- Nấm mốc được nuôi 2 ngày trên môi trường PDA
- Dùng que cấy thu sinh khối nấm mốc cho vào ống eppendorf có chứa 750 µl SSC 2X để loại bỏ protein và RNA. Sau đó gia nhiệt ở 100 o
C trong 10 phút và ly tâm 12000 vòng/phút trong 1 phút ở 20 oC.
- Bỏ dịch, giữ phần sinh khối, thêm vào 750 µl nước cất để rửa sạch tế bào và ly tâm 12000/phút trong 1 phút ở 10 oC. Bỏ phần dịch và giữ lại phần sinh khối.
- Dùng que cấy chuyển phần sinh khối này sang ống eppendorf mới có chứa hạt thủy tinh và 150 µl phenol: chloroform tỉ lệ 1:1 và 100 µl nước cất.
- Đưa vào máy phá tế bào trong 2 phút. Sau đó ly tâm ở 12000 vòng/ phút trong 10 phút.
- Sử dụng kit Silica Bead DNA gồm: Binding Buffer, Silica và Washing buffer để tinh chế DNA. Pha 150 µl Binding Buffer với 0,5 µl Silica được dịch silica milk sử dụng để tinh sạch DNA.
- Lấy 150 µl silica milk trộn đều với 5 0µl phần dịch trong sau khi phá tế bào. Giữ ở nhiệt độ phòng trong 5 phút, để DNA bám vào hạt silica. Ly tâm 12000 vòng/phút trong 1 phút ở 10oC .
- Kết tủa được rửa với 500 μl washing buffer (hoặc ethanol 70%), sau đó ly tâm 12000 vòng/phút trong 1 phút. Lặp lại 3 lần để thu DNA sạch.
- Làm khô bằng thiết bị cô quay chân không trong 30 phút ở 30oC. Bổ sung 15 µl nước PCR và ủ ở 50 oC trong 5 phút (để DNA rời ra khỏi hạt silica). Ly tâm 12000 vòng/phút trong 1 phút. Thu được dịch DNA tinh sạch và đem giữ lạnh.