- Dễ tìm, giá rẻ.
2.2.7.2 Xác định DE theo phương pháp axií Dinìtrosaỉicyỉic (DNS)
DE (Dextrose equivalent) là lượng đường khử (quy ra glucose) so với chất khô.
Trong quá trình phân giải Cellulose và Hemicellulose của rơm rạ. Giá trị DE cho biết mức độ phân giải rơm rạ thành đường.
Cở sở của phương pháp dựa trên phản ứng tạo màu giữa đường khử với thuốc thử axit dinitrosalicylic (DNS). Cường độ màu của hồn hợp phản ứng tỷ lệ thuận với nồng độ đường khử trong một phạm vi nhất định. Dựa trên đồ thị đường chuẩn của Glucose tinh khiết với thuốc thừ axit dinitrosalicylic sẽ tính được hàm lượng đường khử của mẫu nghiên cứu.
* Hóa chất:
- Axit 3,5 - dinitrosalicylic (DNS)
- Muối Tartarat kép (KNaC4H4 0 6.4H20 ) - Natrihydroxit (NaOH)
- Nước cất
- Glucose tinh khiết (99,5%)
* Cách tiến hành:
- Xây dựng đường chuẩn Glucose - Phản ứng DNS:
Cho 3 ml thuốc thử và 0,3 ml mẫu vào ống nghiệm sau đó đem đun cách thủy trong nước sôi 10 phút và làm lạnh nhanh đến nhiệt độ phòng dưới vòi nước chảy. Sau đó tiến hành đo mật độ quang ở bước sóng 570nm.
Lượng đường khử tạo ra được xác định dựa trên phương trình đường chuẩn glucose xác định bằng phương pháp DNS.
Tính toán:
Từ lượng đường khử xác định được, tính ra DE theo công thức: DE =((a X b)/c) X 100
Trong đó:
a: Là lượng đường khử trong mẫu đo (g) b: Tỷ lệ pha loãng mẫu
c: Nồng độ phần trăm chất khô.
*Thay đổi nồng độ Glucose từ 0 đến 50mM/l. Đo độ hấp phụ quang của dung dịch glucose tại bước sóng 570nm. Kết quả được trình bảy ở bảng sau:
Bảng 6: Độ hấp thụ quang của dung dịch glucose ở các nằng độ khác nhau.
Nồng độ glucose mM /ỉ H àm lượng glucose (g/1) Độ hấp thụ (Abs)
0 0 0,001 1 0,18 0,064 3 0,54 0,088 5 0,9 0,153 7 1,26 0,228 10 1,8 0,321 13 2,34 0,411 15 2,7 0,47 17 3,06 0,533 20 3,6 0,623 23 4,14 0,711 25 4,5 0,784 27 4,86 0,826 30 5,4 0,904 33 5,94 0,967 35 6,3 1,042 37 6,66 1,04 40 7,2 1,163 43 7,74 1,307 45 8,1 1,309 47 8,46 1,332 50 9 1,409
Phương trình đường chuẩn glucose - độ hấp thụ quang có dạng y= 2.454x - 4.3117, với phương sai R2 = 0,9986, có độ tin cậy cao. Vi thế chúng tôi sử dụng phương trình đường chuẩn này để xác định DE cho các thí nghiệm tiếp theo.