3. í nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
3.1.5. Cỏc triệu chứng ở lợn tiờu chảy
Để xỏc định cỏc triệu chứng thƣờng gặp ở lợn mắc bệnh tiờu chảy, chỳng tụi đó tiến hành điều tra đối với từng trƣờng hợp lợn mắc bệnh. Cỏc thụng tin về triệu chứng của lợn bệnh đƣợc ghi chộp cụ thể vào phiếu điều tra. Cụ thể, đó tiến hành điều tra triệu chứng của 9.122 lợn mắc tiờu chảy, trong đú: Lứa tuổi từ 1-21 ngày (1.720 con), lứa tuổi từ 22-30 ngày (3.119 con) và lứa tuổi từ 31- 60 ngày (4.283 con).
Số lƣợng và tần suất xuất hiện cỏc triệu chứng của lợn tiờu chảy đƣợc trỡnh bày ở bảng 3.9.
Kết quả ở bảng 3.9 cho thấy trong 10 triệu chứng thỡ tần suất xuất hiện triệu chứng bỏ ăn (72,3%) là cao nhất, kế đến là triệu chứng bụng chƣớng hơi (69,61%), mệt mỏi (68,7%), phõn màu vàng (65,51). Triệu chứng nụn mửa cú tần suất thấp nhất (15,6%).
Nhƣ vậy, lợn bị mắc tiờu chảy thƣờng xuất hiện cỏc triệu chứng chủ yếu nhƣ sau: Mệt mỏi, bỏ ăn, uống nƣớc nhiều, nụn mửa, bụng chƣớng hơi, màu phõn thay đổi… Khi tiờu chảy nặng và kộo dài thƣờng xuất hiện cỏc triệu chứng toàn thõn nhƣ: da nhăn, chậm lớn, lụng xự, phõn bết ở hậu mụn…
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Việc xỏc định triệu chứng lõm sàng chớnh xỏc sẽ giỳp cụng tỏc chẩn đoỏn bệnh nhanh và điều trị kịp thời.
Bảng 3.9. Tổng hợp cỏc triệu chứng ở lợn con mắc tiờu chảy
Diễn giải
Lứa tuổi lợn mắc tiờu chảy Tổng hợp 1-21 ngày 22-30 ngày 31-60 ngày Tổng số
con xuất hiện triệu chứng Tỷ lệ (%) Số con xuất hiện triệu chứng Tỷ lệ (%) Số con xuất hiện triệu chứng Tỷ lệ (%) Số con xuất hiện triệu chứng Tỷ lệ (%)
Số con điều tra 1.720 3.119 4.283
Bỏ ăn 1.156 67,20 2.450 78,55 2.993 69,88 6.595 72,30 Lồng xự 746 43,37 1.374 44,05 2.107 49,19 4.227 46,34 Bụng chƣớng hơi 1.174 68,25 2.136 68,48 3.040 70,97 6.350 69,61 Uống nhiều nƣớc 1.230 71,51 1.898 60,85 2.254 52,63 5.382 59,0 Nụn mửa 278 16,16 525 16,83 620 14,47 1.423 15,6 Mệt mỏi 1.324 76,97 2.158 69,18 2.785 65,02 6.267 68,7 Da nhăn 438 25,47 764 24,5 1.124 26,24 2.326 25,5 Phõn màu trắng 1.012 58,83 773 24,78 362 8,45 2.147 23,54 Phõn màu vàng 612 35,58 2.460 78,87 2.904 67,80 5.976 65,51 Chậm lớn 454 26,39 484 15,52 1.480 34,56 2.418 26,50
3.2. KẾT QUẢ NGHIấN CỨU XÁC ĐỊNH VAI TRế CỦA VI KHUẨN E.COLI
TRONG HỘI CHỨNG TIấU CHẢY Ở LỢN CON DƢỚI 2 THÁNG TUỔI
3.2.1. Kết quả xỏc định số lƣợng vi khuẩn E.coli cú trong phõn của lợn tiờu chảy và lợn bỡnh thƣờng tiờu chảy và lợn bỡnh thƣờng
Nhiều tỏc giả khi nghiờn cứu về hội chứng tiờu chảy ở lợn đó cho rằng: Loạn khuẩn đƣờng ruột là nguyờn nhõn gõy ra tiờu chảy ở lợn. Sự biến động về số lƣợng vi khuẩn cú trong phõn lợn tiờu chảy phản ỏnh hiện tƣợng loạn
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
khuẩn đƣờng ruột. Để tỡm hiểu vấn đề này, chỳng tụi đó tiến hành xỏc định số lƣợng vi khuẩn E.coli cú trong phõn của 30 lợn bị tiờu chảy và 30 lợn bỡnh thƣờng (ở cỏc lứa tuổi tƣơng đƣơng nhau). Kết quả xỏc định số lƣợng vi khuẩn E.coli đƣợc thể hiện ở bảng 3.10.
