Xây dựng các cấu trúc biểu hiện thụ thể kháng nguyên khảm hướng đích cd19 để điều trị lơ xê mi cấp dòng lympho và thử nghiệm hiệu quả in vitro

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Xây dựng các cấu trúc biểu hiện thụ thể kháng nguyên khảm hướng đích CD19 để điều trị lơ xê mi cấp dòng lympho và thử nghiệm hiệu quả in vitro NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THẢO Thao.NTPCA190017@sis.hust.edu.vn Ngành Công nghệ Sinh học Giảng viên hướng dẫn: TS Lê Quang Hòa Chữ ký GVHD Viện: Công nghệ Sinh học Cơng nghệ Thực Phẩm HÀ NỘI, 10/2021 CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN XÁC NHẬN CHỈNH SỬA LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên tác giả luận văn: Nguyễn Thị Phương Thảo Đề tài luận văn: “Xây dựng các cấu trúc biểu thụ thể kháng nguyên khảm hướng đích CD19 để điều trị lơ xê mi cấp dòng lympho và thử nghiệm hiệu in vitro” Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số SV: CA190017 Tác giả, Người hướng dẫn khoa học Hội đồng chấm luận văn xác nhận tác giả sửa chữa, bổ sung luận văn theo biên họp Hội đồng ngày 13/11/2021 với nội dung sau: STT Nội dung Hội đồng yêu cầu chỉnh sửa Phản hồi học viên Phần viết tắt, nên tách chữ viết tắt, chữ Đã chỉnh sửa phần viết tắt bao gồm tách chữ viết tiếng Anh và dịch tắt, chữ Tiếng Anh dịch Tiếng Việt thành tiếng Việt thành cột khác danh mục viết tắt, trang xiii cột (phần) cho đỡ rối và đẹp mắt Bảng 1.2 cần Việt Bảng 1.2, trang 22 chỉnh sửa theo yêu hóa, đưa vào cầu Hội đồng bao gồm: danh mục viết tắt - Các từ viết tắt chuyển vào danh mục Thêm tài liệu tham viết tắt, trang xiii khảo Bảng - Đã bổ sung tài liệu tham khảo cho thông tin có Bảng i STT Nội dung Hội đồng yêu cầu chỉnh sửa Phản hồi học viên Tổng quan về ALL Đã chỉnh sửa phần Tổng quan về ALL bao gồm: viết gọn lại nữa, - Loại bỏ phần phân loại chi tiết ALL, có thể bỏ phần phân nhắc đến tiêu chuẩn phân loại (tế bào, miễn dịch loại chi tiết mà sinh học phân tử) Chương 1, mục 1.1.4, cần nhắc đến tiêu dòng thứ từ dưới lên, trang chuẩn phân loại - Đã mô tả về liệu pháp điều trị nhắm đích Mô tả điều trị nhắm Chương 1, mục 1.1.5, dòng thứ từ dưới lên đích ung thư trang đến dòng thứ từ xuống trang máu - Đã bổ sung thông tin về số liệu mắc ALL Tài liệu tham khảo cần bổ sung tài liệu tiếng Việt về số liệu mắc ALL và xem lại các sử dụng thông tin website Viện Huyết học –Truyền máu TW Bệnh viện Truyền máu Huyết học chương 1, mục 1.1.1, dòng thứ 19 – 23 từ xuống, trang - Cách sử dụng thông tin website tài liệu tham khảo luận văn đúng với hướng dẫn thủ tục bảo vệ luận văn thạc sỹ (Áp dụng cho học viên bảo vệ từ tháng 01/2020) Phòng đào tạo thông báo quy định ngày 15/01/2020 Bổ sung vào Hình 3.9, trang 47 nghiệm Đã bổ sung nghiệm thức sử dụng 3×107 PBMC thức sử dụng vào Hình 3.9, trang 47 3×107 PBMC - Đã bổ sung tài liệu tham khảo vào số Một số khẳng định, khẳng định, hình ảnh sau: hình ảnh cần trích + Tài liệu tham khảo số 33, chương 1, mục dẫn tài liệu tham 1.1.5, dòng thứ từ dưới lên, trang khảo + Tài liệu tham khảo số 47 55, chương 3, mục 3.1, dòng thứ từ xuống, trang 40 ii STT Nội dung Hội đồng yêu cầu chỉnh sửa Phản hồi học viên + Tài liệu tham khảo số 31 cho Hình 1.1, chương 1, mục 1.1.5, trang + Tài liệu tham khảo số 43 cho Hình 1.2, chương 1, mục 1.2.2, trang 10 + Tài liệu tham khảo số 49 cho Hình 1.3, chương 1, mục 1.2.2, trang 11 + Tài liệu tham khảo số 74 cho Hình 1.4, chương 1, mục 1.3.3, trang 17 Ngày 18 tháng 11 năm 2021 Giáo viên hướng dẫn Tác giả luận văn TS Lê Quang Hòa Nguyễn Thị Phương Thảo CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG PGS TS Tô Kim Anh iii ĐỀ TÀI LUẬN VĂN Đề tài: “Xây dựng các cấu trúc biểu thụ thể kháng nguyên khảm hướng đích CD19 để điều trị lơ xê mi cấp dòng lympho và thử nghiệm hiệu in vitro" Giáo viên hướng dẫn Ký ghi rõ họ tên iv LỜI CAM ĐOAN Tôi Nguyễn Thị Phương Thảo, học viên cao học khoá 2019A, mã số học viên: CA190017, Trường Đại học Bách khoa Hà Nội, chuyên ngành Công nghệ Sinh học, xin cam đoan: Đây là luận văn thân trực tiếp thực dưới hướng dẫn TS Lê Quang Hòa Cơng trình khơng trùng lặp