(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của chó được tiêm vacxin vô hoạt care

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ĐỖ VĂN ĐỨC NGHIÊN CỨU ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH CỦA CHÓ ĐƯỢC TIÊM VACXIN VÔ HOẠT CARE Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Thị Lan NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 download by : skknchat@gmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng 11 năm 2016 Tác giả luận văn Đỗ Văn Đức i download by : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài này, cố gắng thân, tơi cịn nhận nhiều quan tâm giúp đỡ thầy giáo, gia đình, bạn bè đồng nghiệp Trước hết xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Lan tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Lời cảm ơn chân thành xin gửi tới thầy cô giáo môn Bệnh Lý - Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam giúp đỡ, tạo điều kiện suốt thời gian học tập thời gian thực đề tài Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè đồng nghiệp giúp đỡ động viên suốt thời gian qua Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng 11 năm 2016 Tác giả luận văn Đỗ Văn Đức ii download by : skknchat@gmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Trích yếu luận văn …………………………………………………………………………ix Thesis Abstract .x Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục đích đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Một số đặc điểm sinh lý chó 2.1.1 Thân nhiệt (0C) 2.1.2 Tần số hô hấp (số lần thở/phút) 2.1.3 Tần số tim (lần/phút) 2.2 Bệnh Care chó 2.2.1 Khái niệm, lịch sử địa dư bệnh Care chó 2.2.2 Dịch tễ học……………………………………………… ………………………….6 2.2.3 Cơ chế sinh bệnh 2.2.4 Triệu chứng, bệnh tích 11 2.2.5 Chẩn đoán 14 2.2.6 Phòng điều trị 16 1.3 Ứng dụng vacxin để phòng bệnh Care 17 Phần Đối tƣợng, địa điểm, nội dung phƣơng pháp nghiên cứu 19 3.1 Đối tượng nghiên cứu 19 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 3.1.2 Nguyên liệu 19 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 19 3.3 Nội dung nghiên cứu 19 iii download by : skknchat@gmail.com 3.3.1 Nghiên cứu lựa chọn chó thí nghiệm cho tiêm vacxin vô hoạt Care 19 3.3.2 Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch chó tiêm vacxin vô hoạt Care 19 3.4 Phương pháp nghiên cứu 20 3.4.1 Phương pháp tiêm vacxin vô hoạt CDV -VNUA-768 cho chó thí nghiệm 20 3.4.2 Quan sát, khám lâm sàng 21 3.4.3 Phương pháp lấy máu để kiểm tra tiêu 22 3.4.4 Xác định hàm lượng kháng thể có máu 22 3.4.5 Phương pháp RT – PCR 23 2.4.6 Phương pháp công cường độc 23 3.4.7 Phương pháp xử lý số liệu 24 Phần Kết thảo luận 25 4.1 Kết nghiên cứu lựa chọn chó thí nghiệm cho tiêm vacxin vô hoạt Care 25 4.1.1 Hàm lượng kháng thể kháng CDV chó thí nghiệm 25 4.1.2 Kiểm tra có mặt virus CDV số virus khác thể chó trước tiến hành thí nghiệm 25 4.2 Kết nghiên cứu đáp ứng miễn dịch chó tiêm vacxin vơ hoạt Care chủng CDV - VNUA - 05 26 4.2.1 Kết kiểm tra kháng thể kháng CDV chó tiêm vacxin vơ hoạt Care 26 4.2.2 Kết theo dõi số tiêu lâm sàng chó tiêm vacxin vơ hoạt Care sau thử thách cường độc 29 4.3 Kết qua theo dõi số tiêu phi lâm sàng chó tiêm vacxin vơ hoạt Care sau thử thách cường độc 47 4.3.1 Kết kiểm tra hàm lượng kháng thể 47 4.3.2 Kết kiểm tra thải virus care chó sau thử thách cường độc 49 Phần Kết luận kiến nghị 50 5.1 Kết luận 50 5.2 Kiến nghị 50 Một số hình ảnh trình nghiên cứu 54 Tài liệu tham khảo 55 iv download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ đầy đủ ARN Acid Ribonucleic BC Bạch cầu CDV Canine Distemper Virus CD Canine Distemper CPE Cytopathogenic