3. í nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
2.4.4. Phƣơng phỏp xỏc định serotype khỏng nguyờ nO của cỏc chủng
khuẩn E.coli phõn lập đƣợc
Đƣợc thực hiện theo phƣơng phỏp ngƣng kết nhanh trờn phiến kớnh; cỏc chủng vi khuẩn đƣợc tiến hành xỏc định nhúm với cỏc huyết thanh đa giỏ trƣớc, sau đú đến cỏc huyết thanh đơn giỏ trong nhúm.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Chuẩn bị:
+ Chủng vi khuẩn E.coli cần xỏc định serotype đƣợc cấy trờn thạch mỏu cừu, ủ ở tủ ấm 370
C trong 18 - 24 giờ.
+ Cỏc khỏng huyết thanh O chuẩn (đa giỏ và đơn giỏ) do hóng Denka, Seiken Co., Ltd, Niigata, Nhật cung cấp.
+ Nƣớc muối sinh lý 0.85%, phiến kớnh sạch, que cấy nhựa.
- Phương phỏp tiến hành phản ứng ngưng kết nhanh trờn phiến kớnh như sau:
Nhỏ lờn phiến kớnh sạch, mỗi đầu một giọt nƣớc muối sinh lý, dựng que cấy vụ trựng, lấy khuẩn lạc E.coli cần xỏc định đó đƣợc nuụi trờn mụi trƣờng thạch mỏu, trộn đều với 2 giọt nƣớc muối sinh lý để tạo thành huyễn dịch vi khuẩn. Nhỏ một giọt khỏng huyết thanh chuẩn vào một bờn huyễn dịch và một giọt nƣớc sinh lý vào bờn huyễn dịch cũn lại (đối chứng). Nếu cú phản ứng ngƣng kết, sẽ xuất hiện trong vũng 30 giõy. Phản ứng dƣơng tớnh khi hỡnh thành ngƣng kết giữa khỏng nguyờn là vi khuẩn với khỏng huyết thanh, tạo thành những hạt nhỏ trắng lấm tấm, huyễn dịch tỏch ra làm 2 phần là cỏc hạt ngƣng kết và phần nƣớc trong. Với phản ứng ngƣng kết xảy ra nhanh, rừ rệt thỡ đƣợc đỏnh giỏ mức ++++. Tựy theo khả năng ngƣng kết để cú thể đỏnh giỏ mức ngƣng kết ở cỏc mức độ khỏc nhau +, ++, +++. Phản ứng là õm tớnh khi hỗn dịch vi khuẩn với khỏng huyết thanh đục đều nhƣ bờn đối chứng.
Với những chủng cú ngƣng kết với khỏng huyết thanh đa giỏ, tiếp tục thực hiện nhƣ vậy với cỏc khỏng huyết thanh đơn giỏ thuộc nhúm để xỏc định rừ từng serotype. Trong trƣờng hợp cỏc chủng cú hiện tƣợng ngƣng kết chộo với nhiều nhúm hoặc ngƣng kết với nhiều đơn giỏ khỏc nhau, thỡ phải pha loóng khỏng huyết thanh theo cấp số 2, kết quả sẽ lấy ngƣng kết ở cấp số pha loóng cao nhất.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn