Lấy 50mg mẫu cho vào ống thủy tinh nỳt vặn (cỡ 13mm x 100mm) [32]. Alkal húa bằng 1.0ml chất phản ứng I (reagent I, gồm 15g sodium hydroxide (NaOH), 50ml methanol và 50ml Milli- Q). Tế bào đƣợc thủy phõn ở 1000C tại nồi nhiệt khụ trong 5 phỳt. Sau đú làm huyền phự bằng mỏy Vortex trong 5 giõy rồi tiếp tục cho thủy phõn trong 25 phỳt. Dịch thủy phõn đƣợc làm lạnh ở nhiệt độ phũng.
Methyl húa dung dịch Alkal với 0.2ml chất phản ứng 2 (65ml 6N hydrochloric acid và 55ml methanol). Sau khi metyl húa, giữ ở 800C trong nồi cỏch thủy khoảng 10 phỳt. Dung dịch methyl húa đƣợc bổ sung 1.25ml của chất thử 3 (gồm 50ml n- hexane-methyl tert butyl ether, 1:1, v/v) và đƣợc trộn đều bằng mỏy lắc 2000rpm trong 10 phỳt. Dịch nhớt phớa trờn đƣợc loại bỏ. Dung dịch đƣợc bổ sung 3ml thuốc thử 4 (1.2g sodium hydroxide trong 100ml Milli-Q) và đƣợc trộn đều bằng tay trong 5 phỳt. Ly tõm ở 2500rpm trong 10 phỳt. Dịch trờn cựng đƣợc chuyển sang ống thủy tinh mới cú nỳt vặn và cho bay hơi bằng khớ nitrogen thụng thƣờng tới khi khụ. Cuối cựng, toàn bộ dịch mẫu đƣợc làm tan với 50àl của diethyl ether 300 (hoặc acetone – 300, n-hexane). Toàn bộ mẫu đƣợc chấm vào sắc ký bản mỏng (TCL) rồi đƣợc đặt trong bồn thủy tinh chứa 100ml n-hexane-diethyl ether (4:1,v/v) trong 30 – 45 phỳt. Thành phần acid bộo đƣợc hiờn vệt bằng iot trong 30 – 45 phỳt. Acid bộo cú cực và khụng cực xuất hiện nhƣ những vệt xanh. Những vệt đƣợc cạo và rửa giải hai lần bằng diethyl ether 300. Trộn đều dung dịch silicagel trờn mỏy lắc 2000rpm trong 10 phỳt và ly tõm 2500rpm trong 5 hoặc 10 phỳt. Dung dịch đƣợc bay hơi bằng khớ nitrogen thụng thƣờng tới khi khụ mẫu. Mẫu đƣợc hũa tan trở lại với 50àl chất phản ứng 3. Dựng pipet nhỏ vào lọ nhỏ GC cú nỳt đậy. Sau đú, đem phõn tớch trờn mỏy sắc ký khớ (gas chromatography).