Sơ đồ nghiên cứu
Phương pháp nghiên cứu là nghiên cứu tiến cứu mô tả cắt ngang, Chúng tôi thu thập số liệu bằng phương pháp phỏng vấn, khám phụ khoa và xét nghiệm dịch tiết âm đạo, cổ tử cung. Kết quả được ghi vào phiếu phỏng vấn
(phụ luc 1), phiếu ghi kết quả khám lâm sàng (phụ lục 2), phiếu ghi kết quả
xét nghiệm ký sinh trùng và đo pH âm đạo (phụ lục 3.1), phiếu ghi kết quả xét nghiệm vi khuẩn (phụ lục 3.2).
Phỏng vấn
Khám phụ khoa, lấy bệnh phẩm
Hai tăm bông từ âm đạo Tăm bông từ cổ tử cung
Tăm bông số 1Đo pH
Soi tươi tìm: - Nấm Candida, - T.vaginalis, - Bạch cầu đa nhân
Tăm bông số 2Test Sniff
Nhuộm gram: - Candida
- Clue cells chứa G.vaginalis
- Vi khuẩn gây bệnh - Bạch cầu đa nhân
Tăm bông số 3
Test nhanh Chlamydia trachomatis
2.3.4.1. Phỏng vấn đối tượng nghiên cứu
Việc lựa chọn đối tượng nghiên cứu do chính tác giả thực hiện. Phụ nữ được giải thích về mục đích nghiên cứu và được mời tham gia nghiên cứu. Phụ nữ đồng ý tham gia nghiên cứu được phỏng vấn trực tiếp bằng bộ câu hỏi thiết kế sẵn (phụ lục1). Gồm các vấn đề:
- Tuổi, nghề nghiệp - Trình độ học vấn - Tình trạng hôn nhân
- Nguồn nước dùng trong sinh hoạt
- Kiến thức về viêm nhiễm đường sinh dục dưới.
- Thực hành vệ sinh phụ nữ (vệ sinh sinh dục hàng ngày, vệ sinh kinh nguyệt, vệ sinh giao hợp)
- Tiền sử sản khoa: số lần đã đẻ, sẩy, nạo, hút thai. - Tiền sử đã mắc bệnh viêm đường sinh dục dưới - Các biện pháp tránh thai đã và đang dùng.
2.3.4.2. Khám phụ khoa
Mọi đối tượng nghiên cứu đều được khám âm hộ và khám âm đạo bằng mỏ vịt để xác định tình trạng âm hộ, âm đạo, cổ tử cung và đánh giá tình trạng viêm đường sinh dục dưới. Kết quả sẽ được ghi vào phiếu khám lâm sàng
(phụ lục 2).
Biểu hiện ở âm hộ: sẩn ngứa, viêm âm hộ Biểu hiện ở âm đạo
- Khí hư bệnh lý:
+ Khí hư đặc, trắng như bột + Khí hư vàng, xanh có bọt
+ Khí hư thuần nhất, trắng xám, hôi + Khí hư có màu vàng, như mủ
- Những biểu hiện bất thường ở âm đạo: âm đạo viêm đỏ, viêm loét ở âm đạo. Biểu hiện ở cổ tử cung và ở lỗ cổ tử cung
- Khí hư từ lỗ cổ tử cung - Viêm – lộ tuyến cổ tử cung.
2.3.4.3. Xét nghiệm chẩn đoán
Xét nghiệm khí hư để tìm tác nhân gây viêm nhiễm đường sinh dục dưới được thực hiện tại khoa xét nghiệm Bệnh viện Bắc Thăng Long do cán bộ khoa xét nghiệm Bệnh viện Bắc Thăng Long thực hiện. Kết quả được ghi vào phiếu kết quả xét nghiệm ký sinh trùng (Phụ lục 3.1), phiếu ghi kết quả xét nghiệm vi khuẩn (phụ lục 3,2).
Kỹ thuật lấy bệnh phẩm
Mỗi đối tượng nghiên cứu đều được khám, chẩn đoán lâm sàng và được lấy bệnh phẩm bằng 3 tăm bông, lấy bệnh phẩm ở âm đạo và cổ tử cung.
- Tăm bông 1: lấy dịch ở cùng đồ sau âm đạo, dùng để: + Đo pH,
+ Soi tươi tìm nấm Candida, Trichomonas vaginalis. Bạch cầu đa nhân
- Tăm bông 2: Lấy dịch âm đạo ở vùng nghi ngờ nhất, dùng để làm test Sniff, nhuộm Gram tìm hình thể, tính chất bắt màu, mật độ, cách sắp xếp của vi khuẩn, tế bào Clue cells, bạch cầu đa nhân.
- Tăm bông 3: Lấy bệnh phẩm từ ống cổổ tử cung để tìm Chlamydia theo phương pháp miễn dịch sắc ký, sử dụng test nhanh.
Kỹ thuật xét nghiệm
- Đo pH âm đạo
Sử dụng giấy thử pH chỉ thị màu có kèm theo bảng màu chuẩn có chỉ số từ 1– 14 Universal indicator của hãng MERCK (Đức) sản xuất.
Đặt tăm bông bệnh phẩm lấy từ túi cùng sau âm đạo tiếp xúc trực tiếp với dải giấy thử pH âm đạo trong 10 giây, so màu của dải giấy thử đã thấm dịch âm đạo với bảng màu chuẩn để xác định độ pH của dịch tiết âm đạo.
