Tìm kiếm enzyme cellulase bền nhiệt, hoạt động ở ph thấp nhằm ứng dụng trong chăn nuôi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - ĐẶNG THÙY DƢƠNG TÌM KIẾM ENZYME CELLULASE BỀN NHIỆT, HOẠT ĐỘNG Ở pH THẤP NHẰM ỨNG DỤNG TRONG CHĂN NUÔI CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : TS Nguyễn Liêu Ba PGS.TS Vũ Nguyên Thành Hà Nội – Năm 2014 i MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN v LỜI CẢM ƠN vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH ẢNH ix MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu enzyme bổ sung vào thức ăn chăn nuôi giới Việt Nam……………………………………………………………………………………………… 1.1.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.1.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 1.2 Cấu trúc cellulose 1.3 Cellulase hoạt động thủy phân cellulose 10 1.3.1 Vi sinh vật phân hủy cellulose 10 1.3.2 Phân loại cellulase 12 1.3.3 Cấu trúc cellulosome 14 1.3.4 Cơ chế xúc tác hóa học cellulase 17 1.3.5 Các yếu tố điều hòa hoạt động cellulase 19 1.3.6 Ứng dụng cellulase 21 1.4 Những nghiên cứu cellulase bền nhiệt, hoạt động pH thấp 24 1.5 Các phƣơng pháp tinh enzyme 27 CHƢƠNG II ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Đối tƣợng 30 2.2 Hóa chất, trang thiết bị máy móc 30 2.2.1 Hóa chất 30 2.2.2 Dụng cụ, trang thiết bị máy móc 31 2.3 Thành phần môi trƣờng dùng nghiên cứu 32 ii 2.3.1 Môi trường phân lập 32 2.3.2 Môi trường làm giống 32 2.2.3 Môi trường nuôi chiết enzyme 32 2.2.4 Mơi trường thử hoạt tính enzyme 33 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 33 2.4.1 Phương pháp phân lập 33 2.4.2 Làm giống 33 2.4.3 Quan sát hình thái khuẩn lạc, tế bào 34 2.4.4 Nuôi chiết enzyme 34 2.4.5 Thử hoạt tính enzyme cellulase phương pháp đục lỗ thạch 34 2.4.6 Xác định hoạt tính cellulase (FPU) DNS pH3 pH5 34 2.4.7 Xác định hoạt tính CMCase pH3 pH5 37 2.4.8 Xác định khả bền nhiệt enzyme chất CMC 37 2.4.9 Xác định hàm lượng protein phương pháp Lowry 38 2.4.10 Điện di protein 39 2.4.11 Tách chiết DNA tổng số 41 2.4.12 PCR finger printing 41 2.4.13 PCR sequencing 42 2.4.14 Điện di kiểm tra sản phẩm 42 2.4.15 Nuôi chiết enzyme quy mô lớn để nghiên cứu tinh chế 43 2.4.16 Cô đặc dịch chiết enzyme hệ thống lọc crossflow màng 10 kDA 43 2.4.17 Kết tủa enzyme muối ammonium sulfate 44 2.4.18 Tinh chế enzyme phương pháp sắc ký 45 CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 46 3.1 Kết phân lập 46 3.2 Phân nhóm kĩ thuật fingerprinting 50 3.3 Định tên chủng nấm mốc dựa vào phƣơng pháp đọc trình tự rDNA iii 51 3.4.Xác định nồng độ protein, đƣờng kính vịng thủy phân, hoạt tính cellulase, hoạt tính CMCase chủng phân lập đƣợc 53 3.5 Khả bền nhiệt enzyme từ chủng phân lập 60 3.6 Bƣớc đầu tinh chế enzyme cellulase từ Pennicillium verruculosum 63 3.6.1 Cô đặc enzyme 63 3.6.2 Kết tủa enzyme muối ammonium sulfate 64 3.6.3 Sắc ký trao đổi ion cột SP Sepharose FF, thể tích cột 6ml 67 3.6.4 Sắc ký trao đổi ion cột DEAE Sepharose FF, thể tích cột 7ml 69 3.6.5 Sắc ký tương tác kỵ nước cột Butyl Sepharose High Performance 73 3.7 Xác định nhiệt độ tối ƣu độ bền nhiệt enzyme tinh đƣợc 79 3.8 Xác định pH tối ƣu độ bền pH enzyme tinh đƣợc 81 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 82 KẾT LUẬN 82 KIẾN NGHỊ 83 TÀI LIỆU THAM KHẢO 84 PHỤ LỤC………………………………………………………………………………………….92 iv LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đề tài: “ Tìm kiếm enzyme cellulase bền nhiệt, hoạt động pH thấp nhằm ứng dụng chăn nuôi” TS Nguyễn Liêu Ba PGS TS Vũ Nguyên Thành hướng dẫn thực số kết cộng tác với học viên khác, chép tác giả hay tổ chức ngồi nước Tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm nội dung trình bày luận văn Hà Nội, ngày 23 tháng năm 2014 Học viên Đặng Thùy Dương v LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng cảm ơn TS Nguyễn Liêu Ba - Giảng viên trường Đại học Bách Khoa Hà Nội PGS.TS Vũ Nguyên Thành - Giám đốc Trung tâm Vi sinh vật công nghiệp - Viện công nghiệp thực phẩm dành thời gian cơng sức tận tình hướng dẫn định hướng cho tơi suốt q trình nghiên cứu giúp tơi hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn anh, chị bạn Trung tâm Vi sinh vật công nghiệp - Viện công nghiệp thực phẩm tạo điều kiện, giúp đỡ bảo tơi suốt thời gian làm thí nghiệm trung tâm Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy, cô Viện Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm - Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội dạy dỗ tôi, cho kiến thức kinh nghiệm bổ ích suốt q trình học tập Cuối cùng, tơi dành lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình thân yêu, người thân, bạn bè bên tôi, cho tơi nguồn động lực, chia sẻ giúp tơi hồn thành tốt trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 23 tháng năm 2014 Học viên Đặng Thùy Dương vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN APS Ammonium persulfate BSA Brovine Serum Albumin CBD Cellulose binding domain CBM Cellulose binding module CMC Carboxylmethyl cellulose DNA Deoxyribonucleic Acid DNS 3,5 Dinitrosalicylic acid dNTPs Deoxyribonucleotide triphosphates EDTA Ethylene Diamine Tetra Acetic acid et Cộng FPU Fiter Paper Unit GH Glycoside hydrolase ITS Internal transcribed spacer IU International unit kDa KiloDalton OD Opical Desity PCR Polymerase Chain Reaction PDA Potato dextrose agar rDNA Ribosomal Deoxyribonucleic Acid RNA Ribonucleic Acid SDS-PAGE Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophorosis N,N,N’,N’-tetramethyleneethylenediamine TEMED vii DANH MỤC BẢNG STT Bảng Bảng 1.1 Một số chất điều hòa hoạt động cellulase Trang 20 Bảng 2.1 Thành phần gel chạy điện di protein 39 Bảng 3.1 Danh sách chủng nấm mốc chịu pH phân lập 47 Bảng 3.2 Kết phân nhóm tên lồi 35 chủng nấm mốc sinh enzyme thủy phân lignocelluloses PCR fingerprinting phương pháp đọc trình tự rDNA Bảng 3.3 Bảng tổng hợp nồng độ protein, đường kính vịng thủy phân hoạt tính enzyme pH pH 62 chủng 51 Bảng 3.4 Khả bền nhiệt enzyme từ chủng phân lập 61 Bảng 3.5 Hoạt tính enzyme trước sau cô đặc 64 Bảng 3.6 Khối lượng (NH4)2SO4 cần bổ sung phân đoạn 65 Bảng 3.7 Hoạt tính CMCase pH phân đoạn tủa muối 66 10 Bảng 3.8 Hoạt tính CMCase phân đoạn thu từ cột SP sepharose FF Bảng 3.9 Hoạt tính CMCase phân đoạn thu từ cột DEAE Sepharose FF 68 Bảng 3.10 Hoạt tính CMCase phân đoạn thu từ cột Butyl Sepharose High Performance 74 11 12 viii 54 70 DANH MỤC HÌNH ẢNH STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Hình Trang Hình 1.1 Cấu trúc cellulose Hình 1.2 Hoạt động xúc tác cellulase chất cellulose 13 Hình 1.3 Mơ hình chế chuyển vị nhóm OH (inverting 18 mechaism) Hình 1.4 Mơ hình chế trì nhóm OH (retaining mechaism) 19 Hình 2.1 Đường chuẩn glucose pH pH 35 Hình 2.2 Đường chuẩn protein 38 Hình 3.1 Hình thái khuẩn lạc môi trường Czapek pH 46 (trái) pH (phải) Hình 3.2 Hình ảnh khuẩn lạc, hình thái tế bào số chủng 49 nấm mốc phân lập Hình 3.3 Phổ fingerprinting 35 chủng nấm mốc chịu pH thấp 50 Hình 3.4 Đồ thị hoạt tính cellulase pH pH số 57 chủng phân lập Hình 3.5 Đường kính vịng thủy phân chủng nấm mốc 58 62 chủng nấm mốc Hình 3.6 Đồ thị hoạt tính CMCase pH pH số 59 chủng phân lập Hình 3.7 Hình ảnh điện di SDS-PAGE Zymogram phân 66 đoạn tủa muối Hình 3.8 Tinh chế enzyme cellulase qua cột SP Sepharose FF 69 Hình 3.9 Tinh chế cellulase cột DEAE Sepharose FF 72 Hình 3.10 Điện di SDS-PAGE số phân đoạn tinh chế từ cột 73 DEAE Sepharose Hình 3.11 Tinh chế cellulase từ cột Butyl Sepharose High 77 Performance Hình 3.12 Điện di SDS-PAGE số phân đoạn tinh chế từ cột 77 Butyl Sepharose Hình 3.13 Kết bước trình tinh chế 78 Hình 3.14 Ảnh hưởng nhiệt độ lên phản ứng enzyme-cơ chất 79 pH Hình 3.15 Độ bền nhiệt enzyme pH 80 Hình 3.16 Độ bền nhiệt enzyme 60°C, pH theo thời gian 80 Hình 3.17 Ảnh hưởng pH lên phản ứng enzyme chất 81 50°C ix Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm MỞ ĐẦU Để phát triển ngành chăn ni vấn đề giảm giá thành sản xuất, giải hiệu nguồn nguyên liệu thức ăn có lợi nước nhằm đảm bảo chăn nuôi ổn định vấn đề cần thiết Việt Nam nước nông nghiệp nên nguồn nguyên liệu từ phụ phế liệu ngành chế biến nông sản lớn, sử dụng nguồn nguyên liệu để sản xuất thức ăn chăn nuôi đem lại hiệu kinh tế lợi nhiều so với nguyên liệu khác Một hạn chế lớn sử dụng nguyên liệu từ phụ phế liệu nông nghiệp để sản xuất thức ăn chăn nuôi ngun liệu có hàm lượng cellulose cao, nhiều cellulose nên chúng có tỷ lệ tiêu hóa giá trị lượng thấp Chính lý việc nghiên cứu loại enzyme bổ sung vào thức ăn giúp vật ni tiêu hóa dễ dàng ngun liệu có chứa nhiều cellulose yêu cầu cần thiết Nghiên cứu giới enzyme sử dụng bổ sung thức ăn chăn nuôi tiến bước dài Những enzyme sử dụng bổ sung thức ăn chăn nuôi nhiều công ty hàng đầu giới sản xuất từ hai chục năm nay, ứng dụng quy mô công nghiệp nước phát triển Mỹ, Châu Âu, Nhật Bản Trung Quốc Theo Marquardt (Dept of Animal Science, University of Manitoba, Canada) Brufau (IRTA, Dept of Animal Nutrition, Spain), số lĩnh vực tương lai cần tiếp tục nghiên cứu là: cải thiện chất lượng hiệu enzyme theo hướng quan tâm đến giá thành, độ bền nhiệt, chống chịu pH thấp, chống chịu thủy phân