Effect cDNA complement Acid Deoxyribo Nucleic DNA Acid Deoxyribo Nucleic IgG Immunoglobulin G Lepto Leptospira RT Reverse Transcription RT - PCR Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction DMEM Dulbecco’s Modified Eagle Medium FCS Fetal calf serum mRNA Messenger Axít ribonucleic OD Độ hấp thụ quang v download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa máu chó khỏe Bảng 3.1 Hồ sơ chó thí nghiệm 20 Bảng 3.2 Bảng bố trí lơ thí nghiệm sử dụng chủng vacxin CDV 21 vô hoạt cho chó thí nghiệm 21 Bảng 4.1 Hàm lượng kháng thể kháng CDV chó thí nghiệm 25 Bảng 4.2 Kết xét nghiệm có mặt virus Care 26 số virus khác phương pháp RT – PCR 26 Bảng 4.3 Hàm lượng kháng thể chó sau tiêm 27 vacxin vô hoạt Care 27 Bảng 4.4 Thân nhiệt chó thí nghiệm sau thử thách cường độc 29 Bảng 4.5 Tần số hô hấp chó thí nghiệm sau 32 thử thách cường độc 32 Bảng 4.6 Tần số tim mạch chó thí nghiệm sau 35 thử thách cường độc 35 Bảng 4.7 Kết khảo sát tiêu bạch cầu công thức bạch cầu 38 chó sau thử thách cường độc 38 Bảng 4.8 Kết khảo sát số tiêu hệ hồng cầu 41 chó sau thử thách cường độc 41 Bảng 4.9 Triệu chứng lâm sàng chó sau thử thách cường độc 44 Bảng 4.11 Nghiên cứu thải virus Care chó tiêm vacxin vơ hoạt Care sau công cường độc 49 vi download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Đồ thị biểu diễn biến động hàm lượng kháng thể sau tiêm vacxin vơ hoạt Care chó thí nghiệm chó đối chứng 27 Hình 4.2 Đồ thị thể thân nhiệt chó thí nghiệm 30 sau thử thách cường độc 30 Hình 4.3 Đồ thị thể tần số hơ hấp chó thí nghiệm 33 sau thử thách cường độc 33 Hình 4.4 Tần số tim mạch chó thí nghiệm sau thử thách cường độc 36 Hình 4.5 Chó chảy dịch mũi xanh……………………………………………… …….…47 Hình 4.6 Gan bàn chân sừng hóa……………………………………………… ……….47 Hình 4.7 Nốt sài vùng da bụng………………………………………………………….48 Hình 4.8 Mắt đầy dử 48 Hình 4.9 Chó ỉa chảy phân màu cà phê…………………………………………… …….48 Hình 4.10 Chó có triệu chứng thần kinh (Liệt chân sau)……………………………….48 Hình 4.11 Đồ thị biểu diễn biến động hàm lượng kháng thể chó thí nghiệm chó đối chứng sau thử thách cường độc 48 vii download by : skknchat@gmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Đỗ Văn Đức Tên luận văn: “Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch chó tiêm vacxin vơ hoạt Care” Mã số: 60 64 01 01 Ngành: Thú y Tên sở đào tạo: Học Viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Đánh giá khả kích thích sản sinh kháng thể kháng CDV vacxin vô hoạt Care chó Đánh giá số tiêu lâm sàng phi lâm sàng chó tiêm vacxin vơ hoạt Care sau cơng cường độc Từ góp phần cung cấp thông tin khoa học việc sản xuất vacxin phịng bệnh care quy mơ lớn Việt Nam Phƣơng pháp nghiên cứu chó Beagle tuần tuổi chia thành lơ (lơ thí nghiệm lô đối chứng) Sử dụng phương pháp nghiên cứu: tiêm vacxin vô hoạt Care, quan sát, khám triệu chứng lâm sàng, lấy máu để xét nghiệm, phương pháp ELISA, phương pháp RT – PCR, phương pháp cơng cường độc Kết kết luận Kháng thể xuất máu chó sau 21 ngày tiêm vacxin tiếp tục trì sau 69 ngày theo dõi Chỉ tiêu lâm sàng chó tiêm vacxin vơ hoạt Care sau cơng cường độc có tăng nhẹ thân nhiệt, sau ổn định trở lại sau 10 ngày Tần số hô hấp tim mạch, tiêu huyết học (hồng cầu, bạch cầu), tiêu lâm sàng khác trạng thái sinh lý bình thường Hàm lượng kháng thể kháng CDV tăng cao sau cơng cường độc chó tiêm vacxin vơ hoạt Care Virus Care cường động khơng có khả gây bệnh cho chó tiêm vacxin vơ hoạt CDV-VNUA-05 thải nhanh so với chó không tiêm viii download by : skknchat@gmail.com THESIS ABSTRACT Master candidate: Do Van Duc Thesis title: Studying the immune