với bất kỳ nghiên cứu nào khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực và khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật về cam kết Học viên Nguyễn Thị Phương Thảo v LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin bày tỏ kính trọng lòng biết ơn sâu sắc tới TS Lê Quang Hòa, người thầy hướng dẫn, động viên, giúp đỡ em q trình nghiên cứu hồn thành luận văn này Em xin bày tỏ lời biết ơn chân thành đến ThS Trần Thanh Tùng, ThS Phạm Tiến Dũng các em sinh viên học tập nghiên cứu phịng thí nghiệm 306-B1 giúp đỡ em q trình thí nghiệm Đặc biệt em xin chân thành cảm ơn Bộ Khoa Học Công Nghệ cấp kinh phí cho đề tài “Nghiên cứu ứng dụng liệu pháp tế bào CAR-T điều trị bạch cầu nguyên bào lympho cấp”, mã số: KC10/16-20 để em có thể hoàn thành nghiên cứu Em xin bày tỏ lời biết ơn sâu sắc đến gia đình và người thân ủng hộ, động viên, tạo điều kiện cho em suốt thời gian học tập TÓM TẮT NỘI DUNG LUẬN VĂN Bệnh lơ xê mi cấp dòng lympho (ALL) bệnh ung thư phổ biến nhất trẻ em giới So với liệu pháp điều trị sử dụng kháng thể đơn dòng, ngoài tính hướng đích cao, liệu pháp CAR-T có ưu điểm vượt trội cho phép điều trị hiệu liệu pháp điều trị khác thất bại Liệu pháp CAR-T cấp phép để điều trị ALL Mỹ từ năm 2017 Để hướng tới việc ứng dụng liệu pháp CAR-T điều trị ALL Việt Nam, nghiên cứu tiến hành với mục tiêu cụ thể sau: (i) Xây dựng cấu trúc biểu thụ thể kháng nguyên khảm hướng đích CD19; (ii) Thử nghiệm hiệu in vitro khối tế bào CAR-T hướng đích CD19 Các kết nghiên cứu thu luận văn xây dựng thành công cấu trúc CAR-T hướng đích CD19 hệ thứ hai (CD19RCD137/pSB) hệ thứ tư (CAR19-iCasp9-IL15/pSB); hoàn thiện quy trình tạo khối tế bào CART sau: sau phân tách phương pháp ly tâm tỷ trọng với FicollPaque và hoạt hóa bi từ Dynabeads™ Human T-Activator CD3/CD28, 2x107 PBMC chuyển nạp hỗn hợp chứa µg mRNA SB100X 10 µg plasmid pSB hệ thống xung điện Amaxa 4D Nucleofector; dòng tế bào CAR-T sau chuyển nạp tăng sinh đặc hiệu với có mặt tế bào trình diện kháng nguyên nhân tạo aAPC 1D2 chiếu xạ (tỉ lệ CAR-T:aAPC 1:2) IL2 (50 U/mL) 28 ngày (7 ngày thay môi trường lần) Kết cho khối tế bào CAR-T đạt mức xấp xỉ 2,5-5×109 tế bào với 99% biểu CAR Các kết thử nghiệm in vitro cho thấy khối tế bào CAR-T: (i) có khả diệt tế bào ung thư Daudi và aAPC 1D2 (CD19+) từ 70-80% tỷ lệ CD19+:CART cao nhất 1:10; (ii) có khả sinh các cytokine tiền viêm đồng nuôi cấy với các dòng tế bào ung thư CD19+ (31 ng/mL đối với IL2, 210 ng/mL đối với IFN-γ và 64 ng/mL đối với TNF-α); (iii) có khả tăng sinh đồng nuôi cấy với tế bào Daudi aAPC 1D2; (iv) AP20187 nồng độ 20 nM giúp diệt 97% tế bào CAR-T hệ thứ tư, mở khả kiểm soát tăng sinh tế bào CAR-T thể người bệnh HỌC VIÊN Ký ghi rõ họ tên vi MỤC LỤC MỤC LỤC vii DANH MỤC HÌNH VẼ x DANH MỤC BẢNG BIỂU xii DANH MỤC VIẾT TẮT xiii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Bệnh lơ xê mi cấp dòng lympho (ALL) 1.1.1 Tình hình mắc ALL giới Việt Nam 1.1.2 Sinh lý bệnh ALL 1.1.3 Chẩn đoán ALL 1.1.4 Phân loại ALL 1.1.5 Điều trị ALL 1.2 Liệu pháp tế bào CAR-T điều trị ALL 1.2.1 Lịch sử hình thành phát triển liệu pháp tế bào CAR-T 1.2.2 Cấu trúc CAR-T 10 1.2.3 Các hệ tế bào CAR-T 11 1.3 Quy trình cơng nghệ sản x́t tế bào CAR-T điều trị ALL 14 1.3.1 Thu tế bào đơn nhân máu ngoại vi (PBMC) làm giàu quần thể tế bào T 14 1.3.2 Kích hoạt tế bào T 14 1.3.3 Chuyển gen tạo tế bào CAR-T 15 1.3.4 Tăng sinh tế bào sau chuyển gen 18 1.4 Thử nghiệm lâm sàng sử dụng liệu pháp CAR-T cho bệnh nhân mắc bệnh ALL 21 1.5 Tính an tồn liệu pháp tế bào CAR-T 23 1.6 Cách tiếp cận, tính mới, tính sáng tạo đề tài 24 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Vật liệu, hóa chất 26 2.1.1 Các dòng tế bào 26 2.1.2 Hóa chất 26 2.1.3 Oligonucleotide 27 2.1.4 Thiết bị 28 vii 2.2 Phương pháp nghiên cứu 28 2.2.1 Phương pháp xây dựng cấu trúc CAR-T hướng đích CD19 28 2.2.2 Phương pháp tạo khối tế bào CAR-T 35 2.2.3 Đánh giá khả tăng sinh các khối tế bào CAR-T đồng nuôi cấy với các dòng tế bào ung thư CD19+ 37 2.2.4 Đánh giá khả diệt tế bào ung thư CD19+ các khối tế bào CAR-T 38 2.2.5 Đánh giá khả sinh các