Bảng 3.10. Kết quả xỏc định số lƣợng vi khuẩn E.coli cú trong 1gam phõn của lợn bị tiờu chảy và lợn khỏe mạnh bỡnh thƣờng
Lứa tuổi Lợn
(ngày)
Lợn bỡnh thƣờng Lợn bị tiờu chảy Tăng so với bỡnh thƣờng (lần) Số mẫu phõn kiểm tra Số lƣợng vi khuẩn E.coli (triệu/g) Số mẫu phõn kiểm tra Số lƣợng vi khuẩn E.coli (triệu/g) 01 - 21 10 33,26 10 156,65 4,7 21 - 30 10 32,48 10 146,16 4,5 31 - 60 10 31,47 10 132,20 4,2
Từ kết quả trỡnh bày ở bảng 3.10 cho thấy số lƣợng vi khuẩn E.coli cú trong phõn của lợn bị tiờu chảy cao hơn rất nhiều so với lợn khoẻ mạnh (tăng trờn 4 lần) và nhƣ vậy chớnh vi khuẩn E.coli đó đúng vai trũ quan trọng trong bệnh tiờu chảy ở lợn con dƣới 2 thỏng tuổi.
Kết quả của nghiờn cứu này là cũng phự hợp với nghiờn cứu của một số tỏc giả khỏc, đú là sự tăng lờn về số lƣợng của vi khuẩn trong đƣờng ruột của lợn mắc bệnh tiờu chảy. Cụ thể là:
Trƣơng Quang (2005)[48] khi kiểm tra số lƣợng vi khuẩn E.coli/ 1g phõn ở 314 mẫu phõn của lợn khụng bị tiờu chảy và 312 mẫu của lợn bị tiờu chảy, cho kết quả là số lƣợng vi khuẩn ở lợn 1 - 21 ngày tuổi nhiều gấp 2,46 - 2,73 lần và ở 22 - 60 ngày tuổi là 1,88 - 2,10 lần so với lợn khụng bị tiờu chảy.
Hồ Soỏi và cs (2005)[49] cũng phõn lập E.coli ở lợn con từ 1 - 60 ngày tuổi nhƣng chia thành 2 giai đoạn phỏt triển khỏc nhau của lợn, cho kết quả là
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
số lƣợng vi khuẩn E.coli phõn lập đƣợc từ lợn bị tiờu chảy ở 1 - 45 ngày tuổi là 132,79 x 106 VK /gam phõn và ở lợn 40 - 60 ngày tuổi là 124,08 x 106VK/gam phõn, gấp 2,37 lần và 1,39 lần, so với lợn khụng bị tiờu chảy. Phạm Thế Sơn và cs (2008b)[51] khi kiểm tra số lƣợng vi khuẩn
E.coli/ 1g phõn lợn khỏe và lợn tiờu chảy đó cho kết quả là số lƣợng vi khuẩn
E.coli khi lợn mắc tiờu chảy tăng cao so với lợn khỏe trong cựng nhúm: 1- 21 ngày tăng 2,8%, 22- 45 ngày tăng 2,4%, 46- 90 ngày tăng 1,64%.