response of the vaccinated dogs inactivated Care Major: veterinary Code: 60.64.01.01 Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) Research Objectives Assessing the ability to stimulate the production of antibodies to CDV of inactivated vaccine in dogs Care T he rating was an indicator of clinical and non-clinical inactivated vaccinated dog Care after the toxic intensity These results would help provide scientific information in the care preventive vaccine production on a large scale in Vietnam Materials and Methods Beagle dogs weeks old were divided into treatments (experimental group and the control group) Using the methodology: inactivated vaccine Care, observation, examination of clinical symptoms, blood drawn for testing, ELISA, RT - PCR methods, methods of authoritarian power Main findings and conclusions Antibodies appear in the blood of vaccinated dogs after 21 days and continued monitoring after 69 days Clinical indicators of dogs were vaccinated inactivated virulent Care after a slight increase in body temperature, then stabilized again after 10 days The frequency of respiratory and cardiovascular, hematologic indicators (red blood cells, white blood cells) and other clinical indicators were in the normal physiological state CDV antibody concentrations increased after the toxic intensity in dogs vaccinated inactivated Care Momentum Care virus unable to cause disease in vaccinated dogs inactivated CDV-VNUA-05 and was eliminated faster than the non-vaccinated dogs ix download by : skknchat@gmail.com Tỷ lệ tế bào Lympho 27,5±1,00 % Ở lơ đối chứng, chó có tỷ lệ trung bình loại bạch cầu thay đổi rõ rệt: Tỷ lệ BC đa nhân trung tính 67,49±1,05 %, tăng so với lô đối chứng 7,24% với (P < 0,05) Tỷ lệ BC toan trung bình 5,65±0,29 %, giảm so với lô đối chứng 0,45% với (P < 0,05) Tỷ lệ BC kiềm 0,71±0,24 %, tăng 0,09 % so với lô đối chứng 0,09 % với (P < 0,05) Tỷ lệ BC đơn nhân lớn 3,35±0,49 %, giảm 2,28 % so với lô đối chứng 0,09 % với (P < 0,05) Tỷ lệ tế bào Lympho 22,1±1,56, tăng 5,4 % so với lô đối chứng 0,09 % với (P < 0,05) Dựa vào kết khảo sát tiêu bạch cầu cơng thức bạch cầu chó sau thử thách cường độc, nhận thấy chó tiêm phịng vacxin vơ hoạt Care, sau thử thách cường độc, số lượng bạch cầu công thức Bạch cầu nằm phạm vi sinh lý bình thường Trong đó, chó khơng tiêm vacxin vô hoạt Care, thử thách cường độc, số lượng bạch cầu giảm so với chó lơ thí nghiệm; tỷ lệ bạch cầu đa nhân trung tính, bạch cầu kiềm, tế bào Lympho tăng; tỷ lệ bạch cầu toan, bạch cầu đơn nhân lớn giảm Điều chứng tỏ, chó tiêm vacxin vơ hoạt Care có khả đáp ứng miễn dịch với virus Care Có thể giải thích kết nêu chó tiêm phịng vacxin vơ hoạt Care, thể chó sinh miễn dịch đặc hiệu có khả tiêu diệt virus Care nên virus khơng cịn có khả tác động đến thể chó Ngược lại, chó khơng tiêm vacxin vơ hoạt Care, virus xâm nhập vào thể chó, virus tác động vào tế bào có chức miễn dịch, chúng nhân lên, phá hủy tế bào gây trình apotosis (sự chết tế bào) * Kết khảo sát tiêu hồng cầu Chúng tiến hành lấy mẫu máu chó lơ thí nghiệm chó lơ đối chứng để tiến hành khảo sát số tiêu hệ hồng cầu Đếm số lượng hồng cầu máy 18 tiêu huyết học kết thu bảng 4.8 40 download by : skknchat@gmail.com Bảng 4.8 Kết khảo sát số tiêu hệ hồng cầu chó sau thử thách cƣờng độc STT Lơ thí nghiệm Lơ đối chứng (n=3) (n=3) X  mx X  mx Chỉ tiêu P Số lượng HC (triệu/µl) 6,22±0,05 4,15±0,11 < 0,05 Hàm lượng Hb (g%) 14,15±0,50 11,07±0,11 < 0,05 Tỷ khối huyết cầu (%) 37,77±0,72 32,55±0,44 < 0,05 62,36±0,80 46,23±1,96 < 0,05 23,35±0,68 18,62±0,52 < 0,05 33,25±0,82 