3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
2.4.4.Phƣơng pháp nghiên cứu đặc điểm bệnh lý, lâm sàng của bệnh cầu
cầutrùng bê, nghé
2.4.4.1. Phương pháp theo dõi biểu hiện lâm sàng chủ yếu của bê, nghé bị bệnh cầu trùng
* Phương pháp bố trí
Trong quá trình xét nghiệm phân, đã phát hiện đƣợc những bê, nghé nhiễm cầu trùng. Chọn những bê, nghé chỉ nhiễm cầu trùng, không nhiễm bất cứ loại giun sán và bệnh truyền nhiễm nào khác, theo dõi các biểu hiện lâm sàng của những bê, nghé này.
* Phương pháp theo dõi
Sử dụng các phƣơng pháp chẩn đoán lâm sàng nhƣ: đo thân nhiệt bằng nhiệt kế 430C, quan sát thể trạng, lông, da; quan sát màu sắc các niêm mạc; theo dõi màu sắc, trạng thái và mùi phân, số lần đi ỉa trong ngày; tình trạng ăn uống....
2.4.4.2. Phương pháp xét nghiệm máu của nghé bị bệnh cầu trùng và nghé khỏe * Bố trí xét nghiệm máu nghé
Tiến hành hai đợt xét nghiệm máu của hai nhóm nghé. Một nhóm gồm những nghé nhiễm cầu trùng với mức độ nặng. Nhóm kia là nghé khoẻ.
Lấy mẫu máu của nghé khỏe và nghé bị bệnh cầu trùng ở tĩnh mạch cổ (1ml/con) cho vào ống nghiệm có tráng chất chống đông máu. Bố trí thí nghiệm theo sơ đồ sau:
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Nghé nhiễm cầu trùng Nghé khỏe
Số con Số mẫu máu Số con Số mẫu máu
3 nghé 6 3 nghé 6
* Phương pháp xác định
Xác định số lƣợng hồng cầu, số lƣợng bạch cầu, hàm lƣợng huyết sắc tố bằng máy ABX Micros tại khoa huyết học - Bệnh viện Đa khoa Trung ƣơng.
Công thức bạch cầu đƣợc xác định bằng phƣơng pháp Tristova: làm tiêu bản máu, nhuộm Giemsa, đếm số lƣợng từng loại bạch cầu và tính tỷ lệ phần trăm từng loại.
2.4.5. Nghiên cứu biện pháp phòng, trị cầu trùng cho bê, nghé
2.4.5.1. Bố trí thí nghiệm xác định công thức ủ phân có khả năng sinh nhiệt tốt để diệt Oocyst cầu trùng nhiệt tốt để diệt Oocyst cầu trùng
Chúng tôi đã thực hiện thí nghiệm với 3 công thức ủ, nhằm lựa chọn đƣợc một công thức có khả năng sinh nhiệt tốt nhất.
* Phương pháp bố trí thí nghiệm
- Chuẩn bị nguyên liệu ủ, bố trí ủ theo 3 công thức sau:
Công thức 1: Các nguyên liệu ủ đƣợc chuẩn bị theo tỷ lệ: + Phân chuồng: 800 - 1000 kg.
+ Lá xanh băm nhỏ: 200 kg. + Tro bếp: 60 kg.
Công thức 2: Các nguyên liệu ủ đƣợc bố trí theo tỷ lệ: + Phân chuồng: 800 - 1000 kg.
+ Lá xanh băm nhỏ: 200 kg. + Vôi bột: 20 kg.
Công thức 3: Các nguyên liệu ủ đƣợc bố trí theo tỷ lệ: + Phân chuồng: 800 - 1000 kg.
+ Lá xanh băm nhỏ: 200 kg. + Tro bếp: 60 kg.
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
(Theo tài liệu của Trịnh Văn Thịnh và cs (1982) [39], Phạm Văn Khuê và cs (1996) [11], Nguyễn Thị Kim Lan (2012) [17]).
- Cách ủ phân: Trộn đều các nguyên liệu theo tỷ lệ của mỗi công thức ủ, cho vào mỗi bao nilon 20 kg hỗn hợp nguyên liệu đã trộn của mỗi công thức trên.