Nguyễn Cảnh Tự và cs (2009)[73] đó cho biết vi khuẩn E.coli đúng vai trũ quan trọng trong hội chứng tiờu chảy của lợn trờn 60 ngày tuổi và lợn nỏi nuụi tại ĐĂKLĂK. Số lƣợng vi khuẩn E.coli ở lợn trờn 60 ngày tuổi bị tiờu chảy nhiều gấp 1,88 lần và ở lợn nỏi là 1,25 lần so với lợn khụng bị tiờu chảy. Từ cỏc dẫn liệu khoa học trờn, kết hợp với kết quả của nghiờn cứu này, cho thấy cú sự khỏc nhau về số lƣợng vi khuẩn E.coli trong 1gam phõn giữa cỏc lứa tuổi của lợn. Điều này cú thể đƣợc giải thớch dựa trờn cơ sở khỏc nhau về đặc điểmm sinh lý từng giai đoạn sinh trƣởng của lợn, sự dần hoàn thiện chức năng bộ mỏy tiờu hoỏ cũng nhƣ khu hệ sinh vật trong đƣờng ruột và thời gian tiếp xỳc vơi điều kiện ngoại cảnh. Ngoài ra, thành phần và số lƣợng vi khuẩn của đƣờng ruột phụ thuộc vào nhiều yếu tố khỏc nữa nhƣ: thể trạng của lợn, tập quỏn chăn nuụi, khẩu phần dinh dƣỡng, chất lƣợng thức ăn…
Ở lợn khoẻ mạnh bỡnh thƣờng, số lƣợng vi khuẩn đƣờng ruột luụn luụn ở thế cõn bằng động, nhƣng khi lợn bị Stress làm giảm sức đề khỏng cơ thể, một số loại vi khuẩn sẽ cú cơ hội phỏt triển nhanh về số lƣợng làm mất tớnh cõn bằng động và gõy bệnh tiờu chảy. Trong nghiờn cứu này, cú thể thấy vi khuẩn E.coli đó cú sự tăng đột biến rất lớn về số lƣợng khi lợn mắc tiờu chảy, và chứng tỏ rằng trong quỏ trỡnh phỏt triển, vi khuẩn E.coli đó sản sinh ra chất khỏng khuẩn ColV ức chế sự phỏt triển của cỏc loại vi khuẩn đƣờng ruột khỏc, để chiếm vị trớ độc tụn trong hệ vi khuẩn đƣờng ruột. Vấn đề này cũng
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
đó phần nào lý giải cho hiện tƣợng vỡ sao tỷ lệ phõn lập đƣợc cỏc loại vi khuẩn khỏc nhƣ Salmonella, Clostridium và một số vi khuẩn đƣờng ruột khỏc là rất thấp trong cỏc mẫu đƣợc kiểm tra.
3.2.2. Kết quả phõn lập vi khuẩn E.coli từ cỏc mẫu phõn và phủ tạng lợn con tiờu chảy tại tỉnh Bắc Giang con tiờu chảy tại tỉnh Bắc Giang
Mẫu phõn và mẫu phủ tạng (mỏu tim, gan, lỏch, dịch ruột non) đƣợc lấy từ lợn con tiờu chảy ở 3 huyện Tõn Yờn, Hiệp Hũa, Việt Yờn với tổng số mẫu là 270 mẫu. Mẫu sau khi lấy xong đƣợc bảo quản ở 4oC và đƣợc đem đến bộ mụn vi trựng, Viện Thỳ y để phõn lập và làm cỏc xột nghiệm tiếp theo.
