DNA plasmid tái tổ hợp được tách chiết với bộ hóa chất QIAprep Spin Plasmid Extraction Kit (QAGEN Inc). Vì số lượng khuẩn lạc mọc rất nhiều nên chúng tôi tiến hành chọn ngẫu nhiên mỗi đĩa 8 khuẩn lạc trắng để kiểm tra sản phẩm sau biến nạp, sau đó điện di trên gel agarose 0.8%. Kết quả được trình bày trên hình 3.14.
Chuyên ngành Di truyền học 60 Lớp Sinh K17
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hình 3.14: Ảnh điện di sản phẩm tách DNAplasmid tái tổ hợp 1- 8: Chủng L.NĐ.3.4
9-16: Chủng Đ.NĐ. 1.2 17: Đối chứng
Quan sát phổ điện di thấy rằng, DNA plasmid của các chủng vi khuẩn mang vector tái tổ hợp sẽ có kích thước lớn hơn so với DNA plasmid của chủng đối chứng (do chủng DH10B chỉ mang vector pET 32a, không mang gen Ker). Vì vậy, các DNA plasmid có kích thước lớn hơn so plasmid đối chứng sẽ được chọn và kiểm tra lại bằng phản ứng cắt enzyme.
Sản phẩm cắt DNA plasmid được kiểm ta lại bằng phương pháp điện di trên gel agarose 1%. Kết quả điện di thể hiện ở hình 3.15, sản phẩm cắt plasmid xuất hiện 2 băng có kích thước hoàn toàn phù hợp với kích thước của vector pET 32a (khoảng 5.9 kb) và đoạn gen Ker (khoảng 1.2 kb). Kết quả này cho thấy, đoạn gene Ker đã được đưa vào vector pET 32a thành công. Plasmid tái tổ hợp mang gene Ker sẽ được đưa vào biểu hiện ở vi khuẩn E.coli BL21.
Chuyên ngành Di truyền học 61 Lớp Sinh K17
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hình 3.15 Sản phẩm phản ứng cắt DNA plasmid TTH bằng 2 enzyme
XhoI và BamHI