cytokin khối tế bào CAR-T đồng nuôi cấy với dòng tế bào ung thư CD19+ 38 2.2.6 Đánh giá khả kiểm soát tế bào CAR-T chất cảm ứng dimer hóa AP20187 39 2.2.7 Phương pháp xử lý số liệu 39 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Xây dựng các cấu trúc CAR-T hướng đích CD19 để điều trị lơ xê mi cấp dòng lympho 40 3.1.1 Tổng hợp gen nhân tạo cấu trúc CD19RCD137 40 3.1.2 Tổng hợp gen nhân tạo cấu trúc iCasp9-IL15 41 3.1.3 Xây dựng vector biểu cấu trúc CD19RCD137/pSB (CAR-T hệ thứ hai) 43 3.1.4 Xây dựng vector biểu cấu trúc CAR19-iCasp9-IL15/pSB (CAR-T hệ thứ tư) 44 3.2 Hoàn thiện quy trình tạo tế bào CAR-T 46 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng lượng PBMC đến hiệu biểu CAR hệ thứ hai tế bào T 46 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng lượng plasmid đến số lượng tế bào T biểu cấu trúc CAR hệ thứ hai 47 3.3 Tạo và đặc tính hóa khối tế bào CAR-T hướng đích CD19 hệ thứ hai hệ thứ tư 48 3.3.1 Đánh giá hiệu tạo khối tế bào T biểu cấu trúc CAR hệ thứ hai hệ thứ tư 48 3.3.2 Đánh giá khả tăng sinh và biểu CAR khối tế bào CAR-T nuôi cấy với có mặt tế bào trình diện kháng nguyên nhân tạo chiếu xạ (aAPC) 51 3.4 Thử nghiệm hiệu quả diệt tế bào ung thư, khả sinh các cytokine và khả tăng sinh in vitro khối tế bào CAR-T hướng đích CD19 53 3.4.1 Đánh giá khả diệt tế bào ung thư CD19+ khối tế bào CART hệ thứ hai hệ thứ tư 53 viii 80 GGTGGTCTGAGAAGGTGTTCCGTGAGAAGATTCGTGGCT 174 ACAAGGTCCCCCAGTAAAATGATATACATTGACACCAGTGAAGATG 81 GAACACCTTCTCAGACCACCGCCAAGAATTGGGAGCTGA 175 CATTTTACTGGGGGACCTTGTGCAGAACTCGTGGTGCTG 82 GGTGAGAGGCAGAGGCTGTCAGCTCCCAATTCTTGGC 176 CAGCAGCAGCAGTGCCCAGCACCACGAGTTCTGC 83 CAGCCTCTGCCTCTCACCAGCCTCCAGGAGTGTATCC 177 GGCACTGCTGCTGCTGCGGCAGCTGGCAACCT 84 TTGTATCAGAGTGGCCCTGAGGATACACTCCTGGAGGCT 178 CGATCGCGACGATACAAGTCAGGTTGCCAGCTGCCG 85 TCAGGGCCACTCTGATACAACAGTGGCCATCAGCACAT 179 GACTTGTATCGTCGCGATCGGAAATGAGAACAGGGGCATCT 86 CCACACAGCAGCACTGTAGATGTGCTGATGGCCACTG 180 GTCCGCAGGGGCTCAAGATGCCCCTGTTCTCATTTC 87 CTACAGTGCTGCTGTGTGGACTGTCTGCCGTGTCTCT 181 TGAGCCCCTGCGGACGGTGCCGACAGGTGCT 88 CTTCAGGTAACAGGCCAGCAGAGACACGGCAGACAGT 182 CCCAGGATGCAGATCGAGAAGCACCTGTCGGCACC 89 GCTGGCCTGTTACCTGAAGTCTAGACAGACACCTCCTCTG 183 TCTCGATCTGCATCCTGGGATCAAAGCCATAGTGAAGGACA 90 CCTCCATCTCCACAGAGGCCAGAGGAGGTGTCTGTCTAGA 184 CCGTCGGCTGTCCATCACTGTCCTTCACTATGGCTTTGAT 91 GCCTCTGTGGAGATGGAGGCCATGGAAGCCCTGCCT 185 GTGATGGACAGCCGACGGCAGTTGGGATTCGTGAATTGC 92 TGCTTGTTCCCCATGTCACAGGCAGGGCTTCCATGG 186 CACACATAACCAGAGGGCAGCAATTCACGAATCCCAACTG 93 GTGACATGGGGAACAAGCAGCAGAGATGAGGACCTGGA 187 TGCCCTCTGGTTATGTGTGGGAGGGCTAATTCGAAGGC 94 CCAGGTGGTGAGAACAATTCTCCAGGTCCTCATCTCTGC 188 GAATTCACGACAGGCCTTCGAATTAGCCCTCC 72 Kết qủa giải trình cấu trúc CD19RCD137 Mồi Car19-113015-R: Mồi Car19-967-F: 73 Kết quả giải trình tự cấu trúc PGK-IL15-P2A-iCasp9-T2A-Blas Mồi IL15-179-R Mồi IL15-P2A-R 74 Mồi IL15-647-F 75 Mồi icasp9-R Mồi bGH-R 76 77 % tế bào CD3 + biểu CAR 100 80 60 40 20 x1 10 x1 x1 Lượng tế bào Hình S1 Tỷ lệ tế bào sống CD3+ biểu CAR sau 24 chuyển nạp với lượng PBMC khác Hình S2 Kết phân tích đếm dịng chảy tế bào CD3+ biểu CAR dòng tế bào CAR-T hệ thứ hai hệ thứ tư 78 TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 11 12 13 14 15 16 A Jemal, R Siegel, J Xu, and E Ward, "Cancer statistics, 2010," (in eng), CA Cancer J Clin, vol 60, no 5, pp 277-300, Sep-Oct 2010 T Terwilliger and M Abdul-Hay, "Acute lymphoblastic leukemia: a comprehensive review and 2017 update," (in eng), Blood Cancer J, vol 7, no 6, p e577, Jun 30 2017 M Stanulla and M Schrappe, "Treatment of childhood acute lymphoblastic leukemia," (in eng), Semin Hematol, vol 46, no 1, pp 5263, Jan 2009 N Howlader, et al., "SEER Cancer Statistics Review, 1975-2014," National Cancer Institute, Bethesda, MD., 2017 American Cancer Society Key Statistics for Acute Myeloid Leukemia (AML) Available: https://www.cancer.org/cancer/acute-myeloidleukemia/about/key-statistics.html Available: http://www.sannhinghean.vn/tin-tuc-8/benh-bach-cau-cap-otre-em-517 P C Dũng, "Điều trị bệnh bạch cầu cấp dòng lympho người lớn phác đồ LALA94," Luận văn Tốt nghiệp bác sĩ Chuyên