13,73±0,61 > 0,05 Thể tích bình qn HC (µm3) Lượng huyết sắc tố bình qn HC (Þg) Nồng độ huyết sắc tố bình quân (%) - Số lượng hồng cầu: Qua bảng 4.8 thấy sau công cường độc, tiêu hồng cầu lô chó thí nghiệm nằm phạm vi sinh lý bình thường, lơ chó đối chứng có thay đổi rõ rệt nàm phạm vi sinh lý bình thường Cụ thể: Số lượng hồng cầu chó lơ thí nghiệm 6,22±0,05 triệu/µl, cao 2,07 triệu/µl so tiêu lơ đối chứng 4,15±0,11 triệu/µl, sai khác số lượng hồng cầu hai lơ thí nghiệm có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Theo Hồ Văn Nam cs (1997), số lượng hồng cầu bình qn chó khỏe mạnh dao động từ – triệu/mm3 - Hàm lượng huyết sắc tố (Hemoglobin Hb) Qua kết bảng 4.8 chúng tơi thấy hàm lượng huyết sắc tố trung bình chó lơ thí nghiệm 14,15±0,50 g% Trong đó, hàm lượng huyết sắc tố chó lơ đối chứng 11,07±0,11 g%, giảm 3,08 g% (P< 0,05) so với lô đối chứng 41 download by : skknchat@gmail.com - Tỷ khối huyết cầu (Hematocrit) Tỷ khối huyết cầu tỷ lệ phần trăm khối hồng cầu chiếm thể tích máu định Qua bảng 4.8 cho thấy tỷ khối huyết cầu chó thí nghiệm trung bình 37,77±0,72 % Tỷ khối huyết cầu chó lơ đối chứng trung bình 32,55±0,44 % Kết cho thấy so với chó lơ thí nghiệm, tỷ khối huyết cầu chó lơ đối chứng giảm hơn so với chó lơ thí nghiệm 5,22 % (P < 0,05) Như tiêu tương quan thuận với số lượng hồng cầu - Thể tích trung bình hồng cầu: Thể tích bình qn hồng cầu thể tích bình qn hồng cầu Thể tích bình qn hồng cầu tương đối ổn định theo loài Qua bảng 4.8 cho thấy thể tích bình qn hồng cầu chó lơ thí nghiệm 62,36±0,80 µm3 Thể tích bình qn hồng cầu chó lơ đối chứng 46,23±1,96 µm3 Như thể tích bình qn hồng cầu chó lơ đối chứng giảm 16,13 µm3 so với chó khoẻ (P < 0,05) - Lượng Hb nồng độ Hb bình quân hồng cầu: Theo bảng 4.8 cho thấy lượng huyết sắc tố bình quân nồng độ huyết sắc tố bình quân hồng cầu chó lơ thí nghiệm giảm nhiều so với chó lơ đối chứng Lượng huyết sắc tố bình qn hồng cầu chó lơ thí nghiệm 23,35±0,68 pg giảm xuống cịn 18,62±0,52 pg lơ chó đối chứng, giảm 4,73 pg (P < 0,05) Nồng độ huyết sắc tố bình quân hồng cầu chó lơ thí nghiệm 33,25±0,82 % giảm xuống cịn 13,73±0,61 % (của chó lơ đối chứng), giảm 19,52 % (P < 0,05) Như vậy, thấy biến đổi tiêu lượng huyết sắc tố bình quân nồng độ huyết sắc tố bình quân hồng cầu chó lơ đối chứng liên quan đến đến thiếu máu chó bệnh sốt cao xuất huyết Có thể giải thích kết chó có khả đáp ứng miễn dịch sau tiêm vacxin vơ hoạt Care Vì vậy, sau xâm nhập vào thể, virus khơng có khả tác động tiêu hồng cầu chó Trong đó, chó chưa 42 download by : skknchat@gmail.com tiêm vacxin vô hoạt Care, bị virus Care công dẫn đến số lượng hồng cầu giảm bị máu Virus công tế bào gây xuất huyết, có trường hợp tiêu chảy máu kèm theo sốt cao ca bị viêm phổi, làm cho tiêu hồng cầu chó bị thay đổi Tóm lại, qua theo dõi tiêu lâm sàng, tiêu huyết học chó thí nghiệm sau thử thách cường độc chủng CDV- HUA- 04H, chúng tơi thấy lơ chó thí nghiệm chó có triệu chứng điển hình bệnh Care Trong đó, chó lơ chó tiêm vacxin khơng có biểu bệnh Care Kết phù hợp với nghiên cứu Norrby et al (1986) Sự khai khác kết thí nghiệm lơ chó chứng tỏ chó sau tiêm vacxin vơ hoạt Care chế từ chủng CDV – VNUA – 05 có khả đáp ứng miễn dịch với virus Care nên gây nhiễm với virus Care thể chó s tiết kháng thể chủ động đặc hiệu, làm trung hòa virus nên khơng xuất triệu chứng điển hình bệnh Care lô đối chứng 4.2.2.5 Kết theo dõi số triệu chứng lâm sàng Triệu chứng lâm sàng dấu hiệu trình bệnh thể bên ngồi, phương pháp quan sát, khám bệnh lâm sàng dễ dàng nhận biết Các triệu chứng lâm sàng có ý nghĩa vơ quan trọng góp phần