BÁO cáo THÍ NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM PHA CHẾ môi TRƯỜNG GIÁ đậu ĐƯỜNG kỹ THUẬT TUYỆT TRÙNG BẰNG AUTOCLAVE TỔNG VI SINH vật HIẾU KHÍ ( BẰNG PHƯƠNG PHÁP đổ đĩa)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC VÀ THỰC PHẨM BÁO CÁO THÍ NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM Giáo viên hướng dẫn: Nguyễn Quang Duy Lớp :191160C Sáng Thứ Nhóm sinh viên thực Họ Và Tên Mã Số Sinh Viên Trần Lý Mộng Cầm 19116158 Nguyễn Nữ Hoàng Kim Linh 19116183 Bùi Văn Phú 19116206 Nguyễn Thị Hồng Thắm 19116215 Nguyễn Thị Thúy Hằng 19116170 TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2020 download by : skknchat@gmail.com MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU BÀI 1: GIỚI THIỆU MƠN HỌC GIỚI THIỆU KÍNH HIỂN VI QUANG HỌC NỀN SÁNG AN TỒN PHỊNG THÍ NGHIỆM BÀI 2: NHUỘM BÀO TỬ VI KHUẨN BÀI 3: PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG GIÁ ĐẬU ĐƯỜNG KỸ THUẬT TUYỆT TRÙNG BẰNG AUTOCLAVE TỔNG VI SINH VẬT HIẾU KHÍ ( BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỔ ĐĨA) 12 BÀI 4: PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG PATATO DEXTROSE AGAR CÓ BỔ SUNG CHLORAMPHENICOL + ROSE BENGAL TỔNG SỐ NẤM MEN - NẤM MỐC (BẰNG PHƯƠNG PHÁP TRÃI ĐĨA+XÁC ĐỊNH NẤM MEN - NẤM MỐC BẰNG THIẾT BỊ LẤY MẪU TRONG KHƠNG KHÍ) 15 BÀI 5: PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG LSB, BGBL COLIFORM TỔNG SỐ 19 BÀI 6: ỐNG NGHIỆM THẠCH NGHIÊNG + CẤY CHUYỀN (MẪU NẤM MỐC) ỐNG NGHIỆM THẠCH ĐỨNG + CẤY ĐÂM SÂU(MẪU NẤM MỐC) 23 BÀI 7: NHUỘM ĐƠN TIÊU BẢN GIỌT ÉP 27 BÀI 8: KỸ THUẬT NHUỘM GRAM 31 BÀI 9: TIÊU BẢN PHÒNG ẨM 34 KẾT LUẬM 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 download by : skknchat@gmail.com LỜI MỞ ĐẦU Điều nhóm xin gửi lời cảm ơn đến thầy Nguyễn Quang Duy anh trợ giảng Phạm Trương Khắc Huy hướng dẫn truyền đạt đến chúng em kiến thức kỹ thực hành môn học vi sinh thực phẩm.Giúp chúng em biết thêm nhiều kiến thức nắm vững thao tác tiến hành thực nghiệm suốt tuần học tập, thực hành phịng Thí Nghiệm Vi Sinh Thực Phẩm (B210) trường Đại Học Sư Phạm Kỹ Thuật TPHCM Chúng em học hỏi nhiều kinh nghiệm, kỹ thực thao tác, với việc sử dụng dụng cụ, hóa chất Chúng em xin chân thành cảm ơn sâu sắc tới thầy Cảm ơn thầy tạo điều kiện thuận lợi cho chúng em học tập truyền đạt kiến thức quý báu suốt thời gian vừa qua download by : skknchat@gmail.com BÀI 1: GIỚI THỆU MƠN HỌC KÍNH HIỂN VI QUANG HỌC NỀN SÁNG AN TỒN PHỊNG THÍ NGHIỆM I Giới thiệu mơn học -"Thí nghiệm vi sinh vật học thực phẩm" giới thiệu tới người học kiến thức: số kỹ thuật vi sinh vật học, số phương pháp định lượng vi sinh vật, khảo sát hình thái số tính chất sinh lý nhóm vi sinh vật thường gặp thực phẩm, phương pháp kiểm tra tiêu vi sinh thực phẩm, vệ sinh cơng nghiệp -Trình bày nội dung như: Mơi trường ni cấy vi sinh vật, kỹ thuật gieo cấy phân lập, định lượng – tách vi sinh vật, quan sát vi sinh vật nói chung trên,… Mời thầy bạn tham khảo II Giới thiệu kính hiển vi quang học sáng -Một kính hiển vi tốt dụng cụ quan trọng phịng thí nghiệm vi sinh Loại kính thường dùng kính hiển vi quang học sáng -Kính hiển vi có nhiều thấu kính có nguồn ánh sáng trắng Chúng phóng đại chiếu sáng vật thể nhỏ vi khuẩn vi sinh vật khác mà khơng nhìn thấy băng mắt thường download by : skknchat@gmail.com Figure 1: Kính hiển vi quang học sáng III.Các phận chủ yếu chức kính hiển vi quang học sáng Kính hiển vi đặt chân đế vững có phận tay cầm để di chuyển kính hiển vi đén vị trí khác Bần chứa tiêu có lỗ trịn vị trí trung tâm Nó cho phép ánh sáng bên xuyên qua đến thấu kính bên Tiêu cần quan sát đặt bàn chứa tiêu Một đèn chiếu đặt bên chân đé Ánh sáng xuyên qua tụ Abbe Tụ quang có chứa thấu kính Tụ quang có cửa sập dùng để điều chỉnh lượng ánh sáng Một gạt kèm theo để điều chỉnh cửa sập Tụ quang nâng lên hạ xuống nhờ núm điều chỉnh, cách tốt giữ tụ quang ị trí cao điều chỉnh lượng ánh sáng cách đóng mở cửa sập download by : skknchat@gmail.com Phía bàn chứa tiêu bản, gắn với tay cầm, ống trịn có thấu kính phóng đại Bên cổ xoay gắn với ba hay bốn vật kính Bên ống trịn thị kính cho phép nhìn hai mắt Khi sử dụng phải vặn nút sơ cấp cách nhẹ nhàng để nâng hạ bàn chứa tiêu Nút thứ cấp làm di chuyển bàn chưa tiêu cách chậm chạp vập khơng thể thấy di chuyển nhìn Lưu ý hạ bàn chưa mẫu vật xuống đưa mắt vào quan sát thị kính để tránh trường hợp vật kín Khi xoay nút thứ cấp q nhanh làm nút bị kẹt cứng, phải thông báo cho giáo viên hướng dẫn Tổng số lần phóng đại tùy thuộc vào vật kính thị kính dùng Nhìn vào thị kính, sinh viên thấy kí hiệu “10X”, có nghĩa phóng dại 10 lần Nhìn vào vật kính thấy ký hiệu “4X”, “10X”, “40X” “ 100X”, tương ứng với độ phóng đại 4,10,40,và 100 lần Vật kính low-power cịn gọi vật kính 10X hay 16mm Vật kính high- dry cịn gọi vật kính 40X hay 4mm Khi sử dụng dầu sơi kính, dầu soi kính đặt vị trí tiêu vật kính Độ dài tiêu cự ( focal length) vật kính tỉ lệ với đường kính vật kính 10 Sử dụng mảnh vải mềm để lau nhẹ nhàng thấu kính phía tụ quang bị bám bụi 11 Sử dụng mảnh vải mềm để lau nhẹ nhàng thấu kính III CÁC QUY ĐỊNH TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC Các quy định chung Người làm việc phịng thí nghiệm vi sinh phải mặc trang phục bảo vệ đeo bảng tên download by : skknchat@gmail.com Sinh viên phải tham gia 100% buổi thí nghiệm 100% thời gian buổi thí nghiệm Khi làm đổ / tràn dung dịch làm bể dụng cụ thủy tinh, sinh viên phải báo cáo cho cán phòng thí nghiệm xin ý kiến giải Sinh viên phải nắm vững thao tác vo trùng Giảm thiểu hình thành khí dung thao tác Rửa tay trước sau thí nghiệm Khơng ăn, uống phịng thí nghiệm Khơng nằm phịng thí nghiệm Đọc kĩ làm theo quy định thực hành Vệ sinh bàn,ghế dụng cụ trước sau thí nghiệm Đổ bỏ rác