khoa II, Đại học Y Dược TP.HCM, 2006 Đ V Chính, "Xu hướng biến đổi mô hình bệnh lý huyết học số đáp ứng về nguồn lực Viện Huyết học - Truyền máu TW Giai đoạn 2010-2014," Trường Đại học Y tế công cộng, Hà Nội, 2016 B Bielorai et al., "Acute lymphoblastic leukemia in early childhood as the presenting sign of ataxia-telangiectasia variant," (in eng), Pediatr Hematol Oncol, vol 30, no 6, pp 574-82, Sep 2013 J M Chessells et al., "Down's syndrome and acute lymphoblastic leukaemia: clinical features and response to treatment," (in eng), Archives of disease in childhood, vol 85, no 4, pp 321-325, 2001 J German, "Bloom's syndrome XX The first 100 cancers," (in eng), Cancer Genet Cytogenet, vol 93, no 1, pp 100-6, Jan 1997 A Shah, B M John, and V Sondhi, "Acute lymphoblastic leukemia with treatment naive Fanconi anemia," (in eng), Indian Pediatr, vol 50, no 5, pp 508-10, May 2013 L Gérinière, Y Bastion, C Dumontet, G Salles, D Espinouse, and B Coiffier, "Heterogeneity of acute lymphoblastic leukemia in HIVseropositive patients," (in eng), Ann Oncol, vol 5, no 5, pp 437-40, May 1994 S Sehgal, S Mujtaba, D Gupta, R Aggarwal, and R K Marwaha, "High incidence of Epstein Barr virus infection in childhood acute lymphocytic leukemia: a preliminary study," (in eng), Indian J Pathol Microbiol, vol 53, no 1, pp 63-7, Jan-Mar 2010 L G Spector, et al, "Epidemiology and etiology In Childhood Leukemias," England: Cambridge University Press, 2006 T Chowdhury and H J Brady, "Insights from clinical studies into the role of the MLL gene in infant and childhood leukemia," (in eng), Blood Cells Mol Dis, vol 40, no 2, pp 192-9, Mar-Apr 2008 79 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 L Seewald, J W Taub, K W Maloney, and E R McCabe, "Acute leukemias in children with Down syndrome," (in eng), Mol Genet Metab, vol 107, no 1-2, pp 25-30, Sep 2012 J C Alvarnas et al., "Acute Lymphoblastic Leukemia, Version 2.2015," (in eng), J Natl Compr Canc Netw, vol 13, no 10, pp 1240-79, Oct 2015 E J Jabbour, S Faderl, and H M Kantarjian, "Adult acute lymphoblastic leukemia," (in eng), Mayo Clin Proc, vol 80, no 11, pp 1517-27, Nov 2005 "National Institute of Hematology and Blood Transfusion V Lơ xê mi cấp Available from: https://www.nihbt.org.vn/huyet-hoc-lam-sang/lo-xemi-cap/p187i8521.html.," 2019 D A Arber et al., "The 2016 revision to the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia," (in eng), Blood, vol 127, no 20, pp 2391-405, May 19 2016 J M Rowe et al., "Induction therapy for adults with acute lymphoblastic leukemia: results of more than 1500 patients from the international ALL trial: MRC UKALL XII/ECOG E2993," (in eng), Blood, vol 106, no 12, pp 3760-7, Dec 2005 "American Cancer Society Acute Lymphocytic Leukemia (ALL) Subtypes and Prognostic Factors ," Available from: https://www.cancer.org/cancer/acute-lymphocytic-leukemia/detectiondiagnosis-staging/how-classified.html., 2019 X Thomas et al., "Outcome of treatment in adults with acute lymphoblastic leukemia: analysis of the LALA-94 trial," (in eng), J Clin Oncol, vol 22, no 20, pp 4075-86, Oct 15 2004 H Rafei, H M Kantarjian, and E J Jabbour, "Targeted therapy paves the way for the cure of acute lymphoblastic leukaemia," (in eng), Br J Haematol, vol 188, no 2, pp 207-223, Jan 2020 E A Raetz et al., "Chemoimmunotherapy reinduction with epratuzumab in children with acute lymphoblastic leukemia in marrow relapse: a Children's Oncology Group Pilot Study," (in eng), J Clin Oncol, vol 26, no 22, pp 3756-62, Aug 2008 J M Redman, E M Hill, D AlDeghaither, and L M Weiner, "Mechanisms of action of therapeutic antibodies for cancer," (in eng), Mol Immunol, vol 67, no Pt A, pp 28-45, Oct 2015 J B Kaplan, M Grischenko, and F J Giles, "Blinatumomab for the treatment of acute lymphoblastic leukemia," (in eng), Invest New Drugs, vol 33, no 6, pp 1271-9, Dec 2015 J F DiJoseph et al., "Antibody-targeted chemotherapy with CMC-544: a CD22-targeted immunoconjugate of calicheamicin for the treatment of Blymphoid malignancies," (in eng), Blood, vol 103, no 5, pp 1807-14, Mar 