nâng cao hoạt tính phận đích máy tiêu hóa ruột-dạ dày Ở Việt Nam nhiều tác giả nghiên cứu enyme bổ sung thức ăn gia súc, đặc biệt enzyme từ chủng vi sinh vật kết nhiều hạn chế, việc áp dụng sản phẩm enzyme nước ngành sản xuất thức ăn chăn ni cịn nhiều chưa sở sản xuất thức ăn quan tâm Nguyên nhân chủ yếu lực sinh tổng hợp enzyme tự nhiên Đặng Thùy Dương Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội 48 Viện CN Sinh học CN Thực phẩm Pazarlioglu N K., Sariisik M., and Telefoncu A (2005), “ Treating denim fabrics with immobilized commercial cellulases”, Process Biochemistry, vol 40, no 2, pp 767-771 49 Pilz I., Schwarz E., Kilburn D G., Miller R C., Warren R A J., Gilkes N R (1990), Biochemical Journal, 271, pp 277 50 Sakon J., Irwin D., Wilson D B., Karplus P A (1997), Nature Structural & Molecular Biology, 4, pp 810 51 Schimz K L., Broll B., John B (1983), “Cellobiose phosphorylase (EC2.4.1.20) of Cellulomonas: occurrence Induction And its role in cellobiose metabolism”, Archives of Microbiology, 135, pp 241-249 52 Schloesser A., Alderkamp T., Schrempf H (2000), “ Binding characteristics of CebR The regulator of the ceb operon required for cellobiose/cellotriose uptake in Streptomyces reticuli”, FFMS Microbiology Letters, 190, pp 127132 53 Schwarz W H (2001), “ The cellulosome and cellulose degradation by anaerobic bacteria”, Applied Microbiology and Biotechnology, 56, pp 634649 54 Schwarz W H., GraăbnitzF, Staudenbauer W L (1986), Properties of Clostridium thermocellum endoglucanase produced in Escherichia coli”, Applied and Environmental Microbiology, 51, pp 1293-1299 55 Seiboth B., Hakola S., March R L., Suomien P., Kubicek C P (1997), “Role of four major cellulases in triggering cellulase gene expression in Trichoderma reesei”, Journal of Bacteriology, 179, pp 285-289 56 Shrivastava B., Thakur S., Khasa Y P., Gupte A., Puniya A K., and Kuhad R C (2011), “White-rot fungal conversion of wheat straw to energy rich cattle feed,” Biodegradation , vol 22, no.4, pp 823–831 Đặng Thùy Dương 89 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội 57 Viện CN Sinh học CN Thực phẩm Sieo C.C., Abdullah N., Tan W.S., Ho Y.W (2005), “ Influence of βglucanase-producing Lactobacillus strains on intestinal characteristics and feed passage rate of broiler chickens”, Poutry Science, 84, pp 734-741 58 Singh A., Kuhad R C., and Ward O P (2007), “Industrial application of microbial cellulases,” in Lignocellulose Biotechnology: Future Prospects, Kuhad R C and Singh A., Eds., pp 345–358, I K International Publishing House, New Delhi, India 59 Slominski B A., Meng X ,Campbell L D., Guenter W., Jones O (2006), “The use of enzyme technology for improved energy utilization from full-fat oilseeds”, Poultry Science, 85 (6), pp 1031-1037 60 Teng D., Fan Y., Tian ZG., Luo J., Wang J.H (2007), “Codon optimization of Bacillus licheniformis beta-1,3-1,4-glucanase gene and its expression in Pichia pastoris”, Applied Microbiology and Biotechnology, 74(5), pp 10741083 61 Tomme P., Warren R A J., Gilkes N R (1995), “Cellulose hydrolysis by bacteria and fungi In: Poole RK (ed) Advances in microbial physiology”, Academic Press, London , Tomme P., Warren A J., Miller R C., Kilburn D G., Gilkes N R (1995), “Cellulose-binding domains: classification and properties”, In: Saddler J N., Penner M H (eds) “Enzymatic degradation of insoluble carbohydrates”, American Chemical Society, Washington, DC, 142 62 Valeria V M., Alexander V G., Ruslan M A., Artyom G P., Dmitry O O and Arkady P S (2010), “Cellulases of Penicillium verruculosum”, Biotechnology Journal, 5, pp 871–880 63 Warren R A J (1997), “ Structure and function in β-1,4- glycanase”, In: Claeyssens M., Nerinckx W., (eds), “ Carbohydrases from Trichoderma reesei and other microorganisms”, Structures, biochemistry, genetics and applications, Ghent Belgium Royal Society of Chemistry, Cambridge, UK, 115 Đặng Thùy Dương 90 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội 64 Viện CN Sinh học CN Thực phẩm Xu G.Y., Ong E., Gilkes N R., Kilburn D G., Muhandriam D R., HarrisBrandts M., Carver J P., Kay L E., Harvey T S (1995), Biochemistry, 34, pp 6993 65 Yi W H., Gerhard K., Sylvain C., Hugues D and Georg L (2005), “A highly acid-stable and thermostable endo-β -glucanase from the thermoacidophilic archaeon Sulfolobus solfataricus”, Biochemistry Journal, 385, pp 581–588 Tài liệu từ website 66 http://afmb.cnrs-mrs.fr/CAZY/CBM.html 67 CAZy for carbohydrate-active enzyme database; http://www.cazy.org 68 