (tỉ lệ : 1), quy trình ly trích sau: GVHD: Vương Thanh Tùng 43 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ g mẫu thủy sản (cá tra) ml acetonitril : nước (tỉ lệ : 1) Vortex phút Lắc 30 phút (300 vòng/phút) Ly tâm 10 phút (4000 rpm) Xác ml acetone : acetonitril (tỉ lệ 1: 1) Lắc ml chloroform lắc ly tâm phút (4000 rpm) Bỏ Lớp Lớp Bỏ Bình cầu Cơ quay Hồn lưu ml n-hexan Lọc (Ø = 2µm) Cho vào vial Phân tích GC Hình 5.1 Quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) sắc ký khí (GC) GVHD: Vương Thanh Tùng 44 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ 5.2 Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu có hạn nên đề tài khơng thể nghiên cứu hồn thiện quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra), tơi đề nghị nên cần có nhiều nghiên cứu để hồn thiện quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) như: + Khảo sát, so sánh, đánh giá quy trình phân tích trifluralin thủy sản (cá rô phi, tôm, cá biển) + Khảo sát ảnh hưởng cột chiết pha rắn đến quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản GVHD: Vương Thanh Tùng 45 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thị Kim Phụng, Trường Đại Học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh Phương Pháp Cơ Lập Hợp Chất Hữu Cơ – 2007 Trần Minh Phú, Vương Thanh Tùng, Lê Bảo Ngọc – Khoa Thủy Sản – Trường Đại Học Cần Thơ Bài giảng Phân Tích Thực Phẩm Thủy Sản Dương Thị Cẩm Trúc, 2008 Tìm hiểu phương pháp kiểm nghiệm sản phẩm thủy sản phòng kiểm nghiệm Intertek – Cần Thơ Luận văn tốt nghiệp chuyên nghành Chế biến thủy sản, trường Đại học Cần Thơ www.chemvn.net qppl.quangngai.gov.vn www.elsevier.com/locate/chroma Ts Phạm Thị Ánh, Trung Tâm Đào Và Phát Triển Sắc Ký Thành Phố Hồ Chí Minh Tài liệu KĐT : Phân Tích Bằng Kỹ Thuật Sắc Ký TS Nguyễn Thị Diệp Chi, Bộ Mơn Hóa Học, Khoa Khoa Học, Trường Đại Học Cần Thơ Bài giảng Các Phương Pháp Phân Tích Sắc Ký Ueon-Sang Shin and Ho-Sang Shin, 2003 Articles: Determination of 25 EDS in Frog and Fish Tissue by GC-MS (SIM) 10 Rebecca A Trenholma, Brett J Vanderford ,Jorg E Drewes, Shane A Snyder, 2008 Determination of household chemicals using gas chromatography and liquid chromatography with tandem mass spectrometry 11 C Lesueur, M Gartner, A Mentler, M Fuerhacker, 2008 Comparison of four extraction methods for the analysis of 24 pesticides in soil samples with gas chromatography–mass spectrometry and liquid chromatography–ion trap– mass spectrometry 12 Jens Dalluge , Martijn van Rijn, Jan Beens, Rene J.J Vreuls, Udo A.Th Brinkman, 2002 Comprehensive two-dimensional gas chromatography with time-of- flight mass spectrometric detection applied to the determination of pesticides in food extracts 13 www.vasep.com.vn 14 www.fluoridealert.org/pesticide/trifluralin.usda.fact.sheet.htm GVHD: Vương Thanh Tùng 46 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ PHỤ LỤC TỔ CHỨC THƯƠNG MẠI THẾ GIỚI G/TBT/N/EEC/155 25 tháng năm 2007 (07-2168) Bản gốc: Tiếng Anh Ủy ban hàng rào kỹ thuật thương mại THƠNG BÁO Thơng báo sau đưa phù hợp với Điều 10.6 Thành viên tham gia vào Hiệp định thông báo: CỘNG ĐỒNG CHUNG CHÂU ÂU Nêu tên quan quản lý địa phương, có (Điều 3.2 7.2): Cơ quan chịu trách nhiệm: Ủy ban Châu Âu Cơ quan đại diện định để giải góp ý liên quan đến thông báo khác với phần trên: Điểm TBT Ủy ban Châu Âu European Commission EC-TBT Enquiry Point Fax: +(32) 299 8043 E-mail: ec-tbt@ec.europa.eu Website: http://ec.europa.eu/enterprise/tbt/ Thông báo theo Điều 2.9.2 [X ], 2.10.1 [ điều khác: Các sản phẩm điều chỉnh (HS hay CCCN có, khơng mã số thuế quan quốc gia Ngồi cung cấp số ICS thích hợp): Trifluralin (hoạt chất thuốc trừ sâu) Tiêu đề, số lượng trang ngôn ngữ tài liệu thông báo: Dự thảo Quyết định Ủy ban liên quan đến việc không liệt chất Trifluralin vào Phụ lục I Chỉ thị Hội đồng số 91/414/EEC thu hồi giấy phép