II. PHƢƠNG PHÁP THỬ
2.1. Tính chất: bằng cảm quan chế phẩm phải đạt yêu cầu qui định Đánh giá độ tan của chất thử theo qui định chung của DĐVN IV.
Đánh giá độ tan của chất thử theo qui định chung của DĐVN IV.
2.2. Định tính
Phổ IR: áp dụng kỹ thuật viên KBr.
Chuẩn bị mẫu thử: nghiền 1 - 2 mg phức R-HBβCD với 100 - 200 mg bột mịn KBr (dùng cho IR) đã được sấy khô, đủ để tạo thành 1 viên nén có đường kính 13 mm và cho phổ có cường độ phù hợp. Hỗn hợp được nghiền cẩn thận và rải đều trên một khuôn thích hợp. Nén khuôn có hỗn hợp chất thử tới áp suất khoảng 800 Mpa trong điều kiện chân không. Tiến hành đo phổ IR.
Yêu cầu: phổ IR của mẫu thử phải có các đỉnh hấp thụ đặc trưng của các nhóm chức: O-H (3385 cm-1), C-H (2932 cm-1), C-O (1030 cm-1), C=O (1655 cm-1), vòng phenyl (1605, 1508, 1458 cm-1), =C-O-C (1298 cm-1).
Phổ 1H-NMR: đo phổ 1H-NMR trong dung môi DMSO trên máy NMR Bruker AC 500 MHz, T = 300 K.
Yêu cầu: phổ 1
H-NMR của mẫu thử phải có các tín hiệu tương ứng với độ dịch chuyển hóa học đặc trưng của phức R-HBβCD.
2.3. Giảm khối lƣợng do làm khô: xác định trên 1,0 g chế phẩm. Dùng chén cân có nắp mài làm bì đựng mẫu, sấy ở nhiệt độ 120 oC trong 2 giờ, lấy ra để nguội trong bình hút mài làm bì đựng mẫu, sấy ở nhiệt độ 120 oC trong 2 giờ, lấy ra để nguội trong bình hút ẩm, cân xác định khối lượng bì (a g). Cân mẫu thử (m g) cho vào chén cân đã cân bì, đem sấy ở nhiệt độ 120 oC trong 2 giờ, để nguội trong bình hút ẩm, cân xác định khối lượng (b g).
Hàm lượng nước bị mất x (%) sau khi sấy được tính theo công thức:
( ) ( )
2.4. Kim loại nặng: hòa tan 5,0 g chế phẩm trong 50 ml nước không có carbon dioxyd (dung dịch S): tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 9.4.8, phương pháp 1. (dung dịch S): tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 9.4.8, phương pháp 1.
2.5. Cắn sau khi nung: xác định trên 1,0 g chế phẩm: tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 9.8, phương pháp 2. 9.8, phương pháp 2.
2.6. Độ tinh khiết: áp dụng phương pháp đo phổ UV ở bước sóng 362,5 và 375 nm.
2.6.1. Chất chuẩn, trang thiết bị, máy móc, dung môi
Chất chuẩn: rutin (Sigma R 5143), công thức: C27H30O16.1H2O, hàm lượng 94% tính theo chế phẩm hiện trạng.
Trang thiết bị
- Máy quang phổ UV-Vis Shimadzu UV-1800. - Bình định mức 100 ml, 50 ml, 20 ml, 10 ml, 5 ml. - Pipet chính xác 10 ml, 5 ml, 2 ml, 1 ml.
- Micropipet 0,1 - 1 ml.
- Phễu thủy tinh.
Hóa chất, dung môi: nước cất 2 lần, ethanol 96o, acid acetic 0,02 N.
2.6.2. Chuẩn bị mẫu
Mẫu chuẩn: cân chính xác khoảng 5 mg rutin chuẩn, cho vào bình định mức 50 ml, thêm
35 ml ethanol 96o, lắc đều đến khi tan hoàn toàn, thêm 0,5 ml dung dịch acid acetic 0,02 N; thêm ethanol 96o đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ khoảng 100 μg/ml).
Mẫu thử: cân chính xác một lượng phức R-HBβCD tương ứng với khoảng 50 mg rutin, cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều đến khi phức tan hết, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml ethanol 96o, lắc đều, thêm 0,5 ml dung dịch acid acetic 0,02 N; thêm ethanol 96o đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ qui về rutin khoảng 100 μg/ml).
Dung dịch HBβCD: cân chính xác khoảng 115,4 mg HBβCD (tương ứng với lượng phức R-HBβCD chứa khoảng 50 mg rutin), cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều đến khi HBβCD tan hết, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml ethanol 96o, lắc đều, thêm 0,5 ml dung dịch acid acetic 0,02 N; thêm ethanol 96o đến vạch, lắc đều.