thái quy trình, nơi quy định Khơng ngậm đồ dùng miệng Trả đầy đủ dụng cụ thí nghiệm sau hồn thành xong thí nghiệm Vệ sing phịng thí nghiệm Các u cầu an tồn Cột tóc, mặc áo blouse bảo hộ, găng tay y tế Nghiêm cấm dùng miệng hút pipet Trong tình khẩn cấp Lưu ý trang bị cấp cứu cần Báo cáo tình khẩn cấp cho giáo viên dẫn Bình tĩnh có tình khẩn cấp IV AN TỒN SINH HỌC TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC Các tiêu để thiết lập cấp độ an tồn sinh học download by : skknchat@gmail.com Có mước độ an toàn sinh học thiết lập theo nguy cở khả lây nhiễm , khả gây bệnh, khả truyền bệnh, chất công việc tiến hành An toàn sinh học cấp độ cấp độ bảo vệ bản, tương tác với tác nhân khơng gây bệnh người bình thường An tồn sinh học cấp độ tương ứng với tác nhân có nguy mức trung bình gây bệnh cho người nhiều mức độ khác thonon qua đường tiêu hóa, qua da màng nhầy An toàn sinh học cấp độ tương ứng với tác nhân gây bệnh có khả lan truyền dạng khí dung, có khả gây bệnh nguy hiểm bệnh gây chết người An toàn sinh học cấp độ tương ứng với tác nhân gây bệnh ngoại lai có khả đe dọa cao đến sống cách lây nhiễm qua đường khí dung Các tác nhân gây nguy hại phịng thí nghiệm vi sinh vật học Các đường lan truyền tác nhân gây bệnh phịng thí nghiệm bao gồm: (1) qua da, mắt hay màng nhầy tiếp xúc trực tiếp với tác nhân gây bệnh; (2) bin tổn thương kim tiêm, vật sắc nhọn, bi cán đốt động vật mang tác nhân gây bệnh; (3) qua đường tiêu hóa ăn uống phải tác nhân gây bệnh qua tay miệng; (4) hít phải khí dung mang tác nhân gây bệnh Xác lập yếu tố nguy thiết lập biện pháp phong ngừa phù hợp a) Xác định tác nhân gây nguy hại đánh giá nguy có b) Xác định nguy từ quy trình phịng thí nghiệm c) Xác định xác cấp độ an tồn sinh học xác định biện pháp phòng ngừa đánh giá nguy có d) Đánh giá thông thạo người làm việc kĩ thực hành an toàn cugnx sẵn có thiết bị an tồn phịng thí nghiệm vi sinh download by : skknchat@gmail.com e) Nhờ trợ giúp để xem xét lại việc đánh giá nguy từ chuyên gia an toàn sinh học download by : skknchat@gmail.com BÀI 2: NHUỘM BÀO TỬ I Chuẩn bị dụng cụ mẫu cần thực Dụng cụ: - Dung dịch Malachite green bảo hòa (khoảng 7.6%)  95% ethanol  Dung dịch safranin  Phiến kính hình chữ nhật, dầu soi kính  Que cấy vịng  Ngọn lửa đèn cồn Mẫu cần thực hiện: Thịt thúi II Mục đích Quan sát phát bào tử tế bào Phân biệt bào tử tế bào sinh dưỡng III Nguyên tắc cách tiến hành Nguyên tắc Tế bào phải xử lý nhiệt- acid để tế bào bào tử dễ bất màu Sau nhuộm tế bào chất bào tử tế bào thuốc nhuộm hoạt tính mạnh tẩy màu tế bào chất nhuộm với thuốc nhuộm phân biệt khác Khi đó, tế bào chất mang màu, bào tử mang màu khác Cách tiến hành - Làm vết bơi phiến kính - Nhỏ dung dịch A lên vết bôi, hơ nhẹ bên phiến kính để làm bay hơi, tránh để sôi Thêm thuốc nhuộm để không bị cô cạn, giữ phút Đợi nguội đổ thuốc nhuộm - Dùng dung