NGHIÊN cứu, xây DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH hàm LƯỢNG AXIT URIC BẰNG PHƯƠNG PHÁP sắc ký LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) và ỨNG DỤNG PTHỬ NGHIỆM TRONG PHÂN TÍCH

B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM H NI NG THANH HUYN NGHIấN CU, XY DNG QUY TRèNH PHN TCH HM LNG AXIT URIC BNG PHNG PHP SC Kí LNG HIU NNG CAO (HPLC) V NG DNG PTH NGHIM TRONG PHN TCH H V TấN ( Tỏc gi lun vn) B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM H NI NG THANH HUYN NGHIấN CU, XY DNG QUY TRèNH PHN TCH HM LNG AXIT URIC BNG PHNG PHP SC Kí LNG HIU NNG CAO (HPLC) V NG DNG PHN TCH H V TấN ( Tỏc gi lun vn) Lời cảm ơn Lun Thc s khoa hc Húa hc ny c hon thnh ti phũng thớ nghim Pphõn tớch Húa Sinh thuc b mụn Húa Phõn tớch, khoa Húa hc, trng i hc S phm H Ni vi s hng dn, ch bo tn tỡnh ca cụ giỏo, TS V Th Hng cựng cỏc thy, cỏc cụ b mụn Húa Phõn tớch cng nh cỏc thy, cỏc cụ khoa Húa hc, s giỳp ca cỏc anh ch hc viờn K21 khoa Húa hc trng i hc S phm H Ni Vi lũng kớnh trng v bit n sõu sc em xin chõn thnh cm n cụ giỏo, TS V Th Hng, ngi ó giao ti, tn tỡnh ch bo, hng dn v to mi iu kin giỳp em hon thnh lun Thc s ny Em cng xin gi li cm n chõn thnh nht n cỏc thy, cỏc cụ B mụn Húa Phõn tớch, cỏc thy, cỏc cụ khoa Húa hc Trng i hc S phm H Ni, cỏc anh ch cựng ton th cỏc bn hc viờn khoa Húa hc ó giỳp , úng gúp ý kin, to iu kin thun li, nhit tỡnh giỳp v ng viờn sut thi gian hc v lm vic ti phũng thớ nghim Cui cựng em xin c gi ti gia ỡnh, ngi thõn v bn bố li cm n chõn thnh nht ó giỳp em thu nhp thụng tin, t liu v ng viờn, khớch l tinh thn em sut thi gian qua H Ni, thỏng 10 nm 2013 Tỏc gi ng Thanh Huyn B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM H NI NG THANH HUYN & TấN TI: NGHIấN CU, XY DNG QUY TRèNH PHN TCH HM LNG AXIT URIC BNG PHNG PHP SC KKí LNG HIU NNG CAO (HPLC) V NG DNG PHT HIN NGUY C MC BNH GOUT NGI Chuyờn ngnh : Hoỏ phõn tớch Mó s : 60.44.01.18 CHUYấN NGNH : Hoỏ hc Phõn tớch M S: 60440118 LUN VN THC S KHOA HC HểA HC Ngi hng dn khoa hc: TS V Th Hng H v tờn hc viờn : Giỏo viờn hng dn ng Thanh Huyn : TS V Th Hng H Ni - 2013 MC LC H V TấN YTH NGHIM TRONG N TCHTấN TI LUN VN THC S H NI, NM .1 H V TấN YTH NGHIM TRONG PHN TCHTấN TI LUN VN THC S .2 H NI, NM .2 MC LC DANH MC CC KKí HIU VIT TT .33 DANH MC CC HèNH V 34 DANH MC CC BNG BIU 36 M U 2 Mc ớch nghiờn cu .3 Kt qu t c Xõy dng thnh cụng iu kin sc ký phõn tớch xỏc nh quy trỡnh phõn tớch axit uric v ng dng quy trỡnh xỏc nh hm lng axit uric mu nc tiu ca ngi (Phn ny s vit li sau kt thỳc cỏc thớ nghim) Nhng im mi ca ti CHNG I: TNG QUAN 1.1 GII THIU CHUNG V AXIT URIC 1.1.1 Thụng tin chung .6 1.1.2 Tớnh cht vt lý 1.1.3 Trng thỏi tn ti, quỏ trỡnh tng hp v o thi ca axit uric 1.1.4 C ch lng ng ca axit uric v nh hng ca nú i vi