2004 H Dai, Y Wang, X Lu, and W Han, "Chimeric Antigen Receptors Modified T-Cells for Cancer Therapy," (in eng), Journal of the National Cancer Institute, vol 108, no 7, p djv439, 2016 Z Zhao, Y Chen, N M Francisco, Y Zhang, and M Wu, "The application of CAR-T cell therapy in hematological malignancies: 80 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 advantages and challenges," Acta Pharmaceutica Sinica B, vol 8, no 4, pp 539-551, 2018/07/01/ 2018 C L Lorentzen and P T Straten, "CD19-Chimeric Antigen Receptor T Cells for Treatment of Chronic Lymphocytic Leukaemia and Acute Lymphoblastic Leukaemia," (in eng), Scand J Immunol, vol 82, no 4, pp 307-19, Oct 2015 N Singh, N V Frey, S A Grupp, and S L Maude, "CAR T Cell Therapy in Acute Lymphoblastic Leukemia and Potential for Chronic Lymphocytic Leukemia," (in eng), Curr Treat Options Oncol, vol 17, no 6, p 28, Jun 2016 G Gross, T Waks, and Z Eshhar, "Expression of immunoglobulin-T-cell receptor chimeric molecules as functional receptors with antibody-type specificity," (in eng), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, vol 86, no 24, pp 10024-10028, 1989 F Letourneur and R D Klausner, "T-cell and basophil activation through the cytoplasmic tail of T-cell-receptor zeta family proteins," (in eng), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, vol 88, no 20, pp 8905-8909, 1991 Z Eshhar, T Waks, G Gross, and D G Schindler, "Specific activation and targeting of cytotoxic lymphocytes through chimeric single chains consisting of antibody-binding domains and the gamma or zeta subunits of the immunoglobulin and T-cell receptors," (in eng), Proc Natl Acad Sci U S A, vol 90, no 2, pp 720-4, Jan 15 1993 M H Kershaw et al., "A phase I study on adoptive immunotherapy using gene-modified T cells for ovarian cancer," (in eng), Clin Cancer Res, vol 12, no 20 Pt 1, pp 6106-15, Oct 15 2006 B Savoldo et al., "CD28 costimulation improves expansion and persistence of chimeric antigen receptor-modified T cells in lymphoma patients," (in eng), J Clin Invest, vol 121, no 5, pp 1822-6, May 2011 D Hollyman et al., "Manufacturing validation of biologically functional T cells targeted to CD19 antigen for autologous adoptive cell therapy," (in eng), J Immunother, vol 32, no 2, pp 169-80, Feb-Mar 2009 R J Brentjens et al., "CD19-targeted T cells rapidly induce molecular remissions in adults with chemotherapy-refractory acute lymphoblastic leukemia," (in eng), Science translational medicine, vol 5, no 177, pp 177ra38-177ra38, 2013 S Inman, "GSK drug combination approved for advanced melanoma," (in eng), Am J Manag Care, vol 20, no Spec No., p E10, Feb 2014 A Mullard, "FDA approves first CAR T therapy," (in eng), Nat Rev Drug Discov, vol 16, no 10, p 669, Sep 29 2017 C Zhang, J Liu, J F Zhong, and X Zhang, "Engineering CAR-T cells," Biomarker Research, vol 5, no 1, p 22, 2017/06/24 2017 M Pulé, et al., "CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (CAR) COMPRISING A CD19-BINDING DOMAIN," U.B Plc, Editor 2015: England, 2015 A Hombach, A A Hombach, and H Abken, "Adoptive immunotherapy with genetically engineered T cells: modification of the IgG1 Fc 'spacer' domain in the extracellular moiety of chimeric antigen receptors avoids 81 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 'off-target' activation and unintended initiation of an innate immune response," (in eng), Gene Ther, vol 17, no 10, pp 1206-13, Oct 2010 D Abate-Daga and M L Davila, "CAR models: next-generation CAR modifications for enhanced T-cell function," (in eng), Molecular therapy oncolytics, vol 3, pp 16014-16014, 2016 H Zhang et al., "4-1BB is superior to CD28 costimulation for generating CD8+ cytotoxic lymphocytes for adoptive immunotherapy," (in eng), J Immunol, vol 179, no 7, pp 4910-8, Oct 2007 S K Tasian and R A Gardner, "CD19-redirected chimeric antigen receptor-modified T cells: a promising immunotherapy for children and adults with B-cell acute lymphoblastic leukemia (ALL)," (in eng), Ther Adv Hematol, vol 6, no 5, pp 228-41, Oct 2015 A J Smith, J Oertle, D