Cũng trộn đều 5 kg phân của bê, nghé nhiễm cầu trùng nặng với các nguyên liệu khác (lá xanh băm nhỏ, tro bếp, vôi bột) theo tỷ lệ nhƣ 3 công thức, sau đó chia vào các túi vải nhỏ (mỗi túi 10 - 15 g), đặt vào trong các bao phân ủ (ở các vị trí khác nhau). Buộc miệng bao để tạo môi trƣờng yếm khí trong bao. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
* Phương pháp theo dõi khả năng sinh nhiệt và tác dụng diệt Oocyst của 3 công thức ủ
Hàng ngày theo dõi nhiệt độ phân ủ, đồng thời lấy từ mỗi bao 1 túi vải để xét nghiệm Oocyst cầu trùng. Từ đó xác định đƣợc khả năng sinh nhiệt của mỗi công thức ủ và tác dụng diệt Oocyst cầu trùng bê, nghé.
2.4.5.2. Phương pháp nghiên cứu lựa chọn thuốc điều trị cầu trùng cho bê nghé
Lựa chọn 4 loại thuốc thƣờng dùng để điều trị bệnh cầu trùng cho nghé. Dự kiến mỗi loại thuốc đƣợc dùng cho 8 nghé có cùng lứa tuổi, mức độ nhiễm và biểu hiện lâm sàng. Sau 5, 10, 15 ngày dùng thuốc, xét nghiệm phân kiểm tra số Oocyst/g phân để đánh giá hiệu lực điều trị của từng loại thuốc. Từ đó, lựa chọn 2 thuốc có hiệu lực tẩy cao nhất và thời gian tẩy sạch Oocyst cầu trùng sớm nhất.
Thử nghiệm thuốc trị cầu trùng với nghé đƣợc thực hiện ở những nghé nhiễm cầu trùng cƣờng độ từ trung bình đến rất nặng (qua xét nghiệm phân) ở 3 huyện theo sơ đồ sau:
Lô thí nghiệm Tên thuốc, liều lƣợng Số nghé dùng thuốc (con) Thời gian xét nghiệm phân (ngày)
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
(30 mg/kg TT)
Lô II RTD-Coccistop
(136 mg/kg TT) 8 Ngày thứ 5, 10,15
Lô III Nova-coc 5%
(25 mg/kg TT) 8 Ngày thứ 5, 10,15
Lô IV Baycox 5% 8 Ngày thứ 5, 10,15
2.4.5.3. Thử nghiệm thuốc điều trị bệnh cầu trùng có hiệu lực cao cho nghé
Từ kết quả nghiên cứu lựa chọn thuốc điều trị bệnh cầu trùng cho nghé, kết hợp với việc theo dõi những biểu hiện lâm sàng chủ yếu của nghé bị bệnh lựa chọn 02 thuốc điều trị phù hợp.
Thử nghiệm 2 thuốc điều trị cho 2 nhóm nghé bị bệnh cầu trùng ở cƣờng độ từ nhẹ đến rất nặng (dự kiến mỗi nhóm 20 nghé). Sau 15 ngày sử dụng phác đồ điều trị tiến hành xét nghiệm phân kiểm tra số Oocyst/g phân và theo dõi các biểu hiện khác của nghé.
2.4.5.4. Phương pháp xác định khối lượng nghé để tính liều lượng thuốc
Dùng cân xác định khối lƣợng những nghé nhỏ để tính liều lƣợng thuốc, với những nghé có khối lƣợng lớn thì xác định khối lƣợng bằng cách đo và tính theo công thức:
- Nghé: KL (kg) = 88,4 x (vòng ngực)2 x dài thân chéo (m).
2.4.5.5. Phương pháp đánh giá hiệu lực của thuốc trị cầu trùng bê, nghé
Trƣớc khi dùng thuốc, xác định cƣờng độ nhiễm bằng cách đếm số lƣợng Oocyst/g phân. Sau khi dùng thuốc 15 ngày, xác định hiệu lực thuốc bằng phƣơng pháp xét nghiệm lại phân bê, nghé tìm Oocyst và đếm số
Oocyst/g phân. Nếu không thấy Oocyst trong phân thì đánh giá thuốc có hiệu lực triệt để với cầu trùng; nếu vẫn thấy Oocyst trong phân nhƣng số lƣợng
Oocyst/g phân giảm rõ rệt thì đánh giá thuốc có hiệu lực với cầu trùng nhƣng chƣa triệt để; nếu thấy số lƣợng Oocyst/g phân vẫn không giảm so với trƣớc khi dùng thuốc hoặc giảm không đáng kể thì đánh giá thuốc không có hiệu lực với cầu trùng.
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
2.4.5.6. Phương pháp xác định độ an toàn của thuốc
Độ an toàn của thuốc đƣợc đánh giá bằng kết quả theo dõi trạng thái cơ thể, sự vận động, ăn uống và một số chỉ tiêu sinh lý (thân nhiệt, nhịp thở) của nghé trƣớc và sau khi dùng thuốc 1 giờ.
an toàn.