c th 1.1.5 Nghiờn cu nh hng ca axit uric viờm khp 1.1.6 Cỏc yu t nh hng ti vic phõn tớch v nh lng axit uric11 1.2 TNG QUAN V PHNG PHP SC Kí LNG HIU NNG CAO 12 1.2.1.1 Khỏi nim v sc ký 12 1.2.2 Nguyờn tc cu to ca mỏy HPLC .13 1.2.2.1 H thng bm 13 1.2.2.2 H bm mu 14 1.2.2.3 Ct sc ký lng hiu nng cao 14 1.2.2.4 Detector 14 1.2.2.5 B phn ghi tớn hiu 16 1.2.3 Cỏc thụng s c trng ca quỏ trỡnh sc ký v cỏc yu t nh hng 17 1.2.3.1 H s phõn b K (Partition coefficient) 17 1.2.3.2 Thi gian lu tR (Retention time) .17 1.2.3.3 H s dung lng k 18 1.2.3.4 H s chn lc 19 1.2.3.5 Lý thuyt a 19 1.2.4 Pha tnh HPLC 21 1.2.4.1 Phõn loi pha tnh .21 1.2.4.2 Yờu cu ca pha tnh HPLC 22 1.2.5 Pha ng HPLC 23 1.2.6 Chn pH cho dung dch m 24 1.2.8 Cỏch ỏnh giỏ picpớcpic 25 1.3 NG DNG CA HPLC [8] 25 1.3.1 nh tớnh 25 1.3.2 Phõn tớch nh lng .25 1.3.34 Sc ký iu ch .26 1.4 CC PHNG PHP HểA Lí TRONG PHN TCH HM LNG AXIT URIC [5,6] 26 1.4.1 Phng phỏp quang ph phõn t 26 1.4.1.1 Quang ph hp ph UV-VIS 26 1.4.1.2 Quang ph hng ngoi 28 1.4.2 Phng phỏp in húa 28 1.4.2.1 Phng phỏp cc ph 28 1.4.2 S lc v cỏc phng phỏp cc ph v von ampe 29 1.4.2.1 Nguyờn tc ca phng phỏp 29 1.4.2.2 in cc lm vic 30 1.4.2.3 u im ca in cc git Hg 31 1.4.2.4 in cc so sỏnh 31 1.4.2.5 Súng cc ph khuch tỏn 32 1.5 YấU CU CA NH LNG THUC TRONG KIM NGHIM DC PHM [1] 35 1.5.1 Tớnh c hiu ca phng phỏp 35 1.5.2 ng chun v khong tuyn tớnh .36 1.5.3 ỳng 37 1.5.4 chớnh xỏc 37 1.5.5 Gii hn phỏt hin v gii hn nh lng 37 1.5.5.1 Gii hn phỏt hin ( LOD) 37 1.5.5.2 Gii hn nh lng ( LOQ) 39 CHNG II: THC NGHIM 41 2.1 HểA CHT, DNG C 41 2.1.1 Húa cht 41 2.1.2 Dng c v thit b 41 2.2 I TNG NGHIấN CU 41 2.3 NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU .42 2.3.1 Kho sỏt la chn iu kin sc ký 43 2.3.1.1 La chn bc súng hp th cc i 43 2.3.1.4 Kho sỏt h m 44 2.3.1.5 Kho sỏt pH h m 44 picpicpic2.3.1.6 Kho sỏt nng dung dch m .45 2.3.1.3 La chn bc súng 45 2.3.1.74 Kho sỏtLa chn thi gian lu ca cht .45 2.3.1.5 Kho sỏt la chn h m 46 2.3.1.6 Kho sỏt pH h m 46 2.4 XY DNG NG CHUN .47 2.4.1 Chun b dung dch mu chun axit uric 47 2.4.2 Kho sỏt tỡm khong nng axit uric tuyn tớnh vi din tớch picpớcpic sc ký 47 8,0 .95 3,936 95 4354859 95 95 3.933 95 2975852 95 10 95 3,932 95 3808280 95 T kt qu bng 3.4 ta thy cựng mt lng cht v iu kin nh nhau, ti pH = 8, Spớc t giỏ tr cao nht (4354859 mAU) Vỡ vy, vic phỏt hin cng nh xỏc nh axit mụi trng kim thỡ thun li hn Pớc ca cht xut hin pH = l cõn i v cú chiu cao cng nh din tớch ln nht i vi khong pH khỏ rng trờn Tuy nhiờn tỡm pH thc s ti u cho phộp phõn tớch trờn tụi s kho sỏt quanh giỏ tr pH=8 ln lt cỏc giỏ tr tng ng: 96 7,15; 7,5; 7,7; 8; 8,4; 8,7 96 Bng 3.5 nh hng ca pH ca dung dch m photphat quanh giỏ tr pH=8 n thi gian lu, din tớch pớc ca axit uric 96 Giỏ tr pH 96 tpớc (phỳt) 