tích cực cơng tác chẩn đốn nghiên cứu lĩnh vực thú y Theo Greene and Appel (1987), phát lâm sàng bệnh Care thấy sốt thường xảy sớm Tiếp theo ho, ỉa chảy, mắt chảy dịch có mủ nhày Triệu chứng viêm não cấp tính phát triển với biểu khác Theo Nguyễn Văn Thanh (2007), triệu chứng chủ yếu bệnh sốt, ho, xuất nốt sài, sừng hóa gan bàn chân, dử mắt, triệu chứng thần kinh Sau thử thách cường độc cho chó chủng CDV- HUA- 04H, tiến hành theo dõi, ghi chép triệu chứng lâm sàng chó lơ thí nghiệm lơ đối chứng với tiêu sau: sốt, bỏ ăn, giảm ăn, nôn mửa, khó thở, chảy nước mũi, ỉa chảy, xuất nốt sài bụng, triệu chứng thần kinh…trong khoảng thời gian từ sau công cường độc đến 21 ngày sau Kết thể bảng 4.9 43 download by : skknchat@gmail.com Bảng 4.9 Triệu chứng lâm sàng chó sau thử thách cƣờng độc Ngày Sốt Nƣớc mắt, nƣớc mũi Ho, viêm phổi Giảm ăn, bỏ ăn Nốt sài dƣới da Tiêu chảy Nôn mửa Thần kinh Lô đối chứng I 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 3/3 3/3 0/3 2/3 0/3 0/3 0/3 0/3 3/3 3/3 0/3 2/3 0/3 0/3 0/3 0/3 3/3 3/3 0/3 3/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 3/3 0/3 3/3 0/3 0/3 1/3 0/3 0/3 3/3 0/3 3/3 0/3 2/3 0/3 0/3 0/3 3/3 0/3 3/3 0/3 3/3 0/3 0/3 0/3 3/3 0/3 3/3 0/3 3/3 0/3 0/3 10 0/3 3/3 0/3 3/3 2/3 3/3 0/3 0/3 11 3/3 3/3 0/3 3/3 3/3 3/3 3/3 0/3 12 3/3 3/3 2/3 3/3 3/3 3/3 3/3 0/3 13 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 0/3 14 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 0/3 0/3 15 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 0/3 0/3 16 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 0/3 0/3 17 0/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 0/3 2/3 18 0/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 0/3 3/3 19 0/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 20 1/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 21 2/3 3/3 0/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 0/3 0/3 0/3 0/3 II Lô thí nghiệm TBTN 0/5 0/3 0/3 0/3 Ghi chú: 0/3 thể Số chó có biểu triệu chứng/ Số chó thí nghiệm theo dõi (n=3 số chó thí nghiệm, n=3 số chó đối chứng) TBĐC: Trung bình đối chứng 44 download by : skknchat@gmail.com *Ở lô đối chứng: Qua theo dõi nhận thấy, sau thử thách cường độc chó xuất triệu chứng điển hình bệnh Care Cụ thể: Sốt: Chó có biểu sốt vào giai đoạn, lần thứ từ ngày thứ đến ngày thứ sau tiêm, sau thân nhiệt chó trở lại bình thường, đợt sốt thứ từ ngày thứ 11 đến ngày thứ 16 Chảy nước mắt, nước mũi: Từ ngày thứ 3, chó lơ đối chứng có hiểu chảy nước mắt, nước mũi Đây biểu trình bệnh virus tác động lên kết mạc mắt gây viêm kết kết mạc mắt Ho, viêm phổi: Từ ngày thứ 12 đến ngày 20 sau cơng cường độc, chó có biểu ho Triệu chứng giải thích vius xâm nhập vào thể qua đường hô hấp s tác động lên biểu mô đường hô hấp gây tổn thương Giảm ăn, bỏ ăn: Từ ngày thứ 3,4 có 2/3 chó lơ đối chứng có biểu giảm ăn, bỏ ăn khoảng từ ngày từ đến ngày thứ 21, tất chó lơ thí nghiệm có biểu giảm ăn, bỏ ăn Theo nguyên nhân virus xâm nhập vào thể, nhân lên, gây nhiễm trùng dẫn đến biểu bên mệt mỏi, ủ rũ, bỏ ăn Nốt sài sốt da: Sau công cường độc, từ ngày thứ đến ngày thứ 9, chó không xuất nốt sài sốt da, nhiên từ ngày thứ 10 đến ngày 21, chó lô đối chứng xuất nốt sài sốt da vùng mỏng Do virus lan tràn mô làm da phát ban, xuất nốt viêm mủ vùng da bẹn, bụng, đùi Tiêu chảy: Kết cho thấy từ ngày từ chó lơ đối chứng bắt đầu có biểu tiêu chảy kéo dài đến ngày thứ 21 Triệu chứng sau xâm nhập vào thể, virus nhân lên tế bào ruột, dẫn đến hoại tử biểu mơ ruột, bào mịn nhung mao ruột, gây viêm ruột, giảm hấp thu làm cho vật ỉa chảy kéo dài Nôn