c. Vacxin virus đậu gà tái tổ hợp
3.6. Thiết lập phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gián tiếp (IHI)
Nguyên lý của phản ứng: Nếu trong dịch họng có kháng ngun thì kháng ngun đó sẽ kết hợp với kháng thể trong kháng huyết thanh làm cho hiệu giá kháng thể trong huyết thanh giảm. Sau khi quay ly tâm để loại bỏ tổ hợp kháng nguyên-kháng thể, sự tụt giảm hiệu giá kháng thể được phát hiện bằng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gián tiếp.
Kháng huyết thanh chuẩn hoặc γ-globulin cho vào ống Eppendof (60 µl). Dùng nạo y tế nạo khoảng 10 mg dịch họng rồi cho tác dụng với 60 µl kháng huyết thanh chuẩn đựng trong ống Eppendorf đã chuẩn bị, trộn đều. Tạo ống đối chứng âm bằng cách nhúng nạo sạch vào dung dịch gelatin 3% lấy khoảng 10 mg nhúng vào ống Eppendorf chứa huyết thanh chuẩn. Tiến hành li tâm 3000 vòng/phút trong vịng 5 phút, sau đó dùng pipet hút 50 µl dịch trong phía trên (gọi là dịch chiết).
Trước hết cho 50 µl dung dịch sinh lý hoặc dung dịch PBS có pH 7,2 vào cả 8 lỗ giếng của mỗi dãy rồi cho vào lỗ thứ nhất 50 µl dịch chiết, trộn đều
Tanin
bằng cách hút nhả 4 – 5 lần, sau đó chuyển 50 µl sang lỗ thứ hai, tiếp tục trộn- chuyển như vậy cho đến lỗ cuối cùng thì hút bỏ 50 µl. Thêm vào các lỗ 50 µl kháng nguyên IHA rồi để yên khay và đọc hết quả sau 1 – 5 giờ.
Ở mỗi khay nên làm một dãy đối chứng âm tính, với 50 µl dịch từ Eppendorf đối chứng âm, 50 µl dung dịch sinh lý và 50 µl kháng nguyên IHA.
Để phản ứng ở nhiệt độ phòng 1 – 5 giờ sau đó đọc kết quả:
Đọc kết quả phản ứng khi ở các lỗ cuối cùng của dãy đối chứng âm có hồng cầu chìm gọn xuống tâm đáy lỗ: Cột đối chứng âm thường có ngưng kết ở 4 hoặc 5 lỗ đầu. Sử dụng ranh giới này làm giá trị nền để đánh giá các mẫu kiểm. Các mẫu không chênh lệch hiệu giá ngưng kết quá 1 lỗ trên và dưới được coi là âm tính. Mẫu có ngưng kết ít hơn so với đối chứng âm hai lỗ được coi là có kháng nguyên cúm, tức động vật cảm nhiễm HPAI, cịn các mẫu có ngưng kết nhiều hơn đối chứng âm hai lỗ được coi là có kháng thể chống cúm, tức đã đáp ứng miễn dịch.