dịch B rửa lại hết màu đỏ, rửa nước download by : skknchat@gmail.com Hình: Mơi trường thạch nghiêng nấm mốc Hình: Mơi trường thạch đứng nấm mốc IV Nhận xét giải thích Ưu điểm Phân lập giống vi sinh vật khiết bảo quản chúng thời gian dài Kỹ thuật bảo quản tốt giảm thiểu số lần phải cấy chuyền vi sinh vật Nhược điểm Thao tác cấy cần xác, nhanh, gọn, kéo dài thời gian cấy khả bị nhiễm vi sinh vật cao Đối với ống thạch đứng, que cấy vòng phải cấy đâm sâu vào 2/3 chiều sâu mơi trường Nhận xét giải thích kết Mọi thao tác nuôi cấy phải thực điều kiện vô trùng để tránh vi sinh vật tạp nhiễm khơng mong muốn từ mơi trường ngồi Môi trường dụng cụ nuôi cấy cần phải tiệt trùng triệt để Đối với môi trường đặc ống thạch đứng, vi khuẩn kị khí phát triển đáy cột môi trường 25 download by : skknchat@gmail.com Đối với môi trường đặc ống thạch nghiêng, vi sinh vật hiếu khí phát triển tạo nên vệt màu trắng đục mặt thạch 26 download by : skknchat@gmail.com BÀI NHUỘM ĐƠN TIÊU BẢN GIỌT ÉP I Chuẩn bị dụng cụ mẫu cần thực - Phiến kính hình vng, phiến kính hình chữ nhật - Que cấy vòng - Nấm men, nấm mốc - Kính hiển vi, dầu soi II Tiêu giọt ép a.Nguyên tắc -Vi khuẩn không di động (non-motile) môi trường lỏng chúng thường di chuyển hỗn loạn, gọi chuyển động Brown (Brownian movement) -Sự di chuyển thật (động lực tự thân, self-propulsion) thấy số vi khuẩn nhờ số chế khác -Các kiểu di động hay không di động quan sát tiêu giọt treo (hanging drop slide) Tiêu giọt treo dùng để quan sát hình dang vi khuẩn trang thái sống xếp tế bào vi khuẩn chúng kết hợp với b Cách tiến hành -Dùng que cấy vịng chuyển dung dịch mẫu vi khuẩn lên phiến kính hình chữ nhật - Dùng phiến kính hình vng nhẹ nhàng đặt đè lên giọt nước chứa vi khuẩn Tránh khơng để hình thành bọt khí -Đặt lên kính hiển vi để quan sát với vật kính dầu c Kết Tiêu giọt ép nhìn qua kính hiển vi quang học 27 download by : skknchat@gmail.com d Nhận Xét Nấm mốc có dạng hình que, hình cầu Có chuyển động Brown Chúng ta quan sát hình dạng, kích thước, xếp chuyển động vi khuẩn kính hiển vi sử dụng phương pháp làm tiêu giọt ép e Kết Luận -Có thể quan sát trạng thái sống tế bào vi khuẩn đặc biệt chuyển động chúng.Thao tác đơn giản, tiến hành nhanh - Nhưng,không thể xác định rõ xác hình thái vi khuẩn.Trong thao tác thực dễ hình thành bọt khí đặt hai phiến kính chồng lên nhau, gây khó khăn việc quan sát.Dễ bị nhầm lẫn chuyển động Brown chuyển động tự thân III Nhuộm đơn a.Nguyên tắc Kích thước vi khuẩn số lượng chất tế bào nhỏ bé chúng suốt phóng đại làm giảm độ chiếu sáng Do cần phải tìm cách để chúng khơng di động cố định lại để dễ quan sát Một cách đơn giản tạo vết bôi vi khuẩn lên phiến kính thủy tinh “cố định” chúng đó, sau nhuộm chúng phẩm nhuộm Phẩm nhuộm vi khuẩn tốt loại aniline (phẩm nhuộm hữu làm từ nhựa than đá) Khi sử dụng trực tiếp lên vết bôi vi khuẩn cố