mửa: Ở ngày thứ sau cơng cường độc, có 1/3 chó thuộc lơ đối chứng bị nơn mửa, sau khỏi ngày thứ 7, nhiên chó xuất đợt nơn mửa từ ngày thứ 11 đến ngày 13 từ ngày đến từ ngày 19 đến ngày thứ 21 Nguyên nhân virus công nhân lên đường tiêu hóa, gây hoại tử biểu mơ ruột, kích ứng niêm mạc ruột, dày làm bệnh súc nôn mửa liên tục Theo chúng tơi ghi nhận được, chó mắc bệnh lúc đầu nơn thức ăn, sau nơn khan có bọt màu vàng 45 download by : skknchat@gmail.com Thần kinh: Qua theo dõi chúng tơi chó xuất triệu chứng thần kinh từ ngày thứ 17 đến thứ 21 Theo chúng tôi, nguyên nhân virus công vào hệ thần kinh trung ương não gây số triệu chúng thần kinh (run rẩy, co giật, liệt ) * Ở lơ thí nghiệm: khỏe mạnh, ăn uống bình thường, khơng tiêu chảy, khơng sốt, khơng ho, khơng nơn mửa, khơng có triệu trứng thần kinh Từ kết nghiên cứu triệu chứng lâm sàng chó sau thử thách cường độc, chúng tơi nhận thấy có khác biệt rõ rệt biểu lâm sàng chó tiêm phịng vacxin vơ hoạt Care chó khơng tiêm vacxin Có thể giải thích điều chó tiêm vacxin vơ hoạt Care, thể chó sinh đáp ứng miễn dịch đặc hiệu có khả tiêu diệt virus Care nên virus khơng có tác động vào thể chó Ngược lại, chó khơng tiêm vacxin vơ hoạt Care, virus xâm nhập vào thể chó, tác động đồng thời lên nhiều quan thể chó kết mạc mắt, hệ hơ hấp, hệ tuần hồn, hệ thần kinh, hệ tiêu hóa, …gây nên triệu chứng đặc trưng bệnh Care Đây dẫn chứng cho thấy chó có khả đáp ứng miễn dịch sau tiêm phịng vacxin vơ hoạt Care Hình 4.5 Chó chảy dịch mũi xanh Hình 4.6 Gan bàn chân sừng hóa 46 download by : skknchat@gmail.com Hình 4.7 Nốt sài vùng da bụng Hình 4.8 Mắt đầy dử Hình 4.9 Chó ỉa chảy phân Hình 4.10 Chó có triệu chứng thần màu cà phê kinh (Liệt chân sau) 4.3 KẾT QUẢ THEO DÕI MỘT SỐ CHỈ TIÊU PHI LÂM SÀNG CỦA CHÓ ĐƢỢC TIÊM VACXIN VÔ HOẠT CARE SAU KHI THỬ THÁCH CƢỜNG ĐỘC 4.3.1 Kết kiểm tra hàm lƣợng kháng thể Để nghiên cứu khả đáp ứng miễn dịch chó sau tiêm vacxin vô hoạt Care chế từ chủng CDV- VNUA- 05, theo dõi hàm lượng kháng thể lơ chó thí nghiệm sau công cường độc chủng CDV- HUA- 04H (hiệu giá virus 6,25 x 105 TCID50/25 µl) thời gian 21 ngày sau công cường độc gây nhiễm Kết trình bày bảng 4.10 hình 4.5 47 download by : skknchat@gmail.com Bảng 4.10 Hàm lƣợng kháng thể chó sau đƣợc cơng cƣờng độc Chó Ngày Lơ thí nghiệm Lơ đối chứng (n=3) (n=3) OD sau tiêm vaxcin OD X  mx KQ X  mx KQ 1,36 ± 0,32 + 0,03 ± 0,01 - 1,13 ± 0,25 + 0,15 ± 0,01 - Cut-off 14 1,84 ± 0,22 + 0,23 ± 0,02 - = 0,3 21 2,69 ± 0,18 + 0,49 ± 0,01 + Hình 4.11 Đồ thị biểu diễn biến động hàm lƣợng kháng thể chó thí nghiệm chó đối chứng sau thử thách cƣờng độc Kết thu cho thấy, chó lơ đối chứng, sau thử thách cường độc chủng CDV- HUA- 04H, hiệu giá kháng thể chó tăng dần từ sau tiêm đến ngày thứ 69 (21 ngày sau công cường độc có kháng thể) Tuy nhiên, mức độ tăng chậm, cụ thể thời điểm chưa công cường độc, sau 49; 56; 63 ngày, hiệu giá kháng thể với giá trị OD đạt 0,03; 0,15; 0,23 nhỏ 48 download by : skknchat@gmail.com giá trị tới hạn (Cut off = 0,3) Đến ngày thứ 69, hàm lượng kháng thể đạt cao (0,49) lớn giá trị Cut off Như vậy, lơ đối chứng, chó có khả đáp ứng miễn dịch với virus Care từ ngày thứ 21 sau thử thách cường độc Ở lơ thí nghiệm, hiệu giá kháng thể với giá trị OD 49 ngày đạt 1,36 tiến hành công cường độc; 56 ngày đạt 1,13; 63 ngày đạt 1,84; 69 ngày đạt 2,69 Qua cho thấy, hàm lượng kháng thể lô chó thí nghiệm lớn giá trị tới hạn (Cut off = 0,3) có xu hướng ngày tăng Điều cho thấy, chó sau tiêm vacxin vơ hoạt Care có khả đáp ứng miễn dịch bị công cường độc chủng CDV- HUA- 04H Hàm lượng kháng thể sinh tăng lên có