Warren, and D Prato, "Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy for malignant cancers: Summary and perspective," Journal of Cellular Immunotherapy, vol 2, no 2, pp 59-68, 2016/11/01/ 2016 T Brocker, "Chimeric Fv-zeta or Fv-epsilon receptors are not sufficient to induce activation or cytokine production in peripheral T cells," (in eng), Blood, vol 96, no 5, pp 1999-2001, Sep 2000 M Croft, "Co-stimulatory members of the TNFR family: keys to effective T-cell immunity?," (in eng), Nat Rev Immunol, vol 3, no 8, pp 609-20, Aug 2003 H M Finney, A N Akbar, and A D Lawson, "Activation of resting human primary T cells with chimeric receptors: costimulation from CD28, inducible costimulator, CD134, and CD137 in series with signals from the TCR zeta chain," (in eng), J Immunol, vol 172, no 1, pp 104-13, Jan 2004 B Cai et al., "Co-infusion of haplo-identical CD19-chimeric antigen receptor T cells and stem cells achieved full donor engraftment in refractory acute lymphoblastic leukemia," (in eng), Journal of hematology & oncology, vol 9, no 1, pp 131-131, 2016 Y Hu et al., "Predominant cerebral cytokine release syndrome in CD19directed chimeric antigen receptor-modified T cell therapy," Journal of Hematology & Oncology, vol 9, no 1, p 70, 2016/08/15 2016 M C Milone et al., "Chimeric receptors containing CD137 signal transduction domains mediate enhanced survival of T cells and increased antileukemic efficacy in vivo," (in eng), Mol Ther, vol 17, no 8, pp 1453-64, Aug 2009 G Enblad, H Karlsson, and A S Loskog, "CAR T-Cell Therapy: The Role of Physical Barriers and Immunosuppression in Lymphoma," (in eng), Hum Gene Ther, vol 26, no 8, pp 498-505, Aug 2015 X.-Y Tang et al., "Third-generation CD28/4-1BB chimeric antigen receptor T cells for chemotherapy relapsed or refractory acute lymphoblastic leukaemia: a non-randomised, open-label phase I trial protocol," BMJ Open, vol 6, no 12, p e013904, 2016 D Gomes da Silva et al., "Direct Comparison of In Vivo Fate of Second and Third-Generation CD19-Specific Chimeric Antigen Receptor (CAR)- 82 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 T Cells in Patients with B-Cell Lymphoma: Reversal of Toxicity from Tonic Signaling," Blood, vol 128, no 22, p 1851, 2016/01/01/ 2016 M Chmielewski, C Kopecky, A A Hombach, and H Abken, "IL-12 release by engineered T cells expressing chimeric antigen receptors can effectively Muster an antigen-independent macrophage response on tumor cells that have shut down tumor antigen expression," (in eng), Cancer Res, vol 71, no 17, pp 5697-706, Sep 2011 S P Kerkar et al., "Tumor-specific CD8+ T cells expressing interleukin12 eradicate established cancers in lymphodepleted hosts," (in eng), Cancer Res, vol 70, no 17, pp 6725-34, Sep 2010 M Chmielewski and H Abken, "TRUCKs: the fourth generation of CARs," (in eng), Expert Opin Biol Ther, vol 15, no 8, pp 1145-54, 2015 J Marks-Konczalik et al., "IL-2-induced activation-induced cell death is inhibited in IL-15 transgenic mice," (in eng), Proc Natl Acad Sci U S A, vol 97, no 21, pp 11445-50, Oct 10 2000 E Lanitis et al., "Optimized gene engineering of murine CAR-T cells reveals the beneficial effects of IL-15 coexpression," (in eng), J Exp Med, vol 218, no 2, Feb 2021 L V Hurton et al., "Tethered IL-15 augments antitumor activity and promotes a stem-cell memory subset in tumor-specific T cells," (in eng), Proc Natl Acad Sci U S A, vol 113, no 48, pp E7788-e7797, Nov 29 2016 J Feng et al., "Treatment of Aggressive T Cell Lymphoblastic Lymphoma/leukemia Using Anti-CD5 CAR T Cells," (in eng), Stem Cell Rev Rep, vol 17, no 2, pp 652-661, Apr 2021 B L Levine, "Performance-enhancing drugs: design and production of redirected chimeric antigen receptor (CAR) T cells," (in eng), Cancer Gene Ther, vol 22, no 2, pp 79-84, Mar 2015 X Wang and I Rivière, "Clinical manufacturing of CAR T cells: foundation of a promising therapy," Molecular Therapy - Oncolytics, vol 3, p 16015, 2016/01/01/ 2016 M Kalos et al., "T cells with chimeric antigen receptors have potent antitumor effects and can