sản phẩm bảo vệ thực vật có chứa loại chất (4 trang, tiếng Anh) Mô tả nội dung: Quy định Trifluralin không xuất danh mục chất tích cực nước thành viên phải thu hồi giấy phép sản phẩm bảo vệ thực vật có chứa loại chất Quyết định liên quan đến việc tiêu thụ sản phẩm có chứa chất thị trường không ảnh hưởng đến mức dư GVHD: Vương Thanh Tùng 47 ], 5.6.2 [ ], 5.7.1 [ ], SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ lượng tối đa cho phép quốc gia cho sản phẩm thuốc trừ sâu liên quan Mục tiêu lý ban hành, bao gồm chất vấn đề khẩn cấp, có: Chỉ thị số 91/414/EEC liên quan đến việc bày bán sản phẩm thuốc bảo vệ thực vật thị trường thiết lập chế hài hòa cho việc cấp phép tiêu thụ sản phẩm nhằm bảo vệ sức khỏe người bảo vệ môi trường Điều 8(2) Chỉ thị quy định chương trình kéo dài 12 năm việc kiểm tra bước hoạt chất có thuốc bảo vệ thực vật có thị trường Các chất mà có kết đánh giá thuận lợi có mặt Phụ lục I Chỉ thị Trifluralin hoạt chất tiến hành kiểm tra giai đoạn chương trình Trong suốt trình đánh giá, số vấn đề lo ngại liên quan đến chất phát Trifluralin có ảnh hưởng tiêu cực đến sinh vật sống nước, đặc biệt cá Nó chất khó phân hủy đất khó bị sinh vật làm cho thối rữa Vì đặc tính dễ bay hơi, mà việc chúng phát tán khơng khí khơng thể loại trừ Vì số lý mà trifluralin không đáp ứng tiêu chí để có mặt Phụ lục I Chỉ thị 91/414/EEC Thời hạn để loại bỏ, tàng trữ buôn bán sử dụng sản phẩm bảo vệ thực vật có chứa trifluralin theo Quy định Điều 4(6) Chỉ thị 91/414/EEC không 12 tháng, nghĩa 18 tháng kể từ ngày thông qua định Các tài liệu liên quan: Doc SANCO/10158/2006 rev Thời gian dự kiến thơng qua: Thời gian dự kiến có hiệu lực: 15 tháng năm 2007 Các nước thành viên phải thu hồi tất loại giấy phép hành cho sản phẩm bảo vệ thực vật có chứa trifluralin vòng tháng kể từ ngày ban hành định 10 Thời hạn để góp ý: 60 ngày kể từ ngày thông báo 11 Các nội dung có sẵn từ: Điểm hỏi đáp [ X ] hay địa chỉ, số điện thoại, số fax, email, website quan khác, có : Điểm hỏi đáp EC-TBT European Commission EC-TBT Enquiry Point Fax: +(32) 299 8043 E-mail:ec-tbt@ec.europa.eu Văn có tại: http://ec.europa.eu/enterprise/tbt/ GVHD: Vương Thanh Tùng 48 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ PHỤ LỤC GVHD: Vương Thanh Tùng 49 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 GVHD: Vương Thanh Tùng Trường Đại Học Cần Thơ 50 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Trường Đại Học Cần Thơ PHỤ LỤC v Số liệu thống kê thí nghiệm 1: Factor PP Type Levels Values fixed CT Ndo DD 150oC DD 200oC DD 80oC Analysis of Variance for peak, using Adjusted SS for Tests Source PP Error Total DF Seq SS Adj SS Adj MS F 5471753786 5471753786 1823917929 2322.90 6281512 6281512 785189 11 5478035298 P 0.000 Least Squares Means for peak CT DD DD DD PP Ndo 150oC 200oC 80oC Mean 41652.4 52840.1 50583.2 -0.0 SE Mean 511.6 511.6 511.6 511.6 Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable peak All Pairwise Comparisons among Levels of PP Tukey Simultaneous Tests Response Variable peak All Pairwise Comparisons among Levels of PP PP = CT Ndo subtracted from: Level PP DD 150oC DD 200oC DD 80oC Difference of Means 11188 8931 -41652 SE of Difference 723.5 723.5 723.5 T-Value 15.46 12.34 -57.57 Adjusted P-Value 0.0000 0.0000 0.0000 T-Value -3.12 -73.03 Adjusted P-Value 0.0500 0.0000 T-Value -69.91 Adjusted P-Value 0.0000 PP = DD 150oC subtracted from: Level PP DD 200oC DD 80oC Difference of Means -2257 -52840 SE of Difference 723.5 723.5 PP = DD 200oC subtracted from: Level PP DD 80oC Difference of Means -50583 DD 80oC DD 80oC 0.0 0.0 SE of Difference 723.5 v Số liệu thống kê thí nghiệm 2: Factor HPLC Type Levels Values fixed Germini C18 Hypersil ODS STR - ODS - II Lichrospher Analysis of Variance for PEAK, using Adjusted SS for Tests Source HPLC Error Total DF Seq SS Adj SS Adj MS 