M Ở ĐẦU
2.1.2.2 Môi trường nuôi cấy
v Môi trường MM-Canxi phytate( Minimal methanol - Histidine), dùng để xác định vòng phân giải của phytase.
- Agar 15g
- YNB (Yeast Nitrogene Base) 13,4g
- Methanol 100% 5ml
- Biotin 0,02% 2ml
- Thêm nước cất cho đủ 1000ml
- Canxi phytate 5g
v Môi trường YPD (Yeast extract Pepton Dextrose):
Hoạt hóa nấm men Pichia pastoris GS115/phyAI và GS115/phyB
- Cao nấm men 10 g
- Pepton 20 g
- D-glucose 20 g
- Cho nước cất vừa đủ 1000 ml
v Môi trường YPD-agar: Có thành phần như môi trường YPD-lỏng nhưng được bổ sung thêm 1.5% agar. Là môi trường để bảo quản giống (thạch nghiêng).
v Môi trường BMGY (Buffered Glycerol-complex Medium): Môi trường tăng sinh nấm men Pichia pastoris
- Cao nấm men 10g
Luận Văn Thạc Sĩ Trang42 Vật liệu &Phương pháp - YNB 13,4g - Glycerol 10g - Đệm phosphate 1M, pH6.0 100ml - Biotin 0,02% 2ml - Nước cất vừa đủ 1000ml
v Môi trường BMMY (Buffered Methanol-complex Medium): Môi trường lên men thu nhận phytase, có thành phần tương tự môi trường BMGY nhưng thay 10g glycerol bằng 5ml methanol 100%.
v Môi trường nước giá-Glycerol để khảo sát môi trường nuôi cấy:
- Cao nấm men 10g
- Peptone 20g
- Glycerol 10g
- Đệm phosphate 1M, pH 6.0 100ml - Nước chiết giá vừa đủ 1000ml
Nước chiết giá: cân 1kg giá đậu xanh, cho thêm 2 lít nước cất, nấu từ từ, để sôi trong 5 phút, sau đó ép lấy hết nước. Lấy nước chiết này để pha môi trường.
v Môi trường nước giá-Methanol: là môi trường lên men trong khảo sát môi trường
Thành phần giống như môi trường nước giá-Glycerol, chỉ thay 10g glycerol bằng 5ml Methanol 100%.
Cách pha các môi trường: các thành phần: cao nấm men,
peptone, D-glucose, glycerol, được hòa tan trong nước cất (nước chiết giá), sau đó cho đệm phosphate 1M, pH 6.0 và thêm nước cất (nước chiết giá) cho đủ 1000ml, chiết vào các bình erlen. Đêm hấp khử trùng ở 1210C, 15 phút. Biotin 0.02% và methanol được bổ
Luận Văn Thạc Sĩ Trang43 Vật liệu &Phương pháp
sung vào môi trường trước khi cấy. Biotin được pha với nước cất để được nồng độ 0.02% và lọc vô trùng, bảo quản lạnh (40
C).