II. PHƢƠNG PHÁP THỬ 2.1 Tính chất:
2.6. tinh khiết: áp dụng phương pháp đo phổ UV ở bước sóng 363 nm.
2.6.1. Chất chuẩn, trang thiết bị, máy móc, dung môi
Chất chuẩn: meloxicam 99,5% tính theo chế phẩm hiện trạng (Viện kiểm nghiệm thuốc TP. Hồ Chí Minh).
Trang thiết bị
- Máy quang phổ UV-Vis Shimadzu UV-1800. - Bình định mức 100 ml, 50 ml, 20 ml, 10 ml, 5 ml. - Pipet chính xác 10 ml, 5 ml, 2 ml, 1 ml.
- Micropipet 0,1 - 1 ml.
- Phễu thủy tinh.
Hóa chất, dung môi: nước cất 2 lần, dung dịch đệm phosphat pH 6,5.
2.6.2. Chuẩn bị mẫu
Mẫu chuẩn: cân chính xác khoảng 5 mg meloxicam chuẩn, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,5 lắc đều đến khi tan hoàn toàn, thêm dung dịch đệm phosphat pH 6,5 đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ khoảng 100 μg/ml).
Mẫu thử: cân chính xác một lượng phức ME-HPβCD tương ứng với khoảng 50 mg ME, cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất, lắc đều đến khi phức tan hết, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 μm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm dung dịch đệm phosphat pH 6,5 đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ qui về meloxicam khoảng 100 μg/ml).
Dung dịch HPβCD: cân chính xác khoảng 210,3 mg HPβCD (tương ứng với lượng phức ME-HPβCD chứa khoảng 50 mg meloxicam), cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất, lắc đều đến khi tan hết, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 μm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm dung dịch đệm phosphat pH 6,5 đến vạch, lắc đều.
Mẫu kiểm tra: cân chính xác khoảng 50 mg meloxicam chuẩn, cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất, lắc đều, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 μm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm dung dịch đệm phosphat pH 6,5 đến vạch, lắc đều.
2.6.3. Tiến hành định lƣợng
Đo độ hấp thụ của mẫu chuẩn, mẫu thử, dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra tại bước sóng 363 nm, dùng dung dịch đệm phosphat pH 6,5 làm mẫu trắng. Phép thử chỉ có giá trị khi độ hấp thụ của mẫu kiểm tra và dung dịch HPβCD tại bước sóng 363 nm phải nằm trong khoảng ± 0,001.
Tính kết quả
Độ tinh khiết của phức ME-HPβCD tính theo chế phẩm hiện trạng được tính theo công thức:
( ) Trong đó:
- X%: độ tinh khiết của phức ME-HPβCD.
- At: độ hấp thụ của mẫu thử tại bước sóng 363 nm. - Ac: độ hấp thụ của mẫu chuẩn tại bước sóng 363 nm. - Cc: nồng độ của mẫu chuẩn (µg/ml)
- 1829,65: phân tử lượng trung bình của phức ME-HPβCD.
- 333,83: khối lượng trung bình của meloxicam có trong một phân tử lượng trung bình của phức ME-HPβCD.
- P: lượng phức cân (mg).
Thẩm định qui trình
Tính chọn lọc
Quét phổ tử ngoại (200 – 400 nm) của mẫu chuẩn, mẫu thử, dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra.
Yêu cầu:
- Mẫu thử phải có phổ hấp thụ tử ngoại và bước sóng hấp thụ cực đại (363 ± 1 nm) giống mẫu chuẩn.
- Dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra không có bước sóng hấp thụ cực đại tại 363 ± 1 nm). Độ hấp thụ của dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra tại bước sóng hấp thụ cực đại 363 ± 1 nm phải nằm trong khoảng ± 0,001.
Khoảng tuyến tính
Chuẩn bị một dãy dung dịch meloxicam chuẩn có nồng độ khác nhau. Tiến hành đo độ hấp thụ các dung dịch chuẩn ở bước sóng 363 nm. Mỗi dung dịch đo 3 lần, lấy giá trị trung bình. Tính hệ số tương quan R và thiết lập phương trình hồi quy tuyến tính giữa nồng độ và độ hấp thụ. Sử dụng trắc nghiệm F (F test, phân phối Fischer) để đánh giá
tính tương thích của phương trình hồi quy. Sử dụng trắc nghiệm t (t test, phân phối Student) để kiểm tra ý nghĩa của các hệ số trong phương trình hồi quy.
Yêu cầu: Hệ số tương quan R giữa nồng độ và độ hấp thụ phải lớn hơn 0,990.
Độ chính xác
Chuẩn bị 6 dung dịch mẫu thử và đo độ hấp thụ tại bước sóng 363 nm. Tính độ tinh khiết của phức ME-HPβCD.
Yêu cầu: độ lệch chuẩn tương đối của 6 lần thử ≤ 2%.
2.7. Giới hạn nhiễm khuẩn: thử theo qui định của DĐVN IV, phụ lục 13.6.
III. ĐÓNG GÓI-BẢO QUẢN
Đóng trong bao bì kín, tránh ẩm, có nhãn theo qui định. Bảo quản nơi khô mát
TP. Hồ Chí Minh, ngày 24 tháng 6 năm 2014
Trung tâm KHCN Dƣợc Sài gòn
Phụ lục 22