dụng kit thương mại MolYsis
Đề đánh giá được hiệu quả loại bỏ ADN người, chúng tôi tiến hành so sánh sinh phẩm mà chúng tôi thiết lập MCLB1 (SHPT108@dehumanDNA) với phương pháp chuẩn, sử dụng kit thương mại của hãng là Kit loại bỏ ADN người (Kit MolYsis).
51
Hình 17: Hiệu quả loại ADN người (thông qua tồn dư beta globin) giữa các Kit (SHPT108@dehuman ADN), Kit MolYsis
Kết quả cho thấy, so với sinh phẩm kit thương mại thì hiệu quả loại bỏ ADN người của bộ sinh phẩm chúng tôi tạo ra là tương đương nhau. Và cả hai phương pháp này so với phương pháp tách ADN không xử lý thì hiệu quả loại bỏ ADN người là đáng kể. Như vậy, về mặt lý thuyết chúng tôi đã thiết lập thành công phương pháp loại bỏ ADN người. Vậy câu hỏi đặt ra là liệu rằng việc loại bỏ ADN người có đồng thời làm giàu ADN vi khuẩn hay không? Hay việc loại bỏ ADN người lại đồng thời loại bỏ luôn ADN vi khuẩn làm giảm độ nhạy kỹ thuật gây hiện tượng âm tính giả? Để trả lời cho câu hỏi này, chúng tôi đã tiến hành đánh giá độ nhạy của phương pháp bằng việc sử dụng các ADN tách chiết bằng sinh phẩm SHPT108@dehumanDNA để làm nguyên liệu cho phản ứng PCR phát hiện vi khuẩn. Kết quả này được trình bày ở phần dưới đây.
52
3.2.3.3.Kiểm chứng hàm lượng ADN vi khuẩn thu nhận sau khi xử lý bằng dung môi phá bạch cầu
Hình.18. Kết quả PCR mồi đơn E. coli-SuidA trên ADN được xử lý bằng dung
môi SHPT108@dehumanDNA
Qua hình trên cho thấy băng điện di lên rõ nét và đặc hiệu, không thấy có hiện tượng các băng phụ làm ảnh hưởng tới việc nhận định kết quả. Như vậy, kết quả PCR đã giải quyết được hai vấn đề là loại bỏ tối đa ADN người nhưng không ảnh hưởng tới hiệu quả tách chiết ADN vi khuẩn. Ở nồng độ vi khuẩn tối thiểu 10 cfu/ml phương pháp của chúng tôi thiết lập cũng có thể phát hiện được. Như vây, với kết quả này chúng tôi đã đạt được mục tiêu đề ra khi thiết lập một quy trình vừa loại bỏ ADN người đồng thời làm giàu ADN vi khuẩn. Đây không chỉ là cơ sở để
chúng tôi tiến hành khảo nghiệm phát hiện họ vi khuẩn Enterobacteriaceae mà còn
cả các tác nhân vi sinh khác trong bệnh phẩm máu.