Dung dịch sau khi lọc qua cột C18, tiếp tục đƣợc lọc qua màng lọc. Sau đú, cho bay hơi bằng dũng khớ nitrogen tới 50àl. Mẫu đƣợc phõn tớch trờn mỏy sắc ký lỏng cao ỏp tại bƣớc súng 242 nm. Dựng microcystin của hóng Sigma, làm chất chuẩn.
Hỡnh 3.25a. Sắc ký đồ microcystin RR chuẩn
Hỡnh 3.25c . Sắc ký đồ microcystin LR chuẩn
Hỡnh 3.25e. Sắc ký đồ microcystin của chủng LT8
Nhỡn vào kết quả sắc ký đồ của dịch chiết trờn HPLC, trờn sắc ký đồ thấy xuất hiện cỏc cột biểu hiện đặc trƣng của độc tố microcystin. Trong biểu đồ, cú sự xuất hiện của cỏc cột với thời gian lƣu là 4,776 phỳt, 7,409 phỳt, 10,422 phỳt gần tƣơng ứng với thời gian lƣu của MC - RR, YR, LR chuẩn, chứng tỏ trong dịch chiết cú chứa cả ba loại độc tố. Ngoài cỏc cột đặc trƣng này cũn xuất hiện cỏc đƣờng cột khỏc là cỏc cột của dung mụi. Dựa vào diện tớch cột xỏc định đƣợc hàm lƣợng của cỏc thành phần độc tố nhƣ sau
Bảng 3.5. Hàm lƣợng microcystin của 2 chủng LT2 và LT8 Ký hiệu chủng Lƣợng MC- RR Lƣợng MC – YR Lƣợng MC - LR Thời gian Vựng xuất
hiện cột Thời gian Vựng xuất hiện cột Thời gian Vựng xuất hiện cột
LT2 4‟715 29,705 7‟378 26,570 10‟27 30,460 Lƣợng MC (ng/mg trọng lƣợng khụ) 474,3 132,6 114,1 LT8 4‟76 31,450 7‟488 27,140 10‟422 30,450 Lƣợng MC (ng/mg trọng lƣợng khụ) 512,8 236,8 114,25
Bảng 3.5 cho thấy kết quả sắc ký đồ trờn HPLC cho ra cỏc cột biểu hiện đặc
trƣng độc tố từ mẫu vi khuẩn lam, microcystin đƣợc thăm dũ với nhiễu giới hạn. Tuy nhiờn, trong biểu đồ cú sự xuất hiện của cỏc cột khụng mong muốn đú là cỏc cột của dung mụi.
Kết quả phõn tớch cho thấy cả 2 chủng LT2 và LT8 tế bào đều chứa độc tố với cỏc loại microcystin trong tế bào nhƣ MC - LR, -YR và -RR. Hàm lƣợng MC- LR trong chủng LT2 là 114,1 ng, LT8 là 114,25 ng/mg trọng lƣợng khụ. Hàm lƣợng MC-YR trong chủng LT2 là 132,6 ng, LT8 là 236,8 ng/mg trọng lƣợng khụ. Hàm lƣợng MC - RR trong chủng LT2 là 474,3 ng, LT8 là 512,8 ng/mg trọng lƣợng khụ. Từ kết quả ở bảng 3.5 cho thấy trong dịch chiết microcystin từ tế bào khụ Microcystis, hàm lƣợng độc tố MC – RR đạt lớn nhất 512,8 ng/mg trọng lƣợng khụ
so với lƣợng độc tố MC - LR.
Trong khi đú, hàm lƣợng MC - LR cho phộp trong nƣớc uống của WHO là 1 àg/L [48]. Nhƣ vậy nồng độ MC - LR trong hai chủng này 1,141àg/L với LT2 và 1,1425 àg/L với LT8 đó vƣợt quỏ ngƣỡng cho phộp của WHO, sẽ là nguy cơ đe dọa cho nguồn nƣớc nếu sau khi tế bào phõn giải, toàn bộ lƣợng độc tố nội bào giải phúng vào trong nƣớc.