96 Spớc(mAU) 96 7,15 .96 3,934 96 2145000 96 7,5 .96 3.826 96 197 3170130 96 7,7 .96 3,936 96 3353748 96 8,0 .96 3,936 96 4354859 96 8,4 .96 3.973 96 3672993 96 8,7 .96 3.935 96 3378834 96 T bng 3.5 ta thy cựng mt lng cht v iu kin nh nhau, ti pH = din tớch t giỏ tr cao nht (4354859 mAU) Do vy, nghiờn cu ny tụi la chn dung dch m photphat cú pH = tin hnh cho cỏc thớ nghim tip theo 97 97 Hỡnh 3.3 Sc ca axit uric dung dch m photphat cú pH=8 97 3.1.1.6 Kho sỏt nng m 97 Cựng vi pH ca dung dch m cht in ly pha ng cng cú vai trũ quan trng v nú phi cú nng phự hp Vic la chn nng dung dch m da trờn ti liu tham kho, cỏc nng dung dch m c la chn kho sỏt khong 2.10-3M 0,2M Kt qu kho sỏt c trỡnh by bng 3.6 97 Bng 3.6 nh hng ca nng dung dch m photphat n thi gian lu, din tớch pớc ca axit uric 97 Nng m(M) 98 198 tpớc (phỳt) 98 Spớc(mAU) 98 2.10-3M 98 3,957 98 2468384 98 5.10-3M 98 3,964 98 2615401 98 7.10-3M 98 3,951 98 3226548 98 0,01M 98 3,959 98 4337587 98 0,03M 98 3,958 98 3667346 98 0,07M 98 3,951 98 2524749 98 0,1M 98 3,953 98 2238577 98 0,2M 98 3,957 98 199 - 98 T kt qu bng 3.6 ta thy cựng mt lng cht v iu kin nh nhau, ti nng 0,01M pớc cõn i, din tớch t giỏ tr cao nht (4337587mAU) Do vy, nghiờn cu ny tụi la chn dung dch m photphat cú nng 0,01M tin hnh sc ký cỏc thớ nghim tip theo ca lun ny 99 99 Hỡnh 3.4 Sc ca axit uric dung dch m photphat nng 0,01M 99 T cỏc kt qu kho sỏt, em ó xõy dng mt quy trỡnh sc ký cú kh nng phõn tớch xỏc nh nng axit uric nh sau: 99 - Pha tnh: Ct ODS C18 (5àm, 4,6 x 150 cm) 99 - Pha ng: 60% methanol 30% nc ct 10% acetronitril; dung dch m KH2PO4 + KOH cú pH = 8,0 (nng m 0,01M) 99 - Tc dũng: 0,5 ml/phỳt 99 - Thi gian chy mu: 10 phỳt 99 - Th tớch mu phõn tớch ti thiu cn bm vo ct sc ký: 10 àl 100 - Phỏt hin bng detector UV: bc súng 284 nm 100 - Nhit phõn tớch: 40C 100 Qua thc nghim vi iu kin sc ký nh trờn, axit uric xut hin thi gian lu va phi, pớc cõn i v gn 100 3.1.2 ỏnh giỏ phng phỏp nh lng 100 3.1.2.1 Chun b dung dch chun axit uric .100 Cõn chớnh xỏc 5mg cht chun axit uric, sau ú thờm m photphat (pH=8) vo bỡnh nh mc 100ml v lc sau ú nh mc n vch nh mc thu c dung dch axit uric chun cú nng chớnh xỏc 100 3.1.2.2 Kho sỏt tớnh thớch hp ca h thng sc ký .100 ỏnh giỏ mt phộp nh lng bng HPLC mi xõy dng, trc ht ta phi tin hnh kho sỏt tớnh thớch hp ca h thng sc ký .100 200 Vic kho sỏt tớnh thớch hp ca h thng sc ký c tin hnh qua vic tiờm lp li ln dung dch chun axit uric ó c chun b nh 3.1.2.1 Ghi li cỏc giỏ tr v thi gian lu (i lng cú giỏ tr nh tớnh axit uric), din tớch pớc (i lng cú giỏ tr nh lng axit uric), phõn gii gia hai pớc Kt lun v tớnh thớch hp ca h thng sc ký da trờn cỏc giỏ tr lch chun tng i v tR, Spớc, RS Kt qu kho sỏt tớnh thớch hp ca h thng HPLC c trỡnh by bng 3.7 100 Bng 3.7 Kt qu kho