Mẫu kiểm tra: cân chính xác khoảng 50 mg rutin chuẩn, cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml ethanol 96o, lắc đều, thêm 0,5 ml dung dịch acid acetic 0,02 N; thêm ethanol 96o đến vạch, lắc đều.
2.6.3. Tiến hành định lƣợng
Đo độ hấp thụ của mẫu chuẩn, mẫu thử, dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra tại bước sóng 362,5 nm và 375 nm, dùng ethanol 96o chứa 1% dung dịch acid acetic 0,02 N làm mẫu trắng. Phép thử chỉ có giá trị khi mẫu chuẩn và mẫu thử phải có tỷ số A375/A362,5 nhỏ
hơn 0,879 và độ hấp thụ của mẫu kiểm tra và dung dịch HPβCD tại bước sóng 362,5 nm phải nằm trong khoảng ± 0,001.
Tính kết quả
Độ tinh khiết của phức R-HBβCD tính theo chế phẩm hiện trạng được tính theo công thức: ( ) Trong đó:
- X%: độ tinh khiết của phức R-HBβCD.
- At: độ hấp thụ của mẫu thử tại bước sóng 362,5 nm. - Ac: độ hấp thụ của mẫu chuẩn tại bước sóng 362,5 nm. - Cc: nồng độ của mẫu chuẩn (µg/ml)
- 2199,10: phân tử lượng trung bình của phức R-HBβCD.
- 631,37: khối lượng trung bình của rutin có trong một phân tử lượng trung bình của phức R-HBβCD.
- P: lượng phức cân (mg).
Thẩm định qui trình
Tính chọn lọc
Quét phổ tử ngoại (200 – 400 nm) của mẫu chuẩn, mẫu thử, dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra.
Yêu cầu:
- Mẫu thử phải có phổ hấp thụ tử ngoại và bước sóng hấp thụ cực đại (362,5 ± 1 nm và 375 ± 1 nm) giống mẫu chuẩn.
- Mẫu chuẩn và mẫu thử có tỷ số A375/A362,5 nhỏ hơn 0,879.
- Dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra không có bước sóng hấp thụ cực đại tại 362,5 ± 1 nm và 375 ± 1 nm. Độ hấp thụ của dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra tại bước sóng hấp thụ cực đại 362,5 ± 1 nm phải nằm trong khoảng ± 0,001.
Khoảng tuyến tính
Chuẩn bị một dãy dung dịch rutin chuẩn có nồng độ khác nhau. Tiến hành đo độ hấp thụ các dung dịch chuẩn ở bước sóng 362,5 nm. Mỗi dung dịch đo 3 lần, lấy giá trị trung bình. Tính hệ số tương quan R và thiết lập phương trình hồi quy tuyến tính giữa nồng độ và độ hấp thụ. Sử dụng trắc nghiệm F (F test, phân phối Fischer) để đánh giá tính tương thích của phương trình hồi quy. Sử dụng trắc nghiệm t (t test, phân phối Student) để kiểm tra ý nghĩa của các hệ số trong phương trình hồi quy.
Yêu cầu: Hệ số tương quan R giữa nồng độ và độ hấp thụ phải lớn hơn 0,990.
Độ chính xác
Chuẩn bị 6 dung dịch mẫu thử và đo độ hấp thụ tại bước sóng 362,5 nm. Tính độ tinh khiết của phức R-HBβCD.
Yêu cầu: độ lệch chuẩn tương đối của 6 lần thử ≤ 2%.
2.7. Giới hạn nhiễm khuẩn: thử theo qui định của DĐVN IV, phụ lục 13.6.
III. ĐÓNG GÓI-BẢO QUẢN
Đóng trong bao bì kín, tránh ẩm, có nhãn theo qui định. Bảo quản nơi khô mát
TP. Hồ Chí Minh, ngày 24 tháng 6 năm 2014
Trung tâm KHCN Dƣợc Sài gòn
Phụ lục 19
TIÊU CHUẨN CƠ SỞ
ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP. HỒ CHÍ MINH
TRUNG TÂM KHOA HỌC CÔNG NGHỆ DƢỢC SÀI GÒN NGHỆ DƢỢC SÀI GÒN PHỨC ITRACONAZOL- HYDROXYPROPYL-β- CYCLODEXTRIN Số TC: 05 TCCS Có hiệu lực từ ngày:
I. YÊU CẦU KỸ THUẬT