M Ở ĐẦU
3.4.1. Phương pháp phân tích chỉ tiêu hóa lý
a) Phương pháp xác định độ ẩm (phương pháp sấy khô đến khối lượng không đổi)
- Nguyên tắc: Sấy mẫu trong thời gian dài để tách lượng nước tự do và nước liên kết bên trong sản phẩm. Trong quá trình sấy cần theo dõi và cân khối lượng mẫu đến khi khối lượng lần trước và lần sau nó không thay đổi thì dừng sấy. Lượng nước trong nguyên liệu đã bay hết, phần còn lại là chất khô.
- Công thức tính: Độẩm (W%) được tính theo công thức sau: W (%) = 100 0 1 2 1 × − − G G G G Trong đó:
G1: Khối lượng mẫu + chén sứ trước khi sấy (g) G2: Khối lượng mẫu + chén sứ sau khi sấy (g) G0: Khối lượng chén sứ (g).
b) Phương pháp đo mật độ quang dịch chiết (Theo TCVN 5367-91)
Dịch chiết thu được đem lọc sạch qua giấy lọc và bước sóng 548.1nm ( bước sóng hấp thụ riterpenoid).
Tiến hành: Bật máy đo quang phổ rồi để máy ổn định trong 10 phút. Tráng cuvet bằng nước cất. Trước khi đo mẫu cần đo bằng ethanol trước. Sau đó, lấy khoảng 3 ml dịch chiết của mẫu cho vào cuvet, đo trên máy ở bước sóng 548,1 nm.
c) Phương pháp xác định hàm lượng trietrpenoid
Lượng trietrpenoid được xác định bằng phương pháp đo mật độ chiết quang Phương pháp đo mật độ chiết quangdựa trên việc hấp thụ tại bước sóng 548,1 nm. Hàm lượng triterpenoid được xác định bằng cách so sánh với một đường chuẩn. Sử dụng máy quang phổ hấp thụ, chọn bước sóng 548,1 nm, xây dựng đường chuẩn, đo các mẫu phân tích.
* Xây dựng đường chuẩn
Quy trình lập đường chuẩn triterpenoid như sau:
- Cân chính xác 1,15 mg acid ursolic, hòa tan trong 10 ml ethyl acetate để
xây dựng đường chuẩn với các nồng độ acid ursolic là 0; 0,20; 0,40; 0,60; 0,80; 1 và 1,20 mg dung dịch được làm khô ở 100 0C.
- Sau đó thêm 0,40 ml dung dịch acid axetic và vanillin 5% -1 ml acid pecloric, ở 60oC / 15 phút sau đó di chuyển nó vào bồn nước đá, thêm 5 ml acid axetic, đặt nó ở nhiệt độ phòng trong 15 phút .
- Xác định độ hấp thụ của nó trong 548,1 nm.
Vẽđường chuẩn dựa trên kết quả xác định. Trọng lượng tiêu chuẩn trong phạm vi 0-0,14 mg cho thấy một mối quan hệ tuyến tính tốt với giá trị hấp thụ. Phương trình hồi quy tuyến tính là Y = 0,2158X - 0,0018, hệ số tương quan r = 0,9991.
* Kết quả xây dựng đường chuẩn
Đường chuẩn triterpenoid được dựng nhờ chương trình Microsoft Excel
được thể hiện ở phụ lục 1. Với trục tung là mật độ quang và trục hoành là nồng độ
chất chuẩn. Phương trình thể hiện mối tương quan giữa triterpenoid và OD548,1nm là:
y = 0,2158X - 0,0018
Trong đó y là hàm lượng triterpenoid trong 1 ml dịch (mg/ml), x là giá trị
OD548,1nm tương ứng. Hệ số tương quan r = 0,999 chứng tỏ mối liên quan giữa x và y
là chặt chẽ.
Dựa vào đường chuẩn, phương trình đường chuẩn y = 0,2158X - 0,0018 và
kết quả đo quang phổ hấp thụ tại bước sóng 548,1nm của các mẫu phân tích, xác
định được nồng độ của các mẫu phân tích. Hàm lượng triterpenoid được xác đinh thông qua công thức dưới đây.
* Tính toán xác định hàm lượng triterpenoid trong sinh khối nấm Linh Chi
- Từđường chuẩn xác định được nồng độ mẫu phân tích. - Hàm lượng glucan được tính theo công thức sau:
Hàm lượng glucan (%) =
Trong đó: X: Số gam xác định từđường chuẩn V: Thể tích dịch trích ly
n: Là hệ số pha loãng
m: Là khối lượng mẫu ban đầu đem phân tích = 2g.