sỏt tớnh thớch hp ca h thng sc ký i vi axit uric 101 STT 101 tpớc (phỳt) 101 Spớc(mAU) .101 101 3,936 101 5019757 101 101 3,938 101 4978767 101 101 3,941 101 4886695 101 .101 3,935 101 4973555 101 101 3,941 101 5009479 101 101 201 3,933 101 4998732 101 Giỏ tr 101 trung bỡnh 101 3,937 101 4977830 101 lch chun tng i 101 101 0,082 101 0,964 101 3.1.2.3 Kho sỏt lp li ca phng phỏp sc ký .102 Tin hnh phõn tớch mc nng (nh, trung bỡnh v ln) mi mc nng tin hnh o ln, kho sỏt lp li ca din tớch pớc ỏnh giỏ phõn tỏn ca s liu da vo giỏ tr lch chun SD v lch chun tng i RSD (%) Kt qu kho sỏt lp c th hin bng 3.8 102 Bng 3.8 Kt qu kim tra lp li ca phng phỏp sc ký .102 Mc nng thc (mg/l) 102 S ln o lp li (n) 102 Thp: 0,2 102 Trung bỡnh: 33 102 Cao: 44 .102 Din tớch pớc (Sp) .102 102 98930 .102 3552880 102 202 4683461 102 102 98866 102 3561927 102 4689829 102 102 98879 102 3552614 102 4635967 102 102 98797 102 3542352 102 4694109 102 102 98901 102 3534618 102 4694966 102 Din tớch pớc trung bỡnh (Sp) 102 98874 102 3548878 102 4679666 102 lch chun S 102 49,702 .102 10561,561 102 24849,454 102 203 lch chun tng i 102 102 0,050 102 0,298 102 0,531 102 3.1.2.4 Kho sỏt ỳng ca phng phỏp 103 ỳng ca mt phng phỏp phõn tớch l mc sỏt gn ca cỏc giỏ tr tỡm thy phõn tớch so vi giỏ tr thc 103 ỳng ca phng phỏp c xỏc nh bng phng phỏp thờm chun 103 (thờm khong 20% mu th) Thờm vo mu th mt lng cht chun cho tng nng ca chỳng nm khong tuyn tớnh ó kho sỏt Tin hnh sc ký dung dch chun, dung dch th v dung dch thờm chun, da vo din tớch pớc ca cỏc dung dch ny tớnh t l thu hi lng cht chun thờm vo 103 em o trờn thit b sc ký hiu nng cao (HPLC) cựng iu kin vi dung dch chun, lp li thc nghim ln Mi ln bm vo ct sc ký chỳng tụi u dựng xilanh ly chớnh xỏc 10 l 103 Da vo hm lng cỏc cht ó bit mu th, lng cỏc cht chun thờm vo v cn c vo din tớch pớc ca dung dch th v dung dch chun s tớnh c lng cỏc cht chun tỡm thy so vi lng chun thờm vo Kt qu kho sỏt ỳng c trỡnh by bng 3.9 103 Bng 3.9 Kt qu xỏc nh ỳng ca axit uric trờn thit b 103 sc ký lng hiu nng cao (HPLC) 103 Nng chun thờm vo nn (mg/l) 104 S mu 104 Nng chun tỡm li (mg/l) 104 Nng tỡm li trung bỡnh (ng chun) .104 lch chun tng i 104 204 104 H s thu hi H (%) 104 104 104 104 104 104 104 104 104 104 104 ( Phn ny em kho sỏt cha kt qu nờn em gi Cụ sau ) 105 3.1.2.5 Kho sỏt tuyn tớnh ca phng phỏp 105 a Xõy dng ng chun ca axit uric 105 Cỏch tin hnh: 105 Chun b mt dóy bỡnh nh mc dung tớch V ml pha c dung dch cú nng tng t 2.10-4 mg/l n 0,05mg/l Sau ú ln lt bm 10l tng dung dch mu axit uric chun vo h thng o ca thit b sc ký lng hiu nng cao, t cỏc iu kin ti u cho mỏy chy, ng vi thi gian lu ca axit uric thỡ mỏy t ng hin trờn mn hỡnh din tớch pớc (Spớc ), ghi kt qa Cỏc kt qa thu c th hin bng 3.10 .105 Bng 3.10 S ph thuc din