Phõn lập vi khuẩn E.coli thực hiện theo quy trỡnh thƣờng quy của bộ mụn vi trựng, Viện Thỳ y Quốc gia (270 mẫu trong đú cú 150 mẫu phủ tạng và 120 mẫu phõn của lợn con dƣới 2 thỏng tuổi mắc bệnh tiờu chảy). Kết quả đƣợc trỡnh bày ở bảng 3.11.
Bảng 3.11. Kết quả phõn lập vi khuẩn E.coli từ cỏc mẫu phõn và phủ tạng lợn con tiờu chảy (n=270)
Địa điểm thu thập mẫu Mẫu phủ tạng (n=150) Mẫu phõn (n=120) Tổng số mẫu phõn lập Tổng số mẫu dƣơng tớnh Tỷ lệ (%) Số mẫu phõn lập Số mẫu dƣơng tớnh Tỷ lệ (%) Số mẫu phõn lập Số mẫu dƣơng tớnh Tỷ lệ (%) Việt Yờn 50 43 86 40 35 87,50 90 78 86,67 Hiệp Hũa 50 48 96 40 40 100 90 88 97,78 Tõn Yờn 50 45 90 40 37 92,50 90 82 91,11 Tụ̉ng sụ́ 150 136 90,67 120 112 93,33 270 248 91,85
Trong 270 mẫu phõn và phủ tạng đƣợc thu thập từ lợn con tiờu chảy (bảng 3.11) cho thấy vi khuẩn E.coli hiện diện trong hầu hết cỏc mẫu
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
(248/270 mẫu chiếm 91,85%), trong đú, 90,67% là từ cỏc mẫu phủ tạng và 93,33% từ cỏc mẫu phõn. Cũng nhận thấy huyện Hiệp Hũa cú tỷ lệ phõn lập
E.coli từ lợn con bị tiờu chảy là cao nhất (97,78%), thấp hơn là Tõn Yờn (91,11%) và thấp nhất là Việt Yờn (86,67%). Kết quả về tỷ lệ phõn lập đƣợc vi khuẩn E.coli trong nghiờn cứu này là tƣơng đƣơng với cỏc nghiờn cứu của một số tỏc giả trƣớc đõy:
Cự Hữu Phỳ và cs (1999)[41] khi tiến hành phõn lập vi khuẩn E.coli từ cỏc mẫu phõn của lợn từ 35 ngày đến 4 thỏng tuổi bị tiờu chảy, đó xỏc định đƣợc 60/ 70 mẫu cú vi khuẩn E.coli, chiếm tỷ lệ 85,71%.
Trịnh Quang Tuyờn và cs (2004)[71] khi tiến hành phõn lập vi khuẩn
E.coli từ cỏc mẫu phõn của lợn bị tiờu chảy, đó xỏc định đƣợ 259/ 325 mẫu cú vi khuẩn E.coli, chiếm tỷ lệ 79,69%.
Trƣơng Quang (2005)[48] khi phõn lập vi khuẩn E.coli từ cỏc mẫu phõn lợn bị tiờu chảy lấy tại địa bàn Hà Nội, đó cú kết luận 100% mẫu phõn của lơn từ 1- 60 ngày tuổi bị tiờu chảy phõn lập đƣợc E.coli.
Nguyễn Thị Kim Lan (2004)[23] phõn lập E.coli từ cỏc mẫu phõn lợn bị bệnh phự đầu ở 2 tỉnh Bắc Giang và Thỏi Nguyờn, đó thụng bỏo rằng cú 100% mẫu phõn của lợn bị tiờu chảy và phự đầu phõn lập đƣợc vi khuẩn E.coli.
Nguyễn Thị Ngữ (2005)[34] khi nghiờn cứu về vi khuẩn E.coli và
Salmonella trong phõn lợn bị tiờu chảy tại huyện Chƣơng Mỹ- Hà Tõy, đó nhận xột: Cú tới 93,7 - 96,4% số mẫu phõn lập cú E.coli và 75,0 - 78,6% số mẫu phõn lập cú Salmonella.
Đặng Xuõn Bỡnh và cs (2008)[3] khi tiến hành phõn lập vi khuẩn E.coli
từ cỏc mẫu bệnh phẩm lợn con mắc bệnh phõn trắng thu thập tại cỏc tỉnh: Cao Bằng, Thỏi Nguyờn, Hà Tõy, Bắc Ninh, đó xỏc định đƣợc 150/177 mẫu cú vi khuẩn E.coli chiếm tỷ lệ 84,7%.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
3.2.3. Kờ́t quả giỏm định đặc tớnh sinh học của cỏc chủng vi khuẩn E.coli
phõn lọ̃p đƣợc
Giỏm định đặc tớnh sinh học cỏc chủng vi khuẩn E.coli phõn lập đƣợc nhằm phõn loại và xỏc định đỳng loài, trờn cơ sở đú cú những nghiờn cứu tiếp theo. Sau khi phõn lập đƣợc 248 chủng vi khuẩn E.coli từ mẫu phõn và mẫu phủ tạng của lợn con mắc tiờu chảy, chỳng tụi tiến hành làm cỏc phản ứng sinh hoỏ và kiểm tra khả năng gõy dung huyết của chỳng. Kết quả đƣợc trỡnh bày tại bảng 3.12.
Bảng 3.12. Kờ́t quả giám định đặc tớnh sinh học của cỏc chủng vi khuõ̉n E.coli phõn lọ̃p đƣợc
STT Chỉ tiờu kiểm tra
Vi khuõ̉n E.coli Sụ́ chủng kiểm tra Sụ́ chủng dƣơng tính Tỷ lệ (%) 1 Dung huyờ́t 248 248 100 2 Indol 248 248 100 3 VP 248 0 0 4 Citrat 248 0 0 5 MR 248 248 100 6 Lactose 248 248 100 7 Maltose 248 248 100 8 Xylose 248 248 100 9 Fructose 248 248 100 10 Glucose 248 248 100 11 Inositol 248 0 0 12 D - Raffnose 248 248 100 13 Sobitol 248 248 100
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Bảng 3.12 cho chỳng tụi thấy:
- Tất cả cỏc chủng E.coli phõn lập đƣợc (100%) đều cú khả năng gõy dung huyết trờn mụi trƣờng thạch cú bổ sung 5% mỏu cừu. Trƣớc đõy, khả năng dung huyết của của vi khuẩn E.coli đƣợc coi là một yếu tố gõy bệnh quan trọng của vi khuẩn này, nhƣng nhiều nghiờn cứu gần đõy đều đó thống nhất rằng dung huyết chỉ đƣợc xem nhƣ một đặc tớnh sinh hoỏ học của vi khuẩn E.coli.
- 100% cỏc chủng E.coli đƣợc kiểm tra cho phản ứng sinh Indol và MR dƣơng tớnh, cũn cỏc phản ứng VP và Citrat thỡ đều cho kết quả õm tớnh. Tỷ lệ cỏc chủng lờn men đƣờng Lactose, Maltose, Mannitol, Mannose, Sorbitol, Xylose là 100%. Riờng với đƣờng Inositol, tất cả chủng đều cho kết quả õm tớnh.
So sỏnh kết quả giỏm định đặc tớnh sinh hoỏ của 248 chủng vi khuẩn
E.coli phõn lập đƣợc với bảng sinh hoỏ chuẩn của loại vi khuẩn này thỡ thấy cỏc chủng vi khuẩn E.coli phõn lập đƣợc từ lợn con tiờu chảy tại tỉnh Bắc Giang đều cú cỏc đặc điểm chung, rất điển hỡnh của vi khuẩn E.coli nhƣ đó đƣợc cỏc tài liệu trong và ngoài nƣớc mụ tả.