2.4.5.7. Đề xuất quy trình phòng trừ tổng hợp bệnh cầu trùng bê, nghé
Từ kết quả thu đƣợc về một số đặc điểm dịch tễ và kết quả thử nghiệm thuốc trị cầu trùng, kết quả xác định công thức ủ phân phù hợp, đề xuất quy trình phòng trừ tổng hợp bệnh cầu trùng cho bê, nghé.
2.5. Phƣơng pháp xử lý số liệu (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Số liệu thu đƣợc đƣợc xử lý bằng phƣơng pháp thống kê sinh học (Nguyễn Văn Thiện, 1997) [37], trên phần mềm Excel 2003 và phần mềm Minitab 14.0.
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Chƣơng 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. Các loài cầu trùng ký sinh ở bê, nghé tại tỉnh Thái Nguyên
Bảng 3.1. Các loài cầu trùng ký sinh ở bê, nghé tại tỉnh Thái Nguyên
Ký hiệu loại Oocyst Số Oocyst theo dõi Kích thƣớc Oocyst ( m) Hình thái và màu sắc Thời gian phát triển thành Oocyst gây bệnh (ngày) Kết luận loài cầu trùng Chiều dài (x± mx) Chiều rộng (x± mx) O1 10 18,23 1,27 14,28 0,47 Hình trứng, có 1 - 2 lớp vỏ, màu vàng nhạt. 4 - 5 E. alabamensis (Christiensen, 1941) O2 10 27,27 1,06 18,90 1,13 Hình trứng hoặc không đối xứng, có 2
lớp vỏ, màu nâu hay hơi vàng, không có hạt cực, lỗ noãn ở đầu hẹp. 2 - 3 E. bovis (Christiensen, 1941) O3 10 23,24 0,60 15,07 0,45 Hình e líp hoặc bầu dục, có 1 - 2 lớp vỏ, màu phớt hồng hoặc
không màu, không có hạt cực. 2 - 3 E. ellipsoidalis (Becker, Frye, 1929) O4 10 19,22 0,84 14,93 0,48 Hình trứng hoặc hình cầu, có 2 lớp vỏ, màu nâu nhạt hoặc không màu, không
có hạt cực.
2 - 3
E. zuernii
(Rivolta, 1878, Martin, 1909)
Kết quả bảng 3.1 cho thấy, bê, nghé nuôi tại 3 huyện của tỉnh Thái Nguyên nhiễm 4 loài cầu trùng. Căn cứ vào đặc điểm hình thái, kích thƣớc,
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
màu sắc của Oocyst và thời gian hình thành bào tử, chúng tôi có nhận xét và kết luận nhƣ sau:
- Loại O1: có kích thƣớc 18,23 x 14,28 µm, thời gian phát triển thành
Oocyst có sức gây bệnh là 4 - 5 ngày, Oocyst gây bệnh có 4 túi bào từ, trong mỗi túi bào tử có 2 bào tử con. Theo Christiensen (1941), loài Eimeria alabamemsis có kích thƣớc 13 - 24 x 11 - 16 µm, thời gian hình thành bào tử 4 - 5 ngày. Vì vậy, chúng tôi kết luận O1 chính là loài Eimeria alabamemsis.
- Loại O2: có kích thƣớc 27,27 x 18,90 µm, thời gian phát triển thành
Oocyst có sức gây bệnh là 2 - 3 ngày, Oocyst gây bệnh có 4 túi bào tử, trong mỗi tử túi bào tử có 2 bào tử con. Theo Christiensen (1941), loài Eimeria bovis có kích thƣớc 23 - 34 x 17 - 23 µm, thời gian hình thành bào tử 2 - 3 ngày nên chúng tôi kết luận loài O2 chính là Eimeria bovis.
- Loại O3: có kích thƣớc 23,24 x 15,07 µm, thời gian phát triển thành
Oocyst gây bệnh là 2 - 3 ngày, Oocyst gây bệnh có 4 túi bào tử, trong mỗi túi bào tử có 2 bào tử con. Theo Becker and Frye (1929), loài Eimeria ellipsoidalis có kích thƣớc 9 - 16 x 7 - 15 µm, thời gian hình thành bào tử 2 - 3 ngày. Từ đó, chúng tôi kết luận O3 chính là loài Eimeria ellipsoidalis.