tớch pớc ca axit uric vo nng 105 STT 105 Cht chun 105 Caxit uric(mg/l) 105 Spớc 105 205 105 C1 .105 0,2 .105 98868 105 105 C2 .105 0,4 .105 93568 105 105 C3 .105 105 326321 105 105 C4 .105 105 586937 105 105 C5 .105 10 105 1152718 105 105 C6 .105 25 105 2675070 105 105 206 C7 .105 50 105 5245475 105 Spớc= (103324,26844609,57518).Caxit uric +(87304,2489713143,17752) ( 3.1) 105 H s tng quan R=0,99979 105 Sau thu c s liu bng 3.10 tụi th hin s ph thuc nng ca axit uric vo din tớch pớc tng ng ca chỳng trờn phn mm Origin 8.0 T ú tụi thu c phng trỡnh ng chun ca axit uric vi tin cy cao nh hỡnh 3.5 106 106 Hỡnh 3.5 S ph thuc Spớc axit uric vo nng axit uric 107 Sp = (b Sb.t,k ) Caxit uric + (a Sa.t,k ) 107 X lý thng kờ theo phn mm Origin 8.0 c phng trỡnh ng chun: 107 Spớc= (103324,26844609,57518).Caxit uric +(87304,2489713143,17752) 107 T phng trỡnh ng chun ny nu o c din tớch pớc rt d rng tớnh c nng axit uric tng ng vi din tớch pớc sc ký: 107 (mg/l) .107 Nhn xột: 108 Cỏc kt qu trờn cho thy: vi khong nng ca axit uric bin thiờn khong 0,2 mg/l n 50 mg/l cú s tng quan tuyn tớnh gia nng v din tớch pớc tng ng, th hin qua ng thng hi qui v h s tng quan R = 0,99979 Vi h s tng quan u rt gn 1, hu ht cỏc giỏ tr o c nm trờn ng hi qui hoc phõn b u c hai phớa ca ng hi qui Trờn c s ú, tụi la chn nng nh lng axit uric v nc tiu nm khong tuyn tớnh ó kho sỏt 108 Mt khỏc tụi x lý thng kờ phng trỡnh ng chun bng phong phỏp hi quy tuyn tớnh ó c lp trỡnh theo ngụn ng Pascal (xem ph lc 1) cỏc kt qu thu c tng t nh ng dng phn mm Origin 8.0, nhng cú thờm: .108 SSp = 13143,17752; Sa =609,57518; Sb =27459,54705 108 207 - Tớnh gii hn phỏt hin v gii hn nh lng theo ng chun: 108 - Gii hn phỏt hin: (mg/l) 108 Trong ú Sy= SSp, b l h s ca phng trỡnh ng chun 108 - Gii hn nh lng: (mg/l) 108 b Kim tra ng chun ca axit uric .108 kim tra chớnh xỏc ca ng chun xõy dng c, tụi pha dung dch chun axit uric hai nng 2,5 mg/l v 33 mg/l Dựng xilanh ly 10l tng dung dch mu axit uric chun trờn bm vo thit b HPLC cho mỏy chy ỳng thi gian lu s xut hin pớc sc ký, ghi kt qu din tớch pớc o lp li ln Thay din tớch pớc vo phng trỡnh ng chun t ú xỏc nh c nng Cx So sỏnh Cx ó tỡm c theo ng chun vi giỏ tr thc ó pha vi thng kờ cho trc kim tra chớnh xỏc ca ng chun thu c Kt qu c th hin bng 3.11 109 Bng 3.11 Bng ỏnh giỏ chớnh xỏc ca ng chun .109 S ln o 110 Nng axit uric thc 33 (mg/l) 110 Nng axit uric thc 2,5 (mg/l) .110 Nng axit uric xỏc nh theo .110 ng chun .110 (mg/l) 110 Nng axit uric xỏc nh theo ng chun (mg/l) 110 110 110 110 110 110 110 208 110 32,733 .110 2,510 110 33,217 .110 2,598 110 33,304 .110 2,469 110 32,985 .110 2,519 110 33,126 .110 2,498 110 32,613 .110 2,523 110 33,561 .110 2,479 110 Giỏ tr trung bỡnh 110 33,077 .110 2,513 110 lch chun (S) .110 0,329 110 0,042 