establish memory in patients with advanced leukemia," (in eng), Sci Transl Med, vol 3, no 95, p 95ra73, Aug 10 2011 B L Levine, J Miskin, K Wonnacott, and C Keir, "Global Manufacturing of CAR T Cell Therapy," (in eng), Mol Ther Methods Clin Dev, vol 4, pp 92-101, Mar 17 2017 N J Piscopo et al., "Bioengineering Solutions for Manufacturing Challenges in CAR T Cells," (in eng), Biotechnol J, vol 13, no 2, Feb 2018 B Tumaini et al., "Simplified process for the production of anti-CD19CAR-engineered T cells," (in eng), Cytotherapy, vol 15, no 11, pp 140615, Nov 2013 Z Jin et al., "The hyperactive Sleeping Beauty transposase SB100X improves the genetic modification of T cells to express a chimeric antigen receptor," (in eng), Gene Ther, vol 18, no 9, pp 849-56, Sep 2011 83 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 P V Manuri et al., "piggyBac transposon/transposase system to generate CD19-specific T cells for the treatment of B-lineage malignancies," (in eng), Hum Gene Ther, vol 21, no 4, pp 427-37, Apr 2010 A M Geurts et al., "Gene transfer into genomes of human cells by the sleeping beauty transposon system," (in eng), Mol Ther, vol 8, no 1, pp 108-17, Jul 2003 X Huang et al., "Gene transfer efficiency and genome-wide integration profiling of Sleeping Beauty, Tol2, and piggyBac transposons in human primary T cells," (in eng), Mol Ther, vol 18, no 10, pp 1803-13, Oct 2010 L Mátés et al., "Molecular evolution of a novel hyperactive Sleeping Beauty transposase enables robust stable gene transfer in vertebrates," (in eng), Nat Genet, vol 41, no 6, pp 753-61, Jun 2009 R Monjezi et al., "Enhanced CAR T-cell engineering using non-viral Sleeping Beauty transposition from minicircle vectors," (in eng), Leukemia, vol 31, no 1, pp 186-194, Jan 2017 H Singh et al., "Manufacture of clinical-grade CD19-specific T cells stably expressing chimeric antigen receptor using Sleeping Beauty system and artificial antigen presenting cells," (in eng), PLoS One, vol 8, no 5, p e64138, 2013 P Vormittag, R Gunn, S Ghorashian, and F S Veraitch, "A guide to manufacturing CAR T cell therapies," (in eng), Curr Opin Biotechnol, vol 53, pp 164-181, Oct 2018 F L Locke et al., "Phase Results of ZUMA-1: A Multicenter Study of KTE-C19 Anti-CD19 CAR T Cell Therapy in Refractory Aggressive Lymphoma," (in eng), Mol Ther, vol 25, no 1, pp 285-295, Jan 2017 M Poorebrahim et al., "Production of CAR T-cells by GMP-grade lentiviral vectors: latest advances and future prospects," (in eng), Crit Rev Clin Lab Sci, vol 56, no 6, pp 393-419, Sep 2019 S L Maude et al., "Chimeric antigen receptor T cells for sustained remissions in leukemia," (in eng), N Engl J Med, vol 371, no 16, pp 1507-17, Oct 16 2014 "Chimeric Antigen Receptor-Modified T Cells in Chronic Lymphoid Leukemia; Chimeric Antigen Receptor-Modified T Cells for Acute Lymphoid Leukemia; Chimeric Antigen Receptor T Cells for Sustained Remissions in Leukemia," (in eng), N Engl J Med, vol 374, no 10, p 998, Mar 10 2016 T Gargett, N Truong, L M Ebert, W Yu, and M P Brown, "Optimization of manufacturing conditions for chimeric antigen receptor T cells to favor cells with a central memory phenotype," (in eng), Cytotherapy, vol 21, no 6, pp 593-602, Jun 2019 M Sadelain, R Brentjens, and I Rivière, "The basic principles of chimeric antigen receptor design," (in eng), Cancer Discov, vol 3, no 4, pp 388-98, Apr 2013 L Gattinoni et al., "Removal of homeostatic cytokine sinks by lymphodepletion enhances the efficacy of adoptively transferred tumorspecific CD8+ T cells," (in eng), J Exp Med, vol 202, no 7, pp 907-12, Oct 2005 84 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 P Kebriaei et al., "Phase I trials using Sleeping Beauty to generate CD19specific CAR T cells," (in eng), J Clin Invest, vol 126, no 9, pp 3363-76, Sep 2016 M L Davila et al., "Efficacy and toxicity management of 19-28z CAR T cell therapy in B cell acute lymphoblastic leukemia," (in eng), Sci Transl Med, vol 6, no 224, p 224ra25, Feb 19 2014 D W Lee et al., "T cells expressing CD19 chimeric antigen receptors for