định, đường nét vi khuẩn lên rõ ràng Các phẩm nhuộm gồm dạng acid (acidic), kiểm (basic) hay trung tính (neutral) Phẩm nhuộm dang acid hay trung tính thường dùng nghiên cứu vi khuẩn Các ion tự phẩm nhuộm dang acid ion âm kết hợp với cation (thành phần tế bào) để tạo dạng muối Phẩm nhuộm dang có nhiều ion âm kết hợp với acid vật liệu nhuộm để tạo loại muối Tế bào vi khuẩn có nhiều ribonucleic acid phẩm nhuộm 28 download by : skknchat@gmail.com trung tính bắt màu tốt Phẩm nhuộm dạng trung tính thường kết hợp hai loại phẩm nhuộm Vì phẩm nhuộm dạng trung tính có tác dụng tốt nhuộm tế bào phức tạp chúng cho phép làm rõ cấu trúc bên vi khuẩn Các tế bào cấu trúc bị nhuộm màu phẩm nhuộm gọi basophilic, bị nhuộm màu với phẩm nhuộm acid gọi acidophilic b Cách tiến hành Tạo vết bôi -Lắc kỹ dung dịch vi khuẩn Với thao tác vơ trùng chuyển hai vịng cấy vi khuẩn vào phiến kính Trải diện tích khoảng ½ inch - Hơ phiến kính lửa để cố định giết chết vi khuẩn Nhuộm đơn -Nhuộm với phẩm nhuộm crystal violet 20 - 30 giây) -Rửa trôi thuốc nhuộm nước vài giây -Thấm khô giấy thấm Không xát lên vết - Quan sát kính hiển vi với vật kính dầu C Kết Nhuộm Gram với mẫu nấm men d Nhận Xét Vi khuẩn quan sát đa số hình que dạng chuỗi phần nhỏ hình que Kết thu kỹ thuật nhuộm đơn tạo tương phản vi khuẩn cảnh nên dễ dàng quan sát 29 download by : skknchat@gmail.com e Kết Luận -Có thể “cố định” vi khuẩn phiến kính thủy tinh Vi khuẩn bị gắn chặt vào phiến kính bị giết chết mà không bị biến dạng tế bào Kỹ thuật có sử dụng thuốc nhuộm crystal violet tạo tương phản vi khuẩn cảnh nền, giúp việc quan sát trở nên dễ dàng hơn.Thời gian tiến hành ngắn, nhanh chóng thu kết - Tuy nhiên, địi hỏi độ xác thời gian quy trình nhuộm đơn Chuẩn bị vết bơi phải cách, sử dụng lượng vi khuẩn vừa phải mật độ vi khuẩn nhiều tạo nên chồng chéo gây khó khăn việc quan sát 30 download by : skknchat@gmail.com BÀI KỸ THUẬT NHUỘM GRAM II Chuẩn bị dụng cụ mẫu cần thực Dụng cụ:  Dung dịch crytal violet  Dung dịch Gram’s oidine  95% ethanol  Dung dịch safranin  Phiến kính hình chữ nhật, dầu soi kính  Que cấy vịng  Ngọn lửa đèn cồn Mẫu cần thực hiện: Nước dưa cải chua III Mục đích Phân chia vi khuẩn thành hai nhóm khác nhau: vi khuẩn Gram dương (+) vi khuẩn Gram âm (-) IV Nguyên tắc cách tiến hành Nguyên tắc Đầu tiên, tiêu nhuộm với phẩm nhuộm crytal violet Sau đó, tiêu được xử lý với dung dịch odine, đóng vai trị chất cẩn màu Sau tiêu tẩy màu ethanol Cuối tiêu nhuộm bổ sung phẩm nhuộm có màu khác crytal violet safranin Kết vi khuẩn Gram dương bắt có màu tím cịn vi khuẩn Gram âm có màu hồng Cách tiến hành 1) Chuẩn bị vết bôi cố định vi sinh vật 2) Dùng dung dịch crytal violet phủ lên vết bôi Để yên phút 3) Để nghiêng phiến kính 45 độ, rửa vịi nước cho trơi hết phần thuốc nhuộm dư (giọt cuối chảy khỏi phiến kính khơng cịn màu) 4) Phủ lên vết bôi dung dịch