Lấy khoảng 2g cắn DC2 hòa tan trong Ethanol tuyệt đối, lọc qua giấy lọc thu đƣợc dịch chiết để làm các phản ứng định tính flavonoid, coumarin, tanin và chất béo. Cô cách thủy Bã dƣợc liệu EtOH TĐ Ngâm 3 ngày Rút dịch chiết Dịch chiết lần 1 Dịch chiết cồn Cất thu hồi cồn Dịch chiết lần 2,3 Dịch chiết đặc Nƣớc nóng (1:1) Dịch chiết nƣớc Tủa DC2 (20g) PĐ thân dầu DC3 Ngâm 5 ngày Rút dịch chiết Bình ngấm kiệt Bột dƣợc liệu (5kg) Khay men EtOH TĐ Thấm ẩm EtOH TĐ Cắn DC1
51
Định tính flavonoid
- Phản ứng Cyanidin: Cho khoảng 2ml dịch chiết cồn vào ống nghiệm sạch, thêm một ít bột Magie kim loại và vài giọt HCl đặc, lắc đều và đun nóng cách thủy thấy xuất hiện màu đỏ cam (+).
- Phản ứng với kiềm:
Phản ứng với dd NaOH 10% : Cho 1ml dịch chiết cồn vào ống nghiệm, thêm vài giọt NaOH 10% thấy xuất hiện tủa vàng, thêm 1ml nƣớc cất thấy tủa tan và màu vàng của dung dịch trong ống nghiệm tăng lên (+).
Phản ứng với NH3 đặc: Nhỏ một giọt dịch chiết cồn lên giấy lọc, cho bay hơi hết, hơ tờ giấy lọc qua lại trên miệng bình NH3 đặc thấy màu vàng đậm lên (+).
- Phản ứng với dd FeCl3 5%: Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết cồn, thêm vào 1-2 giọt FeCl3 5% thấy xuất hiện tủa màu xanh đen (+).
Kết luận: Phân đoạn DC2 có chứa Flavonoid.
Định tính courmarin
Phản ứng mở, đóng vòng lacton:
Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 1 ml dịch hòa tan cắn Ống 1: thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10%
Ống 2: để nguyên
- Đun cả 2 ống đến sôi, để nguội, quan sát thấy: Ống 1: trong suốt, không có tủa
Ống 2: trong suốt
- Thêm vào cả 2 ống nghiệm mỗi ống 2 ml nƣớc cất. Lắc đều rồi quan sát thấy Ống 1: trong suốt
Ống 2: trong suốt
Acid hóa ống 1 bằng vài giọt HCl đặc, cả 2 ống đều trong suốt.
Kết quả: phản ứng âm tính (-)
52
miếng giấy lọc. Nhỏ 2-3 giọt dung dịch NaOH 5% lên vị trí có dịch chiết. Sấy nhẹ. Che một phần diện tích dịch hòa tan cắn trên giấy lọc bằng một miếng kim loại, chiếu tia tử ngoại trong một vài phút. Bỏ miếng kim loại ra, quan sát tiếp dƣới đèn tử ngoại thấy phần không bị che có huỳnh quang sáng nhƣ phần bị che.
Kết quả: phản ứng âm tính (-)
Kết luận: Phân đoạn dịch DC2 không chứa coumarin.
Định tính tanin
Lấy khoảng 2g cắn DC2 hòa tan trong nƣớc, lọc qua giấy lọc thu đƣợc dịch chiết nƣớc để làm các phản ứng định tính tanin.
- Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%: Cho khoảng 1ml dịch chiết nƣớc vào ống nghiệm sạch, thêm 2-3 giọt dung dịch FeCl3 5% thấy xuất hiện kết tủa màu nâu đen (+).
- Phản ứng với dung dịch gelatin 1%: Cho khoảng 1ml dịch chiết nƣớc vào ống nghiệm sạch, thêm 2-3 giọt dung dịch gelatin 1% không thấy xuất hiện tủa bông trắng (-).
- Phản ứng với chì acetat: Cho khoảng 1ml dịch chiết nƣớc vào ống nghiệm sạch, thêm 2-3 giọt dung dịch chì acetat 10% thấy xuất hiện tủa bông (+).
Kết luận: Phân đoạn DC2 không chứa tanin.
Định tính chất béo
Lấy khoảng 50mg cắn DC2 hòa tan trong Ether dầu hỏa, gạn lấy dịch
chiết để làm phản ứng định tính chất béo.
Nhỏ 2 giọt dịch chiết Ether dầu hỏa lên giấy lọc, hơ nóng cho bay hơi hết dung môi thấy không có vết mờ trên giấy lọc (-).
Kết luận: Phân đoạn DC2 không chứa chất béo.
Kết quả định tính phân đoạn dịch chiết CD2 hạt Cần tây đƣợc trình bày tóm tắt ở bảng 3.7.
53
Bảng 3.7: Kết quả định tính phân đoạn dịch chiết DC2 từ hạt Cần tây Nhóm chất Phản ứng định tính Kết quả Kết luận Flavonoid Phản ứng Cyanidin Phản ứng với kiềm Phản ứng với dd FeCl3 +++ ++ +++ Có Flavonoid Coumarin Phản ứng mở, đóng vòng lacton
Quan sát hiện tƣợng huỳnh quang - - Không có Coumarin Tanin Phản ứng với dd FeCl3 Phản ứng với dd Gelatin Phản ứng với dd Pb(CH3COO)2 + - ++ Không có tannin
Chất béo Tạo vết mờ trên giấy - Không có chất béo
Ghi chú:
(-): Phản ứng âm tính (++) : Phản ứng dƣơng tính rõ (+): Phản ứng dƣơng tính (+++) : Phản ứng dƣơng tính rất rõ
Nhận xét: Từ kết quả bảng 3.7 cho thấy phân đoạn DC2 có thành phần chủ yếu là flavonoid.