6.6975E+12 6.6975E+12 2.2325E+12 2.8846E+10 2.8846E+10 3605798359 11 6.7264E+12 F 619.14 P 0.000 Expected Mean Squares, using Adjusted SS GVHD: Vương Thanh Tùng 51 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 Source HPLC Error Trường Đại Học Cần Thơ Expected Mean Square for Each Term (2) + Q[1] (2) Error Terms for Tests, using Adjusted SS Source HPLC Error DF Error MS 8.00 3.606E+09 Synthesis of Error MS (2) Variance Components, using Adjusted SS Source Error Estimated Value 3605798359 Least Squares Means for PEAK HPLC Germini C18 Hypersil ODS Lichrospher STR - ODS - II Mean 1724806 -0 1151364 SE Mean 34669 34669 34669 34669 Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable PEAK All Pairwise Comparisons among Levels of HPLC Tukey Simultaneous Tests Response Variable PEAK All Pairwise Comparisons among Levels of HPLC HPLC = Germini subtracted from: Level HPLC Hypersil Lichrosp STR - OD Difference of Means -1724806 -1724806 -573442 SE of Difference 49029 49029 49029 T-Value -35.18 -35.18 -11.70 Adjusted P-Value 0.0000 0.0000 0.0000 T-Value -0.0000 23.4832 Adjusted P-Value 1.0000 0.0000 T-Value 23.48 Adjusted P-Value 0.0000 HPLC = Hypersil subtracted from: Level HPLC Lichrosp STR - OD Difference of Means -0 1151364 SE of Difference 49029 49029 HPLC = Lichrosp subtracted from: Level HPLC STR - OD Difference of Means 1151364 SE of Difference 49029 v Số liệu thống kê thí nghiệm 3: Factor Dung môi PP Type Levels Values fixed C1 C2 C3 fixed GC HPLC Analysis of Variance for HS Thuho, using Adjusted SS for Tests Source Dung môi PP Error Total DF 14 17 Seq SS 497.4 13558.1 270.2 14325.7 Adj SS 497.4 13558.1 270.2 Adj MS 248.7 13558.1 19.3 F 12.89 702.56 P 0.001 0.000 Expected Mean Squares, using Adjusted SS Source Dung môi Expected Mean Square for Each Term (3) + Q[1] GVHD: Vương Thanh Tùng 52 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 Luận văn TN CBTS K32 PP Error Trường Đại Học Cần Thơ (3) + Q[2] (3) Error Terms for Tests, using Adjusted SS Source Dung môi PP Error DF 14.00 14.00 Error MS 19.3 19.3 Synthesis of Error MS (3) (3) Variance Components, using Adjusted SS Source Error Estimated Value 19.30 Least Squares Means for HS Thuho Dung môi C1 C2 C3 PP GC HPLC Mean 46.27 34.09 36.57 SE Mean 1.793 1.793 1.793 66.42 11.53 1.464 1.464 Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable HS Thuho All Pairwise Comparisons among Levels of Dung môi Tukey Simultaneous Tests Response Variable HS Thuho All Pairwise Comparisons among Levels of Dung môi Dung môi = C1 subtracted from: Level Dung môi C2 C3 Difference of Means -12.19 -9.70 SE of Difference 2.536 2.536 T-Value -4.804 -3.824 Adjusted P-Value 0.0008 0.0050 T-Value 0.9804 Adjusted P-Value 0.6006 Dung môi = C2 subtracted from: Level Dung môi C3 Difference of Means 2.487 SE of Difference 2.536 Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable HS Thuho All Pairwise Comparisons among Levels of PP Tukey Simultaneous Tests Response Variable HS Thuho All Pairwise Comparisons among Levels of PP PP = GC subtracted from: Level PP HPLC Difference of Means -54.89 SE of Difference 2.071 GVHD: Vương Thanh Tùng T-Value -26.51 53 Adjusted P-Value 0.0000 SVTH: Võ Phước Thọ - 2065519 ... vật thủy sản Vì việc kiểm tra dư lượng trifluralin sản phẩm thủy sản mmotj yêu cầu cấp thiết nhằm để đảm bảo yêu cầu chất lượng thủy sản xuất Đề tài ? ?Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích dư lượng. .. đích tìm quy trình phân tích trifluralin thích hợp để phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) 1.2 Nội dung đề tài: - Nghiên cứu quy trình trích ly Trifluralin sản phẩm thủy sản (cá Tra)... pháp phân tích thiết bị sắc ký khí (GC) quy trình phân tích trifluralin sản phẩm thủy sản (cá tra) 31 4.2 Kết thí nghiệm 2: xác định cột sắc ký quy trình phân tích trifluralin sản phẩm