mặt virus gây bệnh giúp chó trung hòa virus gây bệnh 4.3.2 Kết kiểm tra thải virus Care sau thử thách cường độc Bảng 4.11 Nghiên cứu thải virus Care chó đƣợc tiêm vacxin vơ hoạt Care sau cơng cƣờng độc Lơ thí nhiệm Lơ tiêm vacxin Lô đối chứng 10 ngày 14 ngày 21 ngày Chó + + + - - Chó + + + - - Chó + + + - - Chó + + + + + Chó + + + + + Chó + + + + + Ghi chú: Ở cột ngày theo dõi: +: Có virus; -: Khơng có virus Qua kết bảng 4.11 thấy sau cơng cường độc, lơ chó đối chứng, chó có kết dương tính với virus Care tất thời điểm lấy dịch swab xét nghiệm Ở lơ thí nghiệm, 10 ngày đầu, chó có kết dương tính với virus Care, nhiên từ lần kiểm tra sau (vào ngày 14 21 ngày) cho kết âm tính với virus Care Từ kết nghiên cứu thải virus chó sau thử thách cường độc thấy đáp ứng miễn dịch chó sau tiêm vacxin vơ hoạt Care loại thải hồn tồn virus thể chó khoảng tuần sau nhiễm chủng cường độc Trong đó, chó đối chứng khơng tiêm vacxin tiếp tục thải virus môi trường sau 21 ngày theo dõi 49 download by : skknchat@gmail.com PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch chó tiêm vacxin vơ hoạt Care chế từ chủng CDV – VNUA – 05 thấy: - Kháng thể xuất máu chó sau 21 ngày tiêm vacxin tiếp tục trì sau 69 ngày theo dõi - Chỉ tiêu lâm sàng chó tiêm vacxin vô hoạt Care sau công cường độc có tăng nhẹ thân nhiệt, sau ổn định trở lại sau 10 ngày Tần số hô hấp tim mạch, tiêu huyết học (hồng cầu, bạch cầu), tiêu lâm sàng khác trạng thái sinh lý bình thường, - Chỉ tiêu phi lâm sàng: Hàm lượng kháng thể kháng CDV tăng cao sau cơng cường độc chó tiêm vacxin vơ hoạt Care Virus Care cường động khơng có khả gây bệnh cho chó tiêm vacxin vơ hoạt CDVVNUA-05 thải nhanh so với chó khơng tiêm 5.2 KIẾN NGHỊ Do điều kiện không cho phép nên nghiên cứu khả đáp ứng miễn dịch chó Beagle sau tiêm phịng vacxin vơ hoạt Care chế từ chủng CDV- VNUA- 05 Để nghiên cứu hoàn thiện đưa kiến nghị : - Tiếp tục nghiên cứu thêm khả đáp ứng miễn dịch chó sau tiêm phịng vacxin vơ hoạt Care chế từ chủng CDV- VNUA- 05 giống chó khác với số lượng lớn - Nghiên cứu cách sử dụng vacxin vơ hoạt CDV- VNUA- 05 để phịng bệnh Care cho chó liều lượng, đường đưa thuốc, độ tuổi tiêm phịng cho chó thích hợp - Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến khả đáp ứng miễn dịch chó sau tiêm phịng vacxin vô hoạt Care 50 download by : skknchat@gmail.com MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG Q TRÌNH NGHIÊN CỨU Hình Lấy máu chó thí nghiệm Hình Vacxin vơ hoạt Hình Đo thân nhiệt chó thí nghiệm Hình Mẫu máu dịch 54 download by : skknchat@gmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Vương Đức Chất Lê Thị Tài (2004) Bệnh chó mèo cách phịng trị, NXB Nơng Nghiệp Hà Nội, Hà Nội Hồ Đình Chúc (1993) Bệnh Care đàn chó Việt Nam kinh nghiệm điều trị, Cơng trình nghiên cứu, Hội thú y Việt Nam Tô Du Xn Giao (2006) Kỹ thuật ni chó mèo phịng trị bệnh thường gặp, NXB Lao động xã hội Nguyễn Thị Lan, Bounheuang SIHOUNGVANH, Nguyễn Thị Yến, Nguyễn Hữu Nam (2014) Một số đặc điểm bệnh lý chó gây bệnh thực nghiệm chủng virus Care (CDV – 768), Tạp chí khao học Phát triển 2015, tập 13, số 1: 56 – 64 Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên Phạm Ngọc Thạch (1997) Giáo trình chẩn đốn lâm sàng thú y, NXB Nơng Nghiệp, Hà Nội Trần Văn Nên, Nguyễn Thị Lan, Nguyễn Thị Hoa, Nguyễn Hữu Nam (2016) Đánh giá khả bảo hộ vacxin vô hoạt Care chế từ chủng CDV – VNUA- 768 chó thí nghiệm, Tạp chí khoa học Phát triển 2016, tập 14, số 1: 21 – 27 Trần Thanh Phong (1996) Một số bệnh truyền nhiễm chó, Tủ sách trường Đại học Nơng lâm thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Minh