khí kết hợp khối phổ (GC/MS)
Thí nghiệm đƣợc tiến hành trên máy sắc ký khí khối phổ AGILENT TECHNOLOGIES 7693 với các điều kiện nhƣ sau :
38
+ Cột sắc ký 1909 1 S – 433 HP – 5MS kích thƣớc 30m × 250µm × 0,25 µm.
+ Hệ thống tiêm mẫu tự động.
+ Detector : Khối phổ AGILENT TECHNOLOGIES 5975C + Khí mang : Heli
- Chuẩn bị mẫu: Mẫu tinh dầu nghiên cứu đƣợc pha loãng ở nồng độ 0,1% trong Chloroform (MERCK) rồi cho vào lọ thủy tinh 2ml có nắp chuyên dụng, lắc đều, đậy nắp, đặt vào vị trí chứa mẫu trên khay của hệ thống tiêm mẫu tự động.
- Khởi động thiết bị:
+ Mở bình khí Heli: mở van tổng và van bi + Bật công tắc điện khởi động GC
+ Bật máy tính + Khởi động MS
- Thiết lập phương pháp phân tích: Khởi động phần mềm INSTRUMENT I và cài đặt các thông số:
+ Injector: Thể tích tiêm mẫu: 1µm
Trƣớc khi tiêm mẫu: Rửa kim 3 lần với dung môi chloroform. Rửa kim 3 lần với dung dịch mẫu.
Sau khi tiêm mẫu: Rửa kim 3 lần với dung môi chloroform. Rửa kim 3 lần với dung môi n-hexan
+ Inlet: Khí mang Heli
Mode: Spilt (tiêm mẫu chia dòng) Nhiệt độ: 250 ˚C
Áp suất: 8,2317 psi Tổng dòng: 104 ml/min Tỷ lệ chia dòng: 100:1
39
+ Oven: Nhiệt độ ban đầu 60˚C trong 2 phút, sau đó tăng lên 220˚C với tốc độ 6°C/min, giữ trong 2 phút. Sau khi ngừng phân tích, giữ nhiệt độ 250˚C trong 1 phút. Tổng thời gian phân tích mẫu 35 phút.
+ Column: Nhiệt độ: 60˚C Áp suất: 8,2317 psi
Chế độ chạy đẳng dòng: 1ml/min + General Information:
Tune File: Stune. u Acquistion mole: Scan
+ MS Information : Slovent Delay:4,50 min ( thời gian cắt bỏ dung môi) + Scan parameters :
Low Mass: 30,0 High Mass: 300,0 Lƣu phƣơng pháp đã thiết lập.
- Chạy mẫu:
Chờ GC đạt tất cả các điều kiện cài đặt. Chọn Sequence\ Edit Sequence Gọi phƣơng pháp đã thiết lập, bấm OK. Chọn Run Sequence
Khai báo các dữ liệu về mẫu phân tích vào bảng, bấm OK để bắt đầu phân tích mẫu.
- Xử lý kết quả: Sử dụng phần mềm DATA ANALYSIS
Đối chiếu khối phổ của các chất ghi nhận đƣợc với các thƣ viện phổ khối FLAVOR 2, NIST 08 và WILEY W9N08 để nhận dạng các thành phần của tinh dầu. Hàm lƣợng % tƣơng đối của các thành phần đƣợc tính dựa trên diện tích pic.
- Kết quả: Thành phần hóa học của tinh dầu BPTMĐ và tinh dầu hạt Cần tây đƣợc trình bày ở bảng 3.1.
40
Bảng 3.1: Kết quả phân tích thành phần hóa học tinh dầu BPTMĐ và tinh dầu hạt Cần tây bằng phƣơng pháp GC/MS
STT Hợp chất TR/phút Diện tích pic (%) BPTMĐ Hạt 1 Beta-Pinen 6,705 0,49 0,41 2 Myrcen 7,002 16,09 0,46 3 p-Cymen 7,813 1,43 - 4 Limonen 7,966 46,23 24,85 5 Cis- Ocimen 8,101 5,91 2,00 6 1,3,6-Octatrien, 3,7-dimethyl- 8,346 0,54 - 7 Gamma-Terpinen 8,633 4,86 - 8 Bicyclo[3,3,0]octan-2-one, 7- methylene—6(or8)-methyl 11,036 1,58 - 9 Carvon 13,111 - 0,73 10 β-Elemen 16,455 - 0,47 11 Caryophyllen 17,093 3,46 0,76 12 Alpha-Humulen 17,805 0,44 - 13 β-Selinen 18,508 12,56 49,37 14 α-Selinen 18,886 1,71 7,68 15 5-Acetoxymethyl-2-furaldehyd 19,335 0,26 - 16 Caryophyllene oxid 20,440 0,30 - 17 Apiol 21,142 - 0,79 18 Buthyl phthalid 21,701 0,47 0,52 19 Cyclohexen 22,983 1,20 - 20 3-isobutylidenphtalid 23,097 2,48 11,96 Tổng diện tích pic 100,01 100,00
Ghi chú: TR: Thời gian lƣu (phút)
Nhận xét: Thành phần tinh dầu Cần tây thay đổi tùy thuộc vào các bộ phận của cây. Trong BPTMĐ Cần tây chứa chủ yếu các monoterpen, các thành phần chính là limonen (46.23%), myrcen (16,09%). Bên cạnh đó, hợp
41
chất chính có trong hạt là β-selinen (49,37%). Limonen có trong cả tinh dầu BPTMĐ và tinh dầu hạt Cần tây với hàm lƣợng cao.