http://www.encorbio.com/protocols/AM-SO4.htm 69 http://www.nal.usda.gov/fnic/DRI//DRI_Energy/339-421.pdf Đặng Thùy Dương 91 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm PHỤ LỤC Độ dài trình tự độ tƣơng đồng với chủng ngân hàng liệu >LPH002 L002 ITS1 A12 AACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCC CGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTTACAG CTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGG CATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGA ATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCC GAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCC TCACACGGGTGCCGGCCCCTAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCA GTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAAC TTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAA T Trichoderma asperellum Sequence ID: gb|KF737410.1| Identities 523/523(100%) >LPH 005 L5 ITS1 1505RAA000_A2 TCCGTGTCTATTGTACCCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGCTTGTCGGCCGCCGGGGGG GCGCCTCTGCCCCCCGGGCCCGTGCCCGCCGGAGACCCCAACACGAACACTGTCTGAA AGCGTGCAGTCTGAGTTGATTGAATGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTT GGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAA TTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCA TGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGGTCGCCGTCC CCCTCTCCGGGGGGACGGGCCCGAGAGGCAGCCGCGGCACCGCGTCCGATCC Aspergillus niger Sequence ID: gb|GQ259131.1| Identities 400/402(99.5%) > LPH 006 L6 ITS1 1505RAA000_A3 TGTGAACGTTACCAATCTGTTGCCTCGGCGGGATTCTCTTGCCCCGGGCGCGTCGCAGC CCCGGATCCCATGGCGCCCGCCGGAGGACCAACTCCAAACTCTTTTTTTCTCTCCGTCG CGGCTCCCGTCGCGGCTCTGTTTTATTTTTGCTCTGAGCCTTTCTCGGCGACCCTAGCG GGCGTCTCGAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGAT GAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCG AATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGT CATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGA Trichoderma longibrachiatum Đặng Thùy Dương 92 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm Sequence ID: gb|KC914097.1| Identities : 392/392(100%) >LPH007 L007 ITS1 B1 GTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGGGGGCTCT CAGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAGTGAAGTC TGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCA TCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATC ATCGAGTCTTTGAACGCACATTG Aspergillus flavus Sequence ID: gb|KF562204.1| Identities 257/257(100%) > LPH 010 L10 ITS4 1505RAA000_A5 GCCCCATACGCTCGAGGATCGGACGCGGTGCCGCCGCTGCCTTTCGGGCCCGTCCCCC CGGAGAGGGGGACGGCGACCCAACACACAAGCCGGGCTTGAGGGCAGCAATGACGCT CGGACAGGCATGCCCCCCGGAATACCAGGGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGACTCGAT GATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTAGTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGAT GCCGGAACCAAGAGATCCATTGTTGAAAGTTTTAACTGATTGCATTCAATCAACTCAG ACTGCACGCTTTCAGACAGTGTTCGTGTTGGGGTCTCCGGCGGGCACGGGCCCGGGGG G Aspergillus tubingensis Sequence ID: gb|KF747363.1| Identities 348/348(100%) >LPH013 L13 ITS1 B2 ACCCGTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGGGGG CTCTCAGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAGTGA AGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCC GGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGT GAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTG TCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCTCTC CGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATG GGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCTTGCCGAACGCAAATCAATCTT TTCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCAT Aspergillus flavus Sequence ID: gb|KF562204.1| Đặng Thùy Dương 93 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Identities 514/514(100%) >LPH014 L14 ITS1 Viện CN Sinh học CN Thực phẩm B3 TCCGTGTCTATTGTACCCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGCTTGTCGGCCGCCGGGGGG GCGCCTCTGCCCCCCGGGCCCGTGCCCGCCGGAGACCCCAACACGAACACTGTCTGAA AGCGTGCAGTCTGAGTTGATTGAATGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTT GGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAA TTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCA TGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGTC Aspergillus niger Sequence ID: gb| JF450750.1 | Identities 342/342 (100%) >LPH 015 L15 ITS1 1505RAA000_A6 ACCCGTGACTACCTAACACTGTTGCTTCGGCGGGGAGCCCCCCAGGGGCGAGCCGCCG GGGACCACTGAACTTCATGCCTGAGAGTGATGCAGTCTGAGCCTGAATACAAATCAGT CAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAACTG CGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTG CGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCC GGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGC ACCGTGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCGATTAGGGCCGGCCG GGCGCCAGCCGGCGTCTCCAACCTTATTTTTCTCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGG ATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATA Aspergillus nidulans strain ATCC 38163 Sequence ID: gb|HQ026740.1| Identities 492/492(100%) >LPH018 L18 ITS1 B4 ATCCGTGTCTATTATACCCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGCTTGTCGGCCGCCGGGGG GGCGCCTTTGCCCCCCGGGCCCGTGCCCGCCGGAGACCCCAACACGAACACTGTCTGA AAGCGTGCAGTCTGAGTTGATTGAATGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTC TTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGA ATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGC ATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGTCGCCGTCC CCCTCTCCGGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAG CGTATGGGGCTTTGTCACATGCTCTGTAGGATTGGCCGGCGCCTGCCGACGTTTTCCAA CCATTTTTTCCAG Aspergillus niger Đặng Thùy Dương 94 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm Sequence ID: gb| JF450750.1 | Identities 479/479 (100%) > LPH 019 L19 ITS1 1505RAA000_A7 ATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGATCTCTGCCCCGGGTGCGTCGCAGC CCCGGACCAAGGCGCCCGCCGGAGGACCAACCAAAACTCTTTTTGTATACCCCCTCGC GGGTTTTTTATAATCTGAGCCTTCTCGGCGCCTCTCGTAGGCGTTTCGAAAATGAATCA AAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCG ATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCG CCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCGTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTC CGGGGG Hypocrea lixii Sequence ID: gb|JQ639058.1| Identities 355/356 (99.7%) > LPH 021 L21 ITS1 1505RAA000_A8 ATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGATCTCTGCCCCGGGTGCGTCGCAGC CCCGGACCAAGGCGCCCGCCGGAGGACCAACCAAAACCCTTATTGTATACCCCCTCGC GGGTTTGTTTATAATCTGAGCCATCTCGGCGCCCCTCGTGGGCGTTTCGAAAATGAATC AAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGC GATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGC GCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCT CCGGGGGGTCGG Trichoderma pleuroticola Sequence ID: gb|HM534653.1| Identities 359/362(99%) > LPH 022 L22 ITS1 1505RAA000_A9 (short) CGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAAC CAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTATT TCTTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCT TGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCG Trichoderma asperellum Sequence ID: gb|JN618346.1| Identities 203/203(100%) > LPH 025 L25 ITS1 1505RAA000_A11 Đặng Thùy Dương 95 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm TCTTGTTCTGATCCTGTGCACCTTATGTAGTCCCAAAGCCTTCACGGGCGGCGGTTGAC TACGTCTACCTCACACCTTAAAGTATGTTAACGAATGTAATCATGGTCTTGACAGACCC TAAAAAGTTAATACAACTTTCGACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAAC GCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTG AACGCACCTTGCGCCCTTTGGTATTCCGAGGGGCATGCCTGTTTGAGTGTCATTAAATA CCATCAACCCTCTTTTGACTTCGGTCTCGAGAGTGGCTTGGAAGTGGAGGTCTGCTGG AGCCTAACGGAGCCAGCTCCTCTTAAATGTATTAGCGGATTTCCCTTGCGGGATCGCG TCTCCGATGTGATAATTTCTACGTCGTTGACCATCTCGGGGCTGACCTAGTCAGTTTCA ATAGGAGTCTGCTT Schizophyllum commune Sequence ID: gb|KF679517.1| Identities 482/482(100%) > LPH 026 L26 ITS1 1505RAA000_A12 CTCCCACCCGTGTTTATTGTACCTTGTTGCTTCGGCAGGCCCGCCTCACGGCCGCCGGG GGGCTTCTGCCCCCGGGCCCGCGCCTGCCGGAGACAATCTTGAACGCTGTCTGAAGAA TGCAGTCTGAGCGATTAAGCAAAATTAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTT CCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAATTAATGTGAATTGCAGAATTCA GTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGAC TGTCC Penicillium sclerotiorum Sequence ID: gb|JN626130.1| Identities 294/295(99.7%) > LPH 028 L28 ITS1 1505RAA000_B1 GAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGG AACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGT ATTTCTTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATC TCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCA GAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGG GCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGG GATCGGGACCCCTCACACGGGTGCCGGCCCCTAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGC CTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGT AAAACACCCAACTTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACT TAAGCATATCAATAA Trichoderma asperellum Sequence ID: gb|JQ040323.1| Đặng Thùy Dương 96 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Identities > LPH 031 