acute lymphoblastic leukaemia in children and young adults: a phase dose-escalation trial," (in eng), Lancet, vol 385, no 9967, pp 517-528, Feb 2015 C J Turtle, S R Riddell, and D G Maloney, "CD19-Targeted chimeric antigen receptor-modified T-cell immunotherapy for B-cell malignancies," (in eng), Clin Pharmacol Ther, vol 100, no 3, pp 252-8, Sep 2016 N V Frey et al., "Optimizing chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy for adult patients with relapsed or refractory (r/r) acute lymphoblastic leukemia (ALL)," Journal of Clinical Oncology, vol 34, no 15_suppl, pp 7002-7002, 2016/05/20 2016 J Pan et al., "High efficacy and safety of low-dose CD19-directed CAR-T cell therapy in 51 refractory or relapsed B acute lymphoblastic leukemia patients," (in eng), Leukemia, vol 31, no 12, pp 2587-2593, Dec 2017 Novartis, "Prescribing Information (Kymriah™)," 2017 C C Kloss, M Condomines, M Cartellieri, M Bachmann, and M Sadelain, "Combinatorial antigen recognition with balanced signaling promotes selective tumor eradication by engineered T cells," (in eng), Nat Biotechnol, vol 31, no 1, pp 71-5, Jan 2013 K T Roybal et al., "Precision Tumor Recognition by T Cells With Combinatorial Antigen-Sensing Circuits," (in eng), Cell, vol 164, no 4, pp 770-9, Feb 11 2016 S Yu, M Yi, S Qin, and K Wu, "Next generation chimeric antigen receptor T cells: safety strategies to overcome toxicity," Molecular Cancer, vol 18, no 1, p 125, 2019/08/20 2019 V Hoyos et al., "Engineering CD19-specific T lymphocytes with interleukin-15 and a suicide gene to enhance their antilymphoma/leukemia effects and safety," (in eng), Leukemia, vol 24, no 6, pp 1160-70, Jun 2010 A P Aksoy BA, Wyatt M, Paulos C, Hammerbacher J, "Human primary T cells: A practical guide," PeerJ Preprints 6:e26993v1, 2018 H Singh, H Huls, P Kebriaei, and L J N Cooper, "A new approach to gene therapy using Sleeping Beauty to genetically modify clinical-grade T cells to target CD19," (in eng), Immunological reviews, vol 257, no 1, pp 181-190, 2014 C R Kleiveland, "Peripheral Blood Mononuclear Cells," in The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, K Verhoeckx et al., Eds Cham: Springer International Publishing, 2015, pp 161-167 L Chicaybam, A L Sodre, B A Curzio, and M H Bonamino, "An efficient low cost method for gene transfer to T lymphocytes," (in eng), PLoS One, vol 8, no 3, p e60298, 2013 85 102 103 104 105 106 S Stock et al., "Idelalisib for optimized CD19-specific chimeric antigen receptor T cells in chronic lymphocytic leukemia patients," (in eng), Int J Cancer, vol 145, no 5, pp 1312-1324, Sep 2019 M.-R Benmebarek, C H Karches, B L Cadilha, S Lesch, S Endres, and S Kobold, "Killing Mechanisms of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cells," (in eng), International journal of molecular sciences, vol 20, no 6, p 1283, 2019 T Gargett and M P Brown, "The inducible caspase-9 suicide gene system as a "safety switch" to limit on-target, off-tumor toxicities of chimeric antigen receptor T cells," (in eng), Frontiers in pharmacology, vol 5, pp 235-235, 2014 X Zhou, A Di Stasi, and M K Brenner, "iCaspase Suicide Gene System," (in eng), Methods in molecular biology (Clifton, N.J.), vol 1317, pp 87-105, 2015 M Ando et al., "Bortezomib sensitizes non-small cell lung cancer to mesenchymal stromal cell-delivered inducible caspase-9-mediated cytotoxicity," (in eng), Cancer Gene Ther, vol 21, no 11, pp 472-482, Nov 2014 86 ... nguyên khảm hướng đích CD19 nhằm tạo tế bào CAR-T để điều trị bệnh lơ xê mi cấp dòng lympho; Thử nghiệm hiệu in vitro khối tế bào CAR-T hướng đích CD19 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Bệnh lơ xê. .. sau: (i) Xây dựng cấu trúc biểu thụ thể kháng nguyên khảm hướng đích CD19; (ii) Thử nghiệm hiệu in vitro khối tế bào CAR-T hướng đích CD19 Các kết nghiên cứu thu luận văn xây dựng thành... luận văn: ? ?Xây dựng các cấu trúc biểu thụ thể kháng nguyên khảm hướng đích CD19 để điều trị lơ xê mi cấp dòng lympho và thử nghiệm hiệu in vitro? ?? Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học