Phương (2013) Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ bệnh lý chó mắc bệnh Care Hà Nội, Luận văn thạc sĩ Thú y, Đai học Nông nghiệp Hà Nội, tr 52 – 54 Nguyễn Vĩnh Phước (1978), giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc, NXB Nông nghiệp 10 Lê Thị Tài (2006) Một số bệnh virus, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 11 Nguyễn Văn Thanh (2007) Bài giảng Bệnh chó mèo, NXB Đại học Nông nghiệp Hà Nội, Hà Nội 12 Nguyễn Văn Thanh, Vũ Như Quán Nguyễn Hoài Nam (2012) Giáo trình Bệnh chó, mèo, NXB Đại học Nông nghiệp Hà Nội, Hà Nội 55 download by : skknchat@gmail.com 13 Lê Văn Thọ (1997) Khảo sát số đặc điểm ngoại hình tầm vóc kiểu dáng giống chó ni TP Hồ Chí Minh, Luận văn Thạc sỹ Nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp Hà Nội 14 Đỗ Đức Việt Trịnh Thơ Thơ (1997) Một số tiêu huyết học chó, Tập san khoa học Tiếng Anh: 15 Appel M.J and Summer B.A (1995) Pathologennicity of mobillivirusses forterrestrial carnivores 16 Carter SD, May C, Bell SC, et al (1992) Canine Distemper virus and rheumatoid arthritis in dogs 17 Craig E.Greene and Maxj Appel (1987) Canine Distemper 18 David T.Smith and Donald S.Martin (1979) Zinser’s Text book of Bacteriology 19 Lan, N.T., Yamaguchi, R., Uchida, K., Sugano, S and Tateyama, S 2005 Growth Profiles of Recent Canine distemper Issolates on Vero Cells Expressing canine signalling lymphocyte activation molecule (SLAM) J Comp Pathol 133, 77-81 20 Lan NT (2008) First Isolation and Characterization of CanineDistemper Virus in Viet Nam with the Immunohistochemical Examination of the Dog, J Vet Med Sci 2009 Feb 21 McCarthy AJ, Shaw MA and Goodman SJ (2007) Pathogen evolution and disease emergence in carnivores, Proc Biol Sci 22 I.A Merchant, D.V.M.ph.o, M.P.H Vetternary Bacteriology-Seventh Edition (1961-1969) 23 Norrby, E., Utter, G., Orvell, C., Appel, M.J (1986) Protection against canine distemper virus in dogs after immunization with isolated fusion protein Journal of Virology, 58 : 536 - 541 24 Ron Hines DMV PhD (2006) www//F\MISC\ Distemper In Dog 25 Simpson K.W., Maskell I.E and Mark well P.J (1994) Use of a restricted antigen diet in the management of idiopathic canine Colitis, Journal of small Animal practice 35, p.233-238 56 download by : skknchat@gmail.com 26 Timothy Y.Woma and Moritz van Vuuren (2009) Isolation of canine distemperviruses from domestic dog in South Africa using Vero.DogSLAM cells and its application to diagnosis, African Journal of Microbiology Research Vol.3 27 Wilson, S., Siedek, E., Thomas, A., King, V., Stirling, C., Plevová, E., Salt, J., Sture, G (2014) Influence of maternally - derived antibodies in - week old dogs for the efficacy of a new vaccine to protect dogs against virulent challenge with canine distemper virus, adenovirus or parvovirus Trials in Vaccinology, 3:107 – 113 57 download by : skknchat@gmail.com ... thể chó trước tiến hành thí nghiệm 3.3.2 Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch chó tiêm vacxin vô hoạt Care - Kiểm tra kháng thể kháng CDV chó tiêm vacxin vơ hoạt Care - Theo dõi số tiêu lâm sàng chó tiêm. .. từ chó mắc bệnh Care để chế vacxin vơ hoạt phịng bệnh Care Để đánh giá hiệu phịng bệnh vacxin trên, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài ? ?Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch chó tiêm vacxin vơ hoạt Care? ??... nhân lớn giảm Điều chứng tỏ, chó tiêm vacxin vơ hoạt Care có khả đáp ứng miễn dịch với virus Care Có thể giải thích kết nêu chó tiêm phịng vacxin vơ hoạt Care, thể chó sinh miễn dịch đặc hiệu có