ĐIỆN DI HAI CHIỀU
Cho đến nay, điện di hai chiều (2-DE) vẫn là kỹ thuật đƣợc dùng phổ biến nhất để phân tách các protein trong một mẫu phức tạp. Kỹ thuật 2-DE cho phép phân tách các protein khác nhau chỉ đến 0,1 đơn vị pI (isoelectric point) và 1kDa về khối lƣợng phân tử [43].
Protein trong dịch chiết mô đại trực tràng bình thƣờng và mô ung thƣ của bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng đƣợc phân tách thành các spot protein riêng rẽ bằng kỹ thuật điện di hai chiều. Chiều thứ nhất là điện di đẳng điện trên thanh IPGstrip, pH 3- 10, dài 17cm. Điện di chiều hai đƣợc tiến hành trên gel polyacrylamide 10% có SDS. Mẫu mô ung thƣ và mẫu đối chứng đƣợc tiến hành song song, cùng điều kiện để đảm bảo tính chính xác trong các kết quả so sánh về sau.
40
Trên bản gel điện di, các protein trong mẫu đƣợc phân tách thành các spot riêng rẽ hoặc các dãy spot của một loại protein, đây là kết quả của việc cải biến sau phiên mã hay biến đổi sau dịch mã, tạo ra các đồng phân có khối lƣợng phân tử tƣơng tự nhau và điểm đẳng điện gần nhau (hình 6).
3 10 3 10
A - Mô đại trực tràng bình thƣờng B - Mô ung thƣ đại trực tràng
Hình 6. Phân tách protein mô đại trực tràng của bệnh nhân mã số 11781 trên bản gel điện di hai chiều
Chiều 1: Điện di đẳng điện trên thanh IPG strip pH 3-10 dài 17cm; Chiều 2: Điện di SDS - PAGE trên gel polyacrylamide 10%
Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã phân tách đƣợc các protein mô đại trực tràng bình thƣờng và mô ung thƣ của 5 bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng trên bản gel điện di hai chiều, sử dụng thanh strip dài 17 cm, pH 3-10.