iodine Để yên phút 5) Để nghiêng phiến kính 45 độ, tẩy màu dung dịch 95% ethenol giọt cuối chảy khỏi phiến kính khơng cịn màu (thơng thường khoảng 10-20 giây) Đây bước quan trọng 6) Ngay rửa phiến kính vịi nước 31 download by : skknchat@gmail.com 7) Phủ lên vết bôi dung dịch safranin O Để yên phút 8) Rửa vòi nước 9) Thấm nhẹ giấy thấm Hơ khơ phiến kính trước quan sát kính hiển vi 10) Sử dụng dầu soi kính vật kính dầu để quan sát Chụp ảnh tiêu (File video đính kèm: NHUỘM GRAM.) V Kết Hình: Kết thu nhuộm gram Hình: Kết thu nhuộm gram IV Nhận xét giải thích Ưu điểm kỹ thuật nhuộm Gram Cho kết nhanh phương pháp cấy Phân loại vi khuẩn Gram âm Gram dương Nhược điểm kỹ thuật nhuộm Gram 32 download by : skknchat@gmail.com Nhuộm đơn nhiều lần với nhiều loại thuốc nhuộm khác Địi hỏi độ xác thời gian nhuộm màu tẩy màu để không làm biến đổi vi khuẩn Gram dương thành vi khuẩn Gram âm Nhận xét giải thích kết Kết thu vi khuẩn Gram dương bắt màu tím vi khuẩn Gram âm bắt màu hồng Do lớp peptidoglycan vi khuẩn Gram âm mỏng vi khuẩn Gram dương Vách tế bào chứa hàm lượng lipid cao dễ bị hòa tan chất tẩy màu (alcohol, acetone hay hỗn hợp hai chất này) làm cho thuốc nhuộm ban đầu crystal violet dễ bị rửa trôi vi khuẩn Gram âm bắt màu hồng thuốc nhuộm bổ sung safranin (Sơn, 2018) Ở vi khuẩn Gram dương, cồn làm cho lỗ Peptidoglican co lại phức chất tím tinh thể - iốt bị giữ lại tế bào 33 download by : skknchat@gmail.com BÀI TIÊU BẢN PHÒNG ẨM I Chuẩn bị dụng cụ mẫu cần thực Dụng cụ a) Nước cất b) Đĩa petri c) 95% ethanol d) Đèn cồn e) Que cấy vòng f) Pipette loại g) Phiến kính hình chữ nhật, phiến kính hình vng h) dung dịch methylen blue Môi trường mẫu thưc hiện:  Môi trường M5 (Potato dextrose agar)  200g khoai tây xắt lát, không gọt vỏ  1000ml nước  20g agar  10g glucose  Rose bengal 0.025g  Chloramphenicol 0.05g  Mẫu thực hiện: nấm mốc II Mục đích Có thể quan sát cấu trúc đặc trưng hình thái mà khơng gây ảnh hưởng đến phát triển nấm mốc Phương pháp quan sát cách dễ dàng 34 download by : skknchat@gmail.com cấu trúc liên quan đến sinh sản Việc định danh nấm mốc thường dựa vào cấu trúc liên quan đến sinh sản, đặc tính hình thái học phát triển khuẩn lạc (Sơn, 2018) III Nguyên tắc cách tiến hành Nguyên tắc Nồng độ đường cao pH thấp (5.6) mơi trường khơng thích hợp cho phát triển hầu hết vi khuẩn, đảm bảo hạn chế tạp nhiễm Hầu hết nấm mốc phát triển tốt pH 5.6 Khuẩn lạc nấm mốc quan sát trực tiếp cách lấy sinh khối đặt phiến kính (slide) với giọt nước hay thuốc nhuộm (tiêu giọt ép) Có cách khác tiêu phịng ẩm (slide culture), tiêu có nhiều ưu điểm quan sát cấu trúc đặc trưng hình thái mà khơng gây ảnh hưởng đến phát triển nấm mốc Cách tiến hành - Chuẩn bị phiến kính hình chữ nhật (glass slide) phiến kính hình vng (coverslips) Ngâm phiến kính ethanol 80% tối thiểu 15 phút - Hơ bề mặt phiến kính lửa để vô