110 Sai s l tng i (q%) 110 S sai s gia lớ thuyt .110 v thc nghim 110 lch chun tng i 110 209 110 0,995% 110 1,671% 110 111 chớnh xỏc ca ng chun c ỏnh giỏ qua giỏ tr lch chun S v lch chun tng i RSD (%) Kt qu thu c cho thy RSD (%) thp di 2% (0,995% v 1,671% < %) chng t ng chun cú chớnh xỏc cao gia cỏc ln phõn tớch Phõn tớch xỏc nh hm lng axit uric mu t to theo phng phỏp ng chun, cho kt qu v sai s tng i gia lớ thuyt v thc nghim nh hn % nm khong cho phộp ca phõn tớch nh lng Vy s sai s gia lớ thuyt v thc nghim ch l ngu nhiờn, cú th ỏp dng ng chun ny vo phõn tớch xỏc nh nc tiu ngi nhm phỏt hin nguy c mc bnh Gout 111 3.2 ng dng phng phỏp HPLC xỏc nh nh tớnh v nh lng axit uric nc tiu ngi nhm phỏt hin nguy c mc bnh Gout 111 3.2.1.Nc tiu 111 Mu nc tiu c pha loóng 100 ln bng dung dch m cú pH=8 v lc nhiu ln bng h thng lc mu vi ng kớnh l mng lc 0,45àm 111 Dựng xilanh ly chớnh xỏc 10l dung dch mu thuc v bm vo ct sc ký t cỏc iu kin ti u ó nghiờn cu c, cho thit b sc ký lng hiu nng cao (HPLC) chy lp li thớ nghim ln v o din tớch ca pớc Thay cỏc giỏ tr din tớch pớc thu c vo phng trỡnh ng chun s tớnh hm lng ca axit uric, sau ú suy hm lng axit uric mu v x lý thng kờ s c hm lng axit uric trung bỡnh (Sp), lch chun S v lch chun tng i (RSD %) Kt qu phõn tớch mu c ch bng 3.10 .112 Bng 3.12 Kt qu phõn tớch mu axit uric nc tiu 112 Mu th 112 Hm lng axit uric 112 M1 112 M2 112 210 M3 112 Trung bỡnh 112 lch chun (S) .112 lch chun tng i RSD (%) 112 KT LUN V KIN NGH 112 TI LIU THAM KHO 114 PH LC 117 211 [...]... tối ưu đã nghiên cứu được, cho thiết bị sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) chạy lặp lại thí nghiệm 3 lần và đo diện tích của píc Thay các giá trị diện tích píc thu được vào phương trình đường chuẩn sẽ tính hàm lượng của axit uric, sau đó suy ra hàm lượng axit uric mẫu và xử lý thống kê sẽ được hàm lượng axit uric trung bình (Sp), độ lệch chuẩn S và độ lệch chuẩn tương đối (RSD %) Kết quả phân tích mẫu... TÍNH THÍCH HỢP CỦA PHƯƠNG PHÁP VÀ KIỂM TRA ĐƯỜNG CHUẨN 47 2.5.1 Khảo sát độ tuyến tính của phương pháp 47 ĐÁNH GIÁ PHƯƠNG PHÁP VÀ KIỂM TRA ĐƯỜNG CHUẨN 48 2.5.21 Khảo sát tính thích hợp của hệ thống sắc ký .48 2.5.23 Khảo sát độ lặp lại của phương pháp 48 2.5.4 Khảo sát độ tuyến tính của phương pháp 49 2.6 ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀO ĐỊNH LƯỢNG AXIT URIC TRONG MẪU NƯỚC TIỂU... chuẩn có độ chính xác cao giữa các lần phân tích Phân tích xác định hàm lượng axit uric trong 2 mẫu tự tạo theo phương pháp đường chuẩn, cho kết quả về sai số tương đối giữa lí thuyết và thực nghiệm nhỏ hơn 2 % nằm trong khoảng cho phép của phân tích định lượng Vậy sự sai số giữa lí thuyết và thực nghiệm chỉ là ngẫu nhiên, có thể áp dụng đường chuẩn này vào phân tích xác định nước tiểu người nhằm