- Loại O4: kích thƣớc 19,22 x 14,93 µm, thời gian phát triển thành
Oocyst có sức gây bệnh là 2 - 3 ngày, Oocyst gây bệnh có 4 túi bào tử, trong mỗi túi bào tử có 2 bào tử con. Theo Rivolta (1978) và Martin (1909), loài
Eimeria zuernii có kích thƣớc 15 - 22 x 13 - 18 µm, thời gian hình thành bào tử 2 - 3 ngày. Nên chúng tôi kết luận O4 chính là loài Eimeria zuernii.
Qua kết quả bảng 3.1 và những vấn đề thảo luận ở trên, chúng tôi có nhận xét: bê, nghé nuôi ở tỉnh Thái Nguyên nhiễm 4 loài cầu trùng: E. alabamensis, E. bovis, E. ellipsoidalis, E. zuernii. Cả 4 loài trên thuộc giống
Eimeria, họ Eimerridae, phân ngành Apicomplexa. Đây là 4 loài cầu trùng phổ biến và gây tác hại lớn cho bê, nghé của nhiều nƣớc trên thế giới, trong đó có Việt Nam.
Các cầu trùng trên ký sinh ở ruột già, đôi khi ở phần giữa ruột non. Trong 4 loài cầu trùng mà chúng tôi phát hiện thì cả 4/12 loài là: E.
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
alabamensis, E. bovis, E. ellipsoidalis và E. zuernii đã đƣợc Lâm Thị Thu Hƣơng và cs (2011) [9] phát hiện thấy ở bê tại tỉnh Vĩnh Long. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Điều kiện thời tiết khí hậu của nƣớc ta nói chung và ở tỉnh Thái Nguyên nói riêng, mùa hè nóng, mùa đông không lạnh lắm và gần nhƣ ẩm thƣờng xuyên đã tạo điều kiện thuận lợi cho sự tồn tại của Oocyst cầu trùng ở ngoại cảnh.
3.2. Tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm cầu trùng tại một số địa phƣơng
Bảng 3.2. Tỷ lệ nhiễm cầu trùng bê, nghé tại một số địa phƣơng
Địa điểm (huyện, xã) Số bê, nghé kiểm tra (con) Số bê, nghé nhiễm (con) Tỷ lệ (%)
Cƣờng độ nhiễm (Số Oocyst/g phân)
500 500 - 1000 1000 - 5000 5000 n % n % n % n % Phú Lƣơng 120 46 38,33 23 50,00 16 34,78 5 10,87 2 4,35 Phấn Mễ 42 15 35,71 8 53,33 4 26,67 2 13,33 1 6,67 Tức Tranh 35 15 42,86 7 46,67 6 40,00 2 13,33 0 0,00 Cổ Lũng 43 16 37,21 8 50,00 6 37,50 1 6,25 1 6,25 Phú Bình 129 60 46,51 30 50,00 21 35,00 6 10,00 3 5,00 Lƣơng Phú 43 19 44,19 10 52,63 6 31,58 2 10,53 1 5,26 Đào Xá 41 19 46,34 8 42,11 8 42,11 2 10,53 1 5,26 Tân Kim 45 22 48,89 12 54,55 7 31,82 2 9,09 1 4,55 Phổ Yên 119 45 37,82 24 53,33 15 33,33 4 8,89 2 4,44 Hồng Tiến 41 16 39,02 8 50,00 6 37,50 1 6,25 1 6,25 Đồng Tiến 38 14 36,84 9 64,29 4 28,57 1 7,14 0 0,00 Tiên Phong 40 15 37,5 7 46,67 5 33,33 2 13,33 1 6,67 Tính chung 368 151 41,03 77 50,99 52 34,44 15 9,93 7 4,64
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Kết quả bảng 3.2 cho thấy:
* Về tỷ lệ nhiễm:
Có 151 mẫu bị nhiễm cầu trùng trong tổng số 368 mẫu phân bê, nghé kiểm tra, chiếm tỷ lệ 41,03%, biến động từ 37,82% - 46,51%. Tỷ lệ nhiễm này khác nhau giữa các xã của 3 huyện và phụ thuộc vào nhiều yếu tố nhƣ: tuổi bê, nghé, thời tiết khí hậu, điều kiện chăm sóc nuôi dƣỡng, tình trạng vệ sinh thú y, mật độ chăn nuôi … Do địa hình rộng có một số xã, thôn, xóm ở vùng sâu, phƣơng thức chăn nuôi còn lạc hậu, điều kiện vệ sinh thú y chƣa đảm bảo nên tỷ lệ nhiễm cầu trùng bê, nghé ở các xã thuộc 3 huyện trên là tƣơng đối cao. Ở cả 3 huyện, phƣơng thức chăn nuôi chủ yếu là bán chăn thả (ban ngày đƣợc thả chăn dắt, ban đêm nhốt tại chuồng và cho ăn bổ sung). Trong đó, các xã của huyện Phú Bình có địa hình rộng, xen kẽ nhiều đồi núi thấp, điều kiện vệ sinh chuồng trại, bãi chăn thả kém, bê nghé đƣợc chăn thả theo đàn, tạo điều kiện cho Oocyst cầu trùng phát tán và lây nhiễm sang nhau. Các xã của huyện Phú Lƣơng và Phổ Yên mật độ chăn nuôi thấp hơn. Đồng thời ngƣời chăn nuôi đã có ý thức hơn trong công tác phòng chống dịch bệnh nên tỷ lệ nhiễm cầu trùng thấp hơn (38,33% và 37,82% so với 46,51%).
