1. Ưu điểm của kỹ thuật nhuộm Gram
Cho kết quả nhanh hơn phương pháp cấy.
Phân loại được vi khuẩn Gram âm và Gram dương.
Nhuộm đơn nhiều lần với nhiều loại thuốc nhuộm khác nhau.
Đòi hỏi độ chính xác về thời gian khi nhuộm màu và tẩy màu để không làm biến đổi vi khuẩn Gram dương thành vi khuẩn Gram âm.
3. Nhận xét và giải thích kết quả
Kết quả thu được vi khuẩn Gram dương bắt màu tím và vi khuẩn Gram âm bắt màu hồng.
Do lớp peptidoglycan ở vi khuẩn Gram âm mỏng hơn vi khuẩn Gram dương. Vách tế bào chứa hàm lượng lipid cao và dễ bị hòa tan trong chất tẩy màu (alcohol, acetone hay hỗn hợp hai chất này) chính vì vậy làm cho thuốc nhuộm ban đầu là crystal violet dễ bị rửa trôi và vi khuẩn Gram âm có thể bắt màu hồng của thuốc nhuộm bổ sung là safranin (Sơn, 2018). Ở vi khuẩn Gram dương, cồn làm cho các lỗ trong Peptidoglican co lại do đó phức chất tím tinh thể - iốt bị giữ lại trong tế bào.
BÀI 9
TIÊU BẢN PHÒNG ẨM I. Chuẩn bị dụng cụ và mẫu cần thực hiện I. Chuẩn bị dụng cụ và mẫu cần thực hiện
1. Dụng cụ a) Nước cất a) Nước cất b) Đĩa petri c) 95% ethanol d) Đèn cồn e) Que cấy vòng f) Pipette các loại
g) Phiến kính hình chữ nhật, phiến kính hình vuông. h) dung dịch methylen blue
2. Môi trường và mẫu thưc hiện:
Môi trường M5 (Potato dextrose agar) 200g khoai tây xắt lát, không gọt vỏ 1000ml nước 20g agar 10g glucose Rose bengal 0.025g Chloramphenicol 0.05g Mẫu thực hiện: nấm mốc II. Mục đích
Có thể quan sát cấu trúc đặc trưng về hình thái mà không gây ảnh hưởng gì đến sự phát triển của nấm mốc. Phương pháp này có thể quan sát một cách dễ dàng các
cấu trúc liên quan đến sự sinh sản. Việc định danh nấm mốc thường dựa vào các cấu trúc liên quan đến sự sinh sản, các đặc tính về hình thái học và sự phát triển của khuẩn lạc. (Sơn, 2018)
III. Nguyên tắc và cách tiến hành 1. Nguyên tắc 1. Nguyên tắc
Nồng độ đường cao và pH thấp (5.6) của môi trường này không thích hợp cho sự phát triển của hầu hết vi khuẩn, do đó đảm bảo hạn chế sự tạp nhiễm. Hầu hết nấm mốc phát triển tốt ở pH 5.6. Khuẩn lạc nấm mốc có thể được quan sát trực tiếp bằng cách lấy một ít sinh khối và đặt trên phiến kính (slide) với một giọt nước hay thuốc nhuộm (tiêu bản giọt ép). Có một cách khác là tiêu bản phòng ẩm (slide culture), đây là tiêu bản có nhiều ưu điểm vì có thể quan sát cấu trúc đặc trưng về hình thái mà không gây ảnh hưởng gì đến sự phát triển của nấm mốc.
2. Cách tiến hành
- Chuẩn bị các phiến kính hình chữ nhật (glass slide) và phiến kính hình vuông (coverslips). Ngâm phiến kính trong ethanol 80% trong tối thiểu 15 phút.
- Hơ bề mặt của các phiến kính này trên ngọn lửa để vô trùng (dùng kẹp để cầm).
- Đun chảy ống nghiệm chứa môi trường Sabouraund dextrose agar hay Potato dextrose agar, sau đó làm nguội đến 48 – 50oC. Đổ môi trường vào trong đĩa petri.
- Để đĩa nguội sau đó dùng dao cắt một ô vuông khoảng ô kính hình vuông - Cho miếng thạch đã cắt vào giữa phiến kính hình chữ nhật và đặt phiến kính hình vuông lên.
- Cho một ít giấy thấm nước (vô trùng) vào đĩa petri. Cho một vài que tăm vào bên trên phần giấy thấm. Đặt các phiến kính vừa chuẩn bị ở phần trước lên trên các que tăm. Ủ ở nhiệt độ phòng từ 2 – 4 ngày.
- Quan sát dưới kính hiển vi. Có thể dùng dung dịch methylen blue (0.3% trong ethanol) để nhuộm màu giúp quan sát rõ hơn cấu trúc của nấm mốc (cồn giúp làm mềm vách tế bào nấm mốc giúp thuốc nhuộm dễ đi vào tế bào hơn)
IV. Kết quả
Figure: Kết quả tiêu bản phòng ẩm