-Test Sniff còn gọi là thử nghiệm amine: Cho khí hư lên lam kính, nhỏ một giọt dung dịch KOH 10% lên bệnh phẩm, trộn đều trong 5 giây rồi đưa ngay lên gần mũi ngửi. Nếu có mùi cá ươn là test Sniff dương tính, nếu không có mùi là âm tính.
- Soi tươi tìm Trichomonas, nấm men Candida:
Tăm bông lấy dịch ở cùng đồ sau âm đạo cho vào ống nghiệm có 0,5 ml dung dịch nước muối sinh lý 0,9%, trộn đều, nhỏ một giọt nước muối sinh lý đã có bệnh phẩm lên lam kính. Đậy Lamelle lên lam kính rồi soi dưới kính hiển vi ở vật kính 40, tìm sợi nấm Candida, Trichomonas vaginalis. Tiêu chuẩn xác định dương tính khi:
+ Trichomonas vaginalis (+): trên tiêu bản soi tươi thấy đơn bào có kích thước lớn, hình hạt mơ, di động nhờ roi theo kiểu vừa xoay vừa giật lùi.
+ Nấm Candida (+): Trên tiêu bản soi tươi thấy tế bào nấm hình tròn hoặc hình bầu dục, có chồi, ánh xanh, hoặc thấy hình sợi nấm một đầu tròn.
- Kỹ thuật nhuộm Gram dịch âm đạo
Cách làm tiêu bản: Tăm bông lấy dịch âm đạo, phết lên giữa một lam kính theo hình xoáy trôn ốc từ trong ra ngoài, có đường kính khoảng 1 – 1,5 cm, để khô tự nhiên. Sau đó tiến hành cố định và nhuộm bệnh phẩm với thuốc nhuộm Gram theo quy trình của khoa xét nghiệm của Bệnh viện Bắc Thăng Long như sau [7]:
Cố định tiêu bản: tiêu bản sau khi đã để khô tự nhiên, hơ tiêu bản cắt ngang qua ngọn lửa đèn cồn 2 - 3 lần trong vòng 3 giây.
Nhuộm tiêu bản:
+ Nhỏ vài giọt tím gentian lên tiêu bản, để 1 phút, rửa nước. + Nhỏ vài giọt lugol lên tiêu bản, để 1 phút, rửa nước,
+ Nhỏ vài giọt alcol lên tiêu bản, để 30 giây, rửa nước. + Nhỏ vài giọt fucsin lên tiêu bản, để 1 phút, rửa nước
Để khô, soi tiêu bản trên kính hiển vi vật kính dầu 100, có thể thấy các thành phần sau:
+ Tìm nấm Candida: Nếu có nấm sẽ thấy những tế bào hình tròn hoặc hình bầu dục, có chồi, bắt màu Gram (+).
+ Tìm tế bào “Clue cells” (+): là các tế bào biểu mô âm đạo bong ra, dính với nhau thành từng đám, trên bề mặt và xung quanh tế bào có nhiều trực khuẩn dài ngắn khác nhau bắt màu Gram (-). Ước lượng tỷ lệ Clue cells chiếm bao nhiêu phần trăm tế bào biểu mô âm đạo bị bong. Nếu tác nhân gây bệnh là Gardnerella vaginalis thì tỷ lệ này phải trên 20%.
+ Bạch cầu đa nhân, các loại vi khuẩn gây bệnh như cầu khuẩn Gram dương hoặc trực khuẩn Gram âm.
- Xét nghiệm tìm Chlamydia: Khi lấy bệnh phẩm, lau sạch dịch tiết ở
âm đạo và mặt ngoài cổ tử cung, sau đó đưa tăm bông vào ống cổ tử cung khoảng 1,5 cm, chà và xoay nhẹ tăm bông trong thời gian khoảng 10 giây, khi rút tăm bông không để chạm vào thành âm đạo.
+ Dùng kit của hãng AmeriTek USA. Là xét nghiệm sắc ký miễn dịch dùng kháng thể đơn dòng và đa dòng để xác định chọn lọc Chlamydia trong dịch cổ tử cung. Quy trình thử và đọc kết quả theo hướng dẫn của nhà cung cấp. (Được sửa đổi ngày 22 tháng 10 năm 2007).
+ Nhỏ 10 - 12 giọt dung dịch đệm One Step Rapid Test Buffer vào ống thử có chứa tăm bông bệnh phẩm lấy ở ống cổ tử cung và xoay mạnh để trộn các chất phản ứng trong khoảng 15 giây. Sau đó ủ hỗn hợp ở nhiệt độ phòng trong khoảng 10 phút với tăm bông trong ống thử.
+ Xoáy tăm bông bệnh phẩm trong ống thử khoảng 15 giây, sau đó ép và xoay tăm bông trên thành ống thử để ép dịch ra càng nhiều càng tốt. Vứt bỏ tăm bông.
+ Xé bao đựng dụng cụ thử ở vị trí có khía, lấy dụng cụ thử nghiệm ra khỏi bao.
+ Giữ chiều dài của dụng cụ thử, cẩn thận nhúng vào mẫu chiết xuất. Không nhúng quá mức tối đa.
+ Đọc kết quả thử nghiệm trong 10 đến 12 phút. Không đọc sau 30 phút. Kết quả dương tính khi xuất hiện 2 vạch hồng, 1 vạch ở vùng “C” và 1 vạch ở vùng “T”. Mẫu thử dương tính là có sự hiện diện của Chlamydia trachomatis.
Kết quả âm tính khi chỉ xuất hiện 1 vạch hồng ở vùng “C”, không có vạch hồng ở vùng “T”. Mẫu thử âm tính được xem là không có Chlamydia
trachomatis.