3.2.4. Kờ́t quả xác định serotype kháng nguy ờn O của các chủng vi khuõ̉n
E.coli phõn lọ̃p đƣợc
Chỳng tụi đó xỏc định serotype khỏng nguyờn O của 248 chủng vi khuẩn E.coli bằng phản ứng ngƣng kết nhanh trờn phiến kớnh. Kết quả đƣợc trỡnh bày ở bảng 3.13.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Bảng 3.13. Kờ́t quả xác định serotype kháng nguyờn O của các chủng vi khuõ̉n E.coli phõn lọ̃p đƣợc
Địa điểm (huyện)
Số chủng kiểm tra
Serotype khỏng nguyờn 0
O8 O138 O139 O141 O149 O111
n (+) Tỷ lệ (%) n (+) Tỷ lệ (%) n (+) Tỷ lệ (%) n (+) Tỷ lệ (%) n (+) Tỷ lệ (%) n(+) Tỷ lệ (%) Hiệp Hũa 88 9 10,23 8 9,09 11 12,50 32 36,36 31 35,22 6 6,81 Tõn Yờn 82 7 8,54 7 8,54 15 18,29 21 25,60 29 35,37 9 10,97 Việt Yờn 78 5 6,41 9 11,54 14 17,95 15 19,23 18 23,08 17 21,79 Tổng 248 21 8,47 24 9,68 40 16,13 68 27,42 78 31,45 32 12,90 77
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Trong 248 chủng E.coli đƣợc kiểm tra (Bảng 3.13) đều cho kết quả dƣơng tớnh với 1 trong 6 serotype khỏng huyết thanh O. Trong đú cỏc chủng thuộc serotyp O149 chiếm tỷ lệ cao nhất (31,45%); thấp hơn là cỏc chủng thuộc serotyp O141 (27,42%). Cỏc serotype O139, O111 và O138 lần lƣợt cú tỷ lệ tƣơng ứng là 16,13%; 12,90% và 9,68%; serotype O8 chiếm tỷ lệ thấp nhất (8,47%). Kết quả xỏc định serotype khỏng nguyờn O của chỳng tụi cũng phự hợp với một số nghiờn cứu đó tiến hành trƣớc đõy, phần lớn cỏc tỏc giả đều cho thấy serotype khỏng nguyờn O149 chiếm tỷ lệ cao và là serotype chớnh gõy bệnh ở lợn con sau cai sữa.
Theo Fairbrother (1992)[84] cỏc serotype O138, O139, O141 và O149 thuộc nhúm VK ETEC và VTEC là cỏc nhúm thƣờng hay gặp gõy tiờu chảy cho lợn con sau cai sữa.
Tất giả Vũ Khắc Hựng và cs (2004)[21] khi xỏc định serotype khỏng nguyờn O của cỏc chủng E.coli phõn lập từ lợn con bị tiờu chảy ở Cộng hoà Slovakia lại thấy rằng Serotype O149 chiếm tỷ lệ cao nhất (77%) trong tổng số 220 chủng vi khuẩn đƣợc kiểm tra, serotype O2, O15, O101 và O157 cú cựng tỷ lệ là 1,8%, cũn lại cỏc serotype O8, O54, O84, O147 chiếm cỏc tỷ lệ tƣơng ứng là 6,3%; 2,2%; 2,7%; 2,2%.
Cũng xỏc định serotype khỏng nguyờn O của cỏc chủng E.coli phõn lập đƣợc ở lợn sau cai sữa ở những địa điểm lấy mẫu khỏc nhau thuộc khu vực đồng bằng sụng Cửu Long, Nguyễn Khả Ngự (2000)[35] cho biết, trong số 11 serotype đƣợc xỏc định, O26 chiếm tỷ lệ cao nhất 27,8%, tiếp theo là O139 chiếm tỷ lệ 13,9%, cỏc serotype O127, O111, O124, O125, O126, O86, O149 đều chiếm tỷ lệ 8,3%, cũn serotype O55, O128 chỉ chiếm tỷ lệ 2,8%. Kết quả của tỏc giả Nguyễn Khả Ngự ớt nhiều cú sự sai khỏc với cỏc kết quả của nghiờn