trùng (dùng kẹp để cầm) - Đun chảy ống nghiệm chứa môi trường Sabouraund dextrose agar hay Potato dextrose agar, sau làm nguội đến 48 – 50oC Đổ môi trường vào đĩa petri - Để đĩa nguội sau dùng dao cắt vng khoảng kính hình vng - Cho miếng thạch cắt vào phiến kính hình chữ nhật đặt phiến kính hình vng lên 35 download by : skknchat@gmail.com - Cho giấy thấm nước (vơ trùng) vào đĩa petri Cho vài que tăm vào bên phần giấy thấm Đặt phiến kính vừa chuẩn bị phần trước lên que tăm Ủ nhiệt độ phòng từ – ngày - Quan sát kính hiển vi Có thể dùng dung dịch methylen blue (0.3% ethanol) để nhuộm màu giúp quan sát rõ cấu trúc nấm mốc (cồn giúp làm mềm vách tế bào nấm mốc giúp thuốc nhuộm dễ vào tế bào hơn) IV Kết Figure: Kết tiêu phịng ẩm IV Nhận xét giải thích Ưu điểm Việc sử dụng tiểu phòng ẩm giúp hạn chế thời gian thực mà cịn khơng gây ảnh hưởng đến phát triển nấm mốc Quan sát cách dể dàng cấu trúc liên quan nấm mốc vật kính khác Dựa vào cấu trúc liên quan đến sinh sản, đặc tính hình thái học phát triển khuẩn lạc mà định dang nấm mốc 36 download by : skknchat@gmail.com Nhược điểm Trong trình cấy mẫu, để lẫn vi sinh vật khác vào làm số mẫu nấm khó quan sát chí khơng nhìn thấy Thời gian phải phù hợp để dài không xem kết dẫn đến việc mọc nấm trở nên dày đặt khó quan sát Nhận xét giải thích Từ kết cho thấy, nấm quan sát có dạng sợi, theo tài liệu cho thấy hình dạng kết thu giống với Penicillium thuộc lớp nấm bất tồn Deuteromycetes, khơng có hình thức sinh sản hữu tính Hệ sợi có vách ngăn Bào tử vơ tính bào tử trần 37 download by : skknchat@gmail.com KẾT LUẬN Tóm lại, Thí nghiệm Vi sinh Thực Phẩm môn học thực hành vi sinh vật mà học kinh nghiệm quý báu qua học Cung cấp kiến thức sử dụng thiết bị phòng thí nghiệm, an tồn phịng thí nghiệm, cách quan sát vi khuẩn, ….Chắc chắn qua học sinh viên ngày tiến bộ, vững kiến thức, vững thao tác nhiều 38 download by : skknchat@gmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO - TS Trịnh Khánh Sơn, Giáo trình thực hành vi sinh vật học,01/2018 -TS Trịnh Khánh Sơn, Các kỹ thuật thực nghiệm vi sinh vật học, nhà xuất Đại Học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh,2018 39 download by : skknchat@gmail.com ... VI QUANG HỌC NỀN SÁNG AN TỒN PHỊNG THÍ NGHIỆM BÀI 2: NHUỘM BÀO TỬ VI KHUẨN BÀI 3: PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG GIÁ ĐẬU ĐƯỜNG KỸ THUẬT TUYỆT TRÙNG BẰNG AUTOCLAVE TỔNG VI SINH VẬT HIẾU KHÍ... thức sinh sản hữu tính Hệ sợi có vách ngăn Bào tử vơ tính bào tử trần 11 download by : skknchat@gmail.com BÀI PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG GIÁ ĐẬU ĐƯỜNG KỸ THUẬT TUYỆT TRÙNG BẰNG AUTOCLAVE TỔNG VI SINH VẬT... HIỂN VI QUANG HỌC NỀN SÁNG AN TỒN PHỊNG THÍ NGHIỆM I Giới thiệu mơn học - "Thí nghiệm vi sinh vật học thực phẩm" giới thiệu tới người học kiến thức: số kỹ thuật vi sinh vật học, số phương pháp