Viện CN Sinh học CN Thực phẩm 537/537(100%) L31 ITS1 1505RAA000_B2 (not good) AGGCCCACCTCCCATCCGTGTTGTTAAACACCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGTGGTT CACGCCGTGGCCGCCGGGGGGCATCTCGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACCCCT CGAACGCTGCCTTGAAGGTTGCCGTCTGAGTATGAAATTCAATCGTTAAAACTTTCAA CAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATG TGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCA TTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTAACCCTCCAGCCCGGCTGGTGTGTT GGTGAATTTCATACCCCAGACGGCAACCTTCAAGGCAGCGTTCGAGGGGTCTTCGGCG GGCGCGGGCCCGGGGGCGAGATGCCCCCCGGCGGCCACGGCGTGAACCACGGCGGGC CCGCCGAAGCAACAGGTGTTTAACAACACGGATGGGAGGTTGGGCCTCGAGGGACCC TCACTCGGTAATGATCCTTCC Paecilomyces formosus Sequence ID: gb|FJ389929.1| Identities352/353(99.7%) > LPH 032 L32 ITS1 1505RAA000_B3 TCCGTGTTGAACTACACCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGTGGTTCACGCCCGGCCGCC GGGGGGCCTTGTGCTCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACCCCTCGAACGCTGCCCTGA AGGTTGCCGTCTGAGTATAAAATCAATCATTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTT CCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCC GTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCC TGTCCGAGCGTCATTGCTAACCCTCCAGCCCGGCTGGTGTGTTGGGTCGACGTCCCCCC CGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCGCCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGG GCTTTGTCACGCGCTCTGGTAGGGTCGGCCGGCTGGCCAGCCAGCGACCTCACGGTCA CCTATTTTTTCTCTTAGG Paecilomyces formosus Sequence ID: gb|KC157764.1| Identities 483/483(100%) > LPH 033 L33 ITS1 1505RAA000_B4 TCCGTGTCTATTGTACCCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGCTTGTCGGCCGCCGGGGGG GCGCCTCTGCCCCCCGGGCCCGTGCCCGCCGGAGACCCCAACACGAACACTGTCTGAA AGCGTGCAGTCTGAGTTGATTGAATGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTT GGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAA TTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCA TGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGTCGCCG Đặng Thùy Dương 97 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm Aspergillus niger Sequence ID: gb|KF723009.1| Identities 346/346(100%) >LPH034 L34 ITS1 B6 CTCCCACCCGTGTTTATTCTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCTCACGGCCGCCGGG GGGCACTCGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACACCAATGAACTCTGTCTGAAGAT TGCAGTCTGAGCAGATTAGCTAAATCAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTT CCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCA GTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCC TGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGCTTCGCCCCCCGGC TCCCGGGGGGCGGGCCC Penicillium simplicissimum Sequence ID: gb|GU981587.1| Identities 366/366(100%) > LPH 035 L35 ITS1 1505RAA000_B6 CCGTGTTTATCGTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCTCACGGCCGCCGGGGGGCATC CGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACACACAAACGAACTCTTGTCTGAAGATTGCA GTCTGAGTACTTGACTAAATCAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCA TCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAAT CATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCG AGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGCTCTCGCCCCCCGCTTCCGG GGGGCGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCT TCGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCCCGCCGGCGAA Penicillium oxalicum Sequence ID: gb|KF358372.1| Identities 449/449(100%) >LPH 040 L40 ITS1 1505RAA000_B7 CCCGTGAATACCTAACACTGTTGCTTCGGCGGGGAACCCCCTCGGGGGCGAGCCGCCG GGGACTACTGAACTTCATGCCTGAGAGTGATGCAGTCTGAGTCTGAATATAAAATCAG TCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAACT GCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATT GCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGC CCGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCCCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGC GGCACCGTGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCGACTAGGGCCGG Đặng Thùy Dương 98 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm CCGGGCGCCAGCCGACGTCTCCAACCATTTTTCTTCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAG GGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGGCGG Aspergillus sydowii Sequence ID: gb|JN851041.1| Identities 499/500 (99.8% >LPH043 L43 ITS1 B7 CTCTATACACCCGTTGCTTTGGCGGGCCCACCGGGGCGACCTGGTCGCCGGGGGACGT CCGTCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGCGCTCTGTGAACCCTGATGAAGATGGGCTGT CTGAGTACTATGAAAATTGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCG ATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCAT CGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGC GTCATTTCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTGCGGTCCCCCCGGGGACCTGCC CGAAAGGCAGCGGCGACGTCCGTCTGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTCTGTCACTCGCT CGGGAAGGACCTGCGGGGGTTGGTCACCACCATATTTTACCACGGTTGACCTCGGATC AGGTAGGAGTTACCCGCTGAACTTAAGCATA Penicillium verruculosum Sequence ID: gb|HM469420.1| Identities 494/495(99%) > LPH 044 L44 ITS1 1505RAA000_B9 TCCGTGTTGAATACACCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGTGGTTCACGCCCGGCCGCC GGGGGGCCTTGTGCTCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACCCCTCGAACGCTGCCCTGA AGGTTGCCGTCTGAGTATAAAATCAATCATTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTT CCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCC GTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCC TGTCCGAGCGTCATTGCTAACCCTCCAGCCCGGCTGGTGTGTTGGGTCGACGTCCCCCC CCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCGCCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATG GGGCTTTGTCACGCGCTCTGGTAGGGTCGGCCGGCTGGCCAGCCAGCGACCTCACGGT CACCTATTTTTTCTCTTAGGTTGACCTCCGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAGCTTAAG CATATCGATAAGCGAAAGG Paecilomyces sinensis Sequence ID: emb|AJ243771.1| Identities 534/538 (99.3%) >LPH 045 L45 Đặng Thùy Dương ITS1 1505RAA000_B10 99 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm GTCTATCGTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGTTTCGACGGCCGCCGGGGAGGCC TTGCGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACCCCAACATGAACGCTGTTCTGAAAGTA TGCAGTCTGAGTTGATTATCGTAATCAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTC CGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAG TGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGGTATTCCGGGGGGG Aspergillus fumigatus Sequence ID: gb|KF638652.1| Identities 283/284 (99.7%) >LPH 047 L47 ITS1 1505RAA000_B11 CATACCAATTGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCTCCCGGTAAAACGGGACGGCCCGCC AGAGGACCCCTAAACTCTGTTTCTATATGTAACTTCTGAGTAAAACCATAAATAAATC AAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGC GATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGC GCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCCC GGGTTTGGTGTTGGGGAT Fusarium proliferatum Sequence ID: gb|KF541096.1| Identities 309/309(100%) >LPH049 L49 ITS1 B8 CTATTGTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCAGCGTTGCTGGCCGCCGGGGGGCGAC TCGCCCCCGGGCCCGTGCCCGCCGGAGACCCCAACATGAACCCTGTTCTGAAAGCTTG CAGTCTGAGTGTGATTCTTTGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTC CGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAATTCAG TGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCT GTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGCCCTCGTCCCCCGGC TCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGC Aspergillus terreus Sequence ID: gb|KF971363.1| Identities 382/382(100%) >LPH 050 L50 ITS1 1505RAA000_C1 CCCACCCGTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGG GGGCTCTCAGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAG TGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGT TCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAGTGTGAATTGCAGAATTCC Đặng Thùy Dương 100 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm GTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCC TGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCTC TCCGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGA Aspergillus flavus Sequence ID: gb|KF574925.1| Identities 403/403(100%) >LPH 052 L52 ITS1 1505RAA000_C2 CCTTGTCTCCACACCTGTTGCTTCGGCGGGCCCACCGGGGCCACCCGGTCGCCGGGGG ACATCCGTCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAGGCGCTCTGTGAACCCTGATGAAGATGGG CTGTCTGAGTGATATGAAAATTGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCA TCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAAT CATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCG AGCGTCATTTCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTGTGGTCCCCCTGGGGACC Penicillium sanguineum strain CBS 122434 Sequence ID: gb|JX315663.1| Identities : 348/349(99.7%) >LPH 055 L55 ITS1 1505RAA000_C3 CTCCCACCCGTGTATACCGTACCTTGGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCAGTCTGGCCGCCG GGGGGCACCTGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACATCATTGAACGCTGTCTGAAG ATTGCAGTCTGAGCGATAAGCACAAATTAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGG TTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTC AGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGC CTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGG Penicillium chermesinum Sequence ID: gb|AY742693.1| Identities 332/337(99%) >LPH056 L56 ITS1 B10 TCCGTGTTGAACTACACCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGTGGTTCACGCCCGGCCGCC GGGGGGCCTTGTGCCCCCGGGCCCGCGCTCGCCGAAGACCCCTCGAACGCTGCCCTGA AGGTTGCCGTCTGAGTATAAAATCAATCATTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTT CCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCC GTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCC TGTCCGAGCGTCATTGCTAACCCTCCAGCCCGGCTGGTGTGTTGGGTCGACGTCCCCCC Đặng Thùy Dương 101 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm CGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCGCCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGG GCTTTGTCACGCGCTCTGG Paecilomyces variotii Sequence ID: gb|KC960561.1| Identities 426/426(100%) >LPH 057 L57 ITS1 1505RAA000_C5 AACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGA ACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTA TTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTC TTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGA ATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGC ATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGA TCGGGACCCCTCACACGGGTGCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCT CTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAA AACACCCAACTTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTA AGCATATCATA Trichoderma asperellum Sequence ID: gb|JN618340.1| Identities 533/533(100%) >LPH 058 L58 ITS1 1505RAA000_C6 CCCGTGCTTACCGTACCCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCTTCGGGCGGCCCGGGGCCT GCCCCCGGGACCGCGCCCGCCGGAGACCCCAATGGAACACTGTCTGAAAGCGTGCAG TCTGAGTCGATTGATACCAATCAGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGC ATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAA TCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCG AGCGTCATTTCTCCCCTCCAGCCCCGCTGGTTGTTGGGCCGCGCCCCCCCGGGGGCGG GCCTCGAGAGAAACGGCGGCACCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTCTGTCACCCG CTCTATGGGCCCGGCCGGGGCTTGCCTCGACCCCCAATCTTCTCAGATTGACCTCGGAT CAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATA Aspergillus aculeatus Sequence ID: gb|KC621081.1| Identities 502/502(100%) >LPH 060 L60 ITS1 1505RAA000_C7 CCTTGTCTCTATACACCCGTTGCTTTGGCGGGCCCACCGGGGCCACCTGGTCGCCGGG GGACGTTCGTCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGCGCTCTGTGAACCCTGATGAAGATG Đặng Thùy Dương 102 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật Trường ĐH Bách Khoa Hà Nội Viện CN Sinh học CN Thực phẩm GGCTGTCTGAGTACTATGAAAATTGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGG CATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGA ATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTC CGAGCGTCATTTCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTGTGGTCCCCCTGGGGAC CTGCCCGAAAGGCAGCGGCGACGTCCGTCTGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTCTGTCAC TCGCTCGGGAAGGACCTGCGGGGGTTGGTCACCACCATATTTTACCACGGTTGACCTC GGATCAGGTAGGAGTTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAA Penicillium verruculosum Sequence ID: gb|HM469420.1| Identities 505/508(99%) > LPH 061 L61 ITS1 1505RAA000_C8 AACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGATCTCTGCCCCGGGTGCGT CGCAGCCCCGGACCAAGGCGCCCGCCGGAGGACCAACCAAAACTCTTTTTGTATACCC CCTCGCGGGTTTTTTATAATCTGAGCCTTCTCGGCGCCTCTCGTAGGCGTTTCGAAAAT GAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGA AATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCAC ATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGA ACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGATCGGCCCTGCCTCTTGGCGGTGGCCGTCTCC GAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACACTCGCAT CGGGAGCGCGGCGCGTCCACAGCCGTTAAACACCCAACTTCTGAAATGTTGACCTCGG ATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATC Hypocrea lixii Sequence ID: gb|JQ639058.1| Identities 558/558(100%) Đặng Thùy Dương 103 Luận văn Thạc sỹ Kỹ thuật ... bố enzyme cellulase từ nấm mốc bền nhiệt, bền pH thấp nhằm ứng dụng sản xuất thức ăn chăn ni Do đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Tìm kiếm enzyme cellulase bền nhiệt, hoạt động pH thấp. .. Những nghiên cứu cellulase bền nhiệt, hoạt động pH thấp Tiềm ứng dụng cellulase bền nhiệt hoạt động pH thấp to lớn Ngoài ứng dụng việc bổ sung vào thức ăn gia súc, cellulase sử dụng vào nhiều ngành... 84 PH? ?? LỤC………………………………………………………………………………………….92 iv LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đề tài: “ Tìm kiếm enzyme cellulase bền nhiệt, hoạt động pH thấp nhằm ứng dụng chăn nuôi? ?? TS Nguyễn