IV. MỘT SỐ NGHIÊN CỨU MỚ
a/ Tuyển chọn các chủng nấm men phân giải cellulose:
Các chủng nấm men phân lập được từ các mẫu bún, gỗ đang phân huỷ, từ bánh men rượu ở xung quanh Hà nội và bộ giống nấm men thuộc Bảo tàng giống chuẩn vi sinh vật được phân lập từ trước và sơ tuyển bằng phương pháp cấy vạch trên môi trường Hansen với nguồn cacbon là CMC(carboxymethylcellulose) (10g/l). Hoạt tính phân giải CMC của các chủng được dựa vào khả năng tạo vòng phân giải xung quanh vạch sau 2 ngày nuôi cấy khi thử với Lugol
Những chủng nấm men có vòng phân giải CMC tiếp tục được kiểm tra khả năng phân giải CMC. Trong thí nghiệm này, tiến hành đồng thời nuôi cấy các chủng nấm men trên môi trường Hansen có nguồn đường saccharose và trên môi trường nguồn đường được thay thế bằng CMC để chiết dịch enzym cellulase. Một số công trình nghiên cứu đã cho thấy cellulase là một enzym cảm ứng, một số nguồn cacbon như glucose, saccharose, axetat, succinat lại chính là tác nhân ức chế quá trình tổng hợp enzym này.
Mục tiêu tuyển chọn tiếp theo là chọn ra các chủng vừa sinh trưởng trên nguồn đường saccharose vừa có khả năng sinh enzym phân giải cellulose. Điều này gắn liền với mục tiêu chọn ra các chủng vừa có khả năng sinh trưởng trên bã thải hoa quả với hàm lượng đường còn khá cao vừa có khả năng phân giải cellulose chứa trong các bã thải này. Hoạt tính cellulase được xác định bằng phương pháp đục lỗ, khuếch tán trên thạc
Kết quả cho thấy rõ ràng có những chủng có hoạt tính cellulase cao khi nuôi cấy trên môi trường có chứa CMC nhưng hoạt tính này lại rất thấp hoặc thậm chí không có hoạt tính khi nuôi trên môi trường có chứa saccharose. Điều này phù hợp với một số kết quả nghiên cứu trước đây.
Những chủng có hoạt tính cellulase khi nuôi cấy trên 2 loại môi trường trên và 7 chủng khác không có hoạt tính cellulase khi nuôi trên môi trường có chứa saccharosea nhưng lại có hoạt tính cao khi nuôi trên môi trường có chứa CMC tiếp tục được thử khả năng phân giải một số nguồn cacbon khác: Avicel, cellulose
Những chủng nấm men có hoạt tính phân giải Avicel và cellulose cao nhất được chọn để tiếp tục các thử nghiệm sau này.