phát... dịch thử và dung dịch thêm chuẩn, dựa vào diện tích píc của các dung dịch này tính tỷ lệ thu hồi lượng chất chuẩn thêm vào 103 Đem đo trên thiết bị sắc ký hiệu năng cao (HPLC) trong cùng điều kiện với dung dịch chuẩn, lặp lại thực nghiệm 5 lần Mỗi lần bơm vào cột sắc ký chúng tôi đều dùng xilanh lấy chính xác 10 μl 103 Dựa vào hàm lượng các chất đã biết trong mẫu thử, lượng các... dựng điều kiện để định tính axit uric 88 3.1.1 Lựa chọn phương pháp sắc ký 88 Qua nghiên cứu tính chất lý hóa của axit uric, kết hợp với các điều kiện tài liệu tham khảo và điều kiện có sẵn của phòng thí nghiệm, tôi lựa chọn kiểu sắc ký phân bố pha đảo, sử dụng cột Silica C18 làm pha tĩnh Trong quá trình thực nghiệm tôi đã tiến hành khảo sát các điều kiện sắc ký như: khảo sát các điều... thử, lượng các chất chuẩn thêm vào và căn cứ vào diện tích píc của dung dịch thử và dung dịch chuẩn sẽ tính được lượng các chất chuẩn tìm thấy so với lượng chuẩn thêm vào Kết quả khảo sát độ đúng được trình bày ở bảng 3.9 103 Bảng 3.9 Kết quả xác định độ đúng của axit uric trên thiết bị 103 sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) 103 Nồng độ chuẩn thêm vào nền (mg/l) 104... độ đúng của phương pháp 103 Độ đúng của một phương pháp phân tích là mức độ sát gần của các giá trị tìm thấy trong phân tích so với giá trị thực 103 Độ đúng của phương pháp được xác định bằng phương pháp thêm chuẩn 103 (thêm khoảng 20% mẫu thử) Thêm vào mẫu thử một lượng chất chuẩn sao cho tổng nồng độ của chúng vẫn nằm trong khoảng tuyến tính đã khảo sát Tiến hành sắc ký dung dịch... vào cột sắc ký: 10 µl 100 - Phát hiện bằng detector UV: bước sóng 284 nm 100 - Nhiệt độ phân tích: 40°C 100 Qua thực nghiệm với điều kiện sắc ký như trên, axit uric xuất hiện ở thời gian lưu vừa phải, píc cân đối và gọn 100 3.1.2 Đánh giá phương pháp định lượng 100 3.1.2.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn axit uric .100 Cân chính xác 5mg chất chuẩn axit uric, ... với thực nghiệm 87 CHƯƠNG III : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 88 Trong luận văn này, tôi tập trung nghiên cứu điều kiện tối ưu phân tích axit uric trên cơ sở thiết bị, máy móc, hóa chất, môi trường thí nghiệm ở Việt Nam Mục đích là dựa trên các điều kiện này xác định được định tính và định lượng axit uric có trong nước tiểu một cách nhanh chóng, hiệu quả và chính xác 88 3.1 Xây dựng điều... phương pháp 105 a Xây dựng đường chuẩn của axit uric 105 Cách tiến hành: 105 Chuẩn bị một dãy bình định mức dung tích V ml để pha được dung dịch có nồng độ tăng từ 2.10-4 mg/l đến 0,05mg/l Sau đó lần lượt bơm 10μl từng dung dịch mẫu axit uric chuẩn vào hệ thống đo của thiết bị sắc ký lỏng hiệu năng cao, đặt các điều kiện tối ưu cho máy chạy, ứng với thời gian lưu của axit