Tỷ lệ nhiễm cầu trùng đƣợc thể hiện rõ hơn qua hình 3.1.
37.82 46.51 38.33 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 % Phú Lương Phú Bình Phổ Yên Huyện
Hình 3.1. Biểu đồ tỷ lệ nhiễm cầu trùng bê, nghé ở 3 huyện của tỉnh Thái Nguyên
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Biểu đồ ở hình 3.1 cho thấy, các cột biểu thị tỷ lệ nhiễm cầu trùng ở các huyện cao thấp khác nhau.
Tỷ lệ nhiễm cầu trùng cao nhất ở bê, nghé nuôi tại huyện Phú Bình (46,51%), sau đó đến bê, nghé ở huyện Phú Lƣơng (38,33%) và cuối cùng đến Phổ Yên (37,82%). Kết quả này phù hợp với nghiên cứu của Tauseef Ur Rehman và cs (2010) [69]; và phù hợp với nhận xét của Lassen B. (2009) [61], Lâm Thị Thu Hƣơng (2011) [9].
* Về cƣờng độ nhiễm:
- Bảng 3.2 cho thấy: bê, nghé đều nhiễm cầu trùng ở cƣờng độ từ nhẹ đến rất nặng ở 3 huyện nghiên cứu. Trong tổng số 151 bê nghé nhiễm cầu trùng có 77 bê nghé nhiễm ở cƣờng độ nhẹ (chiếm tỷ lệ 50,99%), có 52 bê nghé nhiễm cầu trùng ở cƣờng độ trung bình (chiếm tỷ lệ 34,44%), ở cƣờng độ nặng có 15 bê nghé (chiếm tỷ lệ 9,93%) và 7 bê nghé nhiễm cầu trùng ở cƣờng độ rất nặng (chiếm tỷ lệ 4,64%). Phú bình là huyện có tỷ lệ nhiễm rất nặng cao nhất (5%).
- Từ kết quả bảng 3.2 và đồ thị 3.1, chúng tôi có nhận xét: điều kiện chăn nuôi ảnh hƣởng tới cƣờng độ nhiễm. Ba huyện Phú Bình, Phú Lƣơng và Phổ Yên của tỉnh Thái Nguyên chăn nuôi với tình trạng vệ sinh thú y kém, chế độ chăm sóc nuôi dƣỡng chƣa tốt, ngƣời dân có tập quán chăn thả theo bầy đàn, nên cƣờng độ rất nặng cao. Kết quả này là phù hợp với nghiên cứu của Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008) [16], Lƣơng Tố Thu (1986) [41], Lâm Thị Thu Hƣơng (2011) [9].
Theo Trịnh Văn Thịnh và cs (1978) [38], điều kiện tự nhiên và xã hội có ảnh hƣởng tới sự tồn tại và phát triển của ký sinh trùng, do đó ảnh hƣởng đến sự cảm nhiễm ký sinh trùng ở gia súc và gia cầm, trong đó có cầu trùng bê nghé.
Những nhận xét của các tác giả trên đã phần nào làm rõ hơn nguyên nhân dẫn đến bê, nghé nhiễm cầu trùng với tỷ lệ và cƣờng độ cao. Trên cơ sở này chúng tôi tiếp tục nghiên cứu các yếu tố ảnh hƣởng đến tỷ lệ nhiễm cầu trùng ở bê, nghé tại tỉnh Thái Nguyên.
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
3.3. Tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm cầu trùng theo tuổi bê, nghé
Theo tài liệu của Phạm Văn Khuê và cs (1996) [11], Trịnh Văn Thịnh và cs (1978) [38], tuổi